МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
Единая
система защиты от коррозии и старения
МАСЛА И СМАЗКИ
Методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию бактерий
Unified protection
corrosion and ageing system. Oils and lubricants.
Methods of laboratory tests for resistance to bacteria action
|
ГОСТ
9.082-77
|
Постановлением
Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 5 декабря 1977 г.
№ 2804 дата введения установлена
01.01.79
Ограничение
срока действия снято Постановлением Госстандарта СССР от 22.10.90 № 2659
Настоящий стандарт
распространяется на масла и смазки и устанавливает исследовательские
лабораторные методы испытаний на стойкость к воздействию бактерий.
1.
МЕТОД 1
1.1. Сущность метода
заключается в выдерживании образцов зараженных водной суспензией бактерий в
условиях, оптимальных для развития бактерий, без дополнительного источника
минерального и органического питания.
Метод
применяют для определения бактериостойкости масел и смазок при отсутствии
минеральных и органических загрязнений.
1.2. Отбор образцов
1.2.1. Масла и смазки отбирают по ОСТ 2517-85 в количестве 10 - 15 г.
1.2.2. Образцами являются масла и смазки в соответствии поставки без
специальной очистки и стерилизации.
1.2.3. Количество образцов должно быть не менее пяти.
1.2.4. Штаммы бактерий
1.2.4.1. Для испытаний применяют смесь штаммов чистых культур бактерий:
Bacillus subtilis ВКМВ-1665Д,
Bacillus pumilus ВКМВ-1664Д,
Bacillus stearothermophilus ВКМВ-1668Д,
Bacillus coagulans ВКМВ-1669Д.
1.2.4.2. Чистые культуры бактерий получают во Всесоюзной коллекции
микроорганизмов института биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР,
поддерживают периодическим пересевом и выращивают непосредственно перед
испытаниями. Культуры бактерий обновляют один раз в год - два.
1.2.4 - 1.2.4.2. (Измененная редакция, Изм. № 1).
1.2.4.3. Пересев, выращивание и хранение
культур бактерий проводят, как указано в приложении 1.
1.3. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048-89.
Масло
МК-8 по ГОСТ
6457-66.
Масло МС-8 рк по ОСТ
38.01387-85.
Масло МС-8 п по ОСТ
38.101163-78.
(Измененная
редакция, Изм. № 1).
1.4. Подготовка к испытаниям
1.4.1. Посуду и материалы готовят по ГОСТ 9.048-89.
1.4.2. Среды для выращивания и хранения чистых культур бактерий и для
испытаний готовят по ГОСТ 9.048-89 и приложению 2.
Рецептура сред приведена в таблице.
Наименование
реактивов
|
Количество для среды
|
1-Чапека-Докса с агаром
|
2-Чапека-Докса с агаром без сахарозы
|
3-из выщелоченного агара
|
4-МПА
|
5-Чапека-Докса без сахарозы
|
6-Чапека-Докса
|
7-БСА
|
1.
Калий фосфорнокислый однозамещенный, г
|
0,7
|
0,7
|
-
|
-
|
0,7
|
0,7
|
-
|
2.
Калий фосфорнокислый двузамещенный, г
|
0,3
|
0,3
|
-
|
-
|
0,3
|
0,3
|
-
|
3.
Магний сернокислый, г
|
0,5
|
0,5
|
-
|
-
|
0,5
|
0,5
|
-
|
4.
Натрий азотнокислый, г
|
2,0
|
2,0
|
-
|
-
|
2,0
|
2,0
|
-
|
5.
Калий хлористый, г
|
0,5
|
0,5
|
-
|
-
|
0,5
|
0,5
|
-
|
6.
Железо сернокислое, г
|
0,01
|
0,01
|
-
|
-
|
0,01
|
0,01
|
-
|
7.
Сахароза, г
|
30,0
|
-
|
-
|
-
|
-
|
30,0
|
-
|
8.
Агар-агар, г
|
20,0
|
Выщелоченный 20,0
|
Выщелоченный 20,0
|
20,0
|
-
|
-
|
20,0
|
9.
Мясо-пептонный бульон, см3
|
-
|
-
|
-
|
До 1000
|
-
|
-
|
500,0
|
10.
Четырехбаллинговое неохмеленное пивное сусло (4 % сахара), см3
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
480,0
|
11.
Вода дистиллированная, см3
|
До 1000
|
До 1000
|
До 1000
|
-
|
До 1000
|
До 1000
|
-
|
1.4.3. Чистые культуры бактерий
пересевают и выращивают, как указано в приложении 1.
1.4.4. Для контроля жизнеспособности бактерий в чашку Петри наливают среду 4
в количестве 20 - 30 см3 и дают ей застыть.
1.4.5. Для размещения образцов смазок среду 3 наливают в чашку Петри в
количестве 20 - 30 см3 и дают ей застыть.
1.4.6. Для размещения образцов масел готовят лунки, для чего в застывшей
среде 3 стерильным сверлом диаметром 10 мм просверливают пять лунок глубиной
около 5 мм.
1.5. Проведение испытаний
1.5.1. Суспензию бактерий готовят, как указано в приложении 3.
1.5.2. Для заражения образцов используют водную суспензию смеси бактерий.
1.5.3. Образцы смазок наносят скальпелем в количестве пяти кусочков размером
1010 мм толщиной 1,5 - 2,0 мм на поверхность среды в чашку Петри,
приготовленную, как указано в п. 1.4.5.
1.5.4. Образцы масел наливают в лунки (на 1 мм ниже уровня среды),
приготовленные, как указано в п. 1.4.6.
1.5.5. Чашка Петри с образцами и контрольные чашки Петри, приготовленные,
как указано в п.п. 1.4.4 и 1.4.5, помещают в бокс. Поверхность образцов и сред заражают водной
суспензией смеси бактерий пульверизатором, не допуская слияния капель.
1.5.6. Чаши Петри с зараженными образцами и контрольные чашки (п. 1.4.4) помещают в эксикатор, на
дно которого налита вода. Эксикатор устанавливают в термостат с температурой
(29 ± 2) °С.
1.5.7. Образцы выдерживают в термостате 56 сут.
1.5.8. Через 1 - 3 сут после начала испытаний осматривают контрольную чашку
Петри.
Если на поверхности среды
рост бактерий и образование пигмента не наблюдается, культуры бактерий считают
нежизнеспособными. Испытания прекращают и повторяют их на новых образцах с
вновь приготовленной суспензией бактерий из новой партии бактерий.
1.5.9. Через 28 сут проводят промежуточный осмотр образцов. Испытания
образцов, на которых обнаруживают развитие бактерий, прекращают.
(Измененная редакция, Изм. № 1).
1.5.10. По окончании испытаний чашки Петри
извлекают из эксикатора и осматривают образцы.
1.6. Обработка результатов
1.6.1. Образцы масел и смазок осматривают через лупу при 2,5 - 7-кратном
увеличении.
1.6.2. Масла и смазки считают бактериостойкими при отсутствии развития
бактерий и пигментации на всех испытанных образцах.
(Измененная редакция, Изм. №
1).
2.
МЕТОД 2
2.1. Сущность метода заключается в выдерживании образцов зараженных водной
суспензией бактерий в условиях, оптимальных для развития бактерий, на среде с
дополнительным источником минерального питания.
Метод применяют для
определения бактериостойкости масел и смазок в условиях, имитирующих
минеральные загрязнения.
2.2. Отбор образцов - по п. 1.2.
2.2.1. Виды бактерий - по п. 1.2.4.
2.3. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048-89.
2.4. Подготовка к испытаниям - по п.п. 1.4.2 - 1.4.4.
2.4.1. Для размещения образцов смазок среду 2 (см. табл.) наливают в чашку
Петри в количестве 20 - 30 см3 и дают ей застыть.
2.4.2. Для размещения образцов масел готовят лунки, как указано в п. 1.4.6, используя среду 2.
2.4.3. (Исключен, Изм. № 1).
2.5. Проведение испытаний
2.5.1. Образцы смазок наносят, как указано в п. 1.5.3, на поверхность среды в
чашку Петри, приготовленную по п. 2.4.1.
2.5.2. Образцы масел наливают в лунки, приготовленные, как указано в п. 2.4.2, в соответствии с
требованиями п. 1.5.4.
(Измененная редакция, Изм. №
1).
2.5.3. (Исключен, Изм. № 1).
2.5.4. Дальнейший порядок проведения испытаний соответствует требованиям
п.п. 1.5.5 и 1.5.6.
2.5.5. Образцы выдерживают в термостате 28 сут.
2.5.6. Дальнейший порядок проведения испытаний соответствует требованиям
п.п. 1.5.8 - 1.5.10 с промежуточным осмотром образцов через 7 - 14 сут.
2.6. Обработка результатов - по п. 1.6.
2.7. Испытание масел
допускается проводить по ГОСТ 9.052-88, метод 3. Вместо
культур грибов по ГОСТ 9.052-88 используют
бактериальные культуры по п. 1.2.4. Отбор для оценки бактериостойкости масел
проводят через каждые сутки.
(Введен
дополнительно, Изм. № 1).
3.
МЕТОД 3
3.1. Сущность метода заключается в выдерживании образцов зараженных водной
суспензией бактерий в условиях, оптимальных для развития бактерий, на среде с
дополнительным источником минерального и органического питания.
Метод применяют для
определения бактериостойкости масел и смазок в условиях, имитирующих
минеральные и органические загрязнения.
3.2. Отбор образцов - по п. 1.2.
3.2.1. Виды бактерий - по п. 1.2.4.
3.3. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048-89.
3.4. Подготовка к испытаниям - по п. 1.4.
3.4.1. Для размещения образцов смазок готовят чашки Петри, как указано в п. 2.4.1, используя среду 4.
3.5. Проведение испытаний - по п. 1.5.
3.5.1. Образцы выдерживают в термостате в условиях, указанных в п. 1.5.6, 14 сут.
3.5.2. Промежуточный осмотр образцов проводят через 7 сут после начала
испытаний.
3.6. Обработка результатов - по п. 1.6.
4.
ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ - по ГОСТ
9.023-74.
ПРИЛОЖЕНИЕ
1
Обязательное
ПЕРЕСЕВ, ВЫРАЩИВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ КУЛЬТУР БАКТЕРИЙ
1. Пересев культур бактерий
1.1. Пересев культур бактерий проводят в специальном боксе, предварительно
продезинфицированном.
1.2. На пробирках, приготовленных для пересева, обозначают виды бактерий,
ставят дату пересева, которую заносят в журнал регистрации пересева культур
бактерий.
1.3. Пересев культур бактерий в пробирки со стерильной питательной средой
проводят при помощи бактериологической петли. Петлю изготавливают из проволоки
(платина, хром, никель, молибден) диаметром (0,6 ± 0,1) мм, длиной (120 ± 20) мм, укрепленной в стеклянном или
металлическом держателе.
1.4. Пробирки, засеянные бактериями, помещают в термостат при температуре
(29 ± 2) °С и выдерживают в нем три - четыре дня до появления хорошего роста
и пигментации.
1.5. Чистоту выросшей культуры контролируют визуально и
микроскопированием.
1.4, 1.5. (Измененная редакция, Изм. № 1).
2. Выращивание и хранение культур бактерий
2.1. Чистые культуры бактерий для проведения испытаний выращивают и хранят
в пробирке со скошенной поверхностью питательной среды.
Допускается хранить их в
виде суспензии в среде 5 п. 1.4.2 в пробирках под слоем минеральных масел
МК-8, или МС-8рк, или МС-8п толщиной 1 см.
(Измененная редакция, Изм. №
1).
2.2. Культуры бактерий пересевают в пробирки для получения музейных
партий.
Примечание. Музейные партии предназначены
для сохранения чистых культур и получения из них рабочих партий.
2.3. Количество музейных партий рекомендуется иметь от 3 до 5 в зависимости
от объема проводимых испытаний в течение месяца.
2.4. Пересев музейных культур необходимо проводить 1 раз в 3 мес.
2.5. Для выращивания культур бактерий используют среду мясопептонного
агара (МПА) или среду 7-БСА.
2.4, 2.5. (Измененная редакция, Изм. № 1).
2.6. Пробирки с чистыми культурами бактерий хранят в холодильнике при
температуре (7 ± 3) °С.
2.7. Допустимый срок хранения культур - 6 мес.
ПРИЛОЖЕНИЕ
2
Обязательное
ПРИГОТОВЛЕНИЕ МЯСО-ПЕПТОННОГО АГАРА
1. Для приготовления мясо-пептонного агара (МПА) можно использовать
мясо-пептонный бульон (МПБ). Основой для его приготовления является мясная
вода, которую обычно готовят следующим образом: 500 г мяса, освобожденного от
костей, жира и сухожилий, разрезают на мелкие куски (или пропускают через
мясорубку), заливают 1 л водопроводной воды и оставляют при комнатной
температуре на 12 ч, или в термостате при 30 °С на 6 ч, или при 37 °С - на 2 ч.
За это время из мяса экстрагируются различные вещества, в том числе
водорастворимые витамины. Затем мясо отжимают через марлю или полотно и
фильтрат кипятят 5 мин. При этом свертываются белки. Остывшую массу фильтруют
без перемешивания через ватный фильтр и добавляют воды до первоначального
объема. К мясной воде добавляют 1 % пептона и 0,5 % поваренной соли.
2. К МПБ, бульону Хоттингера или разбавленному гидролизату Хоттингера
добавляют 2 - 3 % агар-агара. рН МПА должен быть 7 ± 0,2. Стерилизуют при 1
атм. Стерильная среда может храниться в течение 1 - 2 месяцев.
3. Для приготовления МПА можно также использовать бульон Хоттингера (180
мг % аминого азота) или гидролизат Хоттингера (800 мг % аминого азота). Для
приготовления МПА гидролизат Хоттингера разбавляют в четыре - пять раз.
ПРИЛОЖЕНИЕ
3
Обязательное
ПРИГОТОВЛЕНИЕ СУСПЕНЗИЙ БАКТЕРИЙ И КОНТРОЛЬ
ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ БАКТЕРИЙ
1. Для приготовления суспензии клеток используют культуры бактерий
возрастом от 2 до 5 сут, считая с момента пересева.
2. Суспензию клеток с концентрацией 1 - 2 мин/см3 готовят
отдельно для каждого вида бактерий. Для этого в пробирку или колбу, содержащую
(20 ± 5) см3 стерильной воды, переносят клетки бактерий из пробирки
с чистой культурой.
3. Перенос бактериальных клеток из пробирки в колбу осуществляется
захватом клеток бактериологической петлей.
4. Приготовленные в соответствии с требованиями п.п. 1 - 3 суспензии бактерий
смешивают в равных объемах и используют для заражения образцов.
5. Срок хранения суспензии бактерий не более 4 ч с момента их
приготовления.
СОДЕРЖАНИЕ
1. Метод 1. 1
2. Метод 2. 3
3. Метод 3. 3
4. Требования безопасности - по гост 9.023-74. 4
Приложение 1. Пересев, выращивание и хранение культур
бактерий. 4
Приложение 2. Приготовление мясо-пептонного агара. 4
Приложение 3. Приготовление
суспензий бактерий и контроль жизнеспособности бактерий. 5
|