Министерство сельского хозяйства Российской Федерации
Государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕСборник № 24
МОСКВА
ЦЕНТР НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКОЙ ИНФОРМАЦИИ, ПРОПАГАНДЫ И РЕКЛАМЫ 1996 г.
"Утверждено" Министерством Здравоохранении СССР"29" июля 1991 г.N 6092-91.
Временные методические указания по определению тифснсульфурон-ме-тила в растительном материале, зерне, воде, почве хроматографическими методами.
1. Краткая характеристика препарата.
Тифенсульфурон-метил - метил 3-[ [ [ [4-метокси-6-мстил-1,3,5-триазин-2-ил)амино] карбонил] сульфонил] -2-тиофенкпрбоксилат. Торговое название Хармони, ф. Дюпон, США.
C12H13N5O6S2
М.м. 378,40
Белое, твердое вещество. Температура плавления 186° С, степень чистоты 95%. Растворимость в ацетонитриле при 25 ° С 7,3 мг/мл, в этилдцетате при 25° С 2,6 мг/мл, в воде при pH 6,0-2400 мг/мл.
ЛД50 для крыс 5000 мг/кг.
Препарат используется в качестве гербицида для зерновых культур.
2. Методика определения хармони.
2.1. Основные положения.
2.1.1. Принцип метода.
Метод основан на извлечении препарата из анализируемой пробы раствором гидрокарбоната натрия, очистке экстрактов реэкстракцией хлороформом и количественном определении хроматографическими методами (ГЖХ, ТСХ).
2.1.2. Метрологическая характеристика метода (табл.1).
Диапазон определяемых концентраций 0,01-0,5 мг/кг (мг/л).
2.1.3. Определению не мешают наполнители технического препарата.
2.2. Реактивы и растворы.
Хлороформ, ч., ГОСТ 20015-74.
Тифенсульфурон-метил, аналит.стандарт, фирма Дюпон.
Разработчики: Кошарновская Т.А., Морару Л.Е., Гиренко Д.Б. (ВНИИ-ГИНТОКС, г. Киев).
Табл. 1. |
Объект |
Среднее значение с; % |
Доверительный интервал при Р-0,95, п-5<%) |
Стандартное отклонение, S (%) |
Относительное стандартное отклонение, Sr (%) |
ГЖХ |
Зерно |
80 |
±4,3 |
3,5 |
1,6 |
Почва |
84 |
±3,9 |
3,2 |
1,4 |
Зеленая масса |
78,6 |
±6,7 |
5,4 |
2,4 |
Вода |
90,4 |
±3,5 |
2,8 |
3,1 |
ТСХ |
Зерно |
70,5 |
±5,1 |
4,1 |
5,8 |
Почва |
83,5 |
±5,2 |
4,2 |
5,0 |
Зеленая масса |
72 |
±7,3 |
5,9 |
8,2 |
Вода |
86 |
±3,6 |
2,9 |
3,4 |
|
Соляная кислота, х., ГОСТ 3118-77, 0,1 н водный раствор.
Натрий углекислый, х.ч., ГОСТ 4201-79, 0,1 М водный раствор.
Стандартный раствор хармони, содержащий 100 мкг/мл вещества, готовят растворением 10 мг препарата в мерной колбе с притертой пробкой в 100 мл этилового эфира уксусной кислоты. Хранят в холодильнике не более 6 месяцев.
К методу ГЖХ
Азот особой чистоты газообразный, ГОСТ 9293-74.
Хроматон N-AW-DMCS (0,16-0,20 мм) с 5% SE-30.
Хлороформ, х.ч., ТУ 6-09-4263-76.
Метанол, х.ч., ГОСТ 6995-77.
Едкий кали, ч., ГОСТ 9285-78.
Гидразингидрат, чда.
Диэтиловый эфир, хч., ГОСТ 6262-79.
Получение диазометана.
IJ реакционную колбу на 500 мл помещают 6 г едкого кали, 3 мл гидразин-гидрата, 3 мл метанола. Через смесь продувают азоте расходом 100 мл/мин. Из капельницы подают хлороформ со скоростью 1 кап. за 1-2 с. Колбу присоединяют к обратному холодильнику, конец которого снабжен газоотводной трубкой, которая погружена в слой эфира на дне приемника. Приемник охлаждают смесью льда и соли.
Вследствии токсичности и раздражающего действия диазометана прибор должен быть установлен в вытяжном шкафу. При работе использовать индивидуальные средства защиты: экран, перчатки, очки.
После окончания насыщения диэтилового эфира диазометаном (желтый цвет раствора), прекращают подачу в реакционную колбу хлороформ, отключают азот, остатки в реакционной колбе заливают водой и тщательно промывают колбу и все части прибора водой.
К методу ТСХ
Нитрат серебра, ч., ГОСТ 1277-75.
51
Бромфсноловый синий, ч., ТУ 6-09-3719-83.
Лимонная кислота, осч., ТУ 6-09-584-75, 2% раствор.
Пластинки "Силуфол" (Хемапол, ЧССР).
Подвижная фаза ацетон-гексан 1:1.
Проявляющий реактив: Раствор А: 50 мг бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона. Раствор Б: 0,5 г нитрата серебра растворяют и 20 мл дистиллированной воды и прибавляют 60 мл ацетона.
Растворы А и Б сливают в мерную колбу на 100 мл и доводят ацетоном до метки. После обработки бромфеноловым синим, пластинку обесцвечивают 2% раствором лимонной кислоты.
2.3. Приборы и посуда.
Газовый хроматограф, снабженный ДПР (Цвет, Газохром или др.) Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-77,
Колбы конические на шлифе емкостью 250-500 мл, ГОСТ 10394-74. Колбы грушевидные для отгонки растворителей, ГОСТ 23932-79.
Посуда мерная, ГОСТ 1770-74.
Делительные воронки, ГОСТ 23336-82.
Аппарат для встряхивания, ТУ 64-21-1081-73.
Воронки химические, ГОСТ 8613-75.
Индикаторная бумага универсальная, ТУ 6-09-1181-71,
Прибор для получения диазометана:
-колба круглодонная трехгорлая, емкостью 500 мл на шлифах (реакционный сосуд)
-холодильник Либиха на шлифах -делительная воронка на шлифе (капельница)
-П-образный переходник на шлифах -капилляр
Камера хроматографическая, ГОСТ 23932-79.
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-79.
2.4. Отбор проб.
2.4.1. Отбор проб производится в соответствии ^Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Заместителем Главного Государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 за N 2051-79.
Хранят пробы в морозильной камере (-14 - 20° С).
2.5. Проведение определения.
2.5.1. Экстракция и очистка экстрактов.
50 г зерна (50 г воздушно-сухой почвы, 10 г измельченной зеленой массы) помещают в плоскодонную колбу емкостью 250 мл, приливают 50 мл 0,1 М раствора натрия углекислого, встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 1 часа. Отделяют раствор. Колбу и фильтр дважды промывают 20 мл раствора натрия углекислого. Объединяют экстракты, доводят pH до 3,5 с по-
52
мощью соляной кислоты и реэкстрагируют препарат хлороформом (3 х 50 мл). Объединенные экстракты выпаривают при температуре не более 35 ° С до 0,3-0,5 мл.
2.5.2.Определение методом ГЖХ.
Удаляют остаток растворителя на воздухе. К сухому остатку приливают небольшими порциями раствор диазометана в диэтиловом эфире до прекращения обесцвечивания. Затем взбалтывают и выпаривают на воздухе досуха. Растворяют сухой остаток в I мл гексана. Хроматографируют по 5 мкл пробы. Одновременно с пробой готовят и метилируют диазометаном контрольную пробу и стандартные растворы хармони с концентрацией 10 мкг/мл, 5 мкг/мл, 2 мкг/мл.
Условия хроматографирования.
Хроматограф с ДПР.
Колонка стеклянная, длина 3 м, d=3 мм.
Носитель - хроматон N-AW-DMCS (0,16-0,20 мм).
Неподвижная фаза - 5% SE-30.
Температура: испарителя - 230° С, детектора - 230° С, колонки - 170° С.
Скорость газа-носителя - 32 мл/мин (через колонку)
-100 мл/мин (на продувку).
Вводимый объем - 5 мкл.
Время удерживания метилпроизводного хармони - 3 мин 30 с.
Минимально детектируемое количество 3 нг.
Содержание хармони в пробе рассчитывают по формуле:
v Ccr.V1.H2.V3
X=“V2.H,.M ’ГДС
X - количество препарата в пробе, мг/кг, мг/л;
Сет - содержание вещества в стандарте, мкг/мл;
V1 - объем стандарта, введенного в колонку газового хроматографа, мкл;
V2 - объем анализируемой пробы, введенной в колонку газового хроматографа, мкл;
— V3 - общий объем анализируемой пробы, мл;
Hi - высота пика стандарта, мм;
Н2 - высота пика анализируемой пробы, мм;
М - масса пробы, взятой для анализа, г.
2.5.3. Определение методом ТСХ.
Пробу количественно наносят на хроматографическую пластинку "Силу-фол". Рядом наносят стандартный раствор с различным содержанием хармони (2, 5, 7 и 10 мкг). После этого пластинку помещают в камеру для хроматографирования и хроматографируют. Хроматограмму развивают в смеси ацетона с гексаном (1:1). После развития хроматограммы пластинку вынимают из камеры, помещают ее под тягу и дают возможность испариться растворителям, после
53
чего обрабатывают пластинку из пульверизатора вначале раствором бромфено-лового синего, затем раствором лимонной кислоты. Хармони проявляется на пластинках в виде синих пятен на желтом фоне с Rf 0,5 ± 0,03.
2.6. Обработка результатов анализа.
Количественное определение проводят путем сравнения площади и интенсивности окраски пятен рабочей пробы и серии стандартов.
Содержание хармони в анализируемой пробе X мг/кг:
А - количество препарата, найденное на хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;
Р - навеска пробы, г.
3. Техника безопасности.
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.