Методика выполнения измерений содержания антибиотиков группы тетрадиклинов в продукции животного происхождения методом ИФА с использованием наборов реагентов MaxSignal® и ИФА антибиотик - тетрациклин МВИ.МН 3830-2015

(взамен МВИ.МН 3830-2014)

СОДЕРЖАНИЕ

1    Область применении.......................................................................................3

2    Томность измерений........................................................................................4

3    Средства измерении, испытательное н вспомогательное оборудование,

материалы, реактивы...............................................................................................6

4    Метод измерений.............................................................................................9

5    Требования безопасности и требования к квалификации операторов......10

5.1    Общие требования безопасности.....................................................................10

5.2    Требования к квалификации операторов.........................................................10

6    Условия выполнения измерении..................................................................10

7    Условия инкубации микротнтровальных планшетов в помещении..........10

8    Условия хранения набора реагентов............................................................10

9    Подготовка к выполнению измерений.........................................................11

9.1    Отбор образцов...............................................................................................11

9.2    Подготовка лабораторной посуды...................................................................11

9.3    Приготовление растворов...............................................................................11

9.4    Подготовка набора реагентов..........................................................................14

9.5    Подготовка проб.............................................................................................17

10    Выполнение измерений.................................................................................23

10.1    Общие требования..........................................................................................23

10.2    Дозирование компонентов набора реагентов и последовательность операций

при выполнении анализа..........................................................................................23

11    Обработка результатов измерения...............................................................25

11.1    Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях

повторяемости..........................................................................................................27

12    Оформление результатов измерений...........................................................28

12.1    Форма представления результатов измерения с использованием расширенной

неопределенности.....................................................................................................28

12.2    Форма представления результатов в виде односторонней оцеики массовой

концентрации антибиотиков группы тетрациклинов с использованием предела измерения.................................................................................................................28

12.3    Форма представления результатов в виде односторонней оценки массовой

концентрации антибиотиков группы тетрациклинов с использованием значения верхней границы диапазона измерений....................................................................28

13    Контроль точности результатов измерений................................................29

13.1    Оперативный контроль результатов, полученных в условиях повторяемости.29

13.2    Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях

промежуточной прецизионности..............................................................................29

13.3    Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях

воспроизводимости..................................................................................................29

13.4    Контроль правильности..................................................................................31

13.5    Контроль стабильности результатов измерений с применением контрольных

карт Шухарта (КК)...................................................................................................32

14    Нормативные ссылки....................................................................................34

Библиография.........................................................................................................35

планшеты должны храниться в плотно закрытой упаковке. Если набор реагентов нс планируется использовать более одного месяца, то следующие компоненты рекомендуется хранить при температуре минус 20 °С:

•    основной стандарт тетрациклина, раствор антител к тетрациклину X? I. конъюгат антител с псроксидазой № 2 (набор реагентов «MaxSignal OR) для определения тетрациклина (фуины теграциклинов)»;

•    конъюгат, антитела к тетрациклину, градуировочные растворы (набор peareirroB «ИФА антибиотик - тетрациклин»).

9 Подготовка к выполнению измерений

9.1    Отбор образцов

Отбор образцов для анализа проводят по СТБ 1036. Отобранные образцы могут храниться в защищенном от света месте при температуре от плюс 2 °С до плюс 4 °С в течение 2-х дней или в замороженном виде при температуре нс выше минус 20 °С в течение 14 дней. Перед проведением подготовки проб по п. 9.5 замороженные образцы должны быть разморожены при температуре от плюс 2 °С до плюс 4 °С.

9.2    Подготовка лабораторной посуды

Силыюзагряз11енпую лабораторную посуду предварительно обрабатываю! хромовой смесью. Лабораторную посуду после мойки в растворе специализированного моющего средства промывают водопроводной, ополаскивают дистиллированной водой 2 раза и высушивают.

Запрещается:

•    многократное использование одноразовой лабораторной посулы:

•    использование бытовых моющих средств для мойки лаборагориой посуды.

9.3    Приготовление растворов

9.3.1    Приготовление растворов, используемых при работе с набором реагентов «MaxSignal ® для определения тетрациклина (группы тетрациклимов)»

9.3.1.1    Приготовление 30 % раствора гидроокиси натрия

Навеску гидроокиси нагрия массой 15,0 г. взвешенную с погрешностью нс более 0,1 г, помещают в коническую колбу вместимостью 250 см³. В колбу приливают 35 см³ дистиллированной воды, отмеренной цилиндром. Мосле растворения гидроокиси натрия раствор охлаждают до комнатной температуры (от плюс 20 °С до плюс 25 °С). Раствор используют свежеприготовленным.

9.3.1.2    Приготовление 10 мМ фосфатно-солевого буфера

Навески калия фосфорнокислого однозамещениого массой 0,240 г, калия хлористого массой 0,200 г, взвешенные с погрешностью не более 0.001 г, а также нагрия фосфата двуосновного массой 1,44 г (или нагрия фосфорнокислого двузамещенного 2-водного массой 1.87 г), хлористого натрия массой 8,00 г. взвешенные с погрешностью не более 0,01 г, помешают в мерную колбу вместимостью 1000 см³, добавляют такое количество дистиллированной воды, чтобы колба заполнилась примерно до половины своей вмест    полного

растворения и доводят до метки дистиллирова) раствора его pi 1 доводят до 7,4. добавляя но капля

приготовленный по п. 9.3.1.1. Раствор хранят при комнатной температуре (от плюс 20 °С до плюс 25 °С) не более одного месяца.

9.3.1.3 Приготовление экстракционного ОХТЕТ-буфсра

В коническую колбу вместимостью 100 см³ или 250 см³ (в зависимости от объема приготавливаемого расгвора) приливают дозатором или цилиндром аликвоту концецфата экстракционного ОХТЕТ-буфера, добавляют цилиндром в 4 раза больший по отношению к объему добавленной аликвоты концентрата объем дистиллированной воды и перемешивают раствор.

Объем используемой аликвоты V , см³, концентрата экстракционного ОХТЕТ-буфера рассчитывается на основании количества анализируемых образцов мяса, готовых к употреблению мясных продуктов, рыбы, креветок, масла, сыра, творога, яиц по формуле

где    - количество вышеперечисленных анализируемых образцов;

V_x - объем экстракционного ОХТЕТ-буфера, приготавливаемого в запас, см³ (нс менее 1 см³).

Экстракционный ОХТЕТ-буфср приготавливается непосредственно перед использованием и хранению не подлежит.

9.3.1.4    Приготовление 1 М раствора МаОН

Навеску гидроокиси натрия массой 4,00 г. взвешенную с погрешностью 0,01 г, вносят в мерную колбу вместимостью 100 см³, добавляют дистиллированную воду в таком количестве, чтобы колба заполнилась примерно на половину своей вместимости. После растворения гидроокиси натрия, раствор доводят до метки дистиллированной водой. Раствор хранят при температуре (20 ± 5) °С в плотно закрытой полиэтиленовой или фторопластовой посуде не более одного месяца.

9.3.1.5    Приготовление 1 М раствора (IC1

В мерную колбу вместимостью 100 см³ наливают 50 - 70 см³ дистиллированной волы, затем добавляют отмеренные пипеткой 8,5 см³ концентрированной соляной кислоты плотностью 1,18 г/см³. I (осле перемешивания расгвора доводяг объем до метки дистиллированной водой. При использовании кислоты другой плотности ее объем необходимо пересчитывать. Раствор хранят при температуре (20 ± 5) °С не более одного месяца.

9.3.2 Приготовление растворов, используемых при работе с набором реагентов «ИФА антибиотик - тетрациклин»

9.3.2.1 Приготовление натрий-фосфатного буферного раствора

В коническую колбу вместимостью 100 см³ или 250 см³ (в зависимости от объема приготавливаемого раствора) приливают дозатором или цилиндром аликвоту концетрата мафий-фосфатного буферного раствора, ло^^^дх^^шндр<)м в 9 раз

^г‘Кон1вгЙТр^га. объем

' \\

\ff [С 1\1    ¹а/^иЛ-ф6сфуП1()1    О

аликвоту кон централа буферного раа вора для доведения проб, добавляют цилиндром в 99 раз больший но ш ношению к объему добавленной аликвоты концентрата объем буферного раствора для разбавления проб, приготовленного но п. 9.3.2.3 и перемешивают раствор.

Объем используемой аликвоты V, см³, концентрата рассчитывается на основании количества анализируемых образцов всех видов продукции, кроме меда, по формуле

где    ^мяр ~ количество вышеперечисленных анализируемых образцов;

V_x - объем буферного раствора для доведения проб, приготавливаемого в запас, см³ (не менее 5 см³).

Буферный раствор для доведения проб приготавливается непосредственно перед использованием и хранению пс подлежит.

9.4 Подготовка набора реагентов

9.4.1    Предварительная подготовка и правила обращения с наборами реагентов

Набор реагентов извлекают из холодильника, не открывая упаковку микротитровалмюго планшета, выдерживают при температуре от плюс 20 °С до плюс 25 °С от 1 до 2 ч. доводят температуру остальных реагентов от плюс 20 °С до плюс 25 °С.

При работе необходимо исключить прямое попадание солнечных лучей на компоненгы набора реагентов.

Растворы из набора реагентов следует готовить непосредственно перед проведением ИФЛ. Перед использованием жидкие реагенты необходимо перемешать путем осторожного вращения или переворачивания флаконов. Не допускается переливать остатки реагентов обратно в оригинальные флаконы.

9.4.2    Подготовка микротитровалыюго планшета

Количество лунок микротитровалыюго планшета, необходимых для проведения измерений ^.рассчитывается по формуле

N₉m\2 + 2N„,

где yV_w - количество образцов:

12 - количество лунок для градуировочных растворов.

Мнкротитрональный планшет со стрнпами. предварительно подготовленные в соответствии с п. 9.4.1, вынимают из упаковки. В микротитровальный планшет помещают необходимое количество стрипов, рассчитанное исходя из требуемого для проведения измерений количества лунок N„. Оставшиеся стрипы сразу же помещают в упаковку, закрывают и хранят в соответствии с разделом 8.

Распределение лунок для градуировочных растворов и проб проводят с учетом

«MaxSignal Ф для определения тетрациклина (группы тетрациклипов)»;

• «ПО ИФАантибистгик - теграциклин», разработанное ООО «Компания

использовании

«ИФЛ антибиотик - тетрациклин».

Не рекомендуется одновременно использовать более шести стрипов. Если необходимо провести измерение более 18 образцов, ИФЛ выполняется несколько роз.

9.4.3    Приготовление промывочного раствора

Отмеренную дозатором аликвоту концентрата промывочного раствора объемом от 1 до 9 см⁵ приливают в колбу вместимостью 250 см³ или 500 см³ и добавляют отмеренную цилиндром вместимостью 25 см³ или 100 см³ (в зависимости от добавляемого объема) дистиллированную воду. Объем добавляемой дистиллированной воды должен быть в 19 раз больше, чем объем концентрата промывочного раствора. После перемешивания содержимое колбы переливают в емкость с закручивающейся пробкой. Если приготовленный объем раствора нс превышает 50 см³. то для сто приготовления и хранения могут использоваться пробирки для центрифугирования вместимостью 50 см³. Полученный раствор хранят при температуре от плюс 2 °С до плюс 8 °С не более 6-ти недель в стеклянной или полюгиленовой посуде.

9.4.4    Приготовление растворов при работе с набором реагентов «MaxSignal ® для определения тетрациклина (группы тетрациклипов)»

9.4.4.1    Приготовление основного раствора тетрациклина с концентрацией 150 и г/см³

К содержимому флакона с основным стандартом тетрациклина добавляют 1.5 см³ растворителя для приготовления фадуировочных растворов, отмеренного дозатором. Содержимое закрытого флакона перемешивают на вортсксе в течение 1 мин. Полученный основной раствор тетрациклина хранению не подлежит и должен был. использован в течение дня.

9.4.4.2    Приготовление градуировочных растворов тетрациклина

Градуировочные растворы тетрациклина готовят путем последовательного разбавления основного раствора тетрациклина с концентрацией 150 нг/см³, приготовленного по п. 9.4.4.1, следующим образом. В соответствующий флакон для хранения фадуировочных растворов вносят аликвоту раствора тетрациклина и аликвоту растворителя для приготовления градуировочных растворов. Раствор тетрациклина, от которого отбирается аликвота, и объемы аликвот раствора и раствори теля, используемые для приготовления градуировочных растворов, указаны в таблице 7. Содержимое закрытого флакона перемешивают па вортсксс в течение 1 мин. Полученные градуировочные растворы тетрациклина хранению нс подлежат и должны быть использованы в течение дня. После использования остатки градуировочных растворов должны быть удалены из флаконов, подлежащих храпению. Пустые флаконы должны храниться в составе набора реагентов в холодильнике при температуре or плюс 2 °С до плюс 4°С и использоваться при последующем приготовлении градуировочных растворов.

Таблица 7 - Схема приготовления градуировочных растворов

Номер 1рад. раствора Концентрация градуировочного раствора, нг/см3 Источник аликвоты раствора тетрациклина для приготовления градуировочного раствора Объем аликвоты раствора тетрациклина Объем растворителя для приготовления |радуироночных растворов 6 1.60 основной расгвор 20 мм3 1855 мм3 5 0,80 град, раствор X® 6 500 мм3 500 mmj 4 0.40 град, раствор № 5 500 мм3 500 мм3 3 0.15 град, раствор К® 4 375 мм7” 625 мм3 2 0.05 Гоад, расгвор X® 3 200 мм3 400 мм3 1 0,00 _I_ _=_ 500 мм3

9.4.4.3 Приготовление конъюгата антител с перокендазой № 2

В стеклянную пробирку вместимостью 5 см³ или 10 см³ (в зависимости от объема приготавливаемого раствора) отбирают дозатором аликвоту конце1гграта конъюгата антител с перокендазой № 2 объемом нс менее 20 мм³, добавляют дозатором в 99 раз больший по отношению к объему добавленной аликвоты конце1гграта объем растворителя для антител № 2. Содержимое пробирки тщательно перемешивается путем вращения или переворачивания закрытой пробирки.

Объем используемой аликвоты V , см³, концентрата конъюгата антител с пероксидазой № 2 рассчитывается на основании количества используемых лунок микротитроналмют планшета но формуле

_г 150 N₄+V_x 100

где    -    количество    лунок    микротитропальиого    планшета, используемых при

проведении измерений, рассчитывается по п. 9.4.2;

У_х - объем конъюгата антител с перокендазой № 2. приготавливаемого в запас, мм³ (не менее 300 мм³).

Конъюгат антител с перокендазой К® 2 приготавливается непосредственно перед проведением ИФЛ и хранению не подлежит.

9.4.5 Приготовление растворов, используемых при работе с набором реагентов «ИФЛ антибиотик - тетрациклин»

9.4.5.1 Приготовление рабочего раствора конъюгата

В стеклянную пробирку вместимостью 5 см³ или 10 см³ (в зависимости от объема приготавливаемого раствора) отбирают дозатором аликвоту конъюгата объемом нс менее 20 мм³, добавляют дозатором в 99 раз больший по отношению к объему добавленной аликвоты коныогата объем РРК. Содержимое пробирки тщательно перемешивается путем вращения или переворачивания закрытой пробирки.

Объем используемой аликвоты К, см³, конъюгата рассчитывается на основании количества используемых лунок микротитровального планшета по формуле

проведении измерений, рассчитывается по и. 9.4.2;

V_x - объем рабочего раствора конъюгата, приготавливаемого в запас, мм³ (нс менее 300 мм³).

Рабочий раствор конъюгата приготавливается непосредственно перед проведением ИФЛ и хранению нс подлежит.

9.5 Подготовка проб

9.5.1    Подготовка проб при использовании набора реагентов «MaxSignal ® для определения тетрациклина (группы тстрациклинов)»

9.5.1.1    Подготовка проб сырого, стерилизованного и пастеризованного молока

Для подготовки проб используют образец, отобранный в соответствии с разделом 9.1. Доводят температуру образца от шнос 20 °С до плюс 25 °С, выдерживая его при комнатной температуре и тщательно перемешивают. Дозатором отбирают параллельные пробы молока объемом 1 см³ и переносят в пробирки для центрифугирования типа Эпиепдорф вместимостью 2см'. 13 пробирки добавляют отмеренные дозатором 100 мм³ ТЕТ-реагента для очистки проб молока. Пробирки интенсивно встряхивают в течение 20 с и центрифугирую! в следующем режиме: 4000 g, 10 мин. После нентрифутрования из каждой пробирки отбирают дозатором надосадочную жидкость объемом 110 мм³, и переносят ее о стеклянные пробирки вместимостью 5 см³, после чего добавляют отмеренные дозатором 290 мм³ ТЕТ-буфера для доведения проб молока и тщательно перемешивают.

Полученные подготовленные пробы используются для проведения ИФА. Допускается хранение подготовленных проб при температуре от плюс 20 °С до плюс 25 °С в течение двух часов.

9.5.1.2 Подготовка проб молочной сыворотки, восстановленной сухой молочной сыворотки, йогурта, кефира, сметаны

Для подготовки проб используют образец, отобранный в соответствии с п. 9.1. Доводят температуру образца от плюс 20 °С до плюс 25 °С. выдерживая его при комнатной температуре и тщательно перемешивают.

Сухую молочную сыворотку восстанавливают следующим образом. В мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают 2 параллельные навески образца массой 6.25 г, взвешенные с погрешностью не более 0,01 г. К навеске приливают небольшими порциями по 10-20 см³ дистиллированную воду, перемешивая содержимое вращением колбы до полного растворения, затем доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.

При наличии в образце Йогурта частиц твердой консистенции их отбрасывают. Перед взятием навески испытуемый образец тщательно перемешивают

От гомогенизированного образца отбирают две параллельные навески массой

1.00 г, взвешенные с погрешностью нс более 0,01 г, и переносят в пробирки для центрифугирования типа Эппендорф вместимостью 2 см³. 13 пробирки добавляют отмеренные дозатором 100 мм³ ТЕТ-реагента для очистки проб молока. Пробирки интенсивно встряхивают в течение 20 с и центрифугируют, в следующем режиме: 4000 g, 10 мин. После центрифугирования из кажд^^^^^^^Щ^ают дозатором надосадочную жидкость объемом 110 мм³, и

вместимостью 5 см³. после чего добавляют ((    290    мм³

^льгиыЕау* Ц) 17

ГЕТ-буфсра для доведения проб молока и тщательно перемешивают. Проверяют pH с помощью индикаторной бумаги. При необходимости доводят pH раствора до 7, добавляя дозатором по каплям I М раствор NaOH или HCI, приготовленные по пп. 9.3.1 Л 9.3.1.5.

Полученные подготовленные пробы используются для проведения ИФА. Допускается хранение подготовленных проб при температуре от плюс 20 °С до плюс 25 °С в течение двух часов.

9.5.1.3    Подготовка проб сухого молока

Для подготовки проб используют образец, отобранный в соответствии с н. 9.1. Доводят температуру образца от плюс 20 °С до плюс 25 °С, выдерживая его при комнатной температуре. От образца сухого молока отбирают две параллельные навески массой 1,00 г. взвешенные с погрешностью 0,01 г. Навески помещают в стеклянные пробирки вместимостью 10 см³ и в каждую пробирку добавляют отмеренные с помощью пипетки или дозатора 9 см³ дистиллированной воды. Содержимое пробирок встряхивают до полного растворения, после чего выдерживают в течение 15 мин п перемешивают.

Дозатором отбирают по I см³ молоки из каждой пробы и переносят в пробирки для центрифугирования типа Эппепдорф вместимостью 2 см³. Затем в пробирки добавляю! отмеренные дозатором 100 мм³ ТЕТ-реагента для очистки проб молока. Пробирки интенсивно встряхивают в течение 20 с и центрифугируют в следующем режиме: 4000 g, 10 мин. После центрифугирования из каждой пробирки отбирают дозатором над осадочную жидкость объемом 110 мм³, и переносят се в стеклянные пробирки вместимостью 5 см³, после чего добавляют отмеренные дозатором 290 мм³ ТЕТ-буфера для доведения проб молока и тщательно перемешиваю!.

Полученные подготовленные пробы используются для проведения ИФЛ. Допускается храпение подготовленных проб при температуре от плюс 20 °С до плюс 25 °С в течение двух часов.

9.5.1.4    Подготовка проб меда

Для подготовки проб используют образец, отобранный в соответствии с и. 9.1. Доводят температуру образца от плюс 20 °С до плюс 25 °С, выдерживая его при комнатной температуре. От образца меда отбирают две параллельные навески массой 0.50 г. взвешенные с погрешностью 0.01 г. Навески помещают в стеклянные пробирки с закручивающимися крышками вместимостью от 15 см³ до 50 см³ и в каждую пробирку добавляют отмеренные с помощью пинетки и/или дозатора 9,5 см³ 10 мМ фосфатно-солевого буфера, приготовленного по п. 9.3.1.1. Содержимое пробирок растворяют путем интенсивного встряхивания на шейкере в течение 10 мин.

Полученные подготовленные пробы используются для проведения ИФЛ. Допускается хранение подготовленных проб при температуре от плюс 20 °С до плюс 25 °С в течение двух часов.

9.5.1.5    Подготовка проб мяса, готовых к употреблению мясных продукюв, рыбы,

креветок

Доводят температуру образна, отобранного в соотв

Or гомогенизированного образца отбирают две параллельные навески массой

1.00    г, взвешенные с погрешностью 0,01г. Навески помещают в пробирки для центрифугирования вместимостью 15 см³ и в каждую пробирку добавляют отмеренные пипеткой или дозатором 3 см³ экстракционного ОХТЕТ-буфера. приготовленного по п. 9.3.2.1. Пробирки интенсивно встряхивают на шейкере в течение 30 мин.

Затем пробирки центрифугируют в следующем режиме: 4000 об/мин, 10 мин.

В стеклянные пробирки вместимостью 5 см³ приливают отмеренные дозатором 300 мм³ Г1П-буфера для доведения проб мяса и добавляют отобранные дозатором 200 мм³ надосадочной жидкости из пробирок с пробами, после чего перемешивают содержимое пробирок на вортексс в течение 30 с.

Полученные подготовленные пробы используются для проведения ИФА. Допускается хранение подготовленных проб при температуре от плюс 20 °С до плюс 25 °С в течение двух часов.

9.5.1.6 Подготовка проб масла сливочного, сыра, творога, яиц

Для подготовки проб используют образец, отобранный в соответствии с п. 9.1. Образец масла, охлажденный до температуры не выше минус 10 °С, измельчают с помощью терки и перемешивают. У образца сыра отделяют тесто от корки, полимерно-парафинового или воскового сплава, измельчают тесто с помощью терки и перемешивают. Образец творога тщательно перетирают в ступке. Образец яиц гомогенизируют с помощью гомогенизатора или блендера. Доводят температуру образца err плюс 20 °С до плюс 25 °С, выдерживая его при комнатной температуре.

От гомогенизированного образца отбирают две параллельные навески массой

1.00    г, взвешенные с погрешностью 0,01г. Навески помещают в пробирки для центрифугирования вместимостью 15 см³ и в каждую пробирку добавляют отмеренные пипеткой или дозатором 3 см³ экстракционного ОХТЕТ-буфера. приготовленного no п. 9.3.2.1. Пробирки с пробами масла и сыра выдерживают на водяной бане при температуре от 70 °С до 75 °С в течение двух минут.

Затем пробирки с пробами помещают на шейкер и интенсивно встряхивают в течение 30 мин, после чего центрифугируют в следующем режиме: 4000 об/мин, 10 мин.

В стеклянные пробирки вместимостью 5 см³ приливают отмеренные дозатором 800 мм³ 10 мМ фосфатно-солевого буфера, приготовленного но п. 9.3.1.1, и добавляют отбранные дозатором 200 мм³ надосадочной жидкости из пробирок с пробами, после чего перемешивают содержимое пробирок на вортексе в течение 30 с.

Полученные подготовленные пробы используются для проведения ИФА. Допускается хранение подготовленных проб при температуре от плюс 20 °С до плюс 25 °С в течение двух часов.

9.5.2 Получение растворов проб молока, молока сухого, молочной сыворотки, восстановленной сухой молочной сыворотки, ftoiypia, кефира, сметаны с фактором разбавления, увеличенным по сравнению с указанным в инструкции к набору реагентов

Если при проведении измерений в соответствии с разделом 10 проб сырого, стерилизованного и пастеризованного молока, мол^^сшвр^^^сстановленной сухой молочной сыворотки. йогурта, кефира, cs^prtSib

19

значения оптической плотности меньше, чем оптическая плотность градуировочного раствора с концентрацией тетрациклина 1,60 нг/см³. то проводят повторные измерения растворов проб с увеличенным фактором разбавления. 11риготовление растворов проб с увеличенным фактором разбавления проводят согласно пп. 9.5.1,9.5.1.2,9.5.1.3. при этом объем используемого ТЕТ-буфера для доведения проб молока должен составлять 690 мм³.

9.5.3 Подготовка проб при использовании набора реагентов

«ИФА антибиотик - тетрациклин»

9.5.3.1 Подготовка проб сырого, стерилизованного и пастеризованного молока, йогурта, кефира, творога

Для подготовки проб используют образец, отобранный в соответствии с разделом 9.1. Доводят температуру образна от шпос 20 °С до плюс 25 °С, выдерживая его при комнатной температуре.

Образец молока объемом 50-70 см³ переносят в коническую колбу вместимостью 100 см' и тщательно перемешивают. При наличии в образце йогурта частиц твердой консистенции их отбрасывают. Образец творога тщательно перетирают в ступке.

Перед взятием навески испытуемый образец 'тщательно перемешивают.

Две параллельные навески массой 1,00 г, взвешенные с погрешностью 0,01 г, переносят в пробирки для центрифугирования вместимостью 15 см³. В пробирки добавляют отмеренные дозатором 3 см³ экстракционного буфернот раствора, приготовленного по п. 9.3.2.2, и перемешивают на вортексс на максимальной скорости 10 мин или на ротаторе в течение 30 мин. Пробирки центрифугируют в следующем режиме: 4000 g. 10 мин. После центрифугирования из каждой пробирки отбирают дозатором надосадочную жидкость объемом 200 мм³, избегая попадания жира, и переносят ее в стеклянные пробирки вмесгимосхью 5 см³, после чего добавляют отмеренные дозатором 300 мм³ буферного раствора для доведения проб, приготовленного но и. 9.3.2.4, и перемешивают в течение 1 мин на вортексс.

Полученные подготовленные пробы используются для проведения ИФА. Допускается хранение подготовленных проб при температуре от плюс 20 °С до плюс 25 °С в течение двух часов.

9.5.3.2 Подготовка проб сыра, яиц, сметаны

Для подготовки проб используют образец, отобранный в соответствии с и. 9.1. Доводят температуру образца от плюс 20 °С до плюс 25 °С, выдерживая его при комнатной температуре. У образца сыра отделяют тесто от корки, полимерно-парафинового или воскового сплава, измельчают тесто с помощью терки и перемешивают. Образец яиц после удаления скорлупы гомогенизируют с помощью гомогенизатора или блендера. Образец сметаны тщательно перемешивают.

От гомогенизированного образца отбирают две параллельные навески массой

1,00 г, взвешенные с погрешностью 0,01г. Навески помещают в пробирки для центрифугирования вместимостью 15 см³ и в каждую _■ -#робщжу добавляю! отмеренные пипеткой или дозатором 3 см³ экстракцп^ннД^^^^^^К&раствора приготовленного но н. 9.3.2.2. Содержимое пробирок яере^шимЮт^^ктрксс на максимальной скорости 10 мин или на ротаторе в те^вие(30л1ЙМПА^д\ V

Затем пробирки с пробами центрифугируют

1 Область применения

Настоящая мстолика распространяется на молоко (сырое, пастеризованное, стерилизованное), молоко сухое, масло сливочное, сыр. творог, йогурт, кефир, сметану, молочную сыворотку, восстановленную сухую молочную сыворотку, мясо, готовые к употреблению мясные продукты, рыбу, креветки, яйца, мед и устанавливает метод конкурентного иммуноферментного анализа (ИФЛ) для определения содержания антибиотиков группы тстрациклинов (тетрациклина, хлортстрациклина. ролнтетрациклииа, демеклоциклина, окситетрациклина).

Методика предназначена для проведения измерений массовой концентрации шгшбнотмков ipyniiM тетрацикл иной^{1 2} с использованием набора реагентов «MaxSignal ft для определения тстрациклина (группы тстрациклинов)», каталожный помер 1016-04С («MaxSignal®Tetracycline (ТЕТ Group) ELISA Test Kit». Reference# 1016-04C) производства BlOO Scientific Corporation (США), или набора реагентов «ИФА антибиотик - тетрациклин», производства ООО «Кампания Альгнмед» (Республика Беларусь), далее набор реагентов.

Диапазон измерений методики при использовании набора реагентов «MaxSignal ft для определения тетрациклина (группы тетрапиклинов)» составляет:

•    для молока сырого, пастеризованного, стерилизованного, йогурга, кефира, сметаны, молочной сыворотки, восстановленной сухой молочной сывороткмг -от 0,60 до 12,80 мкг/кг,

•    для молока сухого - от 6,00 до 128,00 мкг/кг,

•    для мяса, готовых к употреблению мясных продуктов, рыбы, креветок - от 1,50 до 16,00 мкг/кг;

•    для масла сливочного, сыра, творога, яиц, меда - от 3.00 до 32,00 мкг/кг. Диапазон измерений методики при использовании набора реагентов

«ИФА ангибнотик - тетрациклин» составляет:

•    для молока сырого, пастеризованного, стерилизованного, йогурта, кефира, сметаны, молочной сыворотки, восстановленной сухой молочной сыворотки, сыра, творога, яиц, молока сухого³ - от 1.00 до 16,00 мкг/кг;

•    для мяса, готовых к употреблению мясных продуктов, рыбы, креветок, масла сливочного - от 1,00 до 160,00 мкг/кг;

•    для меда- от 3,00 до 32,00 мкг/кг.

Предел измерения методики мри использовании набора реагенгов «MaxSignal ft-для определения тетрациклина (группы тетради клипов)» составляет:

•    для молока сырого, пастеризованного, стерилизованного, восстановленной сухой молочной емнорогкн - 0,60 мкг/кг;

•    для молока сухого - 6.00 мкг/кг,

•    для мяса, готовых к употреблению мясных продуктов, рыбы, креветок -1,50 мкг/кг;

10 мин.

После центрифугирования из каждой пробирки отбирают дозатором нал осадочную жидкость объемом 200 мм³, избегая попадания жира, и переносят се и стеклянные пробирки вместимостью 5 см³, после чего добавляют отмеренные дозатором 300 мм³ буферного раствора для доведения проб, приготовленного по п. 9.3.2.4, и перемешивают в течение 1 мин на вортсксс.

Полученные подготовленные пробы используются для проведения ИФА. Допускается хранение подготовленных проб при температуре от плюс 20 °С до плюс 25 °С в течение двух часов.

9.5.3.3    Подготовка проб мяса, готовых к употреблению мясных продуктов, рыбы, креветок, сливочного масла

Доводят температуру образца, отобранного в соответствии с п. 9.1, от плюс 20 °С до плюс 25 °С, выдерживая его при комнатной температуре, после чего гомогенизируют с помощью гомогенизатора или блендера.

От гомогенизированного образца отбирают две параллельные нансскн массой

1,00 г, взвешенные с погрешностью 0,01г. Навески помещают в пробирки для центрифугирования вместимостью 15 см³ и в каждую пробирку добавляют отмеренные пипеткой или дозатором 3 см³ экстракционного буферного раствора, приготовленного по п. 9.3.2.2, 1 см³ н-гексана (для образцов креветок н-гоксан не добавляют). Содержимое пробирок перемешивают на вортексс на максимальной скорости 10 мин или на ротаторе в течение 30 мин.

Затем пробирки с пробами центрифугируют в следующем режиме: 4000 g, 10 мин.

После центрифугирования из каждой пробирки отбирают дозатором мадосадочную жидкость объемом 200 мм³, избегая попадания жира, и переносят ее в стеклянные пробирки вместимостью 5 см³, после чего добавляют отмеренные дозатором 300 мм³ буферного раствора для доведения проб, приготовленного но п. 9.3.2.4, и перемешивают в течение 1 мин на вортсксс.

Полученные подготовленные пробы используются для проведения ИФЛ. Допускается хранение подготовленных проб при температуре от плюс 20 °С до плюс 25 °С в течение двух часов.

9.5.3.4    Подготовка проб сухого молока

Дтя подготовки проб используют образец, отобранный в соответствии с п. 9.1. Доводят температуру образца от плюс 20 °С до плюс 25 °С. выдерживая его при комнатной температуре. От образца сухого молока отбирают две параллельные мавсскн массой 1.00г, взвешенные с погрешностью 0,01 г. Навески помещают в стеклянные пробирки вместимостью 10 см³ и в каждую пробирку' добавляют отмеренные с помощью пипетки или дозатора 9 см³ дистиллированной воды. Содержимое пробирок встряхивают до полного растворения, после чего выдерживают в течение 15 мин и перемешивают.

Дозатором отбирают но 1 см³ молока из каждой пробы и переносят пробирки для центрифугирования вместимостью 15 см³. В пробирки добавляют отмеренные дозатором 3 см³ экстракционного буферного раствора, приготовленного по п. 9.3.2.2, и перемешивают на вортексс на максимальной течение 30 мин. Пробирки центрифугируют в

•    для масла сливочного, сыра, творога, яиц. меда - 3,00 мкг/кг.

Предел измерения методики при использовании набора рсагс»ггов «ИФЛ а!гтибиотик - тетрациклин» составляет;

•    для молока сырого, пастеризованного, стсрилизонанного, йогурта, кефира, сметаны, молочной сыворотки, восстановленной сухой молочной сыворотки, сыра, творога, яиц, молока сухого, мяса, готовых к употреблению мясных продуктов, рыбы, креветок, масла сливочного - 1,00 мкг/кг;

•    для меда - 3,00 мкг/кг.

Настоящая методика разработана в соответствии с требованиями ГОСТ 8.010.

2 Точность измерений

Настоящая методика обеспечивает измерение массовой концентрации антибиотиков группы тстрациклинов в указанном выше диапазоне с показателями точности, указанными в таблицах I, 2.

В результате оценки показателя правильности для данной методики была

установлена нсзначимость смещения для всех видов продукции во веем диапазоне измерений, за исключением мяса, готовых к употреблению мясных продуктов, рыбы, креветок при использовании набора реагентов «ИФА антибиотик - тетрациклин». Статистическая значимость смещения учтена при оценивании неопределенности для результатов измерений, получаемых для вышеуказанных видов продукции при использовании набора реагентов «ИФЛ airni6noniK - тетрациклин».

Значения оценок относительной суммарной стандартной неопределенности и относительной расширенной неопределенности приведены в таблицах 3,4.

Таблица 1 - Относительные значения показателей повторяемости и промежуточной прецизионности при использовании набора реагентов «MaxSignal <S> для определения тетрациклина (группы тстрациклинов)»

Виды продукции	Диапазон измерений, мкг/кг	Относительное стандартное отклонение повторяемости аг. %	Относительное стандартное отклонение промежуточной прецизионности ту
Молоко сырое, пастеризованное, стерилизованное	от 0.60 до 12,80 включ.	4.3	5,3
Молоко сухое	от 6,00 до 128,00 включ.	4,5	6,4
Молочная сыворотка, восстановленная сухая молочная сыворотка	от 0,60 до 12,80 включ.	2,1	5,2
Масло сливочное, сыр, япца	от 3,00 до 32,00 включ.	3.2	5,6
Творог	от 3,00 до 32,00 включ.	4,0	5.4
Мясо, готовые к употреблению мясные продукты, рыба, креветки	от 1,50 до 16,00 включ.	5,2	8,3
Мед	от 3,00 до 32,00 включ.	5,3

Таблица 2 - Относительные значения показателей повторяемости и промежуточной прецизионности при использовании набора реагентов «ИФЛ антибиотик - тетрациклин»

Вилм продукции Диапазон измерений, мкг/кг Относительное стандартное отклонение повторяемости а., % Относительное стандартное отклонение промежуточной прецизионное ги % Молоко сырое, пастеризованное, стерилн-зо ванное, молочная сыворотка, восстановленная сухая молочная сыворотка от 1,00 до 16,00 нключ. 5,5 6,0 Йогурт, сметана, кефир, творог, молоко сухое от 1,00 до 16,00 включ. 4.4 5,5 Сыр, яйца от 1,00 до 16,00 включ. 4,8 5,5 Масло сливочное от 1,00 до 160,00 включ. Мясо, готовые к употреблению мясные продукты, рыба, креветки от 1,00 до 160,00 включ. 4,8 9.7 Мед от 3,00 до 32,00 включ.

Таблица 3 - Оценки неопределенности результатов измерений, выполняемых в соответствии с МВИ при использовании набора реатггов «MaxSignal ® дли определении тетрациклина (группы тетра ци кл и 11 о в)»

Виды продукции Диапазон измерений, мкг/кг Относительная суммарная стандартная неопределенность Ис,Уо Относительная расширенная неопределенность и, %, К *2./>®95 % Молоко сырое, пастсритопиннос, стерилизованное от 0,6 до 12,80 включ. 6 12 Молоко сухое от 6,00 до 128,00 включ. 7 14 Молочная сыворотка, восстановленная сухая молочная сыворотка от 0,60 до 12,80 включ. 7 14 Масло сливочное, сыр, яйца от 3,00 до 32,00 включ. 7 14 Творог от 3,00 до 32,00 включ. 6 12 Мясо, готовые к употреблению мясные продукты, рыба, креветки от 1,50 до 16.00 включ. 9 18 Мед от 3,00 до 32,00 включ. к------ - - 12 Йогурт, кефир, сметана от 0,60 до 12,80 включ. 16 - М/Ь -___-

.Альгимео/* i/j

Таблица 4 - Оценки неопределенности результатов измерений, выполняемых в соответствии с МВИ при использовании набора реагентов «ИФА антибиотик - тетрациклин»

Виды продукции Диапазон измерений, м кг/кг Относительная суммарная стандартная неопределенность Относительная расширенная неопределенность U, %, К = 2, Г = 95 % Молоко сырое, пастеризованное, стерилизованное, молочная сыворотка, восстановленная cvxaa молочная сыворотка от 1,00 до 16,00 включ. 9 18 Йогурт, сметана, кефир, творог, молоко сухое от 1,00 до 16,00 включ. 9 18 Сыр, яйца от 1,00 до 16,00 включ. 9 18 Масло сливочное от 1,00 до 160,00 включ. Мясо, готовые к употреблению мясные продукты, рыба, креветки от 1,00 до 160,00 включ. 12 24 Мед от 3,00 до 32.00 включ.

Указанные в таблицах 1 -4 метрологические характеристики получены на

оснонинин данных эксперимента в соответствии с:

•    показатели прецизионности - СТБ ИСО 5725-2;

•    показатели правильности - [ 1 ];

•    оценки неопределенности - I 1 ], [ 2 ].

3 Средства измерений, испытательное и вспомогательное оборудование, материалы, реактивы

Весы лабораторные обшего назначения по ГОСТ 24104 высокого класса точности с наибольшим пределом взвешивания до 500 г. ценой деления не более 0,01 г.

Автоматический микропланшетный фотометр с фильтром на 450 нм (лопускпс.мия погрешность измерения оптической плотности не более 15 %), например EMax Plus, производства Molecular Devices LLC, США.

Программное обеспечение «MaxSignal® ELISA Detection Analysis System», разработанное BIOO Scientific Corporation (США), при использовании набора реагентов «MaxSignal <& для определения тетрациклина (группы тстрапиклинов)»;

Программное обеспечение «ПО ИФАантибиотик тетрациклин», разработанное ООО «Компания Альгимед» при использовании набора реагентов «ИФА антибиотик - тетрациклин».

Термометр лабораторный часгачного погружения класса точности 1 с ценой деления 1 °С но Г ОСТ 28498.

Центрифуга лабораторная, обеспечивающая относительное центробежное ускорение не менее 4000 g, (пробирки вместимостью 2 см³), относительное центробежное ускорение не менее 4000 g и вместимостью 15 см³), например Rotofix 3 Aps, Германия.

Холодильник бытовой, позволяющий поддерживать температуру от плюс 2 °С до плюс 8 °С в холодильной камере и не выше минус 20 °С в морозильной камере.

Лабораторный вортскс, обеспечивающий скорость вращения нс мснсс 1800 об/мин. например MSV-3500, производства BioSan Ltd. Латвия.

Лабораторный шейкер, обеспечивающий скорость до 300 об/мин. например гермошейкер PST-60HL, производства BioSan Ltd, Латвия.

Гомогенизатор лабораторный типа    ULTRA-'TURRAX    производства

IKA* Werke GmbH & Со. KG (Германия), например Ultra Тштах DI 25 Digital или бытовой блендер.

pH-метр с диапазоном измерений от ОрН до14 pH и погрешностью ±0.1рН в комплекте с электродами, например рН-221 производства HANNA instruments®. Inc..

Дозаторы нинеточные с комплектом одноразовых наконечников, например Acura manual 825, Асига manual 835, Асига manual 855 производства Socorcx ISBA S.A., Швейцария:

-    с диапазоном объемов дозирования от 10 до 100 мм* и относительным отклонением фактического объема дозы от номинального ± 2,5 %;

-    с диапазоном объемов дозирования от 100 до 1000 мм³ и относительным отклонением фактического объема дозы от номинального ± 1,5 %;

-    с диапазоном объемов дозирования от 1 до 10 ем³ и относительным отклонением фактического объема лозы от номинального ± 2,0 %:

-    многоканальный с диапазоном объемов дозирования от 40 до 350 мм³ и относи тельным отклонением фактического объема дозы от номинального ± 1,5 %.

Использование следующего оборудования не являемся обязательным, но рекомендуется для увеличения производительности и повышения точности измерений:

•    Инкубатор для микротктровальных планшетов, обеспечивающий поддержание температуры от плюс 20 °С до плюс 25 °С с точностью ± 1 °С. например Thermomixer comfort производства Lppendorf AG, Германия в комплекте с термоблоком для микротитровальных планшетов.

•    Устройство отмывки иммунологических планшетов автоматическое с диапазоном объемов моющего раствора, заливаемого в каждую микро кювету от 100 мм³ до 350 мм³, например 3D-IW8, производства BioSan Ltd, Латвия.

Пленка «нарафильм» или скотч.

Микрофибровые салфетки, например Ultrafinc 30x30. производства Marumi Optical Со. Ltd.

Бумага индикаторная с интервалом изменения pH от 5 до 8, например индикаторная бумага лак.моидная синяя по [ 3 ].

Бумага филыровальная но ГОСТ 12026.

Шпатели пластиковые.

Штатив для пробирок.

Пробирки микроценгрифужные с крышкой (типа Эннеидорф) из полипропилена

Пробирки стеклянные вместимостью

11-2-10-14/23 ХС по ГОСТ 1770.

Колбы мерные вместимостью 1000 см³ типа 2-1000-2 по ГОСТ 1770.

Колбы конические вместимостью 100 см³,250 см³. 500 см³ но ГОСТ 25336. Воронки типа В-56-80 ХС, В-75-110 ХС по ГОСТ 25336.

Стаканы Н-1 - 100 или Н-1 -150 по ГОСТ 25336.

Пипетки I -2-20. I -2-25 но ГОСТ 29169.

Цилиндры мерные вместимостью 25 см³. 100 см³ типа 3-25-2. 3-100-2 по ГОСТ 1770.

Натрия фосфат лвуосиовной (Na₂llP0₄). каталожный номер Sigma-Aldrich S7907 или натрии фосфорнокислый двузамешенный 2-подпыИ (Na₂MP0v2H₂O) чд.а по ГОСТ 245.

Пагрнй хлористый ч.д.а. по ГОСТ 4233.

Калий хлористый ч.д.а. по ГОСТ 4234.

Натрия гидроокись х.ч. по ГОСТ 4328.

Кислота соляная ч.д.а. по ГОСТ 3118.

Калий фосфорнокислый однозамещенный х.ч. (ч.д.а.) по ГОСТ 4198.

Вода дистиллированная но ГОСТ 6709. н-Гсксан ч. по ( 4 ].

Лабораторный детергент, например Triton Х-100.

Набор реагентов «MaxSignal ® для определения тетрациклина (группы теграциклинов)». каталожный номер 1016-04С («MaxSignal® Tetracycline (ТЕХ Group) ELISA Test Kit», Reference ft 1016-04C), производства BIOO Scientific Corporation (США), или набор реагентов «ИФА антибиотик-тетрациклин» по [5], производства ООО «Кампания Альгиме;1» (Республика Беларусь) - набор реактивов и микро пировал ьный планшет, необходимые для выполнения измерений по определению концентрации антибиотиков группы тстраииклинов методом иммуноферментного анализа в составе (таблицы 5,6).

Таблица 5 - Состав наборов реагентов «MaxSignal® для определении тетрациклина (группы тетрациклниов)»

Компонент набора	Количество в комплекта
I Мпкротитровальный планшет (12 стрипов по 8 лунок, покрытых | тетрациклином)	1 нгг
; Основной стандарт тетрациклина массой 225 нг (порошок) для приготовления градуировочных растворов	3 шт
Флаконы для приготовления градуировочных растворов тетрациклина с концентрацией 0 нг/см3,0.05 нг/см3. 0,15 нг/см3. 0,40 нг/см3. 0.80 нг/см3, 1,60 нг/см3	6 шт
Раствор антител к тетрациклину № 1	12 су?
• Конъюгат антител с пероксидазой № 2 (100х конце трат)	0,3 см5
! Растворитель для антител № 2	20см3
Промывочный раствор (20х концентрат)	28 см3
j Стоп-реагент	14 см3
ТМБ субстрат	12см3
Экстракционный ОХТЕТ-буфер (5х концентрат)	2x25 см3
Растворитель для приготовления градуировочных растворов	28 см3
ТПТ-реагентдля очистки проб молока	Юсм3
ТНТ-буфер для доведения проб молока /fa*	^с*с>Э5 см3
ТЕТ-буфер для доведения проб мяса ( f’4'f X Й'см3

Таблица 6 - Состав наборов реагентов «ИФА антибиотик - тетрациклин»

Компонент набора pcarcirroB ИФА антибиогик - тетрациклин Количество в комплекте Микро пировал ьпыи планшет (12 стрипов по 8 лунок, покрытых тетрациклином) 1 ни Градуировочные растворы с концентрацией 0 нг/см3,0,05 иг/см3, 0,15 нг/см3,0,40 нг/см3, 0,80 нг/см3, 1,60 нг/см3 6 шт по 1,2 см3 Раствор антител к тетрациклину 12 см3 Коньюгат 0,3 см3 РРК 20 см’ Концентрат промывочного раствора (КНР) 28оТ~ Стоп-реагент 14 см3 ГМБ субстрат 12 см3 5-ти кратный концентрат экстракционного буферного раствора 2x25 см5 Концентрат буферного раствора для доведения проб 5 см ’ 10-ти кратный концентрат патрий-фосфатного буферного раствора 28 см'

Следующие компоненты набора реагентов являются взаимозаменяемыми о пределах их срока хранения при условии совпадения их номера в наборах реагентов производства BIOO Scientific Corporation:

•    растворитель для антител № 2;

•    промывочный раствор;

•    стон-реагент;

•    ТМБ субстрат.

Следующие компоненты набора реагентов являются взаимозаменяемыми в пределах их срока хранения при условии совпадения их номера серин в наборах реагентов производства ООО «Кампания Альгнмед»:

•    РРК;

•    5-ти кратный концентрат экстракционного буферного раствора;

•    стоп-рсагснт;

•    ТМБ субстрат.

4 Метод измерений

Используемый метод основан на конкурентом колориметрическом иммуноферментном анализе. В ходе анализа в лунки планшета, покрытого тетрациклином, вместе с пробой добавляют первичные антитела, специфичные к тетрациклину. Присутствующие в пробе антибиотики труппы тстрациклинов конкурируют с тетрациклином, нанесенным на стенки лунок, за связывание с внесенными антителами. После внесения вторичных антител, конъюгированных с ферментом пероксидазой, последние связываются с первичными антителами, связанными с тетрациклином на стенках лунки. После добавления субстрата, а затем стои-рсагснта, измеряется оптическая плотность раствора при 450 нм. Измеренная оптическая плотность находится в обратной зависимости от концентрации тетрациклина в градуировочном растворе и антибиотиков группы тстрациклинов в растворе пробы. Массовая концентрация яптмбипггмк;пд-. ipvim^ т-тряпт-ши^ц _в

образце определяется по градуировочной зависимое?^,’и^^Ш^^^шьзованием

61радуировочных растворов.    '/$

[L(Компаниях Ц \Альгимео>^

—,______

5 Требования безопасности и требования к квалификации операторов

5.1    Обшнс требования безопасности

При выполнении работ в соответствии с данной методикой персонал должен знать и строго соблюдать на рабочем месте требования:

•    элсктробсзопасности но ГОСТ 12.2.003;

•    пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004;

•    техники безопасности при работе в химической лаборатории в соответствии с инструкциями, утвержденными в установленном порядке;

•    техники безопасности, изложенные н инструкции по эксплуатации средств измерений и оборудования, применяемых при проведении измерений.

5.2    Требовании к квалификации операторов

К проведению работ по данной методике допускаются лица, имеющие высшее специальное или среднее специальное образование по профилю выполняемых работ, прошедшие обучение приемам работ на оборудовании, освоившие выполнение всех операций, 11редусмо1рс11ных методикой, владеющие техникой постановки иммунофермешного анализа.

6    Условия выполнения измерений

При выполнении измерений в лаборатории должны быть соблюдены следующие условия:

•    температура окружающею воздуха от плюс 20 °С до плюс 25 °С;

•    температура при приготовлении растворов (20 ± 2) °С;

•    относительная влажность воздуха нс более 80% при температуре 25 °С.

7    Условия инкубации микротитровальных планшетов в помещении

При отсутствии инкубатора микротитровальные планшеты могут инкубироваться в помещении при выполнении следующих условий:

•    температура окружающего воздуха должна быть от плюс 20 °С до плюс

25 °С;

•    не должно происходить попадание прямых солнечных лучей на планшет:

•    планшет не должен подвсрппъся воздействию сильных естественных или искусственных потоков воздуха, вызванных, например, принудительной вентиляцией:

•    с целью устранения воздействия холодной поверхности стола, на котором находится планшет, рекомендуется помещать под него теплоизоляционный материал, например, сложенное в несколько слоев бумажное полотенце.

•    при низкой относительной влажности воздуха и наличии воздушных потоков с целью устранения возможности испарения содержимого лунок рекомендуется покрывать планшет пленой «нарафильм» или заклеивать скотчем.

•    в особых случаях, которые оговорены по тексту МВИ, требуется помещать планшет в защищенное от света место, например в ящик стола.

Условия хранения набора реагентов

Хранение набора реагентов осуществляется в xoi плюс 2 ^СС до плюс 8 °С в оригинальных флаконах и[

1

производителем вышеуказанного набора pearcinoe

2

Здесь и долее по тексту результат измерений массовой концентра восстановленной сухой молочной сыворотке относится к носстано;

* Здесь и далее по тексту результат измерений массовой копись использовании набора реагентов «ИФЛ антибиотик - тетрациклин» согласно данной методике продукту