Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1 

89 страниц

Купить МР 1186-74 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Цена на этот документ пока неизвестна. Нажмите кнопку "Купить" и сделайте заказ, и мы пришлем вам цену.

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Методические рекомендации предназначены для использования сотрудниками научных и практических учреждений, проводящих исследования по арбовирусам.

Методики даны по основным полевым и лабораторным исследованиям арбовирусов, а именно: сбору материала от людей и в природных очагах, выделению арбовирусов, серологическим реакциям массового использования - реакции торможения гемагглютинации и связывания комплемента, индикации арбовирусов в членистоногих по иммунофлуоресценции.

Цель методического пособия - рекомендации единых методов сбора материала в природе и его первичной обработки с учетом условий нашей страны и современного уровня знаний по экологии арбовирусов. В данных «Методических рекомендациях» не разбираются вопросы работы с клещевым энцефалитом, так как ряд особенностей, степень изученности и обилие уже опубликованных инструктивных материалов выделяют эту арбовирусную инфекцию из общего ряда.

 Скачать PDF

Оглавление

Полевые исследования

1. Выбор мест для проведения исследования и ключевых участков для сбора материала

     А. Оценка природных условий

     Б. Сбор эпидемиологических сведений

2. Сбор позвоночных животных

     А. Мелкие млекопитающие

     1) Методы отлова и учета

     2) Абсолютный учет численности

     Б. Летучие мыши

     В. Средние и крупные млекопитающие

     Г. Птицы

     1) Учет

     2) Добыча птиц

     Д. Холоднокровные позвоночные

     Е. Лабораторная обработка позвоночных в полевых условиях

3. Сбор членистоногих

     А. Кровососущие клещи

     1) Общие вопросы сбора и обработки материала

     2) Иксодовые клещи

     а) Методика сбора клещей

     б) Методика учета клещей

     в) Методика наблюдения за жизненным циклом клещей в естественных условиях

     г) Способы содержания и получения культур клещей в экспериментальных условиях

     д) Подготовка клещей для вирусологических исследований

     е) Техника безопасности при работе с клещами

     3) Аргасовые клещи

     4) Гамазовые клещи

     5) Краснотелковые клещи

     Б. Комары

     В. Мокрецы

     Г. Москиты

     Д. Доставка паразитологического материала в вирусологическую лабораторию

4. Подсадные животные

5. Сбор материала для вирусологического и серологического исследования

     А. От людей

     Б. От домашних животных

     В. От диких позвоночных животных

6. Хранение и транспортировка материалов

7. Соблюдение правил безопасности при работе в очаге

8. Общие принципы вирусологического и серологического обследования собранного материала

Лабораторная диагностика арбовирусных инфекций

1. Реакции гемагглютинации и торможения гемагглютинации

     А. Ингридиенты реакций гемагглютинации и торможения гемагглютинации

     1) Антигены

     а) Материал для получения антигенов

     б) Методы получения гемагглютинирующих антигенов

     2) Подготовка сывороток крови для РТГА

     а) Адсорбция каолином

     б) Экстракция ацетоном

     в) Удаление нормальных агглютининов гусиных эритроцитов

     3) Получение и подготовка эритроцитов

     а) Взятие крови, обработка и хранение эритроцитов

     4) Буферные растворы

     а) Боратный буферный раствор рН 9б0

     б) 0,4 % альбумино-боратный буферный раствор pH 9,0

     в) Фосфатные буферные растворы

     г) 25 % взвесь каолина на боратном буферном растворе pH 9,0

     д) Раствор Альзовера

     е) Декстрозо-желатино-вероналовый буферный раствор

     Б. Техника постановки реакции

     1) Титрование антигенов в РГА

     2) Реакция торможения гемагглютинации

     а) Титрование рабочей дозы антигена

     б) Техника постановки РТГА

     в) Оценка результатов реакции

     В. Приложение

     1) Реактивы

     2) Оборудование

2. Микрометод реакции связывания комплемента с арбовирусами

     А. Ингредиенты реакции

     1) Антигены

     2) Сыворотки

     3) Комплемент

     4) Гемолитическая сыворотка

     5) Эритроциты

     6) Гемолитическая система

     7) Солевые растворы

     а) Трис-буферный раствор

     б) Вероналовый буфер

     в) Физиологический раствор

     Б. Техника постановки реакции

     1) Титрование антител и антигенов

     2) Изучение антигенных связей между вирусами в РСК

     В. Приложение

     1) Реактивы

     2) Оборудование

3. Индикация арбовирусов в слюнных железах комаров методом иммунофлуоресценции

     А. Оборудование и материалы

     Б. Подготовка объекта исследования

     1) Извлечение слюнных желез

     2) Фиксация слюнных желез

     В. Окраска препаратов

     1) Подготовка ингредиентов для окраски препаратов

     2) Окраска препаратов

     3) Оценка результатов

 
Дата введения01.01.2021
Добавлен в базу01.01.2019
Актуализация01.01.2021

Этот документ находится в:

Организации:

27.09.1974УтвержденМинздрав СССР1186-74
РазработанИнститут вирусологии им. Д.И. Ивановского АМН СССР
Стр. 1
стр. 1
Стр. 2
стр. 2
Стр. 3
стр. 3
Стр. 4
стр. 4
Стр. 5
стр. 5
Стр. 6
стр. 6
Стр. 7
стр. 7
Стр. 8
стр. 8
Стр. 9
стр. 9
Стр. 10
стр. 10
Стр. 11
стр. 11
Стр. 12
стр. 12
Стр. 13
стр. 13
Стр. 14
стр. 14
Стр. 15
стр. 15
Стр. 16
стр. 16
Стр. 17
стр. 17
Стр. 18
стр. 18
Стр. 19
стр. 19
Стр. 20
стр. 20
Стр. 21
стр. 21
Стр. 22
стр. 22
Стр. 23
стр. 23
Стр. 24
стр. 24
Стр. 25
стр. 25
Стр. 26
стр. 26
Стр. 27
стр. 27
Стр. 28
стр. 28
Стр. 29
стр. 29
Стр. 30
стр. 30

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

ПО ЛАБОРАТОРНЫМ И ПОЛЕВЫМ ИССЛЕДОВАНИЯМ АРБОВИРУСОВ

1975 г.

«УТВЕРЖДАЮ* Заместитель Министра здравоохранения СССР

П. Н. Бургасов № 1186*74 27 сентября 1974 г.

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

ПО ЛАБОРАТОРНЫМ И ПОЛЕВЫМ ИССЛЕДОВАНИЯМ АРБОВИРУСОВ

Москва—1975

При необходимости проведения детального Эпидемиологического анализа некоторые сведения об интенсивности связи местных жителей с природой (по роду профессиональной деятельности, в период отдыха, в разные сезоны года и т. п.) могут быть дополнительно получены методом поголовного опроса населения в процессе подворных обходов, проводимых обычно с участием местных медицинских работников (среднее звено). Для этого разрабатываются анкеты с вопросниками той или иной степени детальности. К числу важных сведений относятся данные об интенсивности связей населения с членистоногими — переносчиками арбовирусов и о динамике этих связей во времени и в пространстве. Для оценки этого фактора наблюдения паразитологов дополняются анкетными сведениями, полученными при подворных обходах. При этом в анкету включаются вопросы о нападении кровососущих членистоногих в разных условиях (например, о случаях присасывания клещей и т. п.).

3. Первыми и наиболее важными задачами, возникающими при анализе взаимоотношений населения с популяцией возбудителя, являются: а) возможно более полное выявление клинических случаев, позволяющих предполагать арбови-русную этиологию; б) проведение лабораторной диагностики выявленных случаев; в) проведение иммунологического обследования населения для изучения заражаемости.

Подозрение на арбовирусную инфекцию должно возникать при появлении вспышек заболеваний в весенний, летний и раннеосенний период, или спорадической заболеваемости, протекающей с явлениями энцефалита, менингита, геморрагического синдрома, общелихорадочного заболевания с сыпью, лимфаденитом, суставными и мышечными болями, а в некоторых случаях — только с подъемом температуры. Клиническая картина при арбовирусных инфекциях не имеет патогно-моничных симптомов. Даже в случае инфекций, протекающих с симптомами поражения ЦНС, с геморрагическим синдромом, клиническая картина варьирует от тяжелейших случаев с летальным исходом до инаппарантного течения. Причем при большинстве арбовирусных инфекций инаппарантные формы встречаются значительно чаще, чем клинические. Эти особенности клинической картины при арбовирусных инфекциях обусловливают необходимость использования лабораторных методов при постановке диагноза. Только па основании выделения вируса от больного (обследуются пробы крови в возможно более ранние сроки заболевания) или репрезентативного нарастания ( > 2 лog) титров антител в парных сыворотках, взятых в ранний период и в период

10

реконвалесценции (через 2—4 недели), может быть поставлен достоверный этиологический диагноз при любой арбовирус-чой инфекции. Наиболее полное выявление случаев заболеваний с подозрительной этиологией может быть проведено с помощью подворных обходов во время вспышки.

Характер иммунологической структуры населения является основным показателем, на котором сказывается влияние почти всех факторов, воздействующих на интенсивность заражения. Серологическому обследованию подлежит население, проживающее в населенных пунктах, типичных для данной местности. В каждой ландшафтной зоне серологическое обследование должно быть проведено по крайней мере в двух сходных пунктах (или группах пунктов), расположенных по возможности в разных местах данной ландшафтной зоны. Из обследования исключаются лица, привитые против арбо-вирусных инфекций, а также недавно приехавшие. Общее количество обследованных должно составлять около 0,1 — 0,3% от всего населения. На каждом объекте (по 2 на каждую ландшафтную зону) должно быть обследовано около 200 чеолвек разных возрастных групп. Минимальный объем обследования па объекте — 100 человек в возрасте от 18 до 49 лет. Отбор лиц для обследования среди разных контингентов в избранных населенных пунктах осуществляется методом случайной выборки. Образцы крови собираются однократно в конце или после окончания эпидемического сезона (июль-декабрь), идеально—двукратно (перед и после окончания эпидсезопа у одних и тех же лиц). Кровь берут стерильно шприцем из вены в количестве 5—10 мл. В порядке исключения допустим сбор крови на диски фильтровальной бумаги.

Разработать и обосновать рациональную систему мероприятий по борьбе с инфекцией дает возможность только комплексная оценка всех эпидемиологических сведений (главным образом, места и интенсивность связей жителей с природным очагом и переносчиками инфекции, характер заражаемости и заболеваемости), а также эпизоотологиче-ских сведений об основных хозяевах и переносчиках вируса, их экологии и межпопуляционных взаимоотношениях, о факторах заноса инфекции и механизмах переживания неблагоприятных сезонов. Это могут быть либо профилактические меры (предохранение от покусов переносчиками, вакцинация населения), либо ликвидация возможности заражения па определенных площадях (методы дезинсекции и дератизации) вплоть до ликвидации конкретного природного очага путем прерывания возможности осуществления цикла круговорота возбудителя. Актуальной может быть и разработка

11

мероприятий по предотвращению возможного заноса инфекции из других очагов в том случае, когда подобный занос достоверно доказан и выявлены его пути и механизмы.

2. Сбор позвоночных животных

При изучении позвоночных животных прежде всего стараются выявить все доступные признаки наличия эпизоотий. Так, при некоторых арбовирусных инфекциях замедляется рост молодых животных и т. д. Однако следует помнить, что при многих известных арбовирусных заболеваниях клинически выраженных признаков у позвоночных не обнаруживается, и развитие эпизоотии в популяции внешне не заметно. Во всех случаях в выбранных для исследования местах определяют видовой состав (фауну), обилие разных видов и изменения численности, распределение животных по биотопам, взаимоотношения позвоночных с кровососущими членистоногими. Существенное значение может иметь также изучение половой и возрастной структуры популяций, местных и сезонных особенностей образа жизни. Основное внимание уделяют наиболее многочисленным видам позвоночных, подвергающимся массовому нападению кровососущих членистоногих.

Разнообразие систематического положения и экологических особеностей позвоночных заставляет разделить их на несколько групп, требующих для изучения применения специфических методов. Это: 1) мелкие млекопитающие (грызуны и насекомоядные), 2) летучие мыши, 3) средние и крупные млекопитающие (разных отрядов и семейств), 4) птицы, 5) холоднокровные позвоночные (в основном пресмыкающиеся). Методы сбора материала приведены отдельно для каждой группы.

А. МЕЛКИЕ МЛЕКОПИТАЮЩИЕ

1) Методы отлова и учета

Наиболее распространенным методом оценки обилия мелких млекопитающих является учет ловушками со стандартной приманкой. В качестве орудий лова применяются пружинные капканчики (ловушки Геро или Соколова). Ловушки расставляют в линию в однородном местообитании. В настоящее время наиболее часто употребляются учетные линии с числом ловушек в 25, 50 и 100 штук, с расстоянием между ловушками 5 м. Наиболее удобна учетная линия из 25 ловушек. Стандартной приманкой служит корочка хлеба, смоченная растительным маслом. Учетные линии расставляют

12

вечером, не позже, чем за час до захода солнца. Утром, после восхода солнца, ловушки снимают. Показателем обилия служит число зверьков в расчете на 100 ловушко-суток.

Для вычисления достоверных сравнительных показателей обилия объем учетных работ в каждом местообитании должен составлять не менее 150 ловушко-суток единовременно (в течение одной декады). Периодически в связи с сезонными изменениями численности зверьков учеты в тех же местах обитания повторяют.

Численность некоторых видов учитывают линиями ловушек или капканов, расставленных без приманки. Так, для учета водяной крысы можно использовать дуговые капканы №№ 0 и 1, расставляя их по урезу воды вдоль берега на дорожках и кормовых столиках через 10 м друг от друга. Показателем обилия в этом случае служит число зверьков, пойманных на один километр однотипной береговой линии.

Применение стандартных линий дает возможность использовать для оценки численности членистоногих переносчиков такой показатель, как число эктопаразитов, собранных с зверьков на 100 ловушко-суток или на одну стандартную учетную линию.

Применение метода ловушко-линий дает возможность характеризовать сезонное и многолетнее изменение обилия мелких млекопитающих, изучать территориальное и биотопи-ческос размещение зверьков, производить их отлов и получать ряд цепных сведений об экологии хозяев паразитов и носителей арбовирусов. Подробно способы учетов и обработки полученных данных изложены в сборнике «Методы изучения природных очагов болезнен человека» п/ред. П. А. Петрищевой и Н. Г. Олсуфьева, Медицина, 1964 г.

Некоторые мелкие млекопитающие (землеройки, мышов-ки, лемминги и др.) плохо ловятся или совсем не идут в ловушку с приманкой. В этих случаях для учета численности зверьков используют ловчие канавки или заборчики, которые устраивают во всех основных местах обитания, пригодных для вкапывания цилиндров. Преимуществом этого метода является и то, что зверьки добываются живыми. В канавку длиной 50 м, шириной и глубиной 25 см вкапываются 5 ловчих цилиндров (металлических или сделанных из толя, рубероида). Диаметр цилиндра 25 см (ширина канавки), высота 50—60 см. Цилиндры вкапывают с интервалом 12,5 м. Края Цилиндра должны вплотную соприкасаться с вертикальными стенами канавки, а верхний обрез цилиндра должен быть на 0,5—1 см ниже дна канавки. Можно заменить канавки заборчиками; полосы из плотного картона, фанеры

13

или жести высотой 25—30 см, вставляют в бороздку глубиной в 2—3 см, прорубленную в почве и закрепляют в вертикальном положении шпильками из толстой проволоки. Цилиндры вкапывают в том же порядке, что и в канавки так, чтобы вертикальный обрез цилиндра был на 2—3 см ниже поверхности земли, а края заборчика заходили на 0,5—1 см внутрь цилиндра. Канавки и заборчики обходят рано утром и собирают зверьков, попавших в цилиндры. Единицей учета служит число зверьков, попавших в цилиндры за 10 дней работы одной канавки. При условии регулярной чистки канавки дают также массовый материал для изучения сезонной динамики численности эктопаразитов в определенных местах обитания. Но при этом следует учитывать возможность перехода эктопаразитов с одного зверька на другого, попавшего в тот же цилиндр.

Одним из основных способов учета численности грызунов и других обитающих в норах млекопитающих открытых ландшафтов— в степи, пустыне, на сельскохозяйственных угодьях, лугах и в некоторых типах тундр является подсчет нор или входных отверстий в них. Благодаря простоте и доступности этот способ учета незаменим для быстрой ориентировочной оценки размещения животных по биотопам. Подсчет нор осуществляют на пробных площадках или маршрутных лентах различной ширины. В зависимости от вида учитываемых животных и плотности их населения размеры площадок могут колебаться от 0,25 до 10 га. Прямоугольная площадка пересекается цепью учетчиков, идущих на равном расстоянии друг от друга. Каждый учетчик подсчитывает норы на полосе между собой и идущим по одп> сторону соседом. Ширина обзора колеблется от 1 доЮм, в зависимости от густоты и высоты травяного покрова и размера учитываемых нор. Если учетчик работает без помощника, то обследование площадки совершается при движении челноком. Чтобы не подсчитать повторно одни и те же норы, учетчик после очередного хода ставит на соответствующих сторонах площадки метки, каждый раз передвигая их па ширину обзора. При учете мелких грызунов отмечают группы нор (колоний) и число входных отверстии, разделяя их на жилые и нежилые.

Маршрутный учет заключается в подсчете входных отверстий, отдельных нор или их групп на лентах различной ширины. Маршрутный учет нор мелких грызушов можно проводить вдвоем или в одиночку. При учете вдвоем учетчики связаны закрепленным на поясах шнуром, длина которого, в зависимости от густоты и высоты травостоя, колеблется от 2 до 6 м, Один из учетчиков отмеряет пройденное рассто* 14

яние, другой записывает длину маршрута в каждом биотопе и результаты учета. Оба учетчика считают семейные группы нор, подразделяя их на жилые и нежилые, и число входных отверстий Учитываются моры, не только целиком попавшие в учетную полосу, но и попавшие частично — с одной стороны маршрута (правой или левой — по выбору учетчиков), Записывают, на каком месте учетной полосы встречена каждая нора. При переходе из одного биотопа в другой отмечают пройденное расстояние. При маршрутном учете мелких грызунов, проводимом одним человеком, пользуются ограничителем в виде двухметровой рейки, на концах которой свободно висят прутья. Рейку средней частью закрепляют с помощью ремня на груди учетчика, а свисающие прутья ограничивают ширину обзора. Мерой пройденного расстояния служат шаги учетчика, переводимые при обработке учетных данных в метры. Во всем остальном техника ведения учета и записи результатов одним человеком не отличается от таковой при учете вдвоем.

Количественный учет некоторых грызунов путем подсчета их пор можно проводить с автомашины, аэровизуально или по аэрофотоснимкам. С машины, идущей со скоростью 25—30 км/час, подсчитывают норы, встреченные в полосе шириной 20 м (по Юме каждой стороны машины), определяемой па глаз, и отмечают жилые они или нет. Результаты учета выражают числом нор на один гектар обследованной площади. С автомобиля можно вести учет численности зайцеобразных, грызунов, насекомоядных, имеющих хорошо заметные норы (пищухи, сурки, суслики, некоторые песчанки) или оставляющих на поверхности обширные выбросы земли при устройстве нор (слепушонки, слепцы, цокоры, водяные крысы в период зимовки, кроты и т. д.). Учет с автомобиля позволяет быстро улавливать общие черты распределения зверьков, намечать границы отдельных поселений и распределение вида в целом. Использование коэффициентов заселенности нор, полученных при стационарных работах, позволяют перевести данные автомобильных учетов некоторых видов (сурки, суслики, большие песчанки) в показатели обилия зверьков па единицу площади.

Аэровизуальный метод учета разработан применительно к большой песчанке. С самолета, летящего на высоте до 200 м по заранее намеченному маршруту, подсчитывают все норы больших песчанок, попадающие в полосу, ширина которой определяется углом, образуемым двумя линиями, идущими от глаза наблюдателя через точки, заранее намеченные на переднем или заднем краю крыла самолета. По-

казателем численности служит среднее количество нор, отмеченное за 5 минут полета. Аэровизуальный учет численности большой песчанки позволяет установить относительное обилие нор на различных участках обследуемой территории, выяснить их границы и связь с определенным ландшафтом.

Аэровизуальный учет численности ряда видов млекопитающих и применение для этой цели крупномасштабных аэрофотоснимков весьма перспективны, С их помощью мо^к-но в кратчайшие сроки составить представление о кружеве ареала, очертаниях отдельных поселений, особенностях био-топического распределения и численности некоторых видов на обширных пространствах. Проведение подобных учетов на протяжении нескольких лет позволяет получить количественную характеристику пульсации границ отдельных поселений и ареала в целом,

2) Абсолютный учет численности

Для получения данных об абсолютном обилии зверьков применяют метод полного вылова зверьков на площадках, изолированных для того, чтобы избежать вселения со стороны. Изоляция достигается огораживанием площадок различными способами и материалами. Для изоляции площадок по учету численности сусликов надежным препятствием служит дощатый забор 60 см высотой или даже шнур с цветными флажками, закрепленными вплотную друг к другу. Полуденных и гребенщиковых песчанок хорошо задерживают проволочная сетка высотой 80—90 см, при условии расстановки вдоль ее нижнего края снаружи и внутри площадки капканов с интервалом 10—15 м. Надежную изоляцию площадок по учету численности мелких зверьков в лесу можно получить, огораживая площадку при помощи фанерных или металлических заборчиков 30 см высоты с двойным рядом ловчих циллиндров (внутри и снаружи заборчика). Облов изолированных площадок в основном производится для получения поправочных коэффициентов к менее трудоемким относительным способам учета. Лишь в лесных местообитаниях его можно применять с прямой целью — установления плотности популяции зверьков — прокормителей личинок и нимф иксодовых клещей.

Для исчерпывающего вылова зверьков на изолированных площадках применяют комплекс ловушек: проволочные кап-канчики (ловушки Геро или ловушки Соколова), живоловки, дающие возможность получить живых зверьков, и канавки с цилиндрами для отлова плохо идущих в ловушки землероек, мышовок и др.

16

Абсолютный учет численности мелких грызунов Можно проводить также и на неизолированных площадках путем индивидуального мечения и повторных отловов зверьков жи-воловками. Наилучшим методом мечения является ампутация пальцев в определенном порядке. Цифра 1 получается ампутацией первого пальца, 2 — второго, 3 — третьего и т. д. Цифра 6 получается ампутацией первого и второго пальца па этой же лапе, 7 — первого и третьего, 8 — первого и четвертого, 9 — первого и пятого пальцев 10 получится, если отрезать первый палец на друюй лапе. Правая задняя лапа служит для обозначения единиц, левая задняя — десятков» правая передняя сотен, левая передняя—тысяч Таким образом, можно получить до 9 999 номеров (Наумов Н. П., 1951, Кучерук В. В , 1952).

Для ловли живых зверьков в целях мечения и получения ценного материала для вирусологического и серологического обследования используют разные системы живоловок. Мышей, полевок, мелких песчанок, хомячков ловят сетчатыми и проволочными ловушками с домиками и без них. Ловушки без домиков можно употреблять только в теплый период года или в южных районах. В холодную погоду следует пользоваться ловушками с домиками, куда можно поместить гнездовой материал и запасы корма. При жаркой погоде, чтобы предотвратить гибель зверьков от перегревания, ловушки всех конструкций надо либо очень часто проверять, либо закрывать на день. Водяных крыс, хомячков, песчанок, сусликов ловят живоловками Зайцева. Для ловли сусликов используют также «донецкие» ловушки. Живых сусликов и сурков можно добывать капканами, надевая на их дужки резиновую трубку или обматывая их материей, чтобы не нанести повреждения зверьку. Мелких насекомоядных добывают в ловчие цилиндры, методика та же, что и при учетах с помощью канавок и заборчиков (См. раздел «Мелкие млекопитающие; методы отлова и учета» наст. «Методических рекомендаций»).

Живых зверьков можно добывать также осенью и зимой при полной разборке стогов, скирд, ометов Этот же метод используют и для учета. Обилие характеризуют числом особей на 1 стог или омет или на единицу объема разбираемого субстрата.

Применение всех методов учета в каждом конкретном случае не всегда осуществимо. В зависимости от местных условий и наличия сил и средств следует избрать наиболее продуктивные и доступные методы учета и отлова зверьков.

17

Б. ЛЕТУЧИЕ МЫШИ

В последнее время выявлено не только участие летучих мышей в арбовирусных эпизоотиях, но и роль их в переносе возбудителей на большие расстояния. Поэтому, если в рай' оне исследования есть скопления летучих мышей, необходи-мо собрать материал для определения их связи с арбови-русами.

Добывают живых летучих мышей на местах дневок. Это обычно укрытые и затемненные места: дупла деревьев, старые пустующие постройки, чердаки, пещеры, глубокие трещины скал. Подвесившихся или укрывшихся для отдыха летучих мышей можно просто сбивать палкой, выпиливать верхние участки дупел, добираться до них с помощью лестницы или каната и собирать руками. В сумерки после заката и перед рассветом их можно отлавливать паутинными сетями (см. раздел о птицах). Сети расставляют у входов в пещеры, у труднодоступных мест дневки. В сухих районах эффективно расположение сетей по берегам ручьев, речек и над открытым зеркалом воды. Следует учесть, что за сетями нужно вести постоянное наблюдение и сразу же вынимать из сети попавших зверьков. Для защиты от покусов, зверьков следует брать только в плотных перчатках или рукавицах.

Видовой состав выявляется при определении добытых экземпляров. Приблизительная оценка численности и распределения может быть дана в результате подсчета зверьков на местах дневок или по итогам наблюдения их активности.

В. СРЕДНИЕ И КРУПНЫЕ МЛЕКОПИТАЮЩИЕ

Млекопитающие, относящиеся к категории средних и крупных (крупные грызуны, хищные, копытные и др.) нередко служат важными прокормителями кровососущих членистоногих (например, взрослых иксодид, комаров и др.) и могут регулярно вовлекаться в эпизоотический процесс, о чем свидетельствует присутствие вируса или антител к нему. Поэтому при поисках арбовирусов, изучении природных очагов и разработке способов их оздоровления, надо оценить роль и этих позвоночных в круговороте инфекции.

Главные сведения, необходимые для оценки их значения,— это видовой состав, территориальное распределение и численность, а также связи их с переносчиками инфекции. Видовой состав выявляется предварительно по данным, опубликованным в зоологической литературе, а на месте —

18

по опросам местных жителей (охотников и натуралистов), по сведениям местных охотничьих и заготовительных организаций и по непосредственным наблюдениям в природе.

Численность охотничье-промысловых зверей можно оценивать по данным заготовок, а также выяснять у местных охотников путем опроса или рассылки специальных анкет. Однако, степень достоверности опросных сведений не слишком высока Для проведения учетов в полевых условиях полезно привлечение опытного охотника. Учеты проводят преимущественно маршрутным методом с охотничьей собакой (лайкой, гончей, фокстерьером, таксой). При этом фиксируется длина и ширина учетной полосы, характер пересекаемых местообитаний и число найденных животных. В снежный период по свежей пороше на маршруте фиксируются все пересеченные следы, отмечая расстояния и границы разных местообитаний. Некоторых ночных и сумеречных животных (заяц, шакал и т. п.) можно учитывать ночью в свете фар автомашины, движущейся по определенному маршруту. При этом расстояние записывают по спидометру и фиксируют смену местообитаний.

НорПиков, населяющих открытые ландшафты (степь, полупустыня, пустыня) учитывают на маршруте, отмечая число обитаемых нор или колоний, так, как это описано для мелких млекопитающих (см. соответствующий раздел настоящей инструкции).

Добывать средних п крупных млекопитающих можно с помощью различных самоловов — капканов, петель, живоловок разных конструкций. Ряд видов (крупные грызуны, представители копытных, хищных) добываются путем отстрела. Предварительно необходимо получить лицензии (разрешение) на право добычи животных в республиканском управлении охотничьего хозяйства. Желательно привлечь к этой работе опытного охотника или работника охотничьего хозяйства.

С добытых животных по возможности быстрее собирают эктопаразитов, а у подранков и только что отстрелянных берут кровь и органы для исследования.

Г. ПТИЦЫ 1) Учет

Орнитофауна большинства мест Советского Союза достаточно хорошо изучена и результаты отражены в сводках по различных территориям. Однако, для каждого конкретного места работы необходимо установить видовой состав,

19

Методические рекомендации предназначены для использования сотрудниками научных и практических учреждений, проводящих исследования по арбовирусам.

сравнительное обилие птиц и их распределение по различных биотопам. Существенное дополнение к литературным данным могут дать опросные сведения. Но основу орнитологической работы на первом этапе исследования должны составлять специальные учеты видового состава и обилия птиц.

Большинство существующих методов учета птиц приблизительны. В идеальном случае они должны давать полное представление о количестве птиц того или иного вида. Но погода, густота растительности и, главным образом, опыт и навыки учетчика, влияют на процент учтенных птиц Сравнимости результатов из разных мест или за разные сезоны достигают только тогда, когда учеты порводятся по одной и той же методике по возможности одними и теми же людьми.

Наиболее распространен маршрутный метод учета птиц, имеющий несколько модификаций. Маршрут (или несколько маршрутов) закладывают так, чтобы охватить учетом все основные биотопы интерсующего района. Чаще всего маршрутный учет проводят пешие учетчики, но при подсчетах крупных хорошо заметных птиц, например, дневных хищников, применяют учеты с автомашины или даже из окна железнодорожного вагона. При учетах с движущегося транспорта записывается километраж по спидометру или по столбам (или время и средняя скорость движения), отмечается смена ландшафтов и биотопов и фиксируются все встречи птиц. Для пересчета количества птиц на площадь при всех способах учета надо знать ширину учетной ленты, т. е. пространства справа и слева от учетчика, на котором он хорошо замечает и определяет каждую птицу. При пешем визуальном учете в открытых местах ширина учетной ленты будет больше, чем в лесу или густом кустарнике. Примерную ширину ленты определяют заранее экспериментальным путем для каждого биотопа. Учетчик может также отмечать приблизительное расстояние до каждой учитываемой птицы. Существует деление птиц на 5 групп по дальности их обнаружения: в первую группу входят птицы, хорошо заметные издалека, в пятую — обнаруживаемые на близком расстоянии (Кузякин, 1961). За пределами установленной полосы птиц не учитывают. Выбранные заранее по крупномасштабной карте маршруты проходят или проезжают в часы наибольшей активности птиц.

Для определения обилия мелких, преимущественно воробьиных, птиц в период гнездования применяется маршрутный учет поющих самцов по голосу. Учет проводят в часы

20

Арбовирусы, или вирусы, переносимые членистоногими, широко распространены в природе. Многие из них вызывают тяжелые заболевания у людей. Клещевой и японский энцефалиты, крымская и омская геморрагические лихорадки, западнонильская лихорадка и москитные лихорадки являются арбовирусными инфекциями. Кроме возбудителей этих инфекций, в СССР в последнее десятилетие открыт ряд новых для науки (Тюлений, Баку, Охотский, Сахалин, Сокулук, Иссык-Куль, Баткен, Карши, Залив Терпения) или новых для нашей территории (Синдбис, Семлики, Укуниеми, Три-беч, Тягиня, Дхори) арбовирусов. Их роль в патологии человека еще не изучена.

В связи с тем, что человек осваивает новые территории в результате промышленного строительства, хозяйственной деятельности или в поисках природных ресурсов, арбовирусы представляют потенциальную опасность для здоровья. Этим обосновывается интерес к исследованиям арбовирусов.

Выявление природных очагов арбовирусов идет двумя путями: вирусологическая разведка и серологические исследования. Первое направление является основным, т. к. выделение вируса из природных резервуаров или от больных является прямым доказательством существования очагов. Серологическая разведка дает лишь ориентировочные результаты.

Природным резервуаром арбовирусов являются членистоногие (клещи, комары, мокрецы) и позвоночные животные, в том числе перелетные птицы. Последние, благодаря передвижению на большие расстояния, могут являться связующим звеном между отдельно расположенными природными

3

очагами и осуществлять занос вирусов из одних очагов в другие. Выбор объекта исследований определяется в конкретных условиях в зависимости от поставленной задачи. Эффективность исследований в значительной степени зависит от применения правильных методических приемов

Настоящие методики даны по основным полевым и лабораторным исследованиям арбовирусов, а именно: сбору материала от людей и в природных очагах, выделению арбови-русов, серологическим реакциям массового использования — реакции торможения гемагглютинации и связывания комплемента, индикации арбовирусов в членистоногих по иммунофлуоресценции.

ПОЛЕВЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

L СБОР МАТЕРИАЛА В ПРИРОДНЫХ ОЧАГАХ АРБОВИРУСОВ

К настоящему времени (1972 г.) на территории нашей страны выделено 16 арбовирусов:    в субарктике — вирус

Тюленей (Магаданская, Камчатская, Мурманская области), в умереной зоне — вирус клещевого энцефалита (от восточных до западных границ), японского энцефалита (Приморский край), омской геморрагической лихорадки (Омская и Новосибирская области), Западного Нила (Астраханская область), Тюлений (Сахалинская область), Кемерово (Кемеровская область, Прибалтика), Укуниеми (Прибалтика, Западная Украина), крымской геморрагической лихорадки (Крымская, Астраханская, Ростовская области. Краснодарский и Ставропольский края), Сахалин (Сахалинская область), москитной лихорадки (Крымская область), в субтропиках— крымской геморрагической и москитной лихорадок, Сокулук, Иссык-Куль и Баткен (Среднеазиатские республики), Западного Нила, Синдбис, Баку и Тягиня (Азербайджанская ССР) Нет сомнения, что этим списком не исчерпываются арбовирусы, циркулирующие на территории СССР и имеющие важное значение в патологии человека и домашних животных. Поэтому работы, направленные на поиски природных очагов арбовирусов, путей циркуляции и мест резервации возбудителей, а также возможностей заноса их на территорию СССР из-за рубежа перелетными птицами, являются весьма актуальными. Очень важный этап работы — выяснение обстоятельств, обуславливающих возникновение эпидемически опасных ситуаций.

Для выявления всего круга вопросов по изучению экологии арбовирусов, необходимо проведение комплексных исследований с участием эпидемиологов, вирусологов, зоологов, паразитологов, биогеографов. Конечной целью исследования является разработка рациональной системы мероприятий цо профилактике и борьбе с арбовирусными инфекциями.

5

Цель настоящего методического пособия — рекомендации единых методов сбора материала в природе и его первичной обработки с учетом условий нашей страны и современного уровня знаний по экологии арбовирусов. В данных «Методических рекомендациях» не разбираются вопросы работы с клещевым энцефалитом, так как ряд особенностей, степень изученности и обилие уже опубликованных инструктивных материалов выделяют эту арбовирусную инфекцию из общего ряда.

1. Выбор мест для порведения исследования и ключевых участков для сбора материала

Перед выездом в поле выбирают район для проведения исследований. При этом используется целый ряд предварительных сведений. В зависимости от целей исследования могут быть избраны места: 1) где отмечены заболевания людей известными арбовирусными или похожими на них инфекциями; 2) где уже выделены арбовирусы от домашних или диких позвоночных, членистоногих-переносчиков или получены положительные серологические данные при исследовании крови местных жителей, домашних и диких животных; 3) где на основании теоретических предпосылок предполагается наличие природных очагов арбовирусов; 4) где по косвенным признакам можно ожидать занос арбовирусов (например, места массовой концентрации перелетных птиц) или активизацию их циркуляции (массовые скопления позвоночных при обилии кровососущих членистоногих); 5) типичные для данного ландшафта (при проведении систематической разведки необследованных территорий); 6) места, где нужно подтвердить отсутствие арбовирусов.

Ключевые участки или конкретные пункты для сбора материала в иследуемом районе подбирают, используя литературные и ведомственные сведения, а также личное ознакомление с природными условиями обследуемой территории.

Для получения сравнительных данных и для изучения пространственного распределения эпизоотии ключевые участки закладывают в основных типах биоценозов, наиболее характерных для данной местности. Местами сбора материала служат также населенные пункты и их окрестности, где были обнаружены идентифицированные или подозрительные случаи заболевания людей и животных, а также скотоводческие хозяйства, птицефермы, зверофермы и т. п. Ключевые участки закладывают также в местах массовых скоплений диких позвоночных животных и повышенного обилия кровососущих членистоногих. Площадь каждого ключего участка

6

Определяется конкретными особенностями района исследований, поставленными задачами, составом и возможностями рабочей группы. Ориентировочно можно рекомендовать размер от одного до нескольких квадратных километров.

А. ОЦЕНКА ПРИРОДНЫХ УСЛОВИЙ

Главная цель исследований природных условий — выявить современное распределение на обследуемой территории биоценозов, включающих патогенные арбовирусы, и охарактеризовать основные факторы среды, оказывающие влияние на популяцию возбудителей. Для предварительной оценки природных условий используют опубликованные данные о природных особеностях местности и имеющиеся картографические материалы, а в процессе полевых исследований проводится комплекс наблюдений на месте работы и составляются схемы и планы обследованного района.

Перед выездом в поле необходимо, помимо знания административного положения обследуемой местности, составить общее представление о природных особенностях района работ, ознакомившись с его комплексной физико-географической характеристикой. Из существующей обширной географической литературы выбирают данные о ландшафтно-географическом положении района, т. е. устанавливают, в какой физико-географической стране, зоне, провинции, области он расположен, проходят ли зональные границы по его территории. Особое внимание должно быть обращено на данные о рельефе, размещении водоемов, характере растительности и степени увлажнения, сезонным данным по осадкам, температурному режиму (Ht° > 10°), месячным изотермам. Необходимо собрать возможно более полные сведения о членистоногих— переносчиках заболеваний (видовой состав, изменения числености, распределение, связь с позвоночными — прокормителями) и о массовых видах позвоночных. Для этого следует ознакомиться с биогеографическими и медико-географическими источниками, которые существуют для отдельных районов СССР. Полезные сведения о территориальном распределении природных условий в нужном районе дают комплексные карты и атласы республик, краев и областей Советского Союза. Из работ такого характера можно использовать серийные издания; «Республики Советского Союза», «Природные условия и естественные ресурсы СССР» издательства АН СССР, «Труды заповедников СССР». Можно пользоваться физико-географическим атласом мира (ГУГК, 1964), Атласом СССР, региональными атласами по областям и респуб-

7

ликам СССР, такими мелкомасштабными картами как «Карта растительности СССР 1:10 000 000» (ГУГК, 1960), «Зоо-географическая карта СССР» 1:10000000 (ГУГК, 1960), «Карта лесов СССР» 1:10000000 (ГУГК, 1960), «Климатическая карта СССР» 1: 10 000 000 (ГУГК, 1965).

На первом этапе полевых исследований полезно провести ознакомление с подобранной для изучения территорией и выбор ключевых участков с помощью аэровизуального обзора. Его можно осуществить с легкого самолета (ПО-2, Як-12) или вертолета, облетая на небольшой высоте (300—400 м) всю территорию, подлежащую изучению. При этом надо иметь крупно- или среднемасштабную карту или план местности, чтобы во время полета наносить на них все необходимые пометки.

При первых выходах в поле по ходу маршрутов отмечают рельеф, расположение водоемов, выявляют и описывают приуроченные к комплексу этих факторов биоценозы разных рангов — сверху вниз от биоценозов зон до четко различающихся растительных формаций. Наиболее доступно и рационально проводить геоботанические описания, указывая для каждого выдела видовой состав фоновых растений по ярусам от верхнего до наземного, возраст насаждений, высоту растений, их обилие и проективное покрытие, характер почвы, грунта и степень увлажения. Параллельно учитывают все видимые признаки, свидетельствующие о животном населении, приуроченном к различным растительным формациям.

В результате серии разведывательных маршрутов составляют картосхему размещения на исследуемой территории основных типов биоценозов, к которой впоследствии «привязывают» эпидемиолгические и эпизоотологические данные.

При работе на ключевых участках для наглядного изображения размещения биоценозов, точек работы, мест проведения учетов, взятия проб и т. д. используют имеющиеся картографические материалы:    крупномасштабные топо

графические карты (1:25 000— 1:1 000 000), карты лесоустройства, землеустройства, планы колхозных и совхозных земель, аэрофотоснимки. (Для получения аэрофотоснимков и топографических карт требуется специальное разрешение, которое нужно оформлять до выезда на работу)

Нанесение обстановки и полученных сведений на план или карту проводят в процессе наземных наблюдений и маршрутных работ. С подробностями проведения маршрутной съемки (взятие азимутов, определение углов и направлений, определение расстояний разными методами, учет ошибок) можно подробно ознакомиться в соответствующих руководствах.

8

Сведения об общем климатическом режиме на обследуемой территории и о местных особенностях погоды можно получить на ближайшей метеорологической станции, а для детальной сравнительной характеристики условий в разных биоценозах (и разных ярусах) следует регулярно измерять температуру и влажность (с помощью термометра, гигрометра и психрометра или соответствующих самопишущих приборов) В процессе всех наблюдений нужно ежедневно записывать состояние погоды — облачность, осадки, ветер и т. п.

Б. СБОР ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИХ СВЕДЕНИЙ

Сбор материалов для характеристики эпидемиологической ситуации проводится в трех основных аспектах: 1) получение статистических сведений о населении обследуемого района; 2) изучение связей населения с потенциальными или действующими природными очагами арбовируса; 3) выявление заражаемости и заболеваемости населения арбовирусами.

1. Статистические сведения о населении включают данные: а) по общей численности населения в районе обследования, ее распределению по административным территориальным единицам и по населенным пунктам разного типа (города, поселки городского типа, сельские поселки и временные поселения человека: полевые станы, дома отдыха, лагери, турбазы и т. д.); б) по возрастной структуре населения (через каждые 5 лет: 0—4, 5—9 и т. д. или по трем группам: 0—17 лет, 18—49 лет, 50 лет и старше) и по длительности пребывания в данной местности; в) по профессиональному составу. Статистические сведения можно получить в местных Советах депутатов трудящихся.

2 Для оценки связей населения с природной средой все сведения о населении (пункт 1) приурочивают к различным ландшафтным зонам и другим природным подразделениям местности. При этом используют карты административного деления территории с нанесенными на них населенными пунктами, по которым собраны статистические сведения, сопоставляя их с картами распределения природных условий — как с изданными ладшафтно-географическими картами, так и с картами и планами, составленными в процессе собственных исследований природных условий в районе работ. Статистические данные суммируются по населенным пунктам в контурах определенных ландшафтных выделов. Все эпидемиологические данные рассчитываются на 100 тысяч населения.

9