Методика внесена в Государственный Реестр методик выполнения измерений, применяемых в сферах распространения государственного метрологического контроля и надзора

ФР.1.39.2001.00249

МУ 08-47/111

(по реестру метрологической службы ТПУ)

Определение содержания левомицетина и тетрациклина гидрохлорида в таблетках, капсулах и глазных каплях методом вольтамперометрии

Издание второе. С изменением №1

Томск

7.2    Посуда

7.2.1    Пипетки мерные лабораторные стеклянные 2-го класса точности вместимостью 0,50; 1,00; 2,00; 5,00; 10,0 см³ по ГОСТ 29227.

7.2.2    Посуда и оборудование, лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336 или посуда мерная лабораторная стеклянная 2-го класса точности по ГОСТ 1770: колбы наливные вместимостью 25,0; 50,0; 100,0; 1000 см³; цилиндры вместимостью 10,0; 25,0 см³; пробирки мерные вместимостью 10,0; 15,0 см³.

7.2.3    Кварцевые стаканчики вместимостью 20,0 -н 25,0 см³.

7.2.4    Колбы конические по ГОСТ 25336, вместимостью

100,0 см³ и 250,0 см³.

7.2.5    Палочки стеклянные по ГОСТ 21400.

7.2.6    Ступка фарфоровая по ГОСТ 29225.

7.2.7    Пестик фарфоровый по ГОСТ 29225.

7.3    Реактивы и материалы

7.3.1    Левомицетин (сухой порошок с содержанием основного вещества не менее 98,5%), соответствующий ФС 42-2786-91 [1].

7.3.2    Тетрациклина гидрохлорид (сухой порошок с содержанием основного вещества не менее 98,5%), соответствующий 663 ГФХ [2].

7.3.3    Натрия цитрат по ГОСТ 22280.

7.3.4    Натрия гидроксид по ГОСТ 4328 хч.

7.3.5    Спирт этиловый высшей очистки по ГОСТ 18300.

7.3.6    Калия хлорид по [7].

7.3.7    Аммоний сернокислый по ГОСТ 3769 хч.

7.3.8    Азот газообразный по ГОСТ 9293 или другой инертный газ (аргон, гелий) с содержанием кислорода не более 0,03%.

7.3.9    Вода бидистиллированная по [8].

7.3.10    Паста алмазная ACM 2,3 по ГОСТ 25593.

7.3.11    Бумага индикаторная универсальная (pH 1-И4).

7.3.12    Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026 или фильтры обеззоленные (синяя или зеленая лента).

7.3.13    Бумага масштабно-координатная

Все реактивы должны быть квалификации осч или хч.

8 ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ ИЗМЕРЕНИЙ

8.1 Подготовка приборов к работе

Подготовку и проверку полярографа или аналитического вольт-амперометрического комплекса СТА (см. Приложение Б), самописца и цифрового вольтметра проводят в соответствии с инструкцией по эксплуатации и техническому описанию соответствующего прибора.

8.1.1 Устанавливают следующий режим работы серийного поля-рографа ПУ-1 в режиме дифференцирования:

-    двухэлектродную систему измерений;

-    постояннотоковый режим регистрации вольтамперограмм с последующим дифференцированием;

-    катодную развертку потенциала.

	левомицетин	тетрациклин
Поляризующее напряжение для	-0,45	-0,05
электронакопления, В
Потенциал начала регистрации	-0,45	-0,05
вольтамперной кривой, В
Конечное напряжение развертки, В	-0,95	+0,90
Потенциал очистки электрода, В	-	-
Время очистки, с	-	-
Скорость линейного изменения по	10...25	10...25
тенциала, мВ/с
Чувствительность прибора при регистрации вольтамперограммы (в за	1.10'8 ... 5.10 8	5.10 10 ...
висимости от содержания вещества		1.10'9
в анализируемой пробе и поверхно
сти электрода), А/мм
Время электролиза, с	30	10...20

8.2 Подготовка лабораторной посуды

8.2.1    Новую лабораторную стеклянную посуду, кварцевые стаканчики, сменные наконечники дозаторов, пипетки моют с содой, промывают многократно бидистиллированной водой и высушивают. Стеклянную посуду и кварцевые стаканчики высушивают в сушильном шкафу при температуре 150°С в течение 30 мин.

8.2.2    Проверку стаканчиков для анализа на чистоту проводят путем регистрации вольтамперограмм раствора фонового электролита по 9.1 после многократного ополаскивания их бидистиллированной водой и фоновым электролитом.

Посуда считается чистой, когда получают аналитические сигналы органического соединения в фоновом электролите, равные или близкие к нулю (не более 2 мм при чувствительности прибора 5 10"^1ОА/мм).

8.3 Приготовление и проверка работы индикаторного электрода и электрода сравнения

8.3.1 Подготовка индикаторного ртутно-пленочного электрода для определения левомицетина

Индикаторный ртутно-пленочный электрод представляет собой фторопластовый стержень с запрессованной серебряной проволокой, площадь поверхности которой составляет около 15,0 мм² (поставляется потребителю в готовом виде). Для подготовки электрода к работе необходимо нанести на поверхность серебра пленку ртути. Покрытие производят путем опускания рабочей части электрода (серебряной проволоки) в металлическую ртуть на 2 - 3 с, затем ртуть растирают фильтровальной бумагой для равномерного распределения по поверхности серебра. В том случае, если на конце серебряной проволоки "свисает" избыточное количество ртути в виде капли, ее необходимо удалить стряхиванием в бюкс с ртутью. Электрод промывают биди-стиллированной водой. Процедуру амальгамирования рабочей поверхности электрода повторяют при появлении незаамальгамирован-ных участков на поверхности электрода. Ртутно-пленочный электрод хранят, опустив рабочую поверхность в стаканчик с бидистиллирован-ной водой.

8.3.2 Подготовка индикаторного стеклоуглеродного электрода для определения тетрациклина

Индикаторный стеклоуглеродный электрод представляет собой стеклоуглеродный стержень диаметром 1,5-2 мм, запрессованный во фторопластовый держатель (диаметром 5-6 мм), так чтобы длина выступающей части стержня (рабочей поверхности) стекпоуглерода составляла 8 - 12 мм.

Контакт электрода с прибором осуществляется с помощью металлического токоподвода и стандартного разъема. Электрод поставляется потребителю в готовом виде.

Для подготовки электрода к работе необходимо отполировать его алмазной пастой до зеркального блеска, обезжирить этиловым спиртом и промыть бидистиллированной водой.

Для повышения чувствительности и воспроизводимости измерений стеклоуглеродные электроды подвергают электрохимической обработке. Для этого стеклоуглеродный электрод выдерживается в электрохимической ячейке в растворе натрия гидроксида концентрации 0,1 моль/дм³ при потенциале (+2,0+0,05) В в течение 15 - 30 с. Электрохимически обработанный электрод хранят на воздухе. Электрохимическая обработка проводится по мере необходимости (при снижении воспроизводимости измерений), но не реже одного раза в месяц.

8.3.3 Подготовка к работе электрода сравнения

В качестве электрода сравнения используют хлоридсеребряный электрод. Новый хлоридсеребряный электрод сравнения заполняют насыщенным раствором хлорида калия и выдерживают не менее 48 ч для установления равновесного значения потенциала. После проведения анализов электрод хранят, погрузив его в насыщенный раствор хлорида калия.

Проверку работы индикаторных электродов и электрода сравнения проводят в соответствии с 9.1 настоящей методики.

8.4 Приготовление растворов при определении левоми-цетина

8.4.1    Фоновый электролит - водный раствор аммония сернокислого ((NH₄)₂S0₄) концентрации 0,10 моль/дм³:

на аналитических весах взвешивают навеску 13,20 г с точностью 0,01 г аммония сернокислого и помещают в колбу вместимостью

1000.0    см³, растворяют в небольшом количестве бидистиллированной воды и доводят до метки бидистиллированной водой.

8.4.2    Основным раствором (ОР) левомицетина является рабочий спиртовый стандартный раствор левомицетина концентрации

1000.0    мг/дм³, приготовленный из сухого порошка левомицетина, удовлетворяющего требованию фармакопейной статьи 42-2786-91 [1].

Основной раствор, содержащий 1000,0 мг/дм³ левомицетина, готовят следующим образом: на аналитических весах взвешивают навеску (0,1000+0,0001) г левомицетина, переносят в колбу вместимостью 100,0 см³, растворяют в небольшом количестве этилового спирта и доводят до метки этиловым спиртом.

Основной раствор левомицетина концентрации 1000,0 мг/дм³ устойчив в течение трех месяцев при хранении под темным колпаком в холодильнике при температуре 2    5    °С.

8.4.3    Аттестованные смеси серий АС-1, АС-2 с содержанием левомицетина 100,0; 10,0 мг/дм³ готовят соответствующим разбавлением исходных растворов в мерных колбах или мерных пробирках этиловым спиртом, согласно таблице 2.

Таблица2 - Приготовление аттестованных смесей левомицетина

Концентрация исходного раствора для приготовления АС, мг/дм3 Отбираемый объем, см3 Объем мерной посуды, см3 Концентрация приготовленного раствора АС, мг/дм3 Код полученного раствора левомицетина (АС) 1000,0 2,50 25,0 100,0 АС-1 100,0 2,50 25,0 10,0 АС-2

АС-1 устойчив в течение 30 дней при хранении под темным колпаком в холодильнике при температуре 2    5    °С;    АС-2    -    устойчив    в    те

чение одного дня.

8.4.4 При наличии ГСО растворов определяемого вещества (ле-вомицетина) основные растворы готовят из соответствующего ГСО, следуя указаниям инструкции по приготовлению раствора.

8.5 Приготовление растворов при определении тетрациклина

8.5.1    Фоновый электролит - водный раствор натрия лимоннокислого (Na₃C₆H₅0₇) концентрации 0,10 моль/дм³

На аналитических весах взвешивают навеску 35,71 г с точностью 0,01 г натрия лимоннокислого и помещают в колбу вместимостью

1000.0    см³, растворяют в небольшом количестве бидистиллированной воды и доводят до метки бидистиллированной водой.

8.5.2    Основным раствором (ОР) тетрациклина гидрохлорида является рабочий спиртовый стандартный раствор тетрациклина гидрохлорида концентрации 1000,0 мг/дм³, приготовленный из сухого порошка тетрациклина гидрохлорида, удовлетворяющего требованию фармакопейной статьи 663 ГФХ [2].

Основной раствор, содержащий 1000,0 мг/дм³ тетрациклина гидрохлорида, готовят следующим образом: на аналитических весах взвешивают навеску (0,1000+0,0001) г тетрациклина гидрохлорида, переносят в колбу вместимостью 100,0 см³, растворяют в небольшом количестве этилового спирта и доводят до метки этиловым спиртом.

Основной раствор тетрациклина гидрохлорида концентрации

1000.0    мг/дм³ устойчив в течение трех месяцев при хранении под темным колпаком в холодильнике при температуре 2 н- 5 °С.

8.5.3    Аттестованные смеси серий АС-1 с содержанием тетрациклина гидрохлорида 100,0 мг/дм³ готовят соответствующим разбавлением исходного раствора этиловым спиртом в мерных колбах.

8.5.4    При наличии ГСО растворов определяемого вещества (тетрациклина гидрохлорида) основные растворы готовят из соответствующего ГСО по инструкции по приготовлению раствора.

8.5.5    Раствор натрия гидроксида концентрации 0,1 моль/дм³

На аналитических весах взвешивают навеску 4,0 г с точностью 0,1 г натрия гидроксида и помещают в колбу вместимостью 1000,0 см³, растворяют в небольшом количестве бидистиллированной воды и доводят до метки бидистиллированной водой.

15

8.6 Подготовка проб

8.6.1    Подготовка проб глазных капель, содержащих лево-мицетин

Вскрывают флакон с глазными каплями. Пробу объёмом 0,20 см³, взятую стеклянной пипеткой, вносят в чистый кварцевый стаканчик, подготовленный по 9.1, и добавляют 9,8 см³ бидистиллированной воды. Полученный раствор перемешивают стеклянной палочкой.

Для анализа берут аликвоту полученного раствора объемом 0,20 см³.

8.6.2    Подготовка проб таблеток, содержащих левомице-

тин

Взвешивают на аналитических весах 5 таблеток левомицетина с точностью до 0,001 г, полученную массу делят на 5 и получают среднюю массу одной таблетки (т-). Все 5 таблеток растирают в ступке до однородного состояния. Из этой массы берут навеску, равную 0,090 г, взятую с точностью до 0,001 г (т₂), помещают её в мерную колбу вместимостью 100,0 см³, растворяют в 5,0 см³ этилового спирта и доводят объем до метки бидистиллированной водой. Полученный раствор объёмом 0,2 см³, взятый стеклянной пипеткой, вносят в чистый кварцевый стаканчик, подготовленный по 9.1, и добавляют 5,8 см³ бидистиллированной воды.

Для анализа берут аликвоту полученного раствора объемом 0,3 см³.

8.6.3    Подготовка проб таблеток тетрациклина гидрохлорида, покрытых оболочкой

Для анализа берут 5-10 таблеток. С таблеток снимают механическим путем окрашенное пленочное покрытие. Очищенные таблетки взвешивают на аналитических весах с точностью до 0,001 г и тщательно растирают в фарфоровой ступке фарфоровым пестиком.

Берут навеску пробы таблеток массой 0,0500 г с точностью до 0,0001 г, количественно переносят ее в мерную колбу вместимостью

50,0 см³, растворяют в небольшом количестве этилового спирта, доводят объем до метки этиловым спиртом и перемешивают. В случае, если вспомогательные вещества, вводимые в состав таблеток (стеарат кальция, тальк), не растворяется полностью, то раствору пробы дают отстояться.

Для ИВ-измерений с помощью мерной пипетки или дозатора берут аликвоту раствора пробы (надосадочной жидкости) объемом 0,1 -0,2 см³.

8.6.4 Подготовка проб капсул тетрациклина гидрохлорида

Для анализа берут 5 капсул тетрациклина гидрохлорида, желатиновое покрытие каждой капсулы вскрывают, содержимое всех пяти капсул взвешивают на аналитических весах с точностью до 0,001 г.

Берут навеску пробы капсул массой 0,050 г с точностью до 0,001 г, количественно переносят её в мерную колбу вместимостью 50,0 см³, растворяют в небольшом количестве этилового спирта и доводят объем до метки этиловым спиртом.

Для анализа берется аликвота раствора пробы объемом 0,01 -0,02 см³.

8.1.1, 8.3.3, 8.5.4, 8.6.3 (Измененная редакция, Изм. №1)

9 ВЫПОЛНЕНИЕ ИЗМЕРЕНИЙ

При проведении ИВ-измерений лекарственных препаратов для определения массовой концентрации левомицетина методом ВА необходимо выполнять следующие операции на примере серийных поля-рографов ПУ-1 и др.:

9.1 ВА измерения при определении массовой концентрации левомицетина

9.1.1    Проверка стаканчиков, раствора фонового электролита и электродов на чистоту

9.1.1.1    В приготовленный по 8.2 кварцевый стаканчик вместимостью 15,0 + 25,0 см³ с помощью пипетки вносят 10,0 см³ раствора фонового электролита аммония сернокислого концентрации 0,10 моль/дм³. Стаканчик с полученным фоновым электролитом помещают в электрохимическую ячейку.

9.1.1.2    Опускают в раствор индикаторный электрод и электрод сравнения, подключают их к соответствующим клеммам прибора и устанавливают потенциал -0,45 В.

9.1.1.3    Устанавливают чувствительность прибора 5-10"¹⁰....

1-10"⁹А/мм и включают режим дифференцирования. Включают газ и продувают раствор фонового электролита при потенциале - 1,00 В в течение 300 с.

9.1.1.4    Не отключая газ проводят процесс электронакопления при потенциале -0,45 В в течение 30 с.

9.1.1.5    По окончании электролиза отключают газ и через 20 с начинают регистрацию вольтамперограммы в диапазоне потенциалов от

17

- 0,45 В до - 0,95 В. Потенциал катодного пика левомицетина находится в диапазоне от - 0,60 В до - 0,70 В.

9.1.1.6    Останавливают потенциал при -1,00 В и проводят дорас-

творение примесей с поверхности электрода при перемешивании раствора в течение 10    15 с.

9.1.1.7    Операции по 9.1.1.4 ... 9.1.1.6 повторяют два-три раза.

9.1.1.8    При наличии на вольтамперограмме сигнала органиче

ского вещества менее 2 мм стаканчик, фоновый электролит и индикаторный электрод считают готовыми к проведению анализа. В противном случае проводят очистку электрода или стаканчика и повторяют операции по 9.1.1.1.....9.1.1.7.

9.1.1.9    Отключают электроды от прибора, вынимают стаканчик с раствором из ячейки или датчика и выливают содержимое стаканчика в сосуд для слива.

9.1.2 Анализ пробы

9.1.2.1    В стаканчик с фоновым раствором, подготовленный к проведению измерений по 9.1, помещают аликвоту подготовленного раствора объемом 0,2 см³ (для глазных капель) и 0,3 см³ (для таблеток) анализируемой пробы, подготовленной к измерению по 8.5 и 8.6.

9.1.2.2    Помещают стаканчик с анализируемым раствором в электрохимическую ячейку или датчик.

9.1.2.3    Повторяют последовательно операции по 9.1.2...9.1.6.

9.1.2.4    Если высота катодного пика левомицетина (потенциал пика (-0,65±0,05) В) будут превышать 200 мм, то необходимо изменить чувствительность прибора (загрубить). Если высота катодного пика вещества будет меньше 5 мм, то необходимо увеличить чувствительность прибора.

9.1.2.5    Операции по 9.1.1.4...9.1.1.6 повторяют три раза.

9.1.2.6    Измеряют высоты катодных пиков определяемого вещества.

9.1.2.7    В стаканчик с анализируемым раствором с помощью пипетки или дозатора вносят добавку аттестованной смеси левомицетина в таком объеме, чтобы высота пика на вольтамперной кривой увеличилась примерно в два раза по сравнению с первоначальной.

Добавку вносят в малом объеме, чтобы предотвратить изменение концентрации раствора фонового раствора. Рекомендуемые добавки аттестованных смесей известной концентрации и чувствительность прибора приведены в таблице 3.

Таблица 3 - Рекомендуемые добавки аттестованных смесей левомицетина и чувствительность прибора при регистрации вольтам-перограмм при анализе проб лекарственных препаратов

Диапазон определяемых концентраций левомицетина 0,24...0,35 % масс 0,35...0,55 % масс 230,0...300, 0 мг 300,0...55 0 мг Концентрация АС левомицетина для добавок, мг/дм3 100,0 100,0 100,0 100,0 Рекомендуемый объем добавки АС левомицетина, см3 0,02...0,04 0,03...0,04 0,04...0,05 0,05...0,06 Чувствительность прибора, А/мм 1-10'8 1-10'8 5 10 е 5 10 е

9.1.2.8    Проводят электролиз и регистрацию вольтамперограмм по 9.1.4...9.1.6 три раза.

9.1.2.9    Измеряют высоты катодных пиков левомицетина в пробе с добавкой АС.

9.1.2.10    Выливают содержимое стаканчика в сосуд для слива.

9.1.2.11    Стаканчик подготавливают к последующему анализу

по 8.2.

9.1.2.12    Операции по 9.1.2.1 ...9.1.2.12 проводят для каждой из параллельных анализируемых проб в одинаковых условиях.

9.2 ИВ измерения при определении массовой концентрации тетрациклина

При проведении анализов лекарственных препаратов для определения массовой концентрации тетрациклина гидрохлорида методом ВА необходимо выполнять следующие операции на примере серийных полярографов ПУ-1 и др.:

9.2.1 Проверка стаканчиков, раствора фонового электролита и электрода на чистоту

9.2.1.1    В приготовленный по 8.2 кварцевый стаканчик вместимостью 15,0 + 25,0 см³ с помощью пипетки вносят 10,0 см³ раствора фонового электролита (натрия лимоннокислого концентрации 0,10 моль/дм³). Стаканчик с полученным фоновым электролитом помещают в электрохимическую ячейку.

9.2.1.2    Опускают в раствор индикаторный электрод и электрод сравнения, подключают их к соответствующим клеммам прибора, устанавливают потенциал -0,05 В.

19

9.2.1.3    Устанавливают чувствительность прибора 5-10 .... 1-10"⁹А/мм и включают режим дифференцирования. Включают газ и продувают раствор фонового электролита без наложения потенциала в течение 300 с.

9.2.1.4    Не отключая газ проводят процесс электронакопления при потенциале -0,05 В в течение 15 с при перемешивании раствора.

9.2.1.5    По окончании электролиза отключают газ и через 20 с начинают регистрацию вольтамперограммы в диапазоне потенциалов от -0,05 до +0,95 В. Потенциал анодного пика тетрациклина гидрохлорида находится в диапазоне от +0,65 В до +0,85 В.

9.2.1.6    Операции по 9.2.1.4...9.2.1.5 повторяют два-три раза.

9.2.1.7    При наличии на вольтамперограмме сигнала органического вещества менее 2 мм стаканчик, фоновый электролит и индикаторный электрод считают готовыми к проведению анализа. В противном случае проводят очистку электрода или стаканчика и повторяют операции по 9.2.1.1 ...9.2.1.6.

9.2.1.8    Отключают электроды от прибора, вынимают стаканчик с раствором из ячейки или датчика и выливают содержимое стаканчика в сосуд для слива.

9.2.2 Анализ пробы

9.2.2.1    В стаканчик с фоновым раствором, подготовленный к проведению измерений по 9.2.1, помещают аликвоту подготовленного раствора объемом 0,01 - 0,02 см³ анализируемой пробы, подготовленной к измерению по 8.6.1, 8.6.2.

9.2.2.2    Помещают стаканчик с анализируемым раствором в электрохимическую ячейку или датчик.

9.2.2.3    Повторяют последовательно операции по 9.1.2.. 9.1.5.

9.2.2.4    Если высота анодного пика тетрациклина гидрохлорида (потенциал пика (+0,75 ± 0,10) В) будут превышать 50,0 мм, то необходимо изменить чувствительность прибора (загрубить). Если высота анодного пика вещества будет меньше 5 мм, то необходимо увеличить чувствительность прибора.

9.2.2.5    Операции по 9.2.1.4...9.2.1.5 повторяют три раза.

9.2.2.6    Измеряют высоты анодных пиков определяемого вещества.

9.2.2.7    В стаканчик с анализируемым раствором с помощью пипетки или дозатора вносят добавку аттестованной смеси тетрациклина гидрохлорида в таком объеме, чтобы высота пика на вольтамперной кривой увеличилась примерно в два раза по сравнению с первоначальной.

Добавку вносят в малом объеме, чтобы предотвратить изменение концентрации раствора фонового раствора. Рекомендуемые добавки

20

ТОМСКИЙ ПОЛИТЕХНИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ВНЕДРЕНЧЕСКАЯ НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННАЯ ФИРМА “ЮМХ" АККРЕДИТОВАННАЯ МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ СЛУЖБА ТПУ

(аттестат об аккредитации № РОСС RU 01.00143-03 от 24.12.01)

СВИДЕТЕЛЬСТВО ОБ АТТЕСТАЦИИ МВИ

№08-47/111 А

(взамен 08-47/111)

Методика выполнения измерений массовой концентрации левомицетина и тетрациклина методом инверсионной вольтамперометрии, разработанная в Томском политехническом университете и ООО «ВНП Ф «ЮМХ» и регламентированная в МУ 08-47/111 (по реестру аккредитованной метрологической службы Томского политехнического университета) с Изменением №1

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ЛЕВОМИЦЕТИНА И ТЕТРАЦИКЛИНА ГИДРОХЛОРИДА В ТАБЛЕТКАХ, КАПСУЛАХ И ГЛАЗНЫХ КАПЛЯХ МЕТОДОМ ИНВЕРСИОННОЙ ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИИ

аттестована в соответствии с ГОСТ Р 8.563 (ГОСТ 8.010).

Аттестация осуществлена по результатам теоретического и экспериментального исследования МВИ.

В результате аттестации МВИ установлено, что данная МВИ соответствует предъявляемым к ней метрологическим требованиям и обладает следующими основными метрологическими характеристиками:

1 Диапазоны измерений, относительные значения показателей точности, повторяемости и воспроизводимости методики при доверительной вероятности

Р=0,95

Наименование определяемого компонента	Диапазон определяемых концентраций	Показатель повторяемости (среднеквадратическое отклонение повторяемости),	Показатель воспроизводимости (среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), %	Показатель точности (границы, в которых находится погрешность методики), 5,%
Левомицетин (хлорамфени- кол)	От 230 до 550 мг, включ.	3	4	9
Левомицетин (хлорамфени- кол)	От 0,24 до 0,55,% (массовая доля) включ.	3	4	9
Тетрациклина гидрохлорид	От 40 до 300, мг включ.	4	6	12

аттестованных смесей известной концентрации и чувствительность прибора приведены в таблице 4.

Т а б л и ца 4 - Рекомендуемые добавки аттестованных смесей тетрациклина гидрохлорида и чувствительность прибора при регистрации вольтамперограмм при анализе проб лекарственных препаратов

Диапазон определяемых концентраций тетрациклина гидрохлорида, мг/габ 40...100 100...300 Время электролиза, с 15 15 Навеска, г 0,05 0,05 Объем аликвоты раствора пробы, см3 0,02...0,04 0,01...0,02 Концентрация АС тетрациклина гидрохлорида для добавок, мг/дм3 1000 1000 Рекомендуемый объем добавки АС тетрациклина гидрохлорида, см3 0,01 0,01...0,02 Чувствительность прибора, А/мм 5- IQ'10 1 * 10'9

9.2.2.8    Проводят электронакопление и регистрацию вольтамперограмм по 9.2.1.4, 9.2.1.5 три раза.

9.2.2.9    Измеряют высоты анодных пиков тетрациклина гидрохлорида в пробе с добавкой АС.

9.2.2.10    Выливают содержимое стаканчика в сосуд для слива.

9.2.2.11    Стаканчик промывают бидистиллированной водой, затем протирают влажным фильтром, добавив небольшое количество питьевой соды, промывают бидистиллированной водой и фоновым электролитом.

9.2.2.12    Операции по 9.2.2.1 ...9.2.2.11 проводят для каждой из параллельных анализируемых проб в одинаковых условиях.

9.2.2.13    При выполнении измерений по настоящей методике рекомендуется ведение записей условий анализа в рабочем журнале и регистрация вольтамперограммы на ленте самописца с указанием пробы и условий анализа согласно таблице 5.

Таблица5 - Рекомендуемая форма записи результатов измерений при анализе проб

Опреде ляемый компо нент Анализируемая проба (характеристика, номер, дата...) Условия измерений (чувствительность; время электролиза ; объем аликвоты) Высота пика вещества в пробе, мм, или ток, А Добавка АС: Уд, см3, Сдоб мг/дм3. Высота пика вещества после добавки АС, мм, или ток, А

1 НАЗНАЧЕНИЕ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

Методика предназначена для анализа проб лекарственных препаратов (глазные капли, таблетки, капсулы) и устанавливает порядок определения массовых содержаний левомицетина (хлорамфеникола) и тетрациклина гидрохлорида методом дифференциальной вольтамперометрии (ВА).

Методика применяется для определения массовых концентраций: левомицетина в пробах глазных капель в диапазоне от 0,24 до 0,55 % (массовая доля) и пробах таблеток в диапазоне от 230 до 550 мг [1].

тетрациклина гидрохлорида в пробах таблеток и капсул в диапазоне от 40 до 300 мг [2,3].

2 НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ

В настоящей методике использованы ссылки на следующие стандарты:

Методики выполнения измерений ССБТ. Пожарная безопасность. Общие требования ССБТ. Элекгробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ССБТ. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия Натрий двууглекислый. Технические условия Манометры, вакуумметры, мановакуумметры, напо-ромеры, тягомеры и тягонапоромеры. Общие технические условия

Редуктор. Технические условия

Аммоний сернокислый. Технические условия

Натрия гидроокись. Технические условия

Вода дистиллированная. Технические условия

Манометр. Технические условия

Азот газообразный и жидкий. Технические условия

Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

Машины, приборы и другие технические изделия. Исполнения для различных климатических районов. Категории, условия эксплуатации, хранения и транспортирования в части воздействия климатических факторов внешней среды ¹

Линейки чертежные. Технические условия

Спирт этиловый ректификованный технический.

Технические условия

Стекло химико-лабораторное. Технические требования. Методы испытаний

Натрий лимоннокислый 5,5-водный. Технические условия

Весы лабораторные. Общие технические требования

Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры Пасты алмазные. Технические условия Посуда и оборудование фарфоровые лабораторные. Общие требования и методы испытаний.

Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования 1-2002 Точность(правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения Точность(правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

бочих стандартных образцов используют серийное лекарственное вещество левомицетин, соответствующее требованию фармакопейной статьи [1].

Метод ВА измерения тетрациклина, получающегося при гидролизе тетрациклина гидрохлорида, основан на его способности окисляться на индикаторном стеклоуглеродном электроде в фоновом электролите (раствор цитрата натрия    концентрации

0,1 моль/дм³) в области потенциалов от +0,65 В до +0,80 В относительно насыщенного хлоридсеребряного электрода. Содержание тетрациклина гидрохлорида определяют по высоте анодного пика, регистрируемого при потенциале (+0,75±0,10) В (относительно нас. хсэ) в дифференциальном режиме съемки вольт-амперограмм. Массовая концентрация тетрациклина гидрохлорида определяется методом стандартных добавок аттестованных смесей.

В качестве рабочих стандартных образцов используют серийное лекарственное вещество тетрациклина гидрохлорид, соответствующее требованию фармакопейной статьи [2].

4.1 Методика выполнения измерений содержания левомицетина и тетрациклина в пробах лекарственных препаратов методом инверсионной вольтамперометрии обеспечивает получение результатов измерений с погрешностью, не превышающей значений, приведенных в таблице 1А

Таблица 1А - Диапазоны измерений, относительные значения показателей точности, повторяемости и воспроизводимости методики при доверительной вероятности Р=0,95

Наименование определяемого компонента Диапазон определяемых концентраций Показатель повторяемости (среднеквадратическое отклонение повторяемости), лл v J, % Показатель воспроизводимости (среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), Js) V /, % Показатель точности (границы, в которых находится погрешность методики), 8,% Левомицетин (хлорамфени- кол) От 230 до 550 мг, в ключ. 3 4 9 Левомицетин (хлорамфени- кол) От 0,24 до 0,55,% (массовая доля) вкпюч. 3 4 9 Тетрациклина гидрохлорид От 40 до 300, мг включ. 4 6 12

4.2 Значения показателя точности методики используют при:

-    оценке деятельности лабораторий на качество проведения испытаний;

-    оценке возможности использования результатов измерений при реализации методики выполнения измерений в конкретной лаборатории.

(Измененная редакция, Изм.№1)

Таблица 1 (Исключена, Изм.№1)

Таблица 1А (Введена дополнительно, Изм.№1)

5 ТРЕБОВАНИЯ К ВЫПОЛНЕНИЮ ИЗМЕРЕНИЙ

5.1 Условия безопасного проведения работ

5.1.1    При выполнении анализов необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами.

5.1.2    Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019.

5.1.3    Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

5.2 Требования к квалификации операторов

Измерения может проводить химик-аналитик, владеющий техникой вольтамперометрического анализа и изучивший инструкцию по эксплуатации используемой аппаратуры.

5.3 Условия выполнения измерений

Измерения проводят в нормальных лабораторных условиях:

•    Температура окружающего воздуха (25 + 10) °С;

• Атмосферное давление    (97 + 10)    кПа;

• Относительная влажность    (65 + 15) %;

• Частота переменного тока    (50 + 5) Гц;

•    Напряжение в сети    (220    +10) В.

6 ОТБОР И ХРАНЕНИЕ ПРОБ

Метод отбора проб лекарственных препаратов для анализа на содержание тетрациклина и левомицетина проводят в соответствии с требованиями фармакопейных статей [1,2,3].

Пробы лекарственных препаратов на содержание тетрациклина анализируют в течение рабочего дня. Подготовленные пробы таблеток (спиртовые растворы) могут храниться в холодильнике при температуре 4 - 6 °С в течение месяца.

Пробы лекарственных препаратов на содержание левомицетина анализируют в течение рабочего дня.

(Измененная редакция, Изм. №1)

9

7 СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, ВСПОМОГАТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ, ПОСУДА, РЕАКТИВЫ И МАТЕРИАЛЫ

При проведении количественного химического анализа применяют следующие средства измерений, вспомогательное оборудование, посуду, материалы и реактивы:

7.1    Средства измерений и вспомогательное оборудование в зависимости от выбранного варианта

7.1.1    Полярограф (ПУ или другой) в комплекте с двухкоординатным самописцем и цифровым вольтметром типа Ф-203 [4];

- или комплекс СТА аналитический вольтамперометрический [5] в комплекте с IBM-совместимым компьютером (Порядок работы приведен в Приложении В);

Допускается использовать другое оборудование и приборы, позволяющие воспроизводить технические и метрологические характеристики, указанные в данной методике анализа.

7.1.2    Электрохимическая ячейка (или электрохимический датчик) в состав которой входят:

-    электроды:

*    индикаторный электрод для определения левомицетина.

ртутно-пленочный с рабочей поверхностью 15-20 мм²;

*    индикаторный электрод для определения тетрациклина.

стеклоуглеродный с рабочей поверхностью 60- 100 мм²;

*    электрод сравнения - насыщенный хлоридсеребрянный (нас. хсэ) с сопротивлением не более 3,0 кОм.

-    сменные стаканчики из кварцевого стекла вместимостью

15,0ч-25,0 см³;

-    трубка для подвода инертного газа с целью удаления растворенного

кислорода и перемешивания раствора.

7.1.3    Редуктор по ГОСТ 5381 с манометром (250 ± 1) атм. по ГОСТ 2405.

7.1.4    Весы лабораторные аналитические общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.

7.1.5    Дозаторы пипеточные емкостью 0,01-И ,00 см³ (10-И000 мкл) с дискретностью установки доз 1 или 2 мкл.

7.1.6    Шланги полиэтиленовые для подвода газа к ячейке.

7.1.7    Аппарат для бидистилляции воды (стеклянный) АСД-4 по ГОСТ 15150 или [6].

7.1.8    Линейка мерительная по ГОСТ 17435.

7.1.9    Шкаф сушильный, обеспечивающий поддержание заданного температурного режима от 40 °С до 150 °С с погрешностью ± 5°С.

10

1