Министерство сельского хозяйства Российской Федерации

Государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ

Сборник № 21 Часть 1-ая

МОСКВА

ЦЕНТР НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКОЙ ИНФОРМАЦИИ, ПРОПАГАНДЫ И РЕКЛАМЫ 1994 г.

Утверждено Министерством здравоохранения СССР Я 6078-91 ^р 29 июля 1991 г

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОМУ ОПРЕДЕЛЕНИЮ ИВИНА В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ ( Дополнение к¹‘Методическим указаниям но хроматографическому определению ивина в воде и овощах” N4327-37 от 8-06.87 г.)

1 - Краткая характеристика препарата

Краткую характеристику препарата ивин см на стр-136

2. Методика определения ивина в биологическом материале

2.1. Основные положения

2.1.1 . Принцип метода

Методика основана на извлечении ивина из проб органическим растворителем, кислотной очистке екстрактов, реекстракции препарата и хроматографировании в тонком слое силикагеля. Зоны локализации препарата обнаруживаются: водным раствором крахмала после УФ-облучения и обработки пластинок парами иода, альтернативно реактивом Паули после УФ-обду-чения.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии близких по области применения и структуре следующих соединений: гидрела, дигидрела, хлорхолинхлорида,морфола,морфонола,алара,гибберелина и некоторых производных пиридина-нитрапирина,6-хлорпиколиновой кислоты,2-пиколиновой кислоты, 2,6-дипиколиновой кислоты, 2,6- лутидина.

Разработчики: С. А. Джагацпанян, Ю, А. Вунатян, фил. ВНИИГИНТОКС, г. Ереван

143

2.1.3- Метрологическая характеристика методики

( п-20, Р=0,95)

Анализи- , руемый объект Метрологические параметры Предел . Диапазон , обнару- .опреде-х . жения .концен-й , мкг/г(мл) мкг/г(мл) . Среднее .значение . /(определения .Стандартное .отклонение X . Доверительный . интервал . среднего, X Печень 0,2 0,2-2 84,5 +2,4 +5,2 Почки 0,2 0,2-2 81,7 +2,2 +4,7 Легкие 0,2 0,2-2 83,8 +2,4 +5,0 Мозг 0,2 0,2-2 82,1 +1,9 +4,0 Селезенка 0,2 0,2-2 85,7 +2,5 +5,3 Сердце 0,2 0,2-2 84,7 +2,1 +4,5 Кровь 0,2 0,2-2 86,4 +2,2 +4,7 Моча 0,4 0,4-2 78,6 +2,1 +4,5 Кал 0,4 0,4-2 77,7 +1,5 +3,2

144

2.2. Реактивы и материалы

Ивин, х. ч. Стандартный раствор в хлороформе , содержащий 1ООмкг/мл, действующего вещества,хранить в холодильнике не более 3-х месяцев Хлороформ, х.ч., ГОСТ 20015-74.

Натр едкий, х.ч.,Г0СТ 4328-77,15Х-ный водный раствор.

Кали едкий, х.ч.,Г0СТ 4203-65,10Х~ный водный раствор. Хлористоводородная кислота ,ч., ГОСТ 3118-77 »1М водный расвор. Натрий сернокислый безводный ,ч., ГОСТ 4166-76.

Пластинки хроматографические "Силуфол" UV-254 (ЧССР).

Бензол,х.ч.,ГОСТ 5955-69.

Уксусная кислота лед.,ГОСТ 61-75.

Иод кристаллический,ч.д.а.,ГОСТ 4139-79.

Крахмал,ГОСТ 10163-76,1Я-ныЙ водный раствор.

Сульфаниловая кислота,ч.д.а.,ГОСТ 5821-78.

Натрий азотистокислый,х.ч.,Г0СТ 4197-74.

Спирт этиловый,х.ч.,ТУ 6-1710-77.

Диэтиловый ефир, ч., ГОСТ 6265-74.

2.3. Приборы,аппаратура, посуда

Ртутно-кварцевая лампа ПРК-2 или ПРК-4,ТУ 16-535-280-74.

Прибор для отгонки растворителей,ТУ 25-11-917-76,тип ИР-1М.

Колбы мерные,ГОСТ 1770-74,на 100 мл.

Колбы конические , ГОСТ 25336-82,на 100 мл.

Колбы круглодонные,ГОСТ 25336-82,на 100 мл.

Воронки делительные, ГОСТ 25336-82,вместимостью 250 мл.

Воронки химические, TOGT 25336-82.

Микропипетки,ГОСТ 20292-74,на 0,1 мл.

Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74,емк.50;100 мл.

Камера хроматографическая, ГОСТ 25336-82.

Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 25336-82.

Фильтры бумажные "синяя лента".

Камера с парами иода (10-20г кристаллического иода помещают на дно

герме тически закрытой камеры ).

2.4-    Подготовка к определению

Приготовление проявляющего реактива Паули: к раствору 25 г сульфани-ловой кислоты в 125 мл ЮХ-ного раствора кали едкого добавляют (при охлаждении) 100 мл раствора нитрита натрия,40 мл концентрированной хлористоводородной кислоты и 20 мл воды.Полученную соль промывают последовательно ледяной водой,этанолом,диатиловым эфиром и высушивают.При хранении в темной склянке в холодильнике соль устойчива несколько месяцев.Для опрыскивания готовят 0,1 г диазониевой соли в 20 мл 15Х-ного раствора едкого натра. Раствор готовят перед употреблением.

2.5- Описание определения

2.5- 1.Экстракция и очистка

5 г. измельченного биологического материала (мозг,печень, почки легкие,кал,сердце,селезенка) или 5 мл крови,мочи помещают в плоскодонную колбу и экс^агируют хлороформом трижды по 20 мл. Обьедиыенные экстракты отфильтровывают через бумажный фильтр с безводным сернокислым натрием в колбу для выпаривания. Растворитель отгоняют на ротационном испарителе досуха при температуре не выше 60°С. К сухому остатку добавляют 10 мл 1 М раствора хлористоводородной кислоты, тщательно смывая остаток со стенок колбы.Раствор фильтруют через фильтр "синяя лента" в делительную воронку.Колбу еще дважды ополаскивают по 5 мл 1М раствором хлористоводородной кислоты и сливают в ту же воронку.

Кислотный экстракт нейтрализуют 15Х раствором едкого натра и реэк-страгируют ивин хлороформом 3x30 мл. Хлороформный экстракт высушивают безводным сернокислым натрием и отгоняют растворитель на ротационном испарителе досуха при температуре не выше 60°С.

2.5-2. Хроматографирование и проявление

После отгонки растворителя остаток с помощью хлороформа количественно наносят на пластинку "Силуфол" (ЧССР) на расстоянии 1см от нижнего края пластины.Сначала хроматографирование проводят в бензоле. При этом ивин остается на старте, а примеси, содержащиеся в пробе, продвигаются вверх.Пластинку высушивают на воздухе и проводят вторичное хроматографирование в том же направлении в смеси бензол-уксусная кислота в соотношении 1:1,5.После хроматографирования пластинку высушивают и выдерживают под ртутно-кварцевой лампой в течение 10-15 минут.

Затем пластинку или помещают в камеру с парами иода и обрабатывают раствором крахмала, или сразу обрабатывают реактивом Паули. Зоны локализации ивина обнаруживаются в виде синих пятен (пары иода-крахмал) или в виде розовых пятен (реактив Паули) с величиной Rj 0,58-0,02.

2.6. Обработка результатов анализа

Количественная оценка проводится путем сравнения площадей и интенсивности окраски проб и стандартных растворов.

Содержание ивина в пробе определяют по следующей формуле:

А х S

2

Х= - ,где:

Р х S₁

X - содержание ивина в пробе, мг/г (мл);

А - количество ивина содержащегося в пятне стандартного раствора, мкг ( в диапазоне линейности);

о

3^ — площадь пятна стандартного раствора, мм' ;

3£- площадь пятна пробы, мм^;

Р - количесво анализируемой пробы, г (мл);

147

3.Требования техники безопасности

Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях, а также правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии _рцротивовпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях,отделениях,отделах санитарно-эпидемиологических учреждений системы М3 СССР (# 2455-81 от 20»10.81).

148