Министерство сельского хозяйства Российской Федерации

Государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ

МОСКВА

ЦЕНТР НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКОЙ ИНФОРМАЦИИ, ПРОПАГАНДЫ И РЕКЛАМЫ 1994 г.

УТВЕРЖДЕНО МИНИСТЕРСТВОМ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР “29 "июля    1991 г.

Я 6193-91

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТИТУСА В ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ И ЗЕРНЕ КУКУРУЗЫ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ

1 -Краткое описание препарата

Химическое название: 1 - (4»б-диметоксипиримидин-Р-ил)-3- [ (3-этил-еульфонилпиридин-2-ил) сульфонал 3 мочевина,

Общепринятое название: титус, ДРХ-Е9636 *

Эмпирическая формула: С ^    -

Молекулярная масса:431»4

Химически чистый титус представляет собой белое кристаллическое вещество с температурой плавления 176-178^0.В виде сухой пленки на стекле и в растворе в ацетонитриле относительно устойчив;в кислой (рН<3) и щелочной среде (рЯ>9) быстро гидролизуется. Период полураспада в водной среде при pH 5 -4,6 дней;рН 7 -7,2 дней;pH 9 -0,3 дня,в почве-бт 1,7 до Разработчики:Калинин В.А-,Калинина Т.С.,Белошапкин С.П.,Московская сельскохозяйственная академия им.Тимирязева К.А.

Рио. 3. Хроматограмма стандарта титуоа-0.1 мкг/мл.

Усилитель 1x50. Хроматограф wdiers 510,

Рис. S . Хроматограмма образца зеленой массы кукурузы -контроль без внесения титуса.

Усилитель 1x50. Хроматограф Welters 510.

Рио. £ . Хроматограммы образцов зеленой массы кукурузы: титус I мкг/мл (стандарт); внесено в образец - 0,5 мг/кг. Усилитель 1x50. Хроматограф Wkiers 5Ю.

m

Рис. IQ. Хроматограммы образцов зерна кукурузы: титус - I мкг/мл (стандарт); внесено в образец - 0,5 мг/кг.

Усилитель 1x50. Хроматограф Waters 510.

т

Рис. II. Хроматограммы образцов зерна кукурузы: титус - 0,2 мкг/мл (стандарт); внесено в ооразец - 0,1 мг/кг. Усилитель 1x50. Хроматограф Waters 510.

4*3 дней

Хорошо растворим в ацетонитриле ,метиленхлориде и хлороформе-Растворимость в дистиллированной воде:при 25°С <10 мг/л*в буферном растворе при pH 7 -7*3 г/л.

Титус малотоксичен для человека и теплокровных животных (СД^ф для крыс > 5000 мг/кг) не обладает побочными токсическими эффектами,может вызвать слабое раздражение слизистой оболочки глаз.

Титу с-новый повсходовый гербицид* эффективный в борьбе со злаковыми однолетними и многолетними сорняками в посевах кукурузы и посадках картофеля .Зарегестрирован в России как средство борьбы со злаковыми сорняками*особенно гумаем ползучим*в посевах кукурузы в виде 75%-ной сухой текучей суспензии с нормой расхода 40-50 г/га.

2.Методика определения титуса в зеленой массе и зерне кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

2.1.Основные положения

2.1.1 .Принцип метода

Методика основана на определении остатков титуса с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием фотокондуктивыого детектора и колонки с силикагелем-Определение проводят после экстракции гербицида буферной смесью и реэкстракции метиле нхлоридом.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2.Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов* применяемых при выращивании кукурузы:2,4Д, симазин,атразин,эрадикан.

2.1.3.Метрологическая характеристика метода

iZ9

Таблица 1

Метрологические параметры Р=0.95 Анализируемый п Предел Диапазон Среднее Стан Довери объект обнару жения, мт/кг определяемых концентраций, мг/кг значение определения , / дартное отклонение S.X тельный интервал ср^яюго результата , / Зеленая мас i са растений 15 0,05 0,05-1.0 89,0 7,48 -4,1 Зерно куку х рузы 15 0,05 0,05-1,0 86,5 6,40 -3,5

2.2. Ре активы и материалы

Титус с содержанием действующего вещества-99»5Х фирмы Дшон. Ацетонитрил,ТУ 6-09-3534-^82 .

Вода бидистиллят,ГОСТ 7602-72.

Калий фосфорнокислый двузамещенный.

Кислота уксусная ледяная,ГОСТ 61-75-Кислота ортофосфорная ,Г0СТ 6552-80.

Метилен хлористый для хроматографии,ГОСТ 12794-80.

Натрий сернокислый безводный,х.ч. ГОСТ 4166-76.

Спирт изопропиловый, ГОСТ 9805^84.

Спирт метиловый для хроматографии,ТУ 6-09-1709-77.

Циклогексан для хроматографии,ТУ 6-09-1832-77.

Приготовление растворов:

а) 1-молярный раствор К2НР0^:174 г фосфорнокислого двузамещенного калия помещают в мерную колбу объемом 1000 мл,добавляют дистиллированной воды до полного растворения соли и доводят объем водой до метки*

б) Фосфатный буфер (pH 7,0):смешивают 150 мл 1 М Й^НРО^ с 1350 мл дистиллированной воды .Доводят pH смеси до 7,0, добавляя по каплям кон-

130

центрированную ортофосфорную кислоту и контролируя pH среда с помощью универсального иономера.

в )Экстрагирующая смесь:готовят смесь метанола с фосфатным буфером в соотношении 75:25 по объему*

г )Подвижаая фаза для ВЭЖХ:циклогексан-750 мл,изопропанол-125 мл, метанол-125 мл,смесь уксусной кислоты с водой (9:1 )-1 мл.

д)Состав для кондиционирования колонки!изопропанол-400 мл,уксусная кислота ледяная-100 мл,вода бидистиллят-10 мл.

Приборы, аппаратура, посуда.

Жидкостный хроматограф Уотерс модель 510 с фотокондуктивным детектором Тракор модель 965 или другой аналогичного типа.

Колонка стальная длиной 30 см с сорбентом на основе силикагеля с удельной поверхностью 300 м^/г и размером частиц 10 мкм марки [г-Порасил фирмы Уотерс или Силасорб-300 фирмы Хемапол.

Мельница лабораторная.

Гомогенизатор лабораторный со стаканом емкостью 100-150 мл. Ротационный вакуумный испаритель ИР-1 М,ТУ 25-11-917-74 или аналогичного типа.

Водоструйный насос,ГОСТ 25336-82.

Иономер универсальный ЭВ-74.

Воронки конические,стеклянные,ГОСТ 25336-82-Воронки делительные на 500 мл,ГОСТ 25336-82.

Концентраторы грушевидные КТУ-100-14/19 НШ-19,Г0СТ 25336-82. Воронки Бюхнера фарфоровые диаметром 70 мм,ГОСТ 9147-80.

Колбы Бунзена объемом 800 мл,ГОСТ 25336-82.

Пипетки мерные на 2,0;1,0;5,0;10,0;25 мл,Г0СТ 20292-74*

Колбы мерные на 25,50 и 100 мл,ГОСТ 1770-74*

Вата стеклянная для хроматографии.

4Ы

Фильтры диаметром 20 мм с отверстиями 20 мкм фирмы Мидипор.

2.3.Отбор проб

Отбор проб проводится в соответствии с “Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов*'

(J® 2051-79 от 21.08.79).Отобранные пробы зерна подсушивает до стандартной влажности и хранят в сухом,хорошо вентилируемом помещении. Пь^д анализом пробы размалывают на лабораторной мельнице до размеров частиц менее 1 мм.

Пробы зеленой массы замораживают и хранят в холодильнике при температуре ниже -15°С.

2.4.Подготовка к определению

2.4.1* Кондиционирование хроматографической колонки

Перед началом работы хроматографа раствор для кондиционирования колонки и подвижную фазу дегазируют в течение 2-х часов, пропуска я через растворы гелий.Операцию повторяют ежедневно в течение 1 часа перед началом анализа,не выключая прибора.При добавлении новой порции растворителей дегазирование проводят в течение 2-х часов.

Готовую колонку устанавливают в термостат хроматографа и стабилизируют при 35^С,пропуская через нее в течение 4-х часов раствор для кондиционирования колонки со скоростью 0,5 мл и затем еще А часа подвижную фазу для ВЭЖХ \с той же скоростью. Эту операцию проводят ежедневно перед началом ввода Проб в ночное время с использованием таймеров (реле времени)-Нарушение данного режима приводит к резкой потере чувствительности.

2.4.2.Приготовление стандартных растворов

Стандартный раствор Ж 1 с концентрацией титуса 1 мг/мл готовят еле-

дующим образом:взвешивают 50 мг титуса о точностью - 0,0002 г. переносят навеску в мерную колбу на 50 мл ацетонитрилом и доводят обьем раствора до метки этим же растворителем. Методом последовательного разбавления в ацетонитриле готовят стандартный раствор Я 2 с концентрацией 100 мкг/мл. Растворы JM и 2 можно хранить в холодильнике не более 1 месяца.

Для калибровки хроматографа ежедневно готовят рабочий© стандартные растворы с концентрацией титуса 0,1; 0,2; 0,4; 0,6 мкг/мл, внося пипеткой соответствующее количество раствора Л 2 в мерные колбы, упаривая ацетонитрил досуха током азота и доводя обьем раствора до метки подвижной фазой без уксусной кислоты.

Хроматографируют по 20 мкл каждого рабочего раствора, измеряют высоту пика (или площадь) и строят график зависимости высоты ( площади) пика от концентрации титуса.

2.5- Описание определения

2.5.1 .Экстракция и очистка экстракта

Навеску измельченного зерна или зеленой массы - 10 г помещают в пластиковую банку с крышкой * приливают 100 мл экстрагирующей смеси и гомогенизируют в течение 1 мин при скорости 1500 об/мин. Банки с гомогенатом устанавливают на встряхиватель, закрывают плм-яо крышками и встряхивают 10 мин. По истечении срока банки переносят :< центрифугу с охлаждением и центрифугируют 10 мин при скорости 3500-4500 об/мин. Экстракт осторожно переносят в воронку Бюхнера с бумажным фильтром и фильтруют под вакуумом в колбу Бунзена. Экстракцию повторяют, добавляя в банку 50 мл ацетонитрила, встряхивая 10 мин, центрифугируя и отфильтровывая. Объединенный экстракт переносят из колбы Бунзена в чистую пластиковую банку объемом 250 мл, обмывая колбу экстрагирующей смесью. К экстракту приливают 50 мл метяенхлорида, банку плотно закрывают крышкой и интенсивно встряхивают

смесь в течение 10 мин. Затем экстракт центрифугируют 10 мин при 3500-

/33

4500 об/мин. Содержимое банки осторожно ( но стеклянной палочке) переносят в делительную воронку и нижний слой (метиленхлорид) сливают в концентратор через безводный сульфат натрия. Повторяют экстракцию еще 2 раза порциями метиленхлорвда по 50 мл с последующим центрифугированием. Объединенные экстракты упаривают досуха на ротационном испарителе при t°= 40°С.

Сухой остаток растворяют в 5 мл подвижной фазы» не содержащей уксусной кислота» и вводят в хроматограф 20 мкл раствора.

2.5.2.    Условия хроматографирования

Жидкостный хроматограф “Уотерс^и модель 510 с программатором температуры и фотокондуктивным детектором “Трактор" модель 365-

Показания аттенуатора 1x50.

Скорость движения ленты самописца - 120 мм/час.

Колонка стальная длиной 30 см. внутренний диаметр 3 мм. Неподвижная фаза - Ji- Пора сил, Уотерс.

Температура колонки - 35°С.

Скорость потока подвижной фазы - 0,3 мл/мин.

Объем пробы» вводимой в колонку -20 мкл.

Абсолютное время удерживания титуса - 27 мин 29 сек.

Линейность детектирования сохраняется в пределах 2-20 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят 2 раза и вычисляют среднюю высоту ( площадь) пика. Образцы, дающие пики, большие, чем стандартный раствор 1,0 мкг/мл, разбавляют.

2.5.3.    Обработка результатов анализов

Содержание титуса рассчитывают методом соотношения со стандартом по

% * ^А • ^v х=-

^Пс ' Р

где X - содержание гербицидов в фобе» мг/кг;

П - высота (площадь) пика стандарта, мм;

С

П^р-высота (площадь) пика образца» мл;

А -концентрация стандартного раствора» мкг/мл;

У -объем экстракта» подготовленного для хроматографирования, мл; р -масса анализируемого образца, г.

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями» токсичными веществами» электронагревательными приборами и сжатыми газами.

Таблица 2 Полнота определения титуса в зеленой массе и зерне кукурузы ( 5 повторностей для казвдой концентрации)

Среда добавлено титуса мг/кг Обнаружено. мг/кг Полнота определения, У. Зеленая масса 0,5 0,469 93,8 0.1 0,00833 83,3 0,05 0,045 90,0 Зерно кукурузы 0»5 0,418 83,5 0,1 0,0859 85,9 0,05 0,045 90,0

«Г

Рис. I, Хроматограммы стандартов титуса: 2 и I мкг/мл Усилитель 1x50. Хроматограф W&tefS 510.