МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

СОК ЯБЛОЧНЫЙ.

СОК ЯБЛОЧНЫЙ КОНЦЕНТРИРОВАННЫЙ И НАПИТКИ, СОДЕРЖАЩИЕ ЯБЛОЧНЫЙ СОК

Метод определения содержания патулина с помощью тонкослойной хроматографии

СОК ЯБЛЫЧНЫ.

СОК ЯБЛЫЧНЫ КАНЦЭНТРАВАНЫ I НАП1ТК1, ЯК1Я ЗМЯШЧАЮЦЬ ЯБЛЫЧНЫ СОК

Метад вызначэння змяшчэння патулжу з дапамогай тонкаслаёвай хроматаграфп

(ISO 8128-2:1993, MOD)

Издание официальное

Межгосударственный совет по стандартизации, метрологии и сертификации

Минск

ЕВРАЗИЙСКИЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ (ЕАСС)

EURO-ASIAN COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION (EASC)

СОК ЯБЛЫЧНЫ.

СОК ЯБЛЫЧНЫ КАНЦЭНТРАВАНЫ I НАП1ТК1, ЯК1Я ЗМЯШЧАЮЦЬ ЯБЛЫЧНЫ СОК

Метад вызначэння змяшчэння патулжу з дапамогай тонкаслаёвай хроматаграфм

СОК ЯБЛОЧНЫЙ.

СОК ЯБЛОЧНЫЙ КОНЦЕНТРИРОВАННЫЙ И НАПИТКИ, СОДЕРЖАЩИЕ ЯБЛОЧНЫЙ СОК

Метод определения содержания патулина с помощью тонкослойной хроматографии

ISO 8128-2:1993 Apple juice, apple juice concentrates and drinks containing apple juice - Method for determination of patulin content using thin-layer chromatography (MOD)

Издание официальное

Минск

Госстандарт Республики Беларусь 2006

Предисловие

Евразийский совет по стандартизации, метрологии и сертификации (ЕАСС) представляет собой региональное объединение национальных органов по стандартизации государств, входящих в Содружество Независимых Государств. В дальнейшем возможно вступление в ЕАСС национальных органов по стандартизации других государств.

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-97 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила, рекомендации по межгосударственной стандартизации. Порядок разработки, принятия. применения, обновления и отмены».

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП)

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации

3    ПРИНЯТ Евразийским советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол № 22 от 6 ноября 2002 г.)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 Сокращенное наименование национального органа по стандартизации Армения AM Армстандарт Беларусь BY Госстандарт Республики Беларусь Казахстан KZ Госстандарт Республики Казахстан Кыргызстан KG Кыргызстандарт Молдова MD Молдова-Стандарт Российская Федерация RU Госстандарт России Узбекистан UZ Узстандарт Украина UA Гостандарт Украины

4    Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному стандарту ИСО 8128-2:1993 «Сок яблочный, сок яблочный концентрированный и напитки, содержащие яблочный сок. Определение содержания латулина. Часть 2. Метод тонкослойной хроматографии» (ISO 8128-2:1993 «Apple juice, apple juice concentrates and drinks containing apple juice. Method for determination of patulin content using thin-layer chromatography»), кроме приложения «Библиография».

5    ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ постановлением Госстандарта Республики Беларусь от 29 августа 2006 г. № 39 непосредственно в качестве государственного стандарта Республики Беларусь с 1 марта 2007 г.

6    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных (государственных) стандартов, издаваемых в этих государствах.

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания на территории Республики Беларусь без разрешения Госстандарта Республики Беларусь

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

СОК ЯБЛОЧНЫЙ, СОК ЯБЛОЧНЫЙ КОНЦЕНТРИРОВАННЫЙ И НАПИТКИ, СОДЕРЖАЩИЕ ЯБЛОЧНЫЙ СОК

Метод определения содержания пагулина с помощью тонкослойной хроматографии

Apple juice, apple juice concentrates and drinks containing apple juice.

Method for determination of palulin content using thin-layer chromatography

Дата введения 2007-03-01

1    Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения содержания патулнна в яблочных соках, концентрированных яблочных соках и напитках, содержащих яблочным сок, с помощью тонкослойной хроматографии.

Предел обнаружения патулнна настоящим методом составляет 25 мкг/дм' при условии, что взятый для анализа объем пробы готового к употреблению сока составляет 50 ем³.

2    Сущность метода

Патулин экстрагируют из исследуемой пробы смесью этилацетата с хлороформом (3:2 по объему). Экстракт очищают на колонке с силикагелем. Количественный и качественный анализ экстракта проводят с помощью двумерной тонкослойной хроматографии (ТСХ) при проявлении пятен раствором гидрохлорида гидразона З-мстил-2-бснзотиазолнна (МБТГ).

3    Реактивы

Используют реактивы аналитической чистоты и воду квалификации «для хроматографии».

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — При работе с бензолом и хлороформом следует соблюдать особую осторожность, поскольку эти растворители токсичны и взрывоопасны.

3.1    Растворители: этилацетат, хлороформ и толуол.

3.2    Подвижные фазы для двумерной ТСХ:

бснзол/мстанол/уксусная кислота (массовой долей 80 %) (19:2:1 по объему);

толуол/этилацетат/муравьиная кислота (массовой долей 90 %) (5:4:1 по объему).

3.3    Силикагель для колоночной хроматографии с размером частиц от 0,063 до 0,2 мм.

3.4    Элюирующий раствор: смесь толуола с этилацетатом (75:25 по объему).

3.5    Стандартный раствор патулнна (С₇Н₆0₄)

3.5.1 Приготовление стандартного раствора патулнна

Навеску патулнна массой 10,0 мг. взятую с точностью до 0.1 мг, растворяют в мерной колбе с одной отметкой вместимостью 100 см³ в этилацетатс (3.1). Объем содержимого в колбе доводят до отметки этилацетатом.

Пипеткой переносят 10,0 ем³ приготоазенного раствора в другую мерную колбу с одной отметкой вместимостью 100 см³, объем содержимого в колбе доводят до отметки этилацетатом. Массовая концентрация патулнна в приготовленном стандартном растворе состаатяет около 10 мкг/см³.

И манне официальное

Измеряют оптическую плотность стандартного раствора при длине волны 276 нм на подходящем спектрофотометре с использованием кварцевых кювет рабочей длиной 10 мм.

3.5.2 Расчет концентрации стандартного раствора патулнна

Концентрацию стандартного раствора патулнна (3.5.1) р^. мгк/см³, рассчитывают по формуле

л М1000 С    (1)

Р|К ~ А *

где А — оптическая плотность стандартного раствора патулнна; у4₂₇₆ — малярный показатель поглощения раствора патулнна при длине волны 276 нм. дм³ • моль^-1 • ем^-1 (/4₂7б ⁼ 14600);

А/ — малярная масса патулнна. г/моль;

С — постоянная прибора (обычно С — 1).

3.6 Приготовление раствора гидрохлорида МБТГ

Навеску моногидрата пирохлорида пира зона З-мстил-2-бснзотиазолина (МБТГ) массой 0.5 г растворяют в 100 см³ воды.

Приготовленный раствор хранят в холодильнике. Срок годности раствора — 3 сут.

4 Приборы и лабораторное оборудование

Перед использованием лабораторное оборудование промывают раствором гипохлорита натрия концентрации 10 г/см³.

Обычное лабораторное оборудование, в частности, следующее;

4.1    Хроматографическая колонка длиной 300 мм. внутренним диаметром 22 мм, с резервуаром вместимостью 250 см³ и запорным краном, снабженная с выходного конца пористым стеклянным диском.

4.2    Оборудование для ТСХ: стеклянные хроматографические камеры, длинноволновая ультрафиолетовая лампа (360 нм) и устройство для опрыскивании.

4.3    Флюородснситомстр.

4.4    Пластинки для ТСХ размером 20x20 см, покрытые силикагелем (3.3) толщиной слоя 0,25 мм, без флюоресцентного и иди к;>тора.

4.5    Сушильный шкаф с принудительной вентиляцией, пригодный для работы при (130±I) *С.

5    Отбор проб

Проба, поступающая в лабораторию, должна быть представительной и без следов порчи или изменения свойств продукта при транспортировании и хранении.

6    Проведение испытаний

6.1    Приготовление испытуемого раствора

При испытании концентрированных яблочных соков их разводят водой 1:5 по объему. Дальнейшую процедуру проводит для всех продуктов одинаково, как описано ниже.

Пробу объемом 50 см³ экстрагируют порцией смеси этилацетлта с хлороформом (3:2 по объему) объемом 50 см³ в течение нс менее I мин. Экстракцию повторяют еще два раза той же смесью новыми порциями объемом по 50 см³. Экстракты объединяют и фильтруют на воронке с пористым стеклянным фильтром через слой безводного сульфата натрия толщиной I см, фильтрат собирают в отгонную колбу вместимостью 250 см³.

Экстракт упаривают на ротационном испарителе под вакуумом досуха, остаток количественно переносят в мерный цилиндр вместимостью 100 см³, опатаскивая колбу четырьмя порциями эти-лацетата объемом по 5 см³. Объем содержимого в цилиндре доводят сначала до 25 см³ этнлацетатом, затем до 100 см³ толуолом.

6.2    Колоночная хроматография

В основание колонки (4.1) помещают ватный тампон. В колонку вносят 25 см³ толуола и

суспензию 15 г силикагеля (3.3) в 40 ем* толуола. После оседании силикагели в колонку вносят 15 г безводного сульфата натрии и дают растворителю стечь до верхней кромки насыпного слоя. В колонку вносят экстракт из исследуемой пробы, после чего растворителю дают стечь до верхней кромки насыпного слоя, элюат отбрасывают. В колонку вносят 200 см³ элюирующего раствора (3.4) и проводят элюирование при скорости потока около 5 с.м³/мин. элюат собирают в градуированный цилиндр. Собранный элюат упаривают приблизительно до объема 2 см³.

Сконцентрированный элюат количественно переносят в пробирку вместимостью 20 см³ с помощью четырех порций этил ацетата объемом около 4 см' каждая и упаривают досуха в токе азота. Остаток немедленно растворяют в 0.5 см³ этнлацетата, так как патулин нс стабилен.

6.3 Тонкослойная хрочатшрафия

Пластинки для ТСХ. предварительно покрытые силикагелем (4.4), активируют при температуре 110 *С в течение 2 ч. С помощью капиллярной пипетки или микрошприца на пластинку в точку, находящуюся на расстоянии 2 см от левого края и 2 см от нижнего края, наносят аликвотную часть очищенного экстракта из пробы (6.2) объемом 0.020 см³. В точку, находящуюся на расстоянии 2 см от правого края и 2 см от нижнего края пластинки, наносят 0,005 см³ стандартного раствора патулина (3.5). В точку, находящуюся на расстоянии 2 см от левого края и 2 см от верхнего края пластинки, наносят также 0,005 ем³ стандартного раствора патулина. В точку, находящуюся на расстоянии 2 см от левого края пластинки и 4 см от верхнего края пластинки, наносят 0,010 см³ стандартного раствора патулина (см. рисунок 1).

Направление 11 —................*•

а

с

а

Размеры в сантиметрах

Рисунок I — Двумерная тонкослойная хроматография

Хроматограмму развивают в направлении /(рисунок 1). используя подвижную фазу бснэол/мс-танол/уксусная кислота (3.2). до прохождения фронтом растворителя расстояния 14 ем. Пластинку вынимают из камеры, высушивают на воздухе, после чего развивают хроматограмму в направлении // (рисунок 1), используя подвижную фазу толуол/этилацетат/муравьиная кислота (3.2), до прохождения фронтом растворителя расстояния 14 см. Пластинку вынимают из камеры и высушивают при комнатной температуре. Пластинку опрыскивают раствором гидрохлорида МБТГ (3.6). посте чего высушивают в течение 15 мин в сушильном шкафу (4.5) при температуре 130 *С.

6.4 Определение количества патулина в экстракте

Количество патулина в экстракте определяют сравнением интенсивности флюоресценции пятна патулина из экстракта с пятнами патулина из стандартного раствора при облучении пластинки длинноволновым ультрафиолетовым светом. Пятно патулина из экстракта ищут на пересечении перпендикулярных линий, соединяющих пятна патулина из стандартного раствора. Если интенсивность флюоресценции пятна патулина из 0,020 см³ экстракта выше интенсивности флюоресценции пятен патулина из стандартного раствора, экстракт разводят этилацстатом и повторяют процедуру

УДК 664.863.001.4:006.354    МКС    67.160.20    Н59    ОКСТУ9Ю9

Ключевые слова: яблочный сок, концентрированный яблочный сок, напитки, содержащие яблочный сок. патулнн, определение содержания, тонкослойная хроматография

Текст печатается по изданию:

ГОСТ Р 51440-99 (ИСО 8128-2-93) - М : ИПК Издательство стандартов. 2(КК)

Ответственный за вытек В.Л. Гуревич

Сдано в набор 12.09.2006. Подписано в печать 26.10.2006. Формат бумаги 60x84/8. Бумага офсетная Гарниту ра Таймс. Печать рн зографическая. Уел. печ л. 0.93 Уч,- иод. л. 0.57 Тираж экз. Заказ

Издатель и полиграфическое исполнение НП РУП «Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации» (БелГИСС) Лицензия №02330/0133084 от 30.04.2004.

220113. г. Минск, ул. Мел ежа. 3.