Всесоюзный научно-исследовательский институт гигиены и токсикологии пестицидов, полимеров и пластических масс

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПЕСТИЦИДОВ В ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ И В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ

СБОРНИК МЕТОДИЧЕСКИХ УКАЗАНИЙ И РЕКОМЕНДАЦИЙ

1 9 9 0 г.

^ к количество вещества ХОЕ 064706 (в "иде нг ХОК 036956) введешг ю в колонку

«= количество определяемого раствора (мкл), введенного в колонку

F я коэффициент эффективности метода Т₂+Т^ = частичные объемы в случае разведений 2,6 = объемы в случае разведений

Остаточное количество ХОЕ 06I5I7 в пересчете на ХОЕ 035956

7/' т_л • /j ¹77, •

* остаточное количество в мг/кг

я площадь (высота,) пика ..сследуемого образца (ом² юти см)

= площадь (высоту пика, стандарта (см² или см)

= общий объем водного образца от раствора в г (- мл)

= частичный объем раствора,взятого от центрифуга (vw)

= навеска исследуемою образца (г)

« конечный объем для шределения путем газовой хроматографии (мл)

= количество вещества ХОЕ 070951 (в виде нг ХОЕ 0313966) введенного в колонку

= количество определяемого раствора (шит), введенного в колонку

f = коэффициент эффективности метода

~ частичные объемы в случае разведений - объемы в случае разведений.

Ход анализа при определении баста и его метаболита в семенах рапса

Извлечение и очистка экстракта В колбу Эрленмайера емкостью 500 мл добавляют к 25 мл г гомогенизированного образца шшапеза (it'') 200 мл воды (0^ » 200 мл + 25 г навески = 225 мл). После покрытия с часовым стеклом образец извлекают в течение 30 мин при размешивании при комнатной температуре. После осаждения тведцых компонентов декантируют 40 мл ( Т*. ) водного раствора, к этой аликвотной части добавляют 40 мл ацетона, Для отделения выделяемых компонентов кратную часть центрифугируют в течение 5 мин при 3000 об/мин ( ^ » 80 мл)

40 мл ворхнего слоя (Tg) переводят в делительную воронку емк.

100 мл и встряхивают с 20 мл дихлорметаиа. Органическая фаза (нижняя фаза) отделяется и реэкстрагируется два раза с 10 мд годы. Водную фазу из первого извлечения и после очистки дихлор-метаном объединяют и испаряют в круглодонной колбе при 60°С на ротационном выпарном аппарате досуха. После этого добавляют несколько миллилитров этилацетата для удаления остаточной воды и опять испаряют досуха.

Деривитиэация

Сухой остаток суспендируют с 2 мл концентрированной уксусной

It/?и ftTji-л »■, *л*оГ

кислоты о помощью ультразвуковой бани (присхл. 15 мин ГК К этой суспензии добавляют 8 мл триметилортоацетата и обрабатывают его опять в ультразвуковой бане. Потом нагревают суспензию с обратным холодильником в течение 4 чаоов\/Т(осле охравдения реактивного раствора добавляют 15 мл толуола и испаряют на ротационном испарителе при 40°С до остаточного объема в 0,5 мл. Этот процесс повторяется еще два раза по 15 мл (до удаления запаха уксусной кислоты). Остаюищйся в колбе раствор (0,5-1,0 мл) доводят толуолом до

3 мл и засасывают его в шприц одноразного пользования на 10 мл. Затем колбу промывают пропусканиемЖ мл метилацетата. Этот раствор также засасывают в шприц и тщательно смешивают его взбалтыванием.

Очистка на мини-колонке с силикагелем

Б пастеровскую пипетку, закрытую с одного конца стеклянной ватой, отвешивают 0,6 г силикагеля, подвергающегося соответственной предварительной обработкой. Колонку кондиционируют пропусканием 5 мл смеси метииацетатяи толуола (1:1; об/об).

Через фильт/р типа    _|    который    насаживают на шприц

одноразового пользования, раствор переносят па мини-колонку с силикагелем. Кбл‘0^НРЙШ№"40 мл метилаиетата. Этот раствор, засосанный в шприц, также переносят на мини-колонку с силикагелем.

Затем колонку подключают к несильному вакууму, отсасывают досуха. Дериваты действующего вещества и метаболита элюируют метилацетатом/ метаном (1:1; об/об) и собирают перше 5 млу, Элюат .. ; испаряют при 40°С на ротационном шпарном аппарате до остаточного объема,

9 прибл. 0,5 мл, добавляют два раза по 5 мл толуола и испаряют, кавднй раз после добавления толуола до прибл. 0,5 мл.

Выше названная очистка на мини-колонке с силикагелем повторяется еще раз с 0,4 г предварительно обработанного силикагеля. При второй очистке применяется душ промывания 7 мл метилацетата. После того, как коло, ку пс ;ключают к несильному вакууму и отсасывают ее досуха, дериваты действующего вещества и метаболита элюируют метилацетатом/метаном (1:1; об/об) и собирают первые 5 мл. Зпюат

( т/ = 5 мл) подвергается конечному газохроматограшинескому опре-б

делению,

Элюептнос свойство ь^вдой пориии силикагеля следует проверить соответственно обработанным контрольным образцом, к которому добаь-

- /<?-■

'*'яют после дериватизации ХОЕ 064У06 и ХОЕ 070951. Злюентнсе свойство можно оптимизировать при необходимости путем изменения --^гтент1шх объемов или элюентпой интенсивности растворителей.

Измере ле методом газовой хроматографии и расчет остаточных количеств проводят так, как описано на отр. €-/0-

Эффективность метода при добавлен и 0,05-0,2 мг/кг ХОЕ ОО.Д-ч'о или продукта разложения ХОЕ 06I5I7 к необработанным контрш'мшм образцам сосответс"* повала 90-НОл, в среднем 95$ в пересчете на ХОЕ 025956. Предел практического определения составлял 0,05 мг/кг ХОЕ 039866 или ХОЕ 06I5I7 в пересчете на ХОЕ 035956.

Методические указания разработаны -деци^яисташ фирм Г'ХСТ (д-р Х.Идштейн, др. Х.Оохор, С.Клагшер, Х.Юнкер), апробированы и чмдифицированг с учетам отечественного оборудования специалистами Ш1ШИНТОКС (к.х.н. Письменная Ы.В.).

Производное баста, по которому ведется газо-хроматографисекое

определение - метил-4-(метокся) Лметил)-^юсфинил-2-ацетамид-0утират

(по номенклатуре ИШАК)

9GH3

СН₃- Р    -СН₂ - СН₂ - СН - COOCHg    CgHjgJSEOj- Р

О    ЫН    М.м. 251,25

о*с- сн₃

Фирменное название ХОЕ 064706

5. Производное метаболита баста, по которому производится его хроматографическое определение, метил-3-(метокои)(метил)фосфш-нопропионат (по номенклатуре ИШАК)

осн₃

СН₃Р - СН₂ - СН₂ - С00СН₃    ^С6^Н13°4^Р

⁰    М.м. 180,16

Фирменное название - X0S 070951

Методика определения баста в яблоках_#бананах, семенах рапса

Принцип метода определения в яблоках и бананах*

Баста и продукт его разложения (ХОК 061517) хяхюохххх. извлекают из пробы водой* Аликвотную часть экстракта нагревают и проводят получение производных с триметилортоацетатом. После очистки на мини колонке с силикагелем производные определяют методом газо-жидкостной хроматографии с 1ВД или ТВД.

Реактивы и растворы Этанол, ректификат Этилапетат, чда.

Метанол, хч*

Метилоштат хч.

500 мкл, I мл и доводят объем 1#-нш водным раствором аммиака до 50 мл. Конечные концентрации стандартных растворов составляю г 5, 10, 20 мкг/мл ХОЕ 035956 соответственно,

-    ХОЕ Q6I5I7. 84 мг ХОЕ 06I5I7, что соответствует Х00 мг ХОЕ 035956 растворяют в 100 мл 1#-нш?о водного раствора аммиака, отбирают 250, 500 мкл, I мл, доводят объем жидкости до 50 мл. Конечные концентрации стандартных растворов составляют 5,10,20 мкг/мл

ХОБ 035956 в пересчете на ХОЕ 06I5I7,

Срок хранения растворов - 6 мес,

-    ХОЕ 064706 . 139 мг-ХОЕ 064706, что соответствует 100 мг ХОЕ 035956 растворяют в 5 мл 50#-ного этанола и доводят объем раствора до 100 мл метилацетатом (раствор "а"). Отбирают 10 мл раствора "а¹¹ и доводят объем жидкости метилацетатом до 100 мл (раствор ”б").

Отбирают ip мл раствора "б" и доводят объем жидкости до 100 мд метилацетатом (раствор "в”).

Из раствора "в”,содержащего    I нг/мкл ХОЕ 035956 в пересчете

на ХОЕ 064706 готовят свежие растворы для газохроматографического определения путем разбавления смесью метилаиетата и метанола 1:1 (об/об), содержащие соответственно 50-200 лг/мяиХОЕ 035956 в пересчете на ХОЕ 064706 Приборы

Газовый хроматограф с детектором пламенной фотометрии, может с

Ш

Ультразвуковая баня (Брансоник,52), или обычная водяная баня Ротацисщшй вакуум-шпарной аппарат (£ши,1</ 24 N) или типа ИР-Ш, ТУ 25-11-917*74

Нагреватель для круглодс зшх колб, 60 мл (Герхарт, 3)

Фильтр типа ^^«хЛ^миллипорэ,    ^c^r    W)

Шприцы одноразового пользования (насадка Люэра), 10 мл, о каншей с уплрщенной иглой, длина канши прибл* 10 ом

Инъекционный микро-шприц, 10 мкл (

Магнитная мешалка с ядром, длина 6 см, диаметр 0,8 см

Колба Эрленглайера, 500 мл, широкогорлая

Круглодонные колбы, 50 мл, /V S' 29

Пастеровские пипетки

Измерительные колбы, 5 мл

Интенсивный охладитель, 30 см, /vs*29

Часовое стекло 0 15 см

Подготовка пробы.

Пробу перед анализом тщательно галогенязируют Ход анализа

при определении баста и его метаболита в яблоках и бананах

Извлечение и очистка экстракта

Гомогенизируют 25 г образца ( \Х/ ), прибавляют 200 мл воды (1^=200 мл воды + 25 г навески = 225 мл), накрывают тсовым стеклом и оставляют на 30 мин при постоянном перемешивании* Центрифугируют 60 мл смеси в тчение 10 мин при 3000 об/мин* Отбирают 20 мл верхнего слоя (Т,) и испаряют его в круглодонной колбе емк. 50 мл досуха* Прибавляют для удаления остаточный воды 3-5 мл этилацетата и иоларяют еще раз досуха*

Получение производного (дериватизация

Сухой остаток    15    мин    суспендируют    без нагревания

с 2 мп концентрированной уксусной кислоты с помощью ультразвуковой бани (моюно H№ifibeaъть    К суспензии

дают 8 М/di триметилортоацетата и обарбатывают его опять на

бане* Затем нагревают суспензию^ обратным холодильником в течете

Нь    *■*/!*    сене.

4-х ЧасбЭД периодически "Встряхивая колбу вместе о холодильником.

К реакционному раствору три раза добавляют но 15 мл толуола и каждый раз испаряют его при 50°С до объема ^ 0.5-1 мл (до удаления запаха уксусной кислоты). Доводят объем раствора толуолом до 3 мл и засасывают его в шприц разового пользования. После этого добавляют в колбу 15 мл этилацетата, упаривают до 3-5 мл, засасывают его в тот же шприц и тщательно перемешивают растворитель. Далее проводится очистка на миниколонке с силикагелем*

Очистка на мияриколонке о силикагелем.

В пастеровскую пипетку, закрытую с одного конца сте! янной ватой, отвешивают 0,6 г силикагеля (4?! влажности)* Колонку кондиционируют пропусканием 5 мл смеси метилацетата и толуола (1:1;об/об) Через фильтр    который    насаживают    на    шприц    одноразо

вого пользования, раствор переносят на мини-колонку с силикагелем* Колбу,в которой происходила дериватизация, промывают 10 мл метил-

го г __

ацетата. Этот раствор также переносят чёрёзУфйльтр„тиет Затем колонку подключают к несильному вакууму» отсасывают досуха. Дериваты действующего вещества и метаболиты элюируют метилацетатом/ метанолом (1:1; об/об) и собирают первые 5 мл для определения действующего вещества и метаболита в градуированную измерительную колбу^Л Эйюат (^2=5 мл), содержащий действующее вещество, анализируют метода»; газоь й хроматографии

Измерение методом газовой хроматографии

Измерение методом газовой хроматографии можно провести или

отдельно для действующего вещества и. метаболита на насад,очной

колонке или для обоих компонентов совместно на "мэгаборе"

I/ Злюентное свойство i 'ждой порции силикагеля следует пр соответственным обрайа бавляют после провеши

Измерение методом газовой хроматографии на насадочной колонке ХОЕ 064706

Часть (т_д ) раствора (/г,), полученного после дериватизации и очистки вводят в газовый хроматограф.

Типичные условии для газовой хроматографии

,    Г о г Р    ,    ~    i    г*»*?*****?, _Ги<^

Ириоор: Фирмы Саглл г7«л2150 (Цвет-106) ус л о fa*    с

Колонка: типа: насадочная

стат.фаза: Ультрабонд СoiSc^a^c 20М или^З# ОИ-17^ длина: I м

внутренний диаметр: 2 мм (3 мм) материал: стекло Газ-носитель:    30 мл/мик азот (23 мл/мин)

Горючая смесь: 70 мл/мин водород (14-17 мл/мин)

100 мл/мин воздух (400 мл/мин) стандартный ииъектор для насадочных котонок детектор пламенной фотометрии Ф-фильтр 52 нм илы (ТИд) ииъектор: 225°С    (225°С)

детектор: 225°С колонка: 200°С

Инъекционный объем:    2 мкл

Время удерживании: прибл# 1_#5 мин (3,25 мин)

\ОЬ O^ssrt 1    .

Часть ТТ^) раствора (И^) • полученного после дсривячпзации и

очистки вводят d газовый хроматограф

Прибор:    Фирмы Саi&j Г?^2150 (Цвет- /об )

Колонка:    типа: насадочная

стат.фаза: Ультрафочд С?. О М [(:■/-i.7\3% j длина: 1,6 м (I м) материал: стекло

-V¹/-

Детектор:    детектор    пламенной    фотометрии

ф-фильтр j2 нм

Колонка (программ _{п    п}

г шератур/ IbO С, 2 мин, 39 С/мин, 220 С, 3 мин

Илъоюдаоншй оо'ьем: 2 мкл

Время удерживании: ХОЕ 070931: прибл. I мин ХОЕ 064706: прибл. 4 мин

Оценка результатов

Способ оценки

Оцеик_ь провода¹ путем сравнения площадей или высот пиков обра-) ботанных растворов образцов с площадями или высотами пиков от отаадартиого раствора известной концентрации^. Объемы исследуемых растворов в стандартных растворов должны быть по возможности одинаковы: п 1том площади или высоты пиков, полученных от растворов, должны быть соизмеримы.

Расчеты остаточных количеств

Остаточное количество ХОЕ 039866 в пересчете га ХОР] 035956

, i V ' г4 -Ж- ifи - Л*.* -Рс Ш (МГ/КГ)=     ⁵    ,    /-

* 1~_л • /j ' Ту > ti

М * остаточное количество в мг/кг

площадь (высотаjrniKa - исследуег го образца (см^ или см)

/.'₄ г    t    (ibtcCTfi-} lUr<*C(K    (czt*    t/ла    tu,*}

v_i ~ общий объег водного раствора из обрила в г (= мл)

Т,_{ ~ частичный объем раствора,взятого из центр.*фугша(мл)

<ti/’ - навеска исследуемого образца (г)

- коночный объем душ определена путем газовой хроматографии 2 (мл)

^ Если вещества с матркцой и без таковой показывают различную чувствительность показания в детекторе, то оценка производится но сравнению с обработанными контрольными растворами, к который .добавлен ериват газовой хроматографии в конечный раствор.

-46Г-