Методика внесена в Государственный Реестр методик выполнения измерений, применяемых в сферах распространения государственного метрологического контроля и надзора

ФР.1.31.2005.01451

МУ 08-47/166

(по реестру аккредитованной метрологической службы)

СПИРТОВЫЕ ЭКСТРАКТЫ И НАСТОЙКИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ТРАВ, ПЛОДОВ И ЯГОД. ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАССОВЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ КВЕРЦЕТИНА И РУТИНА

ТОМСК-2005

5.1.2    Прибор в процессе эксплуатации должен быть надежно заземлен.

5.1.3    При выполнении аналитических измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.4.009.

5.1.4    Электробезопасность при работе с электроустановками - по ГОСТ 12.1.019.

5.1.5    Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

5.2 Требования к квалификации операторов

Выполнение измерений производится лаборантом, инженером или химиком-аналитиком, владеющим техникой вольтамперометрического анализа и изучившим инструкцию по эксплуатации используемой аппаратуры.

•    Температура окружающего воздуха, °С    25 ± 10

•    Атмосферное давление, мм.рт.ст    760 ± 30

•    Относительная влажность воздуха, %    65+15

• Частота переменного тока, Гц    50 ± 5

• Напряжение питания в сети, В    220 + 10

6 ОТБОР И ХРАНЕНИЕ ПРОБ

Растворы проб спиртовых экстрактов и настоек хранят под темным колпаком и анализируют в течение рабочего дня, так как кверцетин и рутин со временем в растворе разлагаются на свету (происходит уменьшение их концентраций в пробах).

7 СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, ВСПОМОГАТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ, ПОСУДА, РЕАКТИВЫ И МАТЕРИАЛЫ

При проведении количественного химического анализа применяют следующие средства измерений, вспомогательное оборудование, посуду, материалы и реактивы:

7.1    Средства измерений и вспомогательное оборудование

7.1.1    Комплекс аналитический вольтамперометрический СТА [1], имеющий накопительный режим развертки потенциала, в комплекте с IBM-совместимым компьютером.

11

Допускается использовать другое оборудование и приборы, позволяющие воспроизводить технические и метрологические характеристики, указанные в данной методике анализа.

7.1.2    Редуктор по ГОСТ 5381 с манометром (250 ± 1) атм. по ГОСТ 8625.

7.1.3    Весы лабораторные по ГОСТ 24104.

7.1.4    Дозаторы пипеточные емкостью 0,01 -1,00 см³ (10- 1000 мкл).

7.1.5    Муфельная печь по ГОСТ 9736;

или электропечь сопротивления камерная лабораторная, обеспечивающая поддержание заданного температурного режима от 150 °С до 600 °С с погрешностью + 25 °С;

или комплекс пробоподготовки “Темос-Экспресс” с диапазоном рабочих температур от 50 °С до 650 °С с погрешностью измерений +15 °С (изготовитель ООО “ИТМ”, г.Томск).

7.1.6    Аппарат для дистилляции воды по ГОСТ 28165.

7.1.7    Шланги резиновые для подвода газа к ячейке (при использовании инертного газа).

7.1.8    Темный бокс или светозащитная бумага.

7.1.9    Щипцы тигельные [2].

7.1.10    Водяная баня.

7.1.11    Фильтры обеззоленные [3].

7.1.12    Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

7.2 Посуда

7.2.1    Пипетки мерные лабораторные стеклянные 2-го класса точности вместимостью 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 см³ по ГОСТ 29227.

7.2.2    Посуда мерная лабораторная стеклянная 2-го класса точности по ГОСТ 1770: колбы вместимостью 10,0; 25,0; 50,0 см³, цилиндры вместимостью 10,0; 25,0 см³.

7.2.3    Воронки лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336.

7.3. Реактивы и материалы

7.3.1    Вода бидистиллированная, обессоленная по [4] или дистиллированная по ГОСТ 6709, перегнанная в присутствии серной кислоты (0,5 см³ концентрированной серной кислоты и 3 см³ 3%-ного раствора калия марганцево-кислого на 1 дм³ дистиллированной воды).

7.3.2    Калия хлорид по [5].

7.3.3    Фармакопейный препарат: сухой порошок кверцетина с содержанием основного вещества не менее 99,5 %.

7.3.4    Фармакопейный препарат: сухой порошок рутина с содержанием основного вещества не менее 99,5 %.

7.3.5    Кислота соляная концентрированная по ГОСТ 14261 ос.ч. или ГОСТ 3118 х.ч.

7.3.6    Натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный по ГОСТ 4172.

7.3.7    Спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300.

7.3.8    Азот газообразный по ГОСТ 9293 с массовой долей кислорода не более 0,03 %.

7.3.9    Натрий двууглекислый по ГОСТ 2156.

8 ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ ИЗМЕРЕНИЙ

8.1    Подготовка прибора к работе

Подготовку и проверку комплекса аналитического вольтам перометрического СТА проводят в соответствии с инструкцией по эксплуатации и техническому описанию прибора, Паспортом на комплекс аналитический вольтамперометрический СТА и Руководству пользователя.

8.2    Подготовка и проверка лабораторной посуды

8.2.1    Лабораторную стеклянную посуду, сменные наконечники дозаторов, пипетки протирают фильтром с питьевой содой (натрий двууглекислый), промывают многократно бидистиллированной водой.

8.2.2    Проверку стаканчиков для анализа на чистоту проводят путем регистрации вольтамперограмм раствора фонового электролита по 9.1. Для этого их предварительно два - три раза ополаскивают бидистиллированной водой и прокаливают в муфельной печи или комплексе «Темос-Экспресс» при температуре 500 °С в течение 15-20 мин, охлаждают до комнатной температуры, а затем ополаскивают раствором фонового электролита.

Оптимальными по чистоте являются реактивы и посуда, когда регистрируются аналитические сигналы органического соединения в растворе фонового электролита по высоте равные или близкие к нулю.

8.3 Подготовка электрохимической ячейки

В состав электролитической ячейки входят:

-    электроды:

-    индикаторный электрод - игольчатый стеклоуглеродный (СУЭ) с

рабочей поверхностью 25 - 30 мм²;

-    электрод сравнения - хлорсеребряный в насыщенном растворе

хлорида калия (нас.х.с.) с сопротивлением не более 3,0 кОм.

-    сменные стаканчики из кварцевого стекла вместимостью 20 -

25 см³;

-    стеклянная или тефлоновая трубка с оттянутым концом для подво

да инертного газа для удаления кислорода из раствора и его

перемешивания.

13

Приготовление и проверка работы индикаторного электрода и электрода сравнения

8.3.1    Подготовка индикаторного стеклоуглеродного электрода (СУЭ)

В работе используют игольчатый стеклоуглеродный электрод. Индикаторный стеклоуглеродный электрод представляет собой

стеклоуглеродный стержень диаметром 2 мм и длиной 10-15 мм, запрессованный в полиэтиленовый держатель.

Перед работой боковую поверхность и торец электрода шлифуют на фильтре; выдерживают 2-5 мин в этиловом спирте (для удаления поверхностно-активных веществ, а также для очистки от адсорбированных частиц).

8.3.2    Подготовка к работе электрода сравнения

В качестве электрода сравнения используют насыщенный хлорид-серебряный электрод.

Электрод сравнения заполняют насыщенным раствором хлорида калия. При первом заполнении электрод выдерживают не менее 24 ч.

8.3.4    Проверку работы индикаторных электродов и электродов сравнения проводят в соответствии с 9.1 настоящей методики по методу «введено-найдено».

8.4    Приготовление растворов

8.4.1    Основной раствор (ОР) кверцетина, содержащий 200 мг/дм³ кверцетина

На аналитических весах берут навеску кверцетина массой (0,010 + 0,001) г, количественно переносят в мерную колбу вместимостью

50.0    см³, приливают приблизительно 25 - 30 см³ этилового спирта и 0,05 см³ гидроксида натрия концентрации 0,10 моль/дм³ и перемешивают. После полного растворения кверцетина объем колбы доводят до метки этиловым спиртом.

Основной раствор, содержащий 200 мг/дм³ кверцетина, является одновременно аттестованной смесью.

8.4.2    Основной раствор (ОР) рутина, содержащий 400 мг/дм³

На аналитических весах берут навеску рутина массой (0,020 ± 0,001) г количественно переносят в мерную колбу вместимостью

50.0    см³, приливают приблизительно 25 - 30 см³ этилового спирта и 0,10 см³ гидроксида натрия концентрации 0,10 моль/дм³, перемешивают. После полного растворения рутина объем колбы доводят до метки этиловым спиртом.

Основной раствор, содержащий 400 мг/дм³ рутина, является одновременно аттестованной смесью.

8.4.3    Раствор фонового электролита для определения кверцетина и рутина - раствор натрия фосфорнокислого двузамещенного концентрации (0,05 - 0,10) моль/дм³

На аналитических весах взвешивают навеску натрия фосфорнокислого 12-водного (Na₂HP0₄ - 12 Н₂0) массой (2,5 ± 0,5) г.

Навеску переносят в колбу вместимостью 100 см³, приливают 30 -50 см³ бидистиллированной воды, перемешивают, после полного растворения навески доводят объем колбы до метки бидистиллированной водой.

8.4.4    Раствор гидроксида натрия концентрации 0,10 моль/дм³

Навеску гидроксида натрия массой (0,40 ± 0,01) г переносят в мерную колбу вместимостью 100,0 см³, растворяют в небольшом количестве бидистиллированной воды и доводят объем до метки бидистиллированной водой.

8.5 Подготовка проб

8.5.1    Подготовка проб спиртовых экстрактов и настоек плодов, ягод, лекарственных трав для определения массовых концентраций кверцетина и рутина

В мерную колбу с притертой пробкой или пробирку вместимостью

10,0 см³ вносят 3,0 - 5,0 см³ пробы спиртового экстракта или настойки, взятой с точностью до 0,1 см³, приливают 2,0 см³ перегнанной соляной кислоты. Колбу или пробирку закрывают крышкой и помещают в комплекс пробоподготовки «Темос - Экспресс» или на водяную баню при температуре 80 °С - 100 °С на 30 мин, периодически приоткрывая пробку колбы или пробирки. Затем охлаждают содержимое колбы или пробирки до комнатной температуры и фильтруют через двойной бумажный фильтр («синяя лента»).

Полученный фильтрат является подготовленной пробой для вольт-амперометрического измерения пробы.

8.5.2    При анализе проб спиртовых экстрактов и настоек лекарственных трав, плодов и ягод «холостую» пробу делать не обязательно, так как кверцетин и рутин как загрязнение ни в реактивах, ни в воде не обнаружены. Посуда отмывается от кверцетина и рутина очень легко.

9 ВЫПОЛНЕНИЕ ИЗМЕРЕНИЙ

Выполнение измерений при анализе проб спиртовых экстрактов и настоек лекарственных трав, плодов и ягод для определения массовых концентраций кверцетина и рутина проводят на вольтамперометрическом анализаторе СТА по разделу 9.2 для кверцетина и по разделу 9.3 для рутина.

15

9.1 Процедура выполнения измерений включает следующие операции:

-    задают программу, включающую оптимальные электрохимические параметры ИВ измерений для анализатора СТА (таблица 2);

-    выполняют измерение в соответствии с Руководством по эксплуатации, Паспортом на анализатор СТА или Руководством пользователя.

Таблица 2 - Основные электрохимические параметры проведения измерений на анализаторе СТА

Параметры прибора Определяемый компонент Кверцетин Рутин -тип развертки потенциала Накопительная - электроды: рабочий сравнения СУЭ нас.х.с.э - фоновой электролит (0,05 - 0,10) моль/дм3 Na2HP04 х 12 НгО - потенциал накопления, В -0,30 - диапазон развертки потенциалов (от начала регистрации вольтамперной кривой до конечного напряжения развертки), В ОТ - 0,150 до +0,250 от-0,050 до +0,350 - скорость линейного изменения потенциала, мВ/с 15-25 5-7 - время электролиза, с 30 - потенциалы пиков, В (0,000 ± 0,050) (0,200 ±0,020) - раствор фонового электролита Раствор натрия фосфорнокислого двузамещенного концентрации (0,05 -0,10) моль/дм3

При выполнении ВА измерений массовой концентрации кверцетина или рутина в анализируемой пробе выполняют следующие операции:

-    проверку электрохимической ячейки на чистоту;

-    регистрацию вольтамперограммы - аналитического сигнала (I-,) кверцетина или рутина в растворе подготовленной пробы;

-    регистрацию вольтамперограмм - аналитического сигнала (1₂) кверцетина или рутина в растворе с введенной добавкой АС кверцетина или рутина.

Величины аналитических сигналов кверцетина или рутина пропорциональны массовой концентрации кверцетина или рутина.

9.2 Выполнение измерений с использованием комплекса аналитического вольтамперометрического ста для определения кверцетина

9.2.1 Проверка работы стеклоуглеродного электрода по аттестованным смесям кверцетина

Для этого проводят следующие операции: из команды «ВЫБОР» выбирают или создают файл «Кверцетин». Загружают или создают трассу анализа со следующими параметрами:

Ячейки 1 - Вкл. 2 - Вкл. 3 - Вкл.						Тип развертки
Этапы	Время	Потен циал	УФО	Газ	Меш.	Накопительная Шаг -4 Амплитуда - 0 Задержка 1 -15 Задержка 2 -10 Заполнение - 0 Потенциал- 0,0 1рез = 11 -12 График разв.
1. Подготовка раствора	180 с	0,000	Выкл.	Вкл.	Выкл.
2. Обработка раствора	20	0,250	Выкл.	Вкл.	Выкл.
3. Обработка электрода	0с Цикл мс 1: 0,000 0 2 : 0,000		Выкл.	Вкл.	Выкл.
4. Очистка электрода	0с	0,000	Выкл.	Вкл.	Выкл.
5. Накопление	30 с	-0,300	Выкл.	Вкл.	Выкл
6. Успокоение	Юс	-0,200	Отключено
7. Развертка	Скорость 15 мВ/с	+0,250	Отключено
Число циклов - 5 Множитель -1- Ю"10 Производная - Вкл. Циклическая- Выкл. Инверсия - Выкл. Реверс - Выкл. Фильтр - 50			Сплайн-разметка Выкл. Вычитание ФОНа 0%
Диапазоны поиска пиков элементов: Элемент KV Потенциал 0,050 Зона [+/- мВ] 70

Стаканчик с раствором фонового электролита (раствор натрия фосфорнокислого двузамещенного концентрации 0,05 - 0,10 моль/дм³) объемом 10,0 см³ помещают в измерительный блок анализатора.

Устанавливают электроды и трубочки для газа:

Стеклоуглеродный (рабочий индикаторный) - в гнездо РЭ, Хлорсеребряный (электрод сравнения) - в гнездо ХСЭ, Трубочки для подачи газа.

Поворачивают держатель электродов в нижнее положение (при этом электроды и трубочки для газа погружаются в раствор фонового электролита) и запускают команду «ФОН» (См. «Руководство пользователя» команда ФОН). К штуцеру "Ввод Газа" подводят источник газа с избыточным давлением не менее 1 атм.

Снимают три - пять вольтамперограмм (первые две исключают), проводят их обработку («УСРЕДНЕНИЕ»).

Проводят команду «ВЫХОД».

Переходят в команду «ПРОБЫ».

Вводят в стаканчики с раствором фонового электролита 0,01 см³ аттестованного раствора кверцетина концентраций 200 мг/дм³. Полученный раствор является контрольной пробой с содержанием кверцетина 0,20 мг/дм³ при объеме пробы 10,0 см³.

Добавки аттестованной смеси кверцетина, рекомендованной концентрации, вносят пипеточным дозатором или микропипеткой после регистрации вольтамперограмм пробы. Объем добавленной аттестованной смеси (Удое) не должен превышать 5 % от объема раствора измеряемой пробы в электрохимической ячейке. Величина аналитического сигнала кверцетина после введения добавки аттестованной смеси кверцетина должна увеличиваться в 1,5 - 2 раза.

Рекомендуемые добавки аттестованной смеси кверцетина известной концентрации приведены в таблице 3.

Таблица 3 - Рекомендуемые добавки аттестованных смесей кверцетина при анализе проб спиртовых экстрактов и настоек

Диапазон определяемых концентраций кверцетина, мг/дм3 25- 100 100-200 Время электролиза, с 30 30 Объем аликвоты, см3 0,01 -0,05 0,05-0,10 Концентрация аттестованной смеси для добавок, мг/дм3 200 200 Рекомендуемый объем добавок аттестованных смесей, см3 0,01 -0,02 0,02-0,03

Запускают команду «ПРОБА» (устанавливают курсор на «ПУСК/СТОП», щелкают левой клавишей мыши один раз), производят

съемку трех - пяти вольтамперных кривых, и проводят их обработку («УСРЕДНЕНИЕ») (См. «Руководство пользователя»). Переходят в команду «ДОБАВКА» (см. «Руководство пользователя» команда ДОБАВКА).

Вводят в стаканчик с пробой еще одну добавку кверцетина объемом 0,01 см³ концентраций 200 мг/дм³ и запускают команду «ДОБАВКА».

Пока комплекс проводит измерения, заполняют таблицу в графе «КОЛИЧЕСТВО».

Масса навески		0.00 [г]
Объем пробы		10,00 [ см" ]
Объем минерализата		10,00 [ см" ]
Объем аликвоты		10,00 [ см" ]
ДОБАВКА
Элемент	Объем добавки АС [см31		Концентрация АС Г мг/дм31
Кверцетин	0,01		200,0

После обработки вольтамперных кривых добавки («УСРЕДНЕНИЕ») смотрят «СОДЕРЖАНИЕ».

Если расхождение между результатами в ячейках составляет менее 10 %, электроды считают пригодными к работе. После этого приступают к измерению проб в такой же последовательности.

9.2.2 Измерения при анализе пробы на содержание кверцетина

Одновременно проводят анализ двух параллельных и одной резервной пробы в трех стаканчиках.

В чистые кварцевые стаканчики вносят аликвоты проб, подготовленных по 8.5.1 настоящей методики, и доводят объем пробы до 10 см³ фоновым электролитом. Рекомендуемые объемы аликвоты анализируемых проб приведены в таблице 3.

Запускают команду «ПРОБА» из колонки «ДЕЙСТВИЯ». Затем команду «ПУСК». После каждого цикла измерений на экран выводятся очередные вольтамперограммы характерного типа. В результате выполнения серии измерений на экране должно быть по 3-5 вольтамперограмм в каждом из окон вывода, соответствующим ячейкам 1, 2, 3. Невоспроизводимые вольтамперограммы исключают.

После измерения сигнала кверцетина в пробе выходят из меню действий по пробе и входят в меню "ДОБАВКА". Заполняют таблицу "КОЛИЧЕСТВО" в меню действий по «ДОБАВКЕ».

19

Например:

Масса навески 0,00 [г] Объем пробы 5,00 [см3] Объем минерализата 7,00 [см3] Объем аликвоты 0,05 [СМ3] Д [ОБАВКА Элемент Объем добавки АС [см31 Концентрация АС Г мг/дм31 Кверцетин 0,01 200

Вносят с помощью пипетки или дозатора добавку АС кверцетина с такими же параметрами в каждую ячейку и запускают измерение по добавке, нажав "ПУСК" в меню действий по «ДОБАВКЕ».

Если к этому моменту времени комплекс провел измерение и раз-метка кривых проведена, смотрят результаты анализа в таблице «СОДЕРЖАНИЕ» (см. «Руководство пользователя»).

После завершения всех измерений, исключения выпавших кривых и усреднения результатов - анализ пробы на содержание кверцетина завершен. Окончательный результат смотрят в «СОДЕРЖАНИЕ» и заносят в «АРХИВ» (см. «Руководство пользователя» ).

протокол I ярки в | трясся |реэзпьтяты|еопнчество|содержянне| вы коц 11 ИНФОРМАЦИЯ: I Рисунок 2. Вольтамперограмма определения кверцетина е фоновом электролите (1), в пробе (2) и в пробе с добавкой (3) стандартного раствора

ФЕРЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО, ПО ОБРАЗОВАНИЮ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВА ТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ

«ТОМСКИЙПОЛИТЕХНИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ» АККРЕДИТОВАННАЯ МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ СЛУЖБА ТПУ (аттестат об аккредитации № РОСС RU 01.00143-03 от 24.12.01)

ООО «ВНЕДРЕНЧЕСКАЯНАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННАЯ ФИРМА «ЮМХ»

СВИДЕТЕЛЬСТВО ОБ АТТЕСТАЦИИ МВИ № 08-47/166

Методика выполнения измерений массовой концентрации кверцетина и рутина методом вольтамперометрии, разработанная в Томском политехническом университете и ООО «ВНП Ф «ЮМХ» и регламентированная в МУ 08-47/166 (по реестру аккредитованной метрологической службы Томского политехнического университета)

СПИРТОВЫЕ ЭКСТРАКТЫ И НАСТОЙКИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ТРАВ_} ПЛОДОВ И

ЯГОД ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИЧЕСКИЙМЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАССОВЫХ

КОНЦЕНТРАЦИЙ КВЕРЦЕТИНА и РУТИНА

аттестована в соответствии с ГОСТ Р 8.563 (ГОСТ 8.010).

Аттестация осуществлена по результатам теоретического и экспериментального исследования МВИ.

В результате аттестации МВИ установлено, что данная МВИ соответствует предъявляемым к ней метрологическим требованиям и обладает следующими основными метрологическими характеристиками:

1 Диапазоны измерений, относительные значения показателей точности, повторяемости и воспроизводимости методики при доверительной вероятности Р=0,95

Наименование определяемого компонента Диапазон измеряемых концентраций, мг/дм3 или мг/кг Показатель повторяемости (среднеквадратическое отклонение повторяемости), Показатель воспроизводимости (среднеквадратическое отклонение воспроизводимо- «и), Показатель точности (границы, в которых находится погрешность методики), 5,% Кверцетин и рутин От 1,0 до 20,0 включ. 10 12 25

9.3 Выполнение измерений с использованием комплекса аналитического вольтамперометрического ста для определения рутина

9.3.1 Проверка работы стеклоуглеродного электрода по аттестованным смесям рутина

Для этого проводят следующие операции: из команды «ВЫБОР» выбирают или создают файл «Рутин».

Загружают или создают трассу анализа со следующими параметрами:

Ячейки 1 - Вкл. 2 - Вкл. 3 - Вкл.						Тип развертки
Этапы	Время	Потен циал	УФО	Газ	Меш.	Накопительная Шаг -4 Амплитуда - 0 Задержка 1 -25 Задержка 2 - 22 Заполнение - 0 Потенциал- 0,0 1 рез = 11 -12 График разв.
1. Подготовка раствора	180 с	0,000	Выкл.	Вкл.	Выкл.
2. Обработка раствора	20	0,350	Выкл.	Вкл.	Выкл.
3. Обработка электрода	0 с Цикл мс 1: 0,000 0 2 : 0,000		Выкл.	Вкл.	Выкл.
4. Очистка электрода	0с	0,000	Выкл.	Вкл.	Выкл.
5. Накопление	30 с	-0,300	Выкл.	Вкл.	Выкл
6. Успокоение	Юс	-0,050	Отключено
7. Развертка	Скорость 7 мВ/с	+0,350	Отключено
Число циклов - 5 Множитель -1- Ю"10 Производная - Вкл. Циклическая- Выкл. Инверсия - Выкл. Реверс - Выкл. Фильтр - 50			Сплайн-разметка Выкл. Вычитание ФОНа 0%
Диапазоны поиска пиков элементов: Элемент RU Потенциал 0,220 Зона [+/- мВ] 70

Стаканчик с раствором фонового электролита (раствора натрия фосфорнокислого двузамещенного концентрации 0,05 - 0,10 моль/дм³, объемом 10,0 см³ помещают в анализатор.

Устанавливают электроды и трубочки для подачи газа: Стеклоуглеродный (катод) - в гнездо РЭ,

Хлорсеребряный (анод) - в гнездо ХСЭ,

Трубочки для подачи газа.

Поворачивают держатель электродов в нижнее положение (при этом электроды и трубочки для газа погружаются в раствор фонового электролита) и запускают команду «ФОН» (См. «Руководство пользователя» ко-

21

ФЕР ТРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОВР АЗОВА ТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО

ОБРАЗОВАНИЯ

«ТОМСКИЙ ПОЛИТЕХНИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ» АККРЕДИТОВАННАЯ МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ СЛУЖБА ТПУ

(аттестат об аккредитации № РОСС RU 01,00143-03 от 24.12.01)

ООО «ВНЕДРЕНЧЕСКАЯ НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННАЯ ФИРМА «ЮМХ»

«УТВЕРЖДАЮ»    «УТВЕРЖДАЮ»

Проректор по HP ТПУ    Директор

(по реестру метрологической службы)

СПИРТОВЫЕ ЭКСТРАКТЫ И НАСТОЙКИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ТРАВ, ПЛОДОВ И ЯГОД.

ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИЧЕСКИЙМЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАССОВЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ КВЕРЦЕТИНА И РУТИНА

«СОГЛАСОВАНО»

Метролог метрологической службы ТПУ

Н.П.Пикула " 28 " декабря 2004 г

Томск- - 2004

5

1 НАЗНАЧЕНИЕ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

Настоящий документ (МУ 08-47/166) устанавливает методику выполнения измерений массовых концентрации флавоноидов (кверцетина и рутина) при анализе проб спиртовых экстрактов и настоек лекарственных трав, плодов и ягод методом вольтамперометрии (ВА).

Диапазон содержаний определяемых веществ (компонентов) составляет от 1,0 до 20,0 мг/дм³.

Если содержание веществ в анализируемой пробе выходит за верхнюю границу диапазона определяемых содержаний, допускается разбавление подготовленной к измерению пробы или уменьшения исходного объема анализируемой пробы.

2 НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ

В настоящей методике использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия

ГОСТ 2156-76 Натрий двууглекислый. Технические условия ГОСТ 3118-77 Кислота соляная. Технические условия ГОСТ 4172-76 Натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный. Технические условия

ГОСТ 5381-72 Редуктор. Технические условия ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 8625-77 Манометр. Технические условия ГОСТ 9293-74 (ИСО 2435-73) Азот газообразный и жидкий. Технические условия

ГОСТ 9736-68 Муфельная печь типа ПМ-8 или МР-64-0215. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 14261-77 Кислота соляная особой чистоты. Технические условия

ГОСТ 17435-72 Линейки чертежные. Технические условия ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия

7

ГОСТ 23932-90 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Общие технические условия.

ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 28165-89 Приборы и аппараты лабораторные из стекла. Аквадистилляторы. Испарители. Установки ректификационные. Общие технические требования

ГОСТ 29225-91 (ИСО 1775-75) Посуда и оборудование фарфоровые лабораторные. Общие требования и методы испытаний.

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 29228-91 (ИСО 835-2-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 2. Пипетки градуированные без установленного времени ожидания

ГОСТ Р 8.563-96 Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений

ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике.

3 СУЩНОСТЬ МЕТОДИКИ

Сущность методики состоит в переводе флавоноидов (кверцетина и рутина), содержащихся в пробах спиртовых экстрактов и настоек лекарственных трав, плодов и ягод, в свободное состояние путем гидролиза соляной кислотой, введенной в пробу, с последующим ВА определением массовой концентрации флавоноидов.

Общая схема анализа проб методом вольтамперометрии представлена на рисунке 1.

8

Рисунок 1. Основные этапы анализа проб спиртовых экстрактов плодов, ягод, лекарственных трав, спиртовых экстрактов и настоек лекарственных трав и ягод методом ВА

Метод ВА измерения основан на способности кверцетина и рутина окисляться на индикаторном стеклоуглеродном электроде при определенных потенциалах, характерных для данных органических веществ.

Процесс электрохимического накопления кверцетина и рутина проводят в растворе фонового электролита (раствор фосфата натрия двуза-мещенного) на индикаторном стеклоуглеродном электроде при потенциале, равном минус 0,3 В, а процесс растворения проводят в области потенциалов: от минус 0,150 В до 0,250 В (для кверцетина) (отн. нас. х.с.э.); от минус 0,050 В до 0,350 В (для рутина) (отн. нас. х.с.э.).

Потенциалы максимумов аналитических сигналов (пиков) соответственно находятся: при (0,00 ± 0,05) В для кверцетина (отн. нас. х.с.э.) и при (0,20 ± 0,02) В для рутина (отн. нас. х.с.э.) в зависимости от содержания определенных компонентов в анализируемой пробе.

Регистрация аналитических сигналов кверцетина и рутина на вольт-амперограммах проводится при линейно-меняющимся (в сторону положительных значений) потенциале с использованием вольтамперометриче-ского комплекса СТА (ООО «ИТМ» г.Томск и ООО «ВНПФ «ЮМХ», г.Томск).

Массовая концентрация кверцетина и рутина в пробе определяется методом добавок аттестованных смесей кверцетина и рутина соответственно.

9

4 ПРИПИСАННЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОГРЕШНОСТИ МЕТОДИКИ И РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ

4.1 Методика выполнения измерений массовых концентраций кверцетина и рутина в пробах спиртовых экстрактов и настоек плодов, ягод, лекарственных трав методом вольтамперометрии обеспечивает получение результатов измерений с погрешностью, не превышающей значений, приведенных в таблице 1.

Таблица 1 - Диапазоны измерений, относительные значения показателей точности, повторяемости и воспроизводимости методики при доверительной вероятности Р=0,95

Наименование определяемого компонента Диапазон измеряемых концентраций, мг/дм3 Показатель повторяемости (среднеквадратическое отклонение повторяемости), v J , % Показатель воспроиз водимости (среднеквад ратическое отклонение воспроизво димости), (Л aR\ S ^ J, % Показатель точности (границы, в которых находится погрешность методики), 5,% Кверцетин и рутин От 1,0 до 20,0 включ. 10 12 25

4.2 Значения показателя точности методики используют при:

-    оценке деятельности лабораторий на качество проведения испытаний;

-    оценке возможности использования результатов измерений при реализации методики выполнения измерений в конкретной лаборатории.

5 ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ, ОХРАНЫ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ ПРИ ВЫПОЛНЕНИИ ИЗМЕРЕНИЙ

5.1    Условия безопасного проведения работ

5.1.1    К работе с вольтамперометрическим анализатором, нагревательными приборами и химическими реактивами допускается персонал, изучивший инструкцию по эксплуатации прибора, правила работы с химическими реактивами и химической посудой.