Методика внесена в Государственный Реестр методик выполнения измерений, применяемых в сферах распространения государственного метрологического контроля и надзора

ФР.1.31.2001.00247

МУ 08-47/088

(по реестру аккредитованной метрологической службы)

ВИТАМИНИЗИРОВАННЫЕ КОРМА И ПОДКОРМКИ.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАССОВЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ ВИТАМИНА В₂ МЕТОДОМ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ВОЛЬ ТАМПЕРОМЕТРИИ

Издание второе. С изменением №1

Томск

•    Температура окружающего воздуха    (25 ± 10) °С;

•    Атмосферное давление    (97 ± 10) кПа;

•    Относительная влажность    (65 ± 15) %;

•    Частота переменного тока    (50 ±5) Гц;

•    Напряжение в сети    (220    ± 10) В.

6 ОТБОР И ХРАНЕНИЕ ПРОБ

Отбор проб проводят согласно требованиям по ГОСТ 10852, ГОСТ 13496.0, ГОСТ 13586.3, ГОСТ 13979.0, ГОСТ 27262.

Растворы проб кормов и витаминизированных подкормок хранят под темным колпаком и анализируют в течение рабочего дня, так как витамин В₂ со временем в растворе разлагается на свету (происходит уменьшение его концентрации).

7 СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, ВСПОМОГАТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ, ПОСУДА, РЕАКТИВЫ И МАТЕРИАЛЫ

При проведении количественного химического анализа применяют следующие средства измерений, вспомогательное оборудование, посуду, материалы и реактивы.

7.1    Средства измерений и вспомогательное оборудование

7.1.1    Полярограф (РА-2, ПУ-1 или другой) в комплекте с двухкоординатным самописцем и цифровым вольтметром типа Ф-203 [1];

-    или комплекс аналитический вольтамперометрический СТА [2] в комплекте с IBM-совместимым компьютером (Приложение Б).

Допускается использование другого оборудования и приборов, позволяющих воспроизводить метрологические характеристики, указанные в данной методике анализа.

7.1.2    Электроды, изготовленные фирмой ООО ВНПФ "ЮМХ":

-    индикаторный электрод - стеклоуглеродный с рабочей поверхностью 25 - 30 мм²;

-    электрод сравнения - насыщенный хпорсеребряный (нас.х.с.) в насыщенном растворе хлорида калия [3] с сопротивлением не более

3.0 кОм.

7.1.3    Электролитическая ячейка в состав которой входят:

-    сменные стаканчики из кварцевого стекла вместимостью 15-

11

20 см³;

- стеклянная или тефлоновая трубка с оттянутым концом для подвода инертного газа для удаления кислорода из раствора и его перемешивания.

7.1.4    Весы лабораторные аналитические общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 200 г, 2-го класса точности по ГОСТ 24104.

7.1.5    Дозаторы типа ДП-1-50 или ДП-1-200 или ДП-1-1000 с дискретностью установки доз 1,0 или 3,0 мкл и погрешностью не более 5 % отн.

7.1.6    Шланги резиновые для подвода газа к ячейке (при использовании инертного газа).

7.1.7    Линейка чертежная мерительная по ГОСТ 17435.

7.1.8    Темный бокс.

7.2 Посуда

7.2.1    Пипетки мерные лабораторные стеклянные 2-го класса точности вместимостью 0,5; 1,0; 2,0; 5,0; 10,0 см³ по ГОСТ 29227.

7.2.2    Посуда мерная лабораторная стеклянная 2-го класса точности по ГОСТ 1770: колбы вместимостью 25,0; 50,0; 100,0; 250,0; 1000,0 см³, цилиндры вместимостью 10,0 см³.

7.2.3    Палочки стеклянные по ГОСТ 21400.

7.2.4    Воронки лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336.

7.2.5    Ступка фарфоровая с пестиком по ГОСТ 29225.

7.3 Реактивы и материалы

7.3.1    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

7.3.2    Аммоний лимоннокислый двузамещенный [4].

7.3.3    Калия хлорид по [3].

7.3.4    Натрия гидроксид по [5].

7.3.5    Натрий двууглекислый по ГОСТ 2156.

7.3.6    Фармакопейный препарат: сухой порошок рибофлавина с содержанием основного вещества не менее 99,0 %.

7.3.7    Натрий виннокислый кислый 1-водный [6].

7.3.8    Азот газообразный по ГОСТ 9293 или другой инертный газ (аргон, гелий) с массовой долей кислорода не более 0,03 %.

7.3.9    Бумага фильтровальная любой марки по ГОСТ 12026.

7.3.10    Бумага масштабно-координатная.

8 ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ ИЗМЕРЕНИЙ

8.1    Подготовка приборов к работе

Подготовку и проверку полярографа или вольтамперометрического анализатора (СТА или др.), самописца и цифрового вольтметра или компьютера проводят в соответствии с инструкцией по эксплуатации и техническому описанию соответствующего прибора.

ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ СЕРИЙНОГО ПОЛЯРОГРАФА

8.1.1    Устанавливают режим работы приборов:

-    двухэлектродную систему измерений;

-дифференциальный режим регистрации вольтамперограмм;

-    поляризующее напряжение для электронакопления витамина В₂ -минус 0,60 В;

-    скорость линейного изменения потенциала 40 мВ/с;

-чувствительность прибора при регистрации вольтамперограммы

1-10"⁹ ... 5-10"⁹А/мм (в зависимости от содержания витамина в анализируемой пробе);

-    время электронакопления 30 с.

8.2    Проверка и подготовка лабораторной посуды

8.2.1    Лабораторную стеклянную посуду, сменные наконечники дозаторов, пипетки протирают фильтром с питьевой содой, промывают многократно дистиллированной водой и высушивают в сушильном шкафу.

8.2.2    Проверку стаканчиков для анализа на чистоту проводят путем регистрации вольтамперограмм раствора фонового электролита по 9.1 после многократного ополаскивания их дистиллированной водой и раствором фонового электролита.

Оптимальными по чистоте являются реактивы и посуда, когда регистрируются аналитические сигналы органического соединения в растворе фонового электролита по высоте равные или близкие к нулю (пик менее 2 мм при чувствительности прибора 1-10"⁹ А/мм).

8.3    Приготовление и проверка работы индикаторного электрода и электрода сравнения

8.3.1 Подготовка индикаторного стеклоуглеродного электрода (СУЭ)

Индикаторный стеклоуглеродный электрод представляет собой стеклоуглеродный стержень длиной 5-8 мм, запрессованный в фторопластовый держатель (поставляется потребителю в готовом виде фирмой изготовителем ООО ВНПФ «ЮМХ» г.Томск).

13

8.3.2    Подготовка к работе электрода сравнения

В качестве электрода сравнения используют насыщенный хпорсе-ребряный электрод. Электрод сравнения заполняют насыщенным раствором хлорида калия. При первом заполнении электрод выдерживают не менее 48 час.

8.3.3    Проверку работы индикаторного стеклоуглеродного электрода и электрода сравнения проводят по 9.1 настоящей методики.

8.4 Приготовление растворов

8.4.1    Приготовление основного раствора витамина В₂ концентрации

100.0    мг/дм³

Основной раствор витамина В₂ концентрации 100,0 мг/дм³ готовят из фармакопейного препарата сухого порошка рибофлавина. Для этого на аналитических весах берут навеску (0,0100 ± 0,0002) г рибофлавина, переносят в мерную колбу вместимостью 100,0 см³, добавляют 10,0 см³ раствора гидроксида натрия концентрации 0,10 моль/дм³, перемешивают до полного растворения порошка рибофлавина и доводят объем до метки дистиллированной водой.

8.4.2    Приготовление рабочего раствора витамина В₂ концентрации

10.0    мг/дм³

Рабочий раствор витамина В₂ готовят разбавлением основного раствора. Для этого 5,0 см³ основного раствора витамина В₂ переносят в мерную колбу вместимостью 50,0 см³ и доводят объем до метки дистиллированной водой.

Основной и рабочий раствор витамина В₂ хранят под темным колпаком.

8.4.3    Приготовление раствора фонового электролита - раствор аммония лимоннокислого двузамещенного концентрации 0,1 моль/дм³ (для анализа витаминизированных подкормок)

Навеску (22,618 ± 0,001) г аммония лимоннокислого двузамещенного переносят в мерную колбу вместимостью 1,0 дм³, растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды и доводят объем до метки дистиллированной водой.

8.4.4    Приготовление раствора фонового электролита - раствор натрия виннокислого кислого концентрации 0,1 моль/дм³ (для анализа кормов)

Навеску (19,00 ± 0,01) г натрия виннокислого кислого переносят в мерную колбу вместимостью 1,0 дм³, растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды и доводят объем до метки дистиллированной водой.

14

8.4.5    Раствор гидроксида натрия концентрации 0,10 моль/дм³

Навеску (0,40 ± 0,01) г гидроксида натрия переносят в мерную колбу

вместимостью 100,0 см³, растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды и доводят объем до метки дистиллированной водой.

8.5    Подготовка проб

Для анализа берут две параллельные пробы.

8.5.1    Анализ витаминизированных подкормок

Пробу витаминизированной подкормки готовят для анализа путем растворения навески витаминизированной подкормки в воде.

Пробоподготовку необходимо проводить в темном боксе.

Навеску пробы подкормки массой 0,100 г (согл. таблицы 2), взятой с точностью до 0,001 г, переносят в колбу вместимостью 250,0 см³, добавляют 1,0 см³ раствора гидроксида натрия концентрации 0,10 моль/дм³, далее небольшими порциями примерно по 10,0 см³ приливают 50,0 см³ дистиллированной воды, каждый раз тщательно перемешивая раствор. Осадку дают отстояться в течение 2-5 мин. Раствор над осадком фильтруют через бумажный фильтр. Из полученного фильтрата для ВА измерений берут аликвоту объемом от 0,1 до 0,5 см³.

8.5.2    Анализ кормов

Пробу корма (при необходимости) растирают в фарфоровой ступке фарфоровым пестиком, затем навеску пробы растворяют в воде и проводят высаливание белков солью натрия виннокислого кислого как описано ниже:

Навеску пробы массой 1,00 - 2,00 г, взятую с точностью до 0,01 г, переносят в колбу вместимостью 250,0 см³, добавляют 2,0 см³ раствора гидроксида натрия концентрации 0,10 моль/дм³. Далее небольшими порциями примерно по 10,0 см³ приливают 100,0 см³ дистиллированной воды, каждый раз тщательно перемешивая раствор. Осадку дают отстояться в течение 2-5 мин. Раствор над осадком сливают в другую колбу вместимостью 250,0 см³, туда же вносят 2,0 г сухой соли натрия виннокислого кислого, тщательно перемешивают. Осадку дают отстояться в течение 15-20 мин. Раствор над осадком фильтруют через бумажный фильтр. Из полученного фильтрата для ВА измерений берут аликвоту объемом

10,0 см³.

8.5.3    При анализе проб кормов и витаминизированных подкормок «холостую» пробу делать не обязательно, так как витамин В₂ как загрязнение ни в реактивах, ни в воде не обнаружен. Посуда отмывается от витамина В₂ очень легко.

15

9 ВЫПОЛНЕНИЕ ИЗМЕРЕНИЙ

При проведении анализов проб витаминизированных подкормок и кормов для определения массовой концентрации витамина В₂ методом ВА выполняют следующие операции:

ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ СЕРИЙНОГО ПОЛЯРОГРАФА

Полярограф предварительно должен быть подготовлен по 8.1.1.

9.1    Проверка стаканчиков, раствора фонового электролита и электродов на чистоту

9.1.1    В кварцевый стаканчик вместимостью 15-20 см³ с помощью пипетки вносят 10,0 см³ раствора фонового электролита -

раствор аммония лимоннокислого двузамещенного концентрации 0,1 моль/дм³ (для анализа проб витаминизированной подкормки)

или раствор натрия виннокислого кислого концентрации 0,1 моль/дм³ (для анализа кормов).

Стаканчик с фоновым раствором помещают в электролитическую ячейку или датчик.

9.1.2    Подключают к прибору индикаторный электрод и электрод сравнения, устанавливают потенциал минус 0,60 В. Электроды опускают в раствор.

9.1.3    Устанавливают чувствительность прибора 1-10"⁹.... 5-10"^эА/мм.

9.1.4    Включают газ и проводят процесс электронакопления при потенциале минус 0,60 В в течение 30 с при перемешивании раствора.

9.1.5    По окончании электролиза отключают газ и через 5 с начинают регистрацию вольтамперограммы в диапазоне потенциалов от минус 0,60 В до минус 0,10 В.

Потенциал анодного пика витамина В₂ находится в диапазоне от минус 0,40 В до минус 0,30 В (в растворе аммония лимоннокислого двузамещенного концентрации 0,1 моль/дм³) или в диапазоне от минус 0,30 В до минус 0,20 В (в растворе натрия виннокислого кислого концентрации 0,1 моль/дм³).

9.1.6    Повторяют операции по 9.1.4, 9.1.5 три раза.

9.1.7    При наличии на вольтамперограмме сигнала органического вещества с высотой пика менее 2 мм стаканчик, фоновый раствор и индикаторный электрод считают готовыми к проведению измерений. В противном случае проводят очистку электрода или стаканчика и повторяют операции по 9.1.1 ...9.1.6.

9.1.8    Отключают электроды от прибора, вынимают стаканчик с раствором из ячейки или датчика и выливают содержимое стаканчика.

9.1.2 (Измененная редакция, Изм. № 1).

9.2 В А измерения пробы

9.2.1    При анализе проб витаминизированных подкормок в стаканчик, проверенный по 9.1, помещают 0,30 см³ анализируемой пробы, подготовленной к измерению по 8.5.1, и доводят объем раствора фоновым электролитом (раствором аммония лимоннокислого двузамещенного) до 10,0 см³.

При анализе проб кормов в стаканчик, подготовленный к проведению ВА измерений по 9.1, помещают 10,0 см³ анализируемой пробы, подготовленной к измерению по 8.5.2.

9.2.2    Помещают стаканчик с анализируемым раствором в электролитическую ячейку или датчик.

9.2.3    Повторяют последовательно операции по 9.1.2... 9.1.6.

9.2.4    Потенциал пика витамина В₂ в растворе аммония лимоннокислого двузамещенного концентрации 0,1 моль/дм³ регистрируется в диапазоне от минус 0,40 В до минус 0,30 В, в растворе натрия виннокислого кислого концентрации 0,1 моль/дм³ в диапазоне от минус 0,30 В до минус 0,20 В.

Если высота анодного пика витамина В₂ превышает 200 мм, то уменьшают чувствительность прибора (загрубляют). Если высота анодного пика витамина В₂ будет меньше 5 мм, то увеличивают чувствительность прибора.

9.2.5    Операции по 9.1.4 ... 9.1.6 повторяют три раза.

9.2.6    Измеряют линейкой высоты анодных пиков определяемого компонента.

9.2.7    В стаканчик с анализируемым раствором с помощью пипетки или дозатора вносят добавкуаттестованной смеси витамина В₂ в таком объеме, чтобы высота пика на вольтамперной кривой увеличилась примерно в два раза по сравнению с первоначальной.

Добавку вносят в малом объеме, чтобы предотвратить изменение концентрации пробы. Рекомендуемые добавки аттестованной смеси известной концентрации приведены в таблице 2.

17

Таблица 2 - Рекомендуемые добавки аттестованных смесей при регистрации вольтамперограмм при анализе проб кормов и витаминизированных подкормок

Диапазон определяемых концентраций компонента, мг/кг 10 ... 100 100 ... 200 200 ... 500 500 ... 1000 1000 ... 2000 2000... 3500 Время электролиза, с 30 30 30 30 30 30 Навеска пробы, г 2 1 0,5 0,1 0,1 0,1 Объем растворенной пробы,см3 100 100 50 50 50 50 Объем аликвоты, см3 10 10 1 0,5 0,3 0,1 Концентрация аттестованной смеси для добавок, мг/дм3 100 100 100 10 10 10 Рекомендуемый объем добавок, см3 0,02 ... 0,2 0,1 ... 0,2 0,02 ... 0,05 0,05... 0,10 0,06 ... 0,12 0,04... 0,07 0

9.2.8    Проводят электронакопление и регистрацию вольтамперограмм по 9.1.4...9.1.6 три раза.

9.2.9    Измеряют высоты анодных пиков витамина В₂в пробе с добавкой аттестованных смесей.

9.2.10    Выливают содержимое стаканчика.

9.2.11    Стаканчик протирают фильтром с питьевой содой, промывают дистиллированной водойили фоновым раствором.

9.2.12    Операции по 9.2.1 ... 9.2.11 проводят для каждой из параллельных анализируемых проб в одинаковых условиях.

9.2.13    При выполнении анализа по настоящей методике рекомендуется ведение записей условий анализа в рабочем журнале и регистрация вольтамперограммы на ленте самописца с указанием пробы и условий анализа согласно таблице 3.

18

Таблица 3 - Рекомендуемая форма записи результатов измерений при анализе проб_

Определяемый компонент Анализируемая проба (характеристика, номер, дата...) Условия измерений (чув-ствитель-ность; время электролиза; объем аликвоты) Высота пика компонента в пробе, мм, или ток, А Добавка АС: Уд СМ , Сдоб мг/дм3. Высота пика компонента после добавки АС, мм, или ток, А

9.2.4, 9.2.7 (Измененная редакция, Изм. № 1).

10 ВЫЧИСЛЕНИЕ И ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА

Обработку результатов измерений аналитических сигналов (высот анодных пиков определяемого компонента) и расчет концентраций в анализируемой пробе проводят следующим образом:

10.1    Расчет величин максимальных анодных токов (аналитических сигналов)

10.1.1    Для определяемого компонента рассчитывают среднее из трех значений аналитических сигналов, полученных при трехкратной регистрации вольтамперограммы пробы.

10.1.2    По средней высоте анодного пика для данного компонента вычисляют значение максимального анодного тока витамина по форму-ле (1):

Л = ^ ‘ & , где    (1)

индекс I относится к анализируемой пробе (I =1) и к пробе с добавкой АС компонента (I =2);

I. - величина максимального анодного тока данного компонента в данной пробе, А;

h. - средняя высота пика компонента на вольтамперограмме, мм;

а- чувствительность прибора при регистрации данного пика, А/мм.

Такой расчет проводят как для вольтамперных кривых при регистрации анализируемой пробы (I =1), так и для анализируемой пробы с добавкой аттестованной смеси компонента (I =2).

19

10.1.3 Если регистрацию вольтамперограмм пробы и пробы с добавкой АС компонента проводят без изменения чувствительности прибора и самописца, то операции по 10.1.2 не проводят, используют в дальнейших расчетах величины высот пиков вместо токов пиков.

10.2 Расчет содержания компонента в пробе

10.2.1 Расчет содержания витамина В₂ в анализируемой пробе проводят по формуле (2):

h-c_d-v_d-v_np

h-h -v_m

где:    X,-    содержание витамина В₂ в анализируемой пробе, мг/кг;

С_д - концентрация АС витамина В₂, из которой делается добавка к анализируемой пробе, мг/дм³;

V_d- объем добавки АС витамина В₂, см³;

h - величина максимального анодного тока витамина В₂, в анализируемой пробе, А;

1₂ - величина максимального анодного тока витамина В₂ в пробе с добавкой АС, А;

m - масса анализируемой пробы, г;

V_np - объем растворенной пробы, см³;

V_an - объем аликвоты раствора пробы, взятой для ВА измерения, см³.

Таким образом получен результат анализа первой параллельной пробы -

10.2.2 Аналогичные вычисления проводят для второй параллельной анализируемой пробы. Получают соответственно значения Х₂.

10.4 Проверка приемлемости результатов измерений

10.4.1 Проверяют приемлемость полученных результатов параллельных определений. Расхождение между полученными результатами двух параллельных анализируемых проб не должно превышать предела повторяемости г. Значение предела повторяемости для двух результатов параллельных определений приведено в таблице 5 А.

20

ТОМСКИЙ ПОЛИТЕХНИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

ВНЕДРЕНЧЕСКАЯ НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННАЯ ФИРМА “ЮМХ” АККРЕДИТОВАННАЯ МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ СЛУЖБА ТПУ

(аттестат об аккредитации № РОСС RU 01.00143-03 от 24.12.01)

СВИДЕТЕЛЬСТВО ОБ АТТЕСТАЦИИ МВИ № 08-47/088_А (взамен 08-47/088)

Методика выполнения измерений массовой концентрации витамина В₂ методом дифференциальной вольтамперометрии, разработанная в Томском политехническом университете и ООО «ВНП Ф «ЮМХ» и регламентированная в МУ 08-47/088 (по реестру аккредитованной метрологической службы Томского политехнического университета) с Изменением №1

ВИТАМИНИЗИРОВАННЫЕ КОРМА И ПОДКОРМКИ.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАССОВЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ ВИТАМИНА В₂ МЕТОДОМ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИИ

аттестована в соответствии с ГОСТ Р 8.563 (ГОСТ 8.010).

Аттестация осуществлена по результатам теоретического и экспериментального исследования МВИ.

В результате аттестации МВИ установлено, что данная МВИ соответствует предъявляемым к ней метрологическим требованиям и обладает следующими основными метрологическими характеристиками:

1 Диапазоны измерений, относительные значения показателей точности, повторяемости и воспроизводимости методики при доверительной вероятности Р~0,95

Наименование определяемого компонента	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Показатель повторяемости (среднеквадратическое отклонение повторяемости), £T,pj,%	Показатель воспроизводимости (среднеквадратическое отклонение воспроизводимо- ста),	Показатель точности (границы, в которых находится погрешность методики), 6,%
Витамин В2	От 10 до 3500 включ.	13	17	34

3

Таблица 5 А - Диапазон измерении, значения пределов повторяемости при доверительной вероятности Р=0,95

Наименование определяемого компонента Диапазон измеряемых концентраций, мг/кг Предел повторяемости (для двух результатов параллельных определений), г Предел повторяемости (для четырех результатов параллельных определений), г Витамин В2 От 10 до 3500, включ. 0,36 -X 0,47-X X - среднее арифметическое значение результатов параллельных определений массовой концентрации компонента

Результаты считают приемлемыми при выполнении условия

|х,-х₂| <г.    (3)

Абсолютное значение предела повторяемости рассчитывается для среднеарифметического значения результатов двух параллельных определений

х = ^х1^+х2    .    (4)

2

При выполнении условия (3) значение X принимается за результат измерения массовой концентрации каждого определяемого компонента в пробе.

10.4.2 При превышении предела повторяемости (г) необходимо дополнительно получить еще два результата параллельных определений. Если при этом размах (X_max - X_min) результатов четырех параллельных

*

определений равен или меньше предела повторяемости Т , то в качестве окончательного результата принимают среднее арифметическое значение результатов четырех параллельных определений. Значения преде-

*

ла повторяемости (Г ) для четырех результатов параллельных определений приведены в таблице 5А.

Если размах (X_max - X_min) больше г*, выясняют причины появления неприемлемых результатов параллельных определений. При этом проводят оперативный контроль повторяемости по МИ 2335-2003 «Рекомендация. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного хими-

21

2 Диапазон измерений, значения пределов повторяемости и воспроизводимости при доверительной вероятности Р=0,95

Метролог метрологической службы ГПУ

«• SH.n.nH^ia ” 26 " июля 2004 г.

«СОГЛАСОВАНО»

Замдиректора по метрологии ФГУ «Томский Руководитель

_

U    /

«УТВЕРЖДАЮ»

Директор ООО «ВНПФ «ЮМХ»

ТОМСКИЙ ПОЛИТЕХНИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ВНЕДРЕНЧЕСКАЯ НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННАЯ ФИРМА “ЮМХ” АККРЕДИТОВАННАЯ МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ СЛУЖБА ТПУ

(аттестат об аккредитации № РОСС RU 01.00143-03 от 24 12.01)

«УТВЕРЖДАЮ»

Проректор по HP

МЕТОДИКА ВНЕСЕНА В ГОСУДАРСТВЕННЫЙ РЕЕСТР ПРИМЕНЯЕМЫХ В СФЕРАХ РАСПРОСТРАНЕНИЯ

КОНТРОЛЯ И

ФР.1.31.2001.00247

МУ 08-47/088

(по реестру метрологической службы)

ВИТАМИНИЗИРОВАННЫЕ КОРМА И ПОДКОРМКИ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАССОВЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ ВИТАМИНА Вг МЕТОДОМ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИИ

Издание второе. С изменением №1

«СОГЛАСОВАНО»

Метролог метрологической службы ТПУ

^ Н.П Пикула * июля 2004 г

5

6

1 НАЗНАЧЕНИЕ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

Методика предназначена для анализа проб витаминизированных кормов и подкормок и устанавливает порядок определения массового содержания витамина В₂ (рибофлавина) методом дифференциальной вольтамперометрии (ВА).

Методика применяется для определения массовых концентраций витамина В₂ в диапазоне от 10 до 3500 мг/кг.

(Измененная редакция, Изм. №1).

2 НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ

В настоящей методике использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91 ССБТ. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.019-79 ССБТ. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009-83 ССБТ. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия

ГОСТ 2156-76 Натрий двууглекислый. Технические условия ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 9293-74 (ИСО 2435-73) Азот газообразный и жидкий. Технические условия

ГОСТ 10852-86 Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 13496.0-80 Комбикорма, сырье. Методы отбора проб ГОСТ 13586.3-83 Зерно. Правила приемки и методы отбора проб ГОСТ 13979.0-86 Жмыхи, шроты и горчичный порошок. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 17435-72 Линейки чертежные. Технические условия ГОСТ 21400-75 Стекло химико-лабораторное. Технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

7

ГОСТ 27262-87 Корма растительного происхождения. Методы отбора проб

ГОСТ 29225-91 (ИСО 1775-75) Посуда и оборудование фарфоровые лабораторные. Общие требования и методы испытаний.

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1 -81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ Р 8.563-96 Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений

ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике.

3 СУЩНОСТЬ МЕТОДИКИ

Сущность методики состоит в переводе витамина из пробы витаминизированной подкормки и корма в раствор путем растворения навески пробы в воде с последующим дифференциальным вольтамперометриче-ским определением массовой концентрации витамина В₂.

Пробоподготовка витаминизированных подкормок и кормов отличается:

-    при анализе пробы витаминизированной подкормки навеску пробы витаминизированной подкормки растворяют в воде, проводят фильтрование полученного раствора через бумажный фильтр с последующим дифференциальным вольтамперометрическим определением массовой концентрации витамина В₂ в фильтрате;

-    при анализе пробы корма навеску пробы корма растворяют в воде, затем проводят высаливание белка натрием виннокислым кислым, отделяют осадок фильтрованием полученного раствора через бумажный фильтр с последующим дифференциальным вольтамперометрическим определением массовой концентрации витамина В₂ в фильтрате.

Метод ВА измерения основан на способности витамина В₂ окисляться на индикаторном стеклоуглеродном электроде при определенном потенциале характерном для данного органического вещества.

Процесс электрохимического окисления витамина В₂ проводят в растворе аммония лимоннокислого двузамещенного концентрации 0,1 моль/дм³ при анализе витаминизированных подкормок и в растворе натрия виннокислого кислого концентрации 0,1 моль/дм³ при анализе кормов на индикаторном стеклоуглеродном электроде. Регистрацию аналитического сигнала на вольтамперограмме проводят при линейно-меняющемся (в сторону положительных значений) потенциале на серий-

8

ном поля-рографе ПУ-1 и при накопительной развертке потенциала с использованием комплекса СТА (Приложение Б). Потенциал пика при разных содержаниях витамина В₂ в растворе аммония лимоннокислого дву-замещенного концентрации 0,1 моль/дм³ регистрируют в диапазоне от минус 0,40 В до минус 0,30 В, в растворе натрия виннокислого кислого концентрации 0,1 моль/дм³ в диапазоне от минус 0,30 В до минус 0,20 В. Массовая концентрация витамина В₂ в пробе определяется методом добавок аттестованных смесей витамина В₂ (рибофлавина).

Общая схема анализа методом ВА состоит из следующих этапов:

(Измененная редакция, Изм. №1).

4 ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОГРЕШНОСТИ РЕЗУЛЬТА ТОВ АНАЛИЗА

4.1 Методика выполнения измерений массовых концентраций витамина В₂ в пробах витаминизированных кормов и подкормок методом дифференциальной вольтамперометрии обеспечивает получение результатов измерений с погрешностью, не превышающей значений, приведенных в таблице 1 А.

9

Таблица 1А -Диапазоны измерений, относительные значения показателей точности, повторяемости и воспроизводимости методики при доверительной вероятности Р=0,95

Наименование определяемого компонента и диапазон измеряемых содержаний, мг/кг Характеристика погрешности (границы интервала, в котором погрешность находится с заданной вероятностью), ± 8, % Характеристика случайной составляющей погрешности (среднеквадратическое отклонение случайной составляющей) Характеристика систематической составляющей погрешности (границы интервала, в котором систематическая составляющая погрешности находится с заданной вероятностью), ±5С, % ВИТАМИН В2 от 10 до 3500 вкл. 13 17 34

4.2 Значения показателя точности методики используют при: -оценке деятельности лабораторий на качество проведения испытаний;

- оценке возможности использования результатов измерений при реализации методики выполнения измерений в конкретной лаборатории.

(Измененная редакция, Изм. №1)

Таблица 1 (Исключена, Изм. №1)

Таблица 1 А (Введена дополнительно, Изм. №1)

5 ТРЕБОВАНИЯ К ВЫПОЛНЕНИЮ ИЗМЕРЕНИЙ

5.1    Условия безопасного проведения работ

5.1.1    При выполнении анализов соблюдают требования техники безопасности при работе с химическими реактивами.

5.1.2    Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019.

5.1.3    Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

5.2 Требования к квалификации операторов

Измерения может проводить химик-аналитик, владеющий техникой вольтамперометрического анализа и изучивший инструкцию по эксплуатации используемой аппаратуры.