Министерство сельского хозяйства Российской Федерации
Государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕСборник № 24
МОСКВА
ЦЕНТР НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКОЙ ИНФОРМАЦИИ, ПРОПАГАНДЫ И РЕКЛАМЫ 1996 г.
"Утверждено” Министерством здравоохранения СССР
"29" июля 1991 г. N 6076-91
Временные методические указания по определению остаточных количеств трибенурон-метила в воде, почве» зерне и зеленой массе зерновых культур хроматографическими методами.
1. Краткая характеристика препарата.
Трибенурон-метил - метиловый эфир 2-[4-метокси-6-метил-1,3,5-триазин-2-ил(метил) карбамоилсульфамоил] =бензойной кислоты метиловый эфир.
Торговое название: Гранстар, фирма Дюпон» США.
C15H17N5O6S
М.м. 395,4
Хорошо растворим в ацетонитриле, хлороформе, метаноле, воде (pH 6).
2. Методика определения гранстара в воде, почве, зерне и зеленой массе зерновых культур хроматографическими методами.
2.1. Принцип метода.
Метод основан на извлечении гранстара водой при pH 6,0; очистке экстрактов путем реэкстракции органическим растворителем и дальнейшем определении методом ГЖХ или ТСХ.
2.1.2. Метрологическая характеристика метода.
Предел определения - 0,005-0,02 мг/л (мг/кг)
Разработчики: Кошарновская Т.А., Морару Л.Е., Гиренко Д.Б.
(УкрНИИГИНТОКС, г. Киев).
55
|
Объект |
Среднее значение
определения, % |
Стандартное отклонение, % |
Относительное стандартное отклонение, % |
Доверительный интервал среднего, % при п-5. Р-0.95 |
|
ГЖХ |
|
Вода |
89,0 |
4,4 |
4,9 |
±5,45 |
|
Почва |
83,5 |
4,1 |
4.9 |
±5,07 |
|
Зеленая масса |
79,7 |
3,0 |
3,8 |
±3J2 |
|
Зерно |
87,1 |
1,2 |
__w |
±1,49 |
|
ТСХ |
|
Вода |
88,2 |
. 5,2 |
4.2 |
±6,4 |
|
Почва |
80,0 |
3,75 |
_4J_ _ |
±4,6 |
|
Зеленая масса |
79,0 |
5,90 |
ы_ |
±7.3 |
|
Зерно |
86,4 |
_§2_ |
о |
±6,4 |
2.2. Реактивы, растворы, материалы.
Трибенурон-метил, ан.стандарт, фирма Дюпон.
Хлороформ, х.ч., ГОСТ 20015-74.
Толуол, чда, ГОСТ 5789-78.
Этиловый спирт, 96%, ТУ 6-09-17-10-77.
Основной стандартный раствор трибенурон-метила, содержащий 100 мкг/мл готовят растворением препарата в силиканизированной мерной колбе на 100 мл в хлороформе. Раствор хранят в холодильнике не более месяца.
Рабочие стандартные растворы 1-10 мкг/мл готовят из основного раствора разведением в хлороформе. Хранят в силиканизированной посуде в холодильнике не более 5 дней.
К методу ГЖХ.
Ацетон, осч 9-5 ТУ 6-09-3513-86.
Бензол, х.ч., ГОСТ 5955-81.
Лимонная кислота, ГОСТ 3652-74, 2%-ный водный раствор.
Нитрат серебра, ГОСТ 1277-81.
Бромфеноловый синий, ТУ 6-09-1058-76.
Пластинки "Силуфол" (Хемапол, ЧССР).
Подвижная фаза бензол-ацетон 6:1.
Проявляющий реактив: Раствор А: 100 мг бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона. Раствор Б: 1 г нитрита серебра растворяют в 40 мл воды и прибавляют 120 мл ацетона.
Растворы А и Б сливают в мерную колбу на 200 мл и доводят до метки ацетоном.
К методу ТСХ.
Трифторуксусный ангидрид, ТУ 6-09-4135-75.
Пиридин, ч., ГОСТ 13647-78.
Раствор для силиконизирования стеклянной посуды.
Диметилдихлорсилан-30 мл, ТУ 6-09-14-700-78, ч., растворяют в 1 л толу-
56
ола.
2.3. Приборы и посуда.
Посуда мерная по ГОСТ 1770-74.
Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74.
Водяная баня, ТУ 64-1-2850-76.
Воронки химические, ГОСТ 8613-75.
Воронки делительные, ГОСТ 1770-74.
Колбы грушевидные, ГОСТ 10394-72.
Колбы конические 50, 100 мл, ГОСТ 10394-72.
Сушильный шкаф, ТУ 64-1-1411-76.
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.
К методу ГЖХ.
Хроматограф с детектором постоянной скорости рекомбинации (тип Цвет, 3 Газохром или др.).
Микрошприцы на 10 мкл, МШ-10, ТУ 283.3-106.
Колонки стеклянные хроматографические, длина 1 м, d=3 мм.
К методу ТСХ.
Камера хроматографическая, ГОСТ 23932-79.
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-79.
2.4. Подготовка к определению.
2.4.1. Подготовка стеклянной посуды.
Всю стеклянную посуду перед началом анализа силиканизируют. Для этого посуду погружают в раствор для силиканизирования на 5 мин. Затем ополаскивают толуолом, несколько раз тщательно промывают этиловым спиртом, дистиллированной водой, снова этанолом и высушивают в сушильном шкафу при температуре+105° С. По окончании анализа посуду моют раствором детергента, ополаскивая дистиллированной водой. Операцию силиканизирования повторяют через каждые 2 недели непрерывной работы.
2.4.2. Отбор проб.
Отбор проб проводится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).
Отобранные пробы зерна подсушивают до стационарной влажности и хранят в сухом, хорошо вентилируемом помещении. Перед анализом пробы размалывают на лабораторной мельнице до размера частиц менее 1 мм.
Пробы зеленой массы замораживают и хранят в холодильнике при температуре ниже -5° С.
2.4.3. Подготовка пластинок к хроматографированию.
Пластинки "Силуфол" перед нанесением пробы промыть в камере ацетоном, давая растворителю подняться до верхнего края пластинки.Отметить край пластинки.Дать растворителю испариться с пластинки и подогреть ее 20 минут при 60° С, При хроматографировании линия старта должна быть со стороны
57
нижнего края пластинки.
2.5. Описание определения.
2.5.1. Экстракция.
Навеску измельченных зеленой массы и зерна - Юг, или соломы - 5 г, или почвы - 25 г помещают в коническую колбу и заливают 120 мл дистиллированной воды с pH 6,0. Колбу встряхивают в течение 30 мин, затем экстракт фильтруют через фильтр легкофильтрующий. Экстракцию повторяют еще 2 раза, используя каждый раз по 100 мл воды и встряхивая по 10 минут.
После фильтрования экстракты объединяют, переносят в делительную воронку, подкисляют до pH 5,0 (0,1 н НС1) и реэкстрагируют трибенурон-метил трижды по 50 мл хлороформа. Объединяют хлороформный экстракт, концентрируют до обьема 0,2-0,3 мл при температуре не выше 35° С.
Вода. 1 л воды помещают в делительную воронку, подкисляют до pH 5,0 и экстрагируют препарат трижды по 50 мл хлороформа. Объединяют хлороформ и концентрируют до объема 0,2-0,3 мл при температуре не выше 35° С.
2.5.2. Определение методом ГЖХ.
Удаляют остаток растворителя на воздухе. К сухому остатку пробы приливают 50 мкл трифторуксусного ангидрида и 10 мкл пиридина. Выдерживают приготовленный раствор в течение 30 мин, после чего добавляют I мл бензола и 5 мл дистиллированной воды, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз 5 мкл бензольного слоя вводят в хроматограф.
Условия хроматографирования.
Хроматограф с ДПР (Цвет, Газохром или др.)
Колонка стеклянная, длина 1 м с1=3мм.
Носитель - хроматон N-AW (0,16-0,20 мм).
Неподвижная фаза - 5% ХЕ-60.
Температура: испарителя - 220° С, детектора - 220° С, колонки - 160° С.
Скорость газа-носителя - 55 мл/мин (через колонку);
-150 мл/мин (на продувку).
Вводимый объем - 5 мкл.
Время удерживания фторпроизводного трибенурон-метила - 2 мин 15 с.
Минимально детектируемое количество - 1нг.
Расчет концентрации трибенурон-метила в пробе мг/кг (мг/л) по формуле:
v Hnp.VcT.CcT.V Х= Hcr.Vi.M _’ГДе
Сет- количество трибенурон-метила в стандартном растворе, мкг/мл;
Нет - высота пика стандарта, мм;
Нпр - высота пика анализируемой пробы, мм;
Уст - объем стандартного раствора, введенного в хроматограф, мкл;
VI - объем анализируемого раствора, введенного в хроматограф, мкл;
V - объем экстракта анализируемой пробы, мл;
М - навеска пробы, г.
2.5.3. Определение методом хроматографии в тонком слое.
На пластинку "Силуфол" с помощью капилляра или микропипетки количественно наносят сконцентрированную пробу так, чтобы диаметр пятна не превышал 1 см. Центр пятна должен быть на расстоянии 2 см от нижнего края пластинки. Справа и слева от пробы наносят стандартные растворы, содержащие 1, 2, 5, 10 мкг трибенурон-метила.
Пластинки с нанесенными растворами помещают в хроматографическую камеру, в которую за 30 мин до хроматографирования залита смесь бензол-ацетон 6:1. После поднятия фронта подвижного растворителя на 10 см, пластинку вынимают и оставляют на несколько минут на воздухе для испарения подвижного растворителя. После этого пластинку обрабатывают из пульверизатора раствором бромфенолового синего, а затем обесцвечивают 2% раствором лимонной кислоты.
Препарат проявляется в виде пятен синего цвета на желтом фоне.
Величина Rf 0,45±0,05.
Количество препарата в пробе определяют сравнением интенсивности окраски и площади пятен и стандартного раствора.
Если содержание препарата в пробе превышает границы диапазона (10 мкг), то для нанесения на пластинку необходимо брать аликвотную часть пробы (0,1-0,2 мл) параллельной пробы.
Концентрацию трибенурон-метила вычисляют по формуле:
X - содержание трибенурон-метила в анализируемой пробе, мг/кг;
А - количество трибенурон-метила, найденное в хроматографируемой пробе, мкг;
Р - навеска анализируемой пробы, г.
3. Требования безопасности.
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсическими веществами.
