ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

МАТЕРИАЛЫ ТЕКСТИЛЬНЫЕ

Определение противогрибковой активности текстильных изделий

Часть 1

Люминесцентный метод

ISO 13629-1:2012 Textiles - Determination of antifungal activity of textile products -Part 1: Luminescence method (IDT)

Издание официальное

Предисловие

1    ПОДГОТОВЛЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 412 «Текстиль», Открытым акционерным обществом «Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации» (ОАО «ВНИИС») на основе собственного аутентичного перевода на русский язык международного стандарта, указанного в пункте 4

2    ВНЕСЕН Управлением технического регулирования и стандартизации Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 25 декабря 2014 г. № 2108-ст

4    Настоящий стандарт идентичен меящународному стандарту ИСО 13629-1:2012 «Текстиль. Определение противофунгицидной активности текстильных изделий. Часть 1. Люминесцентный метод» (ISO 13629-1:2012 «Textiles - Determination of antifungal activity of textile products -Part 1: Luminescence method»).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им национальные стандарты Российской Федерации, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

5    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правила применения настоящего стандарта установлены в ГОСТ Р 1.0-2012 (раздел 8). Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе *Национальные стандарты», а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты» В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске информационного указателя «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (gost.ru)

© Стандартинформ. 2015

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МАТЕРИАЛЫ ТЕКСТИЛЬНЫЕ

Определение противогрибковой активности текстильных изделий

Часть 1

Люминесцентный метод

Textiles Determination of antifungal activity of textile products Part 1. Luminescence method

Дата введения —2016—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод количественного определения противогрибковой активности посредством измерения интенсивности люминесценции, производимой ферментативной реакцией (метод АТФ (аденозинтрифосфата)).

Настоящий стандарт применим к текстильным изделиям различных видов, таким как волокна, пряжа, ткани, одежда, постельное белье, домашний текстиль и другая подобная продукция.

В зависимости от предполагаемого применения и окружающей среды, в которой данное текстильное изделие будет эксплуатироваться, до определения методом АТФ пользователь может выбрать наиболее подходящий метод оценки из двух следующих:

a)    метод абсорбции (метод оценки, в котором суспензию испытуемых грибков засевают непосредственно на образцы);

b)    метод переноса (метод оценки, в котором испытуемые грибки помещают на чашку с агар-агаром и отпечатывают на образцах).

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использована нормативная ссылка на следующий международный стандарт:

ИСО 105-F02 2009 Текстиль. Испытания на устойчивость окраски. Часть F02. Технические условия на хлопчатобумажные и вискозные смежные ткани (ISO 105-F022009 Textiles — Tests for colour fastness — Part F02: Specification for cotton and viscose adjacent fabrics)

3    Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1    контрольный образец (control specimen): Образец, используемый для подтверждения роста испытуемых грибков.

Примечание — Контрольный образец можно взять от тех же текстильных изделий, как испытуемые, но не прошедших противогрибковую обработку Если такой возможности нет. то в качестве контрольного образца используют образец 100 %-ного хлопка без флуоресцентных осветлителей или другой отделки, соответствующий требованиям ИСО 105-F02 после 10 циклов стирки в течение 10 мин при температуре 60 ®С без моющих средств или осветлителей, придающих блеск, и двойного полоскания в течение 5 мин в соответствии с ИСО 6330

3.2    противогрибковое средство (antifungal agent): Средство для предотвращения или ослабления роста грибков или снижения их количества

3.3    противогрибковая обработка (antifungal treatment): Обработка для предотвращения или ослабления роста грибков или снижения их количества.

3.4    суспензия (взвесь) спор (spore suspension): Жидкость с равномерно диспергированными в ней грибковыми спорами в стерилизованной воде, содержащей анионное поверхностно-активное вещество (6.3).

Издание официальное

3.5 АТФ (АТР): Аденозинтрифосфат, многофункциональный нуклеотид, присутствующий в живых грибках.

3    6 противогрибковая активность (antifungal activity): Деятельность по предотвращению или ослаблению роста грибков, выраженная как разность показателей роста в логарифме АТФ между контрольным и испытуемым образцами,

3.7 люминесцентный метод (luminescence method): Метод, в котором измеряют количество АТФ. содержащееся в грибковых клетках, в молях АТФ

4    Принцип

Испытуемый и контрольный образцы засевают суспензией спор референтных штаммов грибков и инкубируют при температуре 25 °С в течение 42 ч.

В настоящем стандарте рост грибков или противогрибковая активность определяются количественно посредством сравнения с результатом на контрольном образце измерения интенсивности люминесценции внутриклеточного АТФ

5    Меры предосторожности

Установленные в настоящем стандарте методы требуют применения грибков.

Такое испытание должен выполнять персонал, обладающий соответствующей подготовкой и опытом в сфере микробиологических исследований.

Обязательным являются ознакомление и соблюдение требований всех регламентов, правил и рекомендаций, касающихся соответствующих мер безопасности, в стране, где проводят эти испытания.

6    Референтные штаммы грибков

Применяемые грибки выбирают по таблице А.1 приложения А.

Можно использовать равноценные типы грибков, полученные от других агентств Всемирной федерации коллекций культур (WFCC) по согласованию между заинтересованными сторонами.

В протоколе испытания необходимо указать номер штамма в коллекции и источник поставки использованных грибков.

7    Аппаратура

Обычное лабораторное оборудование и. в частности, следующее:

7.1    Марля для биохимических испытаний или стекловата (спецификация FR).

7.2    Чашки Петри внутренними диаметрами приблизительно 90 мм и от 55 до 60 мм.

7.3    Сухой стерилизатор, обеспечивающий поддержание температуры на уровне от 160 °С до 180 °С.

7.4    Автоклав, обеспечивающий поддержание температуры на уровне

(121 ± 2) °С (эквивалентно 103 кПа).

7.5    Бокс для биохимических испытаний или аналогичное устройство.

7.6    Платиновая петля для работы с колониями диаметром от 2 до 4 мм.

7.7    L-образный платиновый крюк для работы с колониями.

7.8    Инкубатор (термостат), обеспечивающий поддержание температуры в целевом диапазоне от 20 °С до 37 ^вС с допуском ± 2 °С.

7.9    Стеклянный флакон, вместимостью 30 мл. с навинчивающейся полипропиленовой крышкой с прокладкой из политетрафторэтилена или силикона.

7.10    Стеклянная палочка диаметром от 5 до 18 мм и массой от 1 до 50 г.

7.11    Стеклянная воронка.

7.12    Пипетки вместимостью 0,05,0,1 , 0,2,1 , 5 и 10 мл с допуском 5.0 %.

7.13    Пипетка Пастера для микробиологических исследований.

7.14    Коническая колба вместимостью от 100 до 500 мл.

7.15    Пинцет.

7.16    Пластиковая пробирка, специально для люминометра.

7.17    Мешалка для пробирок.

7.18    Центрифуга с ускорением приблизительно 2000д.

7.19    Пробирки для центрифуги.

7.20    Гемоцитометр, обеспечивающий измерение от 1 Ю⁶ до 3 10⁶/мл.

7.21    Микроскоп увеличением 200^х.

7.22    Компактный ультразвуковой очиститель для лабораторных инструментов, частотой приблизительно от 30 до 50 кГц.

2

ГОСТ Р ИСО 13629-1-2014

7.23    Люминометр, измеряющий при длине волны от 300 до 650 нм и обеспечивающий измерение АТФ при концентрации от 1 • 10 до 1 • 10"⁵ моль/л в условиях анализа, определенных в 8 4 и разделе 11.

7.24    pH-метр точностью ± 0.1 при температуре 25 °С.

7.25    Холодильник, обеспечивающий поддержание температуры на уровне от 2 X до 10 X.

7.26    Морозильные камеры, одна с настройкой на температуры ниже минус 80 °С, другая -ниже минус 20 X.

Пробирки, флаконы, колбы, пипетки и пинцеты перед применением необходимо тщательно промыть в щелочном или нейтральном моющем средстве, прополоскать, высушить и подвергнуть сухой стерилизации или стерилизации паром при высоком давлении.

8 Реактивы и питательные среды

8.1    Общие положения

Реактивы, используемые в испытаниях, должны быть аналитической чистоты и/или марки, соответствующей применению в микробиологических анализах.

Обезвоженные продукты, имеющиеся в продаже, рекомендуется использовать при приготовлении питательных сред строго в соответствии с инструкциями изготовителя.

8.2    Чистая вода

Вода аналитической чистоты для микробиологических сред и приготовления реактивов, которая получена непосредственно после дистилляции и/или ионообменника. или ультрафильтра и/или профильтрована с помощью обратного осмоса (ОО = RO). Она не должна содержать токсичных или подавляющих рост грибков веществ.

8.3    Анионное поверхностно-активное вещество Диоктилнатрийсульфосукцинат для приготовления суспензии спор.

8.4    Люминесцентные реактивы, реагенты и буферные растворы

8.4.1    Общие положения

Используют реактивы и буферные растворы, приготовленные в соответствии с 8.4.2 - 8.4.8. Можно после соответствующего подтверждения использовать имеющиеся в продаже готовые реактивы.

8.4.2    Исходный стандартный раствор АТФ (1 • 10 ³ моль/л) (далее - стандарт АТФ)

Двунатриевый комплекс тригидрата аденозин

5‘-трифосфата (CioHuOijPjNa? ЗН.О)    60,5    мг

Чистая вода (см. 8.2)    100    мл    (конечный    объем)

Приготовленный раствор помещают в плотно закупоренную емкость и замораживают при температуре не выше минус 20 X для хранения в течение 6 мес.

Примечание — Не рекомендуется снова замораживать и/или повторно использовать однажды размороженный раствор.

8.4.3    Буферный раствор для получения люминесцентного реактива АТФ

N•[1 рис(гидроксиметил)метил) глицин    1117мг

Дигидрат двунатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты    183    мг

Тетрагидрат ацетата магния    808    мг

Dl-дитиотретиол    6,7 мг

Декстрин    25000 мг

Сахароза    925    мг

Чистая вода    250    мл    (конечный    объем)

8.4.4 Люминесцентный реактив АТФ

Люминесцентные реактивы АТФ должны обеспечить измерение люминометром (см. 7.23) концентрации АТФ от 1 • 10 до 1 10 моль/л в условиях анализа, определенных в 8.4 и разделе 11.

Люцифераза

D-люциферин

Альбумин бычьей сыворотки Буферный раствор (см 8 4.3)

3

После полного растворения до использования люминесцентный реактив АТФ выдерживают при комнатной температуре 15 мин. Используют в течение 3 ч с момента приготовления.

8.4.5 Реактивы для экстракции АТФ

Реактивы для экстракции АТФ должны обеспечивать экстракцию внутриклеточной АТФ из инкубированных грибков при эффективности не менее 80 %.

Применение неустановленного экстрагирующего вещества в составе необходимо указать в протоколе.

8.4.6    Реактивы для удаления АТФ

Реактивы для удаления АТФ должны уменьшать содержание АТФ в питательной среде до концентрации менее 10 ¹¹ моль/л в течение 15 мин при добавлении 1/10 реактива в питательную среду (определено в 8.5.1).

Использовать в течение 8 ч с момента приготовления.

Состав следующий:

Апираза (ЕК: 3.6.1.5)

Аденозинфосфат деаминаза (ЕК: 3.5.4.6 или 3.5.4 17)

Сахароза

Альбумин бычьей сыворотки Буферный раствор, 0,05 моль/л.

2-морфолиноэтансульфоновой кислоты моногидрата

pH

Если используется другой реактив для удаления АТФ. его состав необходимо указать.

8.4.7    Физиологический раствор

Помещают 8.5 г хлорида натрия в 1000 мл чистой воды в колбе. Тщательно растворяют и разливают в пробирки для дальнейшей стерилизации паром под давлением.

8.4.8    Стерилизованная вода, содержащая анионное поверхностно-активное вещество (см.

8.3)

Растворяют 50 мг анионного поверхностно-активного вещества в чистой воде и доводят до 1000 мл. затем разливают в пробирки для дальнейшей стерилизации паром под высоким давлением.

8.5 Питательная среда

Используют питательную среду, приготовленную как описано в 8.5.1 - 8.5.4 Можно использовать готовые имеющиеся в продаже среды после соответствующего подтверждения правильности выбора.

Для питательных сред, которые не будут использованы сразу же после приготовления, рекомендуется хранение при температуре от 5 ®С до 10 °С и срок хранения не более 1 мес.

8.5.1    Бульон Сабуро с декстрозой (SDB)

Пептон    Юг

Декстроза    От 20 до 40 г

Чистая вода    1000 мл

pH после стерилизации    5.6 ± 0.2

8.5.2    Картофельный агар с декстрозой (PDA)

Моют и очищают одну крупную картофелину, желательно без изъянов, удаляя примерно 10 мм кожицы вокруг каждого глазка, режут на кубики со стороной 10 мм. Кипятят эти кубики из расчета 200 г в 1000 мл чистой воды в течение 1 ч. С помощью нескольких слоев марли (см. 7.1) фильтруют, просушивают и добавляют затем дистиллированную воду, чтобы объем смеси составлял 1000 мл. Добавляют 20 г глюкозы и от 15 до 20 г агара, полностью растворяют твердые вещества, прежде чем поместить в автоклав (см. 7.4) для стерилизации.

8.5.3    Культура на скошенном агаре

Наливают приблизительно 10 мл предварительно нагретого и полностью растворенного агара PDA (см. 8.5.2) в пробирку. Затыкают пробирку пробкой из хлопковой ваты и стерилизуют паром. После стерилизации помещают пробирку под углом приблизительно 15° относительно горизонтального уровня на чистом лабораторном столе и оставляют до застывания содержимого. Если на застывшем агаре не выступает вода, то для использования растворяют и отверждают среду заново.

ГОСТ Р ИСО 13629-1-2014

8.5.4 Агар Сабуро с декстрозой (SDA)

Пепсиновый мясной пептон

Декстроза

Агар

Чистая вода

Следуют указаниям поставщика.

pH после стерилизации

Примечание — Эта среда будет использована для метода переноса

9 Консервация и использование грибков

9.1 Консервация грибков

Контрольные грибки и споры пересевают и работают с ними в стерильном боксе (см. 7.5) или равноценном помещении.

-    Стерилизуют ватные пробки и горловины пробирок в пламени или химическим способом до и после пересева.

-    Соскребают небольшое количество грибков с первичных грибков, распределяют споры по выступившей воде в нижней части скошенного агара и смазывают до верхнего конца скошенной поверхности прямым мазком либо зигзагом (см. рисунок 1).

-    Каждый раз при пересеве грибков другого типа пользуются заново стерилизованными в пламени платиновой (бактериологической) петлей (см. 7.6) и крюком (см. 7.7).

• Помещают засеянный скошенный агар в инкубатор (см. 7.8) при температуре (25 ± 2) °С как минимум на восемь дней и. прежде чем консервировать их при температуре от 5 °С до 10 ^вС. подтверждают, что образовалось достаточное количество спор.

-    В течение 3 мес. пересаживают пересеянные грибки на новый скошенный агар для последующей инкубации и консервации.

-    Повторяют пересев с интервалом до трех месяцев Пересеваемую культуру, однако, не следует пересевать более пяти раз. Нельзя использовать грибки старше трех месяцев для дальнейшего субкультивирования.

80*С

1 - выступившая вода. 2-скошенный агар Рисунок 1 — Пересев на скошенный агар

9.2 Использование грибков

Чтобы подготовить грибки для суспензии спор, как изложено в разделе 10. переносят грибки, законсервированные по 9.1. на чашку, инкубируют при температуре (25 ± 2) °С в течение не менее восьми дней. Если грибки не требуется использовать немедленно после инкубирования, консервируют их при температуре от 5 °С до 10 °С и используют в течение семи дней.

10 Суспензия спор

См. рисунок 2.

5

ГОСТ Р ИСО 13629-1-2014

' *т ■ч тш о - £ i J ) ■ 1 щ < ) ■ * С} =э / с) ^> ) V ■ * [ Р* 1 2 3 ' V 4 5 6

1 - предварительный посев на чашку с PDA. 2 - этап 1,3- этап 2. 4- этап 3; 5-этап4. 6-этап5

Рисунок 2 — Этапы процедуры для приготовления суспензии спор

10.1    Суспендирование спор в питательной среде

-    Пользуются короткой пипеткой Пастера (см. 7.13) или аналогичным приспособлением для забора 0.5 мл стерилизованной воды, содержащей анионное поверхностно-активное вещество (см.

8.3) (этап 1).

-    Медленно выпускают ее примерно в пять приемов на споры в центре чашки с агаром, чтобы осторожно смыть поверхность (этап 2).

Примечание — Допускаются небольшие изменения, например, увеличение количества воды для смыва Все условия в таких случаях записывают

10.2    Сбор и диспергирование суспензии спор из питательной среды

-    Суспензию спор (см. 10.1) берут с помощью пипетки Пастера (см. 7.13) или аналогичного приспособления.

-    Переносят ее приблизительно в 5 мл стерилизованной воды, содержащей анионное поверхностно-активное вещество (см. 8.3).

-    Пипеткой забирают - выпускают 100 раз или перемешивают на специальным смесителе для пробирок, или применяют легкую ультразвуковую очистку в течение 5 мин. чтобы споры диспергировали в достаточной степени.

-    Визуально проверяют, чтобы суспензия выглядела слегка мутной (этап 3).

10.3    Фильтрование для удаления гиф и нитей

Для фильтрования пользуются воронкой или другим приспособлением с марлей (см. 7.1) или стекловатой (этап 4).

Примечание — Марля (см 7.1) или стекловата могут состоять из (4 ± 1)слоев в форме квадрата стороной 5 х 5 см

10.4    Использование разделения на центрифуге и повторное суспендирование для удаления надосадочной жидкости

-    После фильтрования выполняют разделение на центрифуге приблизительно при ускорении 2000д в течение не менее 5 мин при температуре (25 ± 2) *0. или при комнатной температуре, если центрифуга (см. 7.18) не имеет устройства для контроля температуры.

-    Удаляют надосадочную жидкость.

-    Добавляют стерилизованной воды, содержащей анионное поверхностно-активное вещество (см. 8.3).

-    Осторожно перемешивают с помощью пипетки, чтобы диспергировать споры, или с помощью смесителя для пробирок, или применяют легкую ультразвуковую очистку в течение примерно 5 мин, чтобы споры были диспергированы в достаточной степени (этап 5). ¹

ГОСТ Р ИСО 13629-1-2014

10.5    Подтверждение концентрации суспензии спор

Проверяют следующие позиции на гемоцитометре.

а) Подсчет спор и статус спор: подтверждают, что количество спор составляет от 1 • 10¹ до 3 10'/мл и что более 90 % спор являются отдельными спорами без гиф.

В случае слишком большого количества спор разводят суспензию стерилизованной водок содержащей анионное поверхностно-активное вещество (см. 8.3). чтобы снизить число спор от 1 • 10^е до 3 10¹/мл. снова проверяют количество спор.

В случае недостаточного количества спор повторяют центрифугирование, чтобы удалить надосадочную жидкость, и используют стерилизованную воду, содержащую анионное поверхностноактивное вещество (см. 8.3) для регулирования числа спор на уровне от 1 10' до 3 10¹/мл. и снова подсчитывают споры.

Для метода переноса, изложенного в 12.1.3.3. число спор необходимо отрегулировать на уровне от 1 • 10^й до 3 • 10^е/мл и эту суспензию используют для анализа.

10.6    Регулирование суспензии для анализа

-    Используют 1/20 SDB для регулирования суспензии спор на уровне от 1 ■ 10⁵ до 3 • 10/мл для анализа.

Примечание —Чтобы получить 1/20 SDB. как изложено в 851. разбавляют стерилизованной водой, содержащей анионное поверхностно-активное вещество (см 8 3)

-    После разбавления хорошо перемешивают суспензию.

-    Охлаждают суспензию на льду и используют в течение 4 ч.

11 Подготовка калибровочной кривой АТФ

Кривую АТФ необходимо получать ежедневно. Процедура подготовки калибровочной кривой следующая.

a)    разбавляют стандартный исходный раствор АТФ (см. 8 4.2) чистой водой, чтобы приготовить три разведения, имеющих точную концентрацию 1 • Ю^-8,

1 10"² и 1 • КГ⁸ моль/л соответственно;

b)    готовят пробу первого разведения АТФ следующим образом: переносят 0.1 мл от каждого разведения в отдельные пластиковые пробирки, затем добавляют 0.05 мл чистой воды и 0.35 мл физиологического раствора в каждую пластиковую пробирку и тщательно перемешивают;

c)    готовят пробу второго разведения АТФ следующим образом: снова переносят 0,1 мл от пробы первого разведения АТФ в пробирку. Добавляют 0.4 мл физиологического раствора в каждую пробирку и тщательно перемешивают;

d)    подготовка к измерению пробы раствора АТФ: переносят 0.1 мл второй пробы АТФ в две пластиковые пробирки для измерения пробы разведения АТФ;

e)    готовят первые холостые пробы следующим образом: добавляют 0.1 мл стерилизованной воды, содержащей анионное поверхностно-активное вещество (см. 8.3), 0.35 мл физиологическое раствора и 0.05 мл вещества для удаления АТФ в пластиковую пробирку. Тщательно перемешивают и оставляют на время от 10 до 20 мин;

f)    готовят вторую холостую пробу следующим образом: переносят 0.1 мл первой холостой пробы в пробирку и добавляют 0.4 мл физиологического раствора в эту пробирку и тщательно перемешивают;

д) подготовка к измерению холостого раствора: переносят 0.1 мл второй холостой пробы в две пластиковые пробирки и используют для холостого измерения;

h) добавляют 0.1 мл реактива для экстракции АТФ в каждую из двух пробирок, содержащих вторую холостую пробу, подготовленных по перечислению д), и тщательно перемешивают;

О добавляют 0.1 мл люминесцентного реактива АТФ и перемешивают в течение 5 с на специальном смесителе;

j)    интенсивность люминесценции вторых холостых проб: немедленно измеряют интенсивность люминесценции обеих холостых проб с помощью люминометра (см. 7.23);

k)    добавляют 0.1 мл реактива для экстракции АТФ в пробы АТФ второго разведения, приготовленные по перечислению d), начиная с пробы с самой низкой концентрацией до пробы с самой высокой концентрацией в порядке последовательности, и тщательно перемешивают;

l)    добавляют 0,1 мл люминесцентного реактива и перемешивают в течение 5 с на смесителе для пробирок;

т) интенсивность люминесценции проб второго разведения АТФ: немедленно измеряют интенсивность люминесценции обеих проб второго разведения АТФ с помощью люминометра (см. 7.23).

л) по формуле (1) рассчитывают коэффициент А и коэффициент В. чтобы построить калибровочную кривую:

-    коэффициент А может быть средним трех значений, полученных делением соответствующей концентрации АТФ (моль/л) на средние значения интенсивности люминесценции каждой из проб второго разведения АТФ из измерения, изложенного в перечислении т);

-    коэффициент В вычисляют путем сложения значения коэффициента А и замены среднего значения второй холостой пробы на X и использования значения «ноль» для У в следующем уравнении калибровочной кривой :

У= АХ- В    (1)

где У - концентрация АТФ, моль/л;

X- интенсивность люминесценции (RLU = относительная световая единица).

Если коэффициент корреляции между средними значениями интенсивности люминесценции и концентрацией АТФ менее 0,99, то подготовку калибровочной кривой АТФ необходимо начать сначала.

12 Метод анализа

12.1    Подготовка образцов для анализа и посев

12.1.1    Общие положения

Для метода посева можно использовать абсорбцию или перенос. Метод переноса применяется к пробам текстильных изделий, которые не абсорбируют воду.

12.1.2    Метод абсорбции

12.1.2.1    Масса и форма образцов

Получают образцы массой (0.20 ± 0.03) г, вырезанных по размеру, удобному для испытания. Получают шесть контрольных образцов и шесть образцов для испытания.

Примечание — Три контрольных образца и три образца для испытания используют для нулевого момента времени, непосредственно после посева Остальные образцы используют для времени контактирования, после инкубации

12.1.2.2    Установка образцов

Каждый из образцов помещают в отдельный флакон (см. 7.9), выбрав один из следующих методов в соответствии с особенностями образца:

a)    если образец представляет собой изделие из текстиля, который легко скручивается, или если он содержит ватин или пух. помещают стеклянную палочку на образец во флаконе (см. 7.9). Альтернативно связывают оба конца образца ниткой;

b)    если образец представляет собой нить, ее завязывают узлом и помещают стеклянную палочку на образец во флаконе (см. 7.9);

c)    если образцы взяты от ковров или аналогичной продукции, отрезают ворс и помещают стеклянную палочку на образец во флаконе (см. 7.9);

d)    если необходимо, образцы можно промыть в соответствии с ИСО 6330 или иным подходящим способом, и после окончательного промывания сполоснуть водой, чтобы смыть моющее средство. Применение неустановленного метода должно быть отмечено в протоколе;

e)    при необходимости, например, для загрязненных образцов, стерилизуют их в автоклаве (см.

7.4) в соответствии со следующей процедурой:

1)    закрывают верхнюю часть флаконов (см. 7.9) с образцами алюминиевой фольгой;

2)    помещают закрытые флаконы (см. 7.9) в металлическую корзинку для автоклавирования;

3)    оборачивают крышки флаконов алюминиевой фольгой и помещают их в металлическую корзинку;

4)    стерилизуют крышки и флаконы (см. 7.9) с образцами в автоклаве (см. 7.4) при температуре 121 *С (103 кПа) в течение от 15 до 20 мин:

5)    после стерилизации снимают алюминиевую фольгу и дают образцам во флаконах (см. 7.9) просохнуть в течение не менее 60 мин. поместив их в стерильный бокс (см. 7.5) или любое иное место, где нет риска загрязнения из воздуха;

6)    плотно закручивают крышки флаконов.

1

2