МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

К ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДЮЕЯИЮЛПРОШНА, А ТАКЖЕ НЕКОТОРЫХ ФЕНОЛОВ В ЕГО ПРИСУТСТВИИ, ПРИ САНИТАРЧО-ХИ?ШЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ ИЗДВМ ИЗ ШЛИДЕРНЫХ МАТЕРИАЛОВ, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫХ № КОНТАКТА С ПЩЕЕШИ ПРОДУКТАМИ *•

ФИЗЖО-ХИМШИЖИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПРЕПАРАТОВ

I. Дифенилолпропан (4,4 - диоксид^еншщиметилметан, бис-фенол "А", диаи - (Cg Н₄ Ш)₂ С (СН^)₂ имеет следующую структурную Формулу г

Чистый дифенилолпропан представляет собой криоталли -ческий порошок белого цвета, температура плавления 156-157°С (технический продукт - 150 - 152°С), растворим в метиловом этиловом, изопропиловом и бутиловом опиртах, в уксусной кислоте.

I.

Утверждено Заместителем Главного Государственного санитарного врача СССР, А,И, Зайченко.

2 июня 1976 г. № 1436 - 76

38,

> ацетоне* днэтиловом эфире, хуже растворим в бензоле и хлороформе. Растворимооть в воде при 20°С равна 0,04 %.

Следует иметь в виду* что при хранении наблюдается изменение дифенилолпропана. Цвет препарата становится серовато - рововым, при хроматографическом определении его по методу, изложенному ниже, на хроматографической пластике образуется два пятна. Изменявшаяся препарат должен быть переуриоталлязован из семидесяти процентной укоуоной кислоты.

ПКРЖРЮТАЛШАШ

Ди^ейвлолпропая растворяют I : I в 70 £-Й уксусной кислоте, нагретой до 65°С, данную температуру поддерживают при нагриваяии в водяной бане. Далее раствор охлаждают в течение часа в водяной бане, имеющей температуру около 10 -12°. Выпавший кристаллический осадок отделяют фильтрованием через стеклянный фильтр Л 3, промывают небольшим количеством холодной дистиллированной воды, снова растворяют осадок в 70 jS-ftoft уксусной кислоте и проводят переосаждеяие как указано выше.

Полученный осадок отделяют фильтрованием через стеклянный фильтр J6 3, промывают холодной дистиллированной водой до нейтральной реакции промывных вод, высушивают в сушильном шкафу при температуре 70°С в течение суток и определяют точку плавления.

2 Л р е з о л н - CHg Cg Н₄ ОН существуют в трех ивомер» них формах - орто-, мета- и пара - крезоли.

47.

оплснной методов.

При работе о модельной средой - 3 % раствор молочной кислоты, ее надо разбавить в 2 - 3 раза, так как экстракт 3 % раствора молочной кислоты дает "хвост” на пластинке.

При работе с модельной средой - 93 % раствор этилового спирта, надо упаривать до объема 0,1 й 0,2 мл и навести на хроматографическую пластику.

При работе о яблочным вином удалить красящее вещество, Для этого хлороформенный экстракт промывают 10-15 мл 10 % раствора уксуснокислого свинца и дальнейшее определение ведут по вышеописанной методике.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФЕНОЛА, ДОШИГОЛПРОПАНА И П- ТРЕТБУТИЛФЕНО ЛА.

I. рпр^ледие „федала

В три делительные воронки вносят : в воронку № 1-100 мл исоледуемой вытяжки, в две другие воронки по 100 мл контрольного модельного раствора.

Кислые вытяжки и контрольные модельные растворы перед определением фенола необходимо нейтрализовать до pH 6,5-7 10 % раствором едкого натрия. Затем в воронку 16 2 добавляют 0,2 мкг фенола, а в воронку й 3 по 0,5 микрограмма фенола, дифенилолпропана и п- третбутилфенола в виде их стандартных растворов. Далее в ворошен Я /6 2, 1,3 добавляют по 3 мл хлороформа и экстрагируют фенол путей энергичного переверти вания воронок 40 - 50 раз, не допуская взбалтывания раствора

48,

во избежание образования стойкой эмульсии.

После расслоения жидкостей хлороформенный слой сливает в фарфоровые чашечки диаметром 5,5 см.

Описанным образом производят экстракцию еще два раза, аспользуа для извлечения по 3 мл хлороформа.

Хяороформешше экстракты из каждой воронки собирают в -Соответствующие фарфоровые чашечки и дают хлороформу исца -риться в вытяжном шкафу при комнатной температуре до 4 ^м 5 капель.

Нанесение исследуемых растворов на хроматографическую пластинку

Полученный после упаривания хлорофорившшй раствор засасываю1 из фарфоровой чашки в стеклянную трубку о капилляром при помощи специальной установки (рис. I). Чашку снова обрабатывают хлороформом» беря при этом 0,5 мд, дают испариться до 3-4 капель» которые 8всасывают в тот да капилляр. Обработку чашки 0,5 мл хлороформа повторяют еще раз Растворы наносят на хроматографическую плаотинку следую щшд способом : стеклянную трубочку о Капилляром, содержащую -хлороформенный раствор, устанавливают так, чтобы его кецфц был так близок к пластинке, как только можно, чтобы не нарушить поверхностного слоя. Работу ведут в ватяжном шкафу при боковом освещении конца капилляра электрическим светом (настольная Лампа). При этом на пластинку падает тень от капилляра в виде темной линии. Устанавливают пластинку так» чтобы тень от конца капилляра касалась линии старта на

49,

расстоянии около I им от точки, в которую должен быть нанесен раствор.

Далее о помощью винта регулируют давление в трубке с капилля-

«

ром таким образом, чтобы последующая капля падала из капилляра на пластинку поело того, как предыдущая капля уже высохла.

Пластинку с нанесенными растворами подвергают хроматографированию в системе растворителей: хлороформ - ацетон (36:1). После того, как растворитель достигает линии фронта, пластинку вынимают и оставляют в вытяжной ккафу дс полного испарения растворителя.

Для проявления пятен пластинку помещают в эксикатор, на дно которого предварительно, за 2-3 часа были помещены кристаллы иода, закрывают эксикатор крыюкоИ и освещают пластинку светом от лампы накаливания ЗОО - 500 вт о зеркальным отражением. Лампу располагают на расстоянии приблизительно 10 см от крышки эксикатора. Время лроявлония 3-5 мин. Затем пластинку вынимают из эксикатора и су-ыат на воздухе ( в вытяжном окафу) до испарения избытка иода. При ноличии фенолов на светлом фоне плаотиики образуются келто-бурые пятна.

При наличии из хроматограмме желто - бурого пятна от иосле-дуеиого раствора, отвечающего местоположению фенола, определяют фенол количественно.

Количественное определение фенола проводят путем визуального сравнения интенсивности окраски и размера пятна от исследуемого раствора с интенсивностью окраски и размера пятна от стандартных растворов фенола, получошшх одно-

50

временно на одной и той же пластинке с исследуемым раствором, используя для этого целочные стандартные растворы

2* Определение фонола в присутствии дифенилолпропана и п— третбутилйенола

Дифенилолпропан и п- третбутилфенол при хроматографическом определении образуют на пластинке пятка жолто-бурого цвета, аналогичные пятнам фенола. Одиако место положение их различно:Rf-

дифенилолпропана около 0,12; фонола - 0,Ф6; п- третбутилфенола-- 0,5$.

Следует отметить, что величины Rf зависят от целого‘ряда факторов• равномерности и толщины разделительного слояконструкции величины и насыщенности камеры, температуры окружающей ореды и др.

не являютоя отрого постоянными

Поскольку пятьа, образуемые дифенилолпропаном, располагаются на пластинке на значительном расстоянии от пятна образуемого фенолом, дифенилолпропан не меыает определению.

Пара- третбутилфеыол образует на хроматограмме пятно, располагающееся на довольно близком рвеотоянии от пятна образуемого Фенолом и может мешать определению его разработанным методом.

Для того, чтобы увеличить раоотояние между пятнами фенола и п- третбутилфенола, пластинку с нанесенными экстрактами, полученными, как олиоано на странице hi помещают в камеру для хроматографирования.

После того, как смесь растворителей доотигает линии фроига ( 10 си от линии старта),

51

пластинку вынимают, дают растворителям испариться о пластинки и проводят повторное хроматографирование в той не сис -теме растворителей. Линия фронта при этом должна находиться на расстоянии 13 см от линии старта. Далее пластину вынимают из камеры, дают растворителям испариться и прояь -ляют хроматограмму в парах йода, как описано на стр ^9

Количественное определение фенола проводят, как указано на стр. *i5'.

Если на хроматограмме наряду о пятном фенола, подучен ним из исследуемого раствора, имеется пятно, местоположение которого соответствует пя*рну от стандартного раствора п-третбутилфенола, считают, что в исследуемом растворе обнаружен п -третбутилфенол.

3. Определение диТюнилолпропана в дриоувотвии Фенола и п-тоетбутил Фенола.

Фенол и п- третбутилфенол дают на хроматографической пластинке вышеуказанным методом бурые пятна, местоположение которых сильно отличается от местоположения пятен дифенилолпропана. Следовательно, фенол и п-третбутилфеиол не мешают его определению.

Ход определения

Исходя из допустимого количества миграции дифеншюл -

пропана из исследуемых изделий в контактирующие в ними

модельные растворы (0,01 мг/л), а также из чувствительности

62

метода его определения для исследования необходимо ваять 20 мл раствора. При этом, если образец отвечает гигиеническим требованиям, на хроматографической пластинке ке должно бить желто - бурого пятна, отвечающего местоположению дифенилолпропана, которое определяют по пятну от 0,3 мкг стандар тного раствора дифенилолпропана, нанесенного на ту же пластин ку одновременно с исследуемым раствором.

Расчет содержания препаратов производят, как указано

выше.

Метод определения крезола и дифенилолпропана был апробирован при анализе образцов консервной тары, покрытой лаками Л 65I0I7 и 918392 (производства ГДР).

Метод определения фенола, дифенилолпропана и п-третбуткл-фенола проверен на модельных раотворах,используемых при оаиятар-но-хлмическом последовании изделий,а также на вытяжках из изде -лий,изготовленных о применением лаков ЭИ-527 и ЗП-547,без добавления и о добавлением к ним определенных количеств указанных фенолов.

Изомеры :	мол,вес :	Т-пл.:	Т-кип :	Растворимость : в органпческ, в воде : растворителе
М-Крв80Л	1,034	11,3	202,3	3,35	рази.
0-крезол	108,14 1,047	30,0	191,5	2,45	раэн.
П-крезол	1,034	36,0	202,5	1,34	разн.

3. Ф а н о л (окспбензол, карболовая кислота)

^ч^.СК    Cg Hg ОН.

Чистый фенол имеет вид длинных бесцветных кристаллов или белой кристаллической массы. Температура плавления фенола 41,5 - 43°С, температура кипения - 181,3°. фенол смешивается о водой, спиртом, эфиром во всех отношениях, растворим в глицерине, бензоле, хлороформе, в эфирных и жирных маслах и в уксусной кислоте.

Следует иметь в вину, что при хранении под действием света и воздуха фенол окиоляется и окрашивается в красный цвет, что объясняется примесью фенохпнона (0 * C^H₄-0CgHgCH), имеющего красную окраску.

Фенол, для приготовления стандартного раствора перегоняют как указано ниже.

Прегонка Фенола. 5 - 7 г фенола помешают в колбу Вюрца емкостью 50 мл, снабженную термометром и прямым воздушным холодильником, конец которого опущен ^ приемник. Колбу, обернутую асбестовым полотном, осторожно нагревают на асбестовой сетке я собирают в приемник фракцию фенола, кипящую при

40

181°, предварительно отбросив первые 8-10 капель отгона.

Свежеотогнанный фенол следует сохранять в плотно закупоренной посуде, в защищенном от света месте.

Шаидцахада

Метод основан на экстракции препаратов органическим растворителем из модельных растворов, используемых при ис -следовании изделий из синтетических материалов, с последую -щим хроматографированием на пластинках, покрытых тонким олеем силикагеля.

Чувствительность определения дифенилолпропана и креэо -ла при обнаружении в виде азокрасителей - 0,01 мг/л, чувст -вительность определения фенола, п-?ре?бутил$енола и дифенил -олпропана при обнаружении парами иода : 0,001; 0,003, и 0,003 мг/д - соответственно.

Еметшишяш

1.    Ацетон (СИ₃/ gCObrOCT 2503-63

2.    Бенаол С_б Н_б, ч.д.а., ГОСТ 5955-68

3.    Этидацетат /этиловый эфир укоусвой кислоты/ O^HgOg, х.ч., ГОСТ 5 : 1070-71

4.    йод металлический, ч.д.а., ГОСТ 4159-64

5.    Наррий оернокислый безводный    ч.д.а*    Г0С1Т

4166-66.

6.    Натрий азотистокиолый fja N Og, х.ч., ГОСТ 4236-67

7.    Гипс медицинский

8.    Соляная кислота BCI, х.ч., ГОСТ 4204

41

9, Хлороформ СНС1_3# ч.д.а., ГОСТ 3160-51 10, Свинец уксуснокислый Рв (СН₃ С00)₂» х.ч., ГОСТ 4236-67 II* п- Нитроанилии CgHgNg Оз» ч.Д.а., ТУ 6-09-258-^0

12.    Фенол Cg Rg Ш, ч.д.а., ГОСТ 6417-58

13.    Крезол СН₃ С₆ Н₄ ОН, ч. _f МРТУ 6-09-2796-66

14.    Дифенилолпропан (СН₃)₂ С CCg Н₄ 0Н)₂, ч. МРТ7 6-09-7-62

15.    Силикагель марки КСК, ГОСТ 3956-54 (очищенный от примесей методом М.А. Клисенко и М.В. Письменной) ;

М.А. Клисенко, М.В. Письменная "Методы определена

микроколичеств пестицидов в продуктах питания, почве

и воде". М., 1968.

16.    Проявляющий реактив - смесь двух растворов :

а)    0,1 г п- нитроаниляка растворяют в 0,5 мл 25 % соляной кислоты л доводят до 100 мл дистиллированной водой.

б)    5 % водный раствор нитрита натрия.

Перед проявлением оба раствора смешивают в ооотно -шении 10 : I.

17.    Стандартный раствор дифенилолпропана в 0,1 Н растворе едкого натра.

Основной стандартный раствор дифенилоллропача с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,01 г дифенилолпропана (если нужно, перекристаллизованного) в мерной колбе емкостью 100 мл в 0,1 н растворе едкого натрия.

Рабочий стандартный раствор с содержанием 10 ккг ди -фекилоллропака в мл. готовят разбавлением основного раствора

10 pas 0,1 н раствором едкого натрия.

18.    Стандартный раствор дифенилолпропана в хлороформе, концснтарция 100 мкг/ыл.

19.    Стандартный раствор фенола в 0,1 н растворе едкого натра. Основной стандартный раствор фенола. В мерную колбу емкость» 50 мл наливают 10-15 мл 0,1 н раот -вора едкого натрия, взвешивают н аналитических весах затем вносят кристаллик свежеперегонного фенола, взвешивают вторично и доводят объем до метки 0,1 н раствором едкого натрия. Вычисляют содержание фенола в мл раствора. Рабочий стандартный раствор с содер -ланьем 10 мкг фенола в I мд готовят соответствующим разбавлением основного раствора 0,1 в раствором едкого натрия.

Стандартный раствор основной и рабочий о-требутил -фенола и крезола готовят так же, как стандартные раствори фенола.

20.    Стандартный раотвор фенола в хлороформе, концентрация 100 мкг/мл.

Двв&ш- нреш

1.    Прибор для отгонки растворителя

2.    Весы аналитические

3.    Камера для хроматографирования

4.    Пульверизатор стеклянный

5.    Ваня водяная

43

6.    Сито капроновое 100 меш.

7.    Микропипетки на 0,1 мл с делениями на 0,001 ил, ГОСТ 1770-54

8.    Воронки делительные емкостью 250 мл

9.    Колбы мерные емкостью 50, 100 мл.

10.    Колбы круглодонные на ДОС мд.

11.    Воронки химические

12.    Хроматографические пластинки "СИЛУЮЛ" и "СИДУФОЛ"

0IV-254 .

Пластинки "СИЛУйОЛ" представляют собой упрочненную алюминиевую фольгу са слоем оидикагеля, содержащего инертный неорганический люминесцентный индикатор. В качеотве связующего вещеотва использован крахмал.

13.    Приготовление пластинок с тонким алеем силикагеля: на химически чистые стеклянные пдаотанки размером

9 х 12 см наносят тщательно перемешанную сороцаонную массу, соотоящую из 34,6 г силикагеля, 1,75 г гипса и 90 мл дистиллированной вода.

14.    Установка дда нанесения раствора на пластинку (рис. I) оостоит из стеклянной трубки, шькнкЯ конец которой оттянут- в капилляр, металлического микроваята, укрепленного на деревянной подставке, имеющей углубление. Стеклянную трубку с мякрокапилляром длиной 12 см удобно из го то в:л ть из пипетки на 2 ил, имеющиеся на ней деления позволяют следить за подъемом раствора при засылании его через капилляр. НижклЙ конец пипетки оттягивают в микрокалнлляр таким образом,

44

чтобы капающая из капилляре капля исследуемого раствора на хроматографической пластинке давала пятно диаметром около 5 мм.

Металлический микровинт длиной 100 мм имеет 100 витков На верхнем конца витка имеется круглая головка диаметром 25 од, толщиной 10 ш, ребристая по окружности, плотно соединенная с винтом. На никнем конце витка имеется подвижная круглая металлическая пластинка диаметром 35 мм. Микровинт укреплен на деревянной круглой подставке диаметром около ТО мм, толщиной около 25 од с помощью металлической дужки и шаЗбочки. В середине деревянной подставки тлеется круглая выемка (место для груш) диаметром около 40 мм.

Верхняя часть отеклянной трубки с капилляром при помощи резиновой трубки присоединяется к резиновой груше, помещенной между пластинкой микровинта и деревянной подставкой. Сдавливая ввинчиванием винта грушу, вытесняют лз нее кеболь -шре количество воздуха через микрокапилляр, после чегр микро* капилляр погружают в исследуемый раствор. При обратном движении винта расширяют грушу и засасывают исследуемый раствор в капилляр.

Е5. Чашки фарфоровые диаметром 5,5 см. ГОСТ 9147-59

16.    Лампа накаливания 300 - 500 вт.

17.    Эксикатор.

16. Груша резиновая # 3.

19. Резиновая трубка диаметром около 0,4 мм.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФЕНОЛА ДИШИЛШРОНАНА И ДОШОЮЛПРОШНА В ЦРИЗУТСТВШ П- КРЕЗОЛА И ФН10ЛА.

Ход определив

106 мд модального раствора, используемого при исследовании изделий из синтетических материалов (проба J* I), по-ышцают в делительную воронку и экстрагируют трихдц по НО шг хлороформом или сердш эфиром, Экстракты объединяют, фильтруют через бумдадцй Фильтр, сущат над слоем безводао-го рернокиолого натрия и упаривает в приборе для отгонки растворители до Объема 0,3 - 0,3 М** Затем упаренный экстракт количественно наносит о помощь» шдредд или микропанетки на слой сорбента на райтояввд не менее Х,8 ем друг от друга и от крае» пластинки.

Диаметр наносимого на слой оорбента пятна не должен превышать 0,5 см. Хроматографирование производят в герметической камере, заполненной системой растворителей : бензол - эти-лацетат 9:1. Фронт системы растворителей поднимают по слою сорбонта на высоту 10 ом. После этого плаотннку высушивают на воздухе до отсутствия запаха растворителей и опрыскивают проявляющим реактивом. ( 16 ).

При обработке проявляющим реактивом анализируемые ве -щества проявляются в виде желтых пятен о величиной R| для крезола 0,50 ± 0,05, дцсфенилодпропана ч 0,33 ± 0,05, фенола

Для количественной оценки пластинку дополнительно опрыскивают 15 % раствора щелочи. Пятна приобретают окраску от

4Ъ.

светлорозового до лило во крас ного цвета.

Концентрацию анализируемых веществ устанавливают путем сравнения площади и интенсивности окрашивания пятен со стандартами используя для этих целей хлороформеиние растворы.

Раочет количественного содержания производят по формуле

X « —--_- где

В

X - определяемое содержание препарата в мкг ;

В - количество мл вытяжки, ввятой для исследования ;

А - экспериментально найденное содержание препарата в пробе путем визуального сравнения.

Прямая завиоимооть концентрации крезола и ди£енялол -пропана от диаметра и интенсивности окрашивания пятна наблюдается в интервале содержания вещества до 10 ют*

ЖСТРАНШИ И ХРОМАТОГРАФИРОВАНИЕ ЮДБЛЫШХ

растворов, Перечисленных нике.

В 9. ДА

0,3 % раствор молочной кислоты 6 % раствор поваренной соли 2 % раствор уксусной кислоты, содержащей 2 % по варенной соли 2 % раствор лимонной кислоты 20 % раствор и 40 % раствор этилового спирта, 1%. раствор укоусной кислоты - проводится по