ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬБЫ С ВРЕДИТЕЛЯМИ, БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИЙ И СОРНЯКАМИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ

Часть 17-я

Данные методики апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками

Москва

- 12 -

Применяется в виде порошка,содержащего 2% актеллика; 25 JC-него концентрата эмульсии - "Актеллик 25ECQ'3~2520);    50#-но-

го концентрата эмульсии - "Актеллик 50 ЕС" ( ^J' 2764)*

Актеллик эффективен против вредителей хлебных злаков; рекомендован для борьбы с эктопаразитами птиц* Он отличается быстрым проявлением инсектицидной активности при сравнительно невысокой норме его расхода*

Актеллик мало токсинен*При внесении внутрь крысам ЗЩ^

2050 мг/кг*При нанесении на кожу ДЦ^ - 2000 мг/кг,0н не кумулируется в жировых тканях* МДУ актеллика в мясе и яйцах кур не установлен*

Допустимая суточная доза актеллика для человека установлена на уровне 0,01 мг/кг массы тела в сутки,что составляет примерно 0* 5-0,7 мг/человека/сутки (данные ФА0/В03)*

2* Методика определения актеллика*

2*1* Основные положения*

2*1*1* Принцип метода*

Метод основан на извлечения актеллика из исследуемой пробы смесью ацетона и водв(1:1),очистке экстракта и определении методой хроматографии в тонком слое с энзимным проявлением либо методом газо-жидкостной хроматографии*

2*1*2* Метрологическая характеристика метода» (приведена в таблице)*

2*2* Реактивы и растворы*

Ацеточ*ч» д, а. ,ГССТ 2603-79 н-Гексан,ч*,ТУ 6-09-3375-78

Натрий сернокислый безводный,ч*д*а*,Г0СТ 4166-76 Бром,ч*,Г0СТ 4109-74

Силикагель марки ИСК, ГОСТ 3956-77    ,дробленный и просе

янный через сито ТОО меииили пластинки "СилуФол"

Кальций сернокислый (СaS0^2Н£0),ч*д*а*,Г0СТ 3210-77, просушенный в шкафу при температуре 160°С в течение 6 часов,

Индоясила1Гтст,ч-д*а*,ТУ 6*-09-07-115*«78 или фирмы "Хемяпол" (Чехословакия),

Буферный раствор (рН~3,69)> К 2,1 мл ортофосфорной ни слоты прибавляют 2,? уксуспои и 2,47 г борной кислот,доводят дне-

Таблица

Метрологическая характеристика метода.

Метод Наименование Диапазон Нижний Среднее Стандарт Доверитель анализа объекта определяемых предел значение ное откл. ный интер концентраций,обнаруж. определ. вал средне- мкг мг/кг % го, % Энзимно-хро Мясо кур 0,005-0,1 0,02 78 4,0 78 ± 6,1 матографиче ский Яйца кур _п_ —,,_ 65 3,1 65 ± 5,2 Газо-жидкост Мясо кур 0,0001- 0,001 80 2,6 Г'З СО +1 о 00 ная хроматография Яйца кур - 0.002 68 3,2 68 1 5,4

-14

тиллированной водой до I л*Для получения буфера с рН=8.69 к 100 мл указанной смеси прибавляют 65 мл 0,2 н.раствора едкого натра.

Уксусная кислота,х.ч,,Г0СТ 18290-72

Ортофосфорная кислота,х.ч.,ГОСТ 6552-80

Борная кислота,х*ч.,ГОСТ 9656-75

Натрий серноватистокислый,ч^д.а*,    0,1    М    водный

раствор.

Калий же лезосинеродистый,х*ч.,ГОСТ 4206-75, 1,6^-ный водный раствор.

Калий желеэистосинеродистый,х»ч»,ГОСТ 4207-75, 2£~ный водный раствор.

Этиловый спирт,96^,ТУ 6-09-17-10*77

Ферментный препарат получают из печени крупного рогатого окота.Свежую, однократно замороженную и сохраняемую в дальнейшем: в холодильнике печень можно использовать в течение 6 месяцев.

Для приготовления ферментного раствора I г печени гомогенизируют с 9 мл буферного раствора и фильтруют через вату.К I мл полученной сыворотки прибавляют 4 мл буферного раствора,Этот раствор используют для опрыскивания пластинок. Раствор готовят непосредственно перед обработкой.

Основной стандартный раствор ^ИА^И актедлика,концентрация 100 мкг/мл.

Рабочие стандартные растворы ^ИБ" - 5,0 мкг/мл и *8” - 1,0 мкг^/ мл. готовят разбавлением основного стандартного раствора в епитоне.

Проявляющий раствор. 10 мг индоксила штата растворяют в 6 мл этанола,прибавляют 6 мл буферного раствора рН=8.6°, 2 мл железо-синеродистого и 2 мл железистосинеродистого катая и хорошо nape-мешивеют.Раствор готовят непосредственно перед обработкой тинок,

2,3* Приборы и посуда.

Баня водяная, ТУ б4.Д-2350-'⁷б Воронки филь?’ровальчне,ГГСТ *'бЕ?-75 Воронки г.втигельные емкостью иv,500 ч л, ГОСТ 8^13—75 Ис^пприге рь рсчп^глю^(п,чй с набором кс^б.тип КР~Г*,ТУ 25-11 917. 7^

- 15 -

Камера для хроматографирования,ГОСТ 10585-75

Камера для опрыскивания,ТУ 25-11-430-70

Колбы мерные емкость» 25,50,100,1000 мл, ГОСТ 1770-74

Колба Бунзена, ГОСТ 6514-75

Пластинки стеклянные, 9x12 см

Пробирки мерные на шлифах емкостью 5-10 мл,ГОСТ 1770-74 Пипетки на I мл, 5 мл, 10 мл, ГОСТ 1770-74 Пульверизатор стеклянный,ГОСТ 10391-74 Никрошприц емкЛО мкл,МШ~10,ТУ 5Е~2,833*024 или микронные'] ка на 0,1 мл,ГОСТ 1770-74 Ступка керамическая, d =10 см Шкаф сушильный, ТУ 64-I-I4II-76

Хроматограф " Ивет-164^м с пламенно-фотометрическим детек-тором(иж "Цвет-Юб¹' с термоионным детектором)*

2*4*1* Подготовка к определению,

2,4*1* Приготовление пластинок.

Для приготовления пластинок берут 35 г* силикагеля"КСК",

2 г* сернокислого кальция и 90 мл дистиллированной воды.Силикагель с гипсом растирают в фарфоровой ступке,прибавляют воду и размешивают до образования однородной массы*Юг.суспензии наносят на пластинку и равномерно распределяют по по-верхности.Сушат пластинки в горизонтальном положении в течение 18-20 часов при комнатной температуре,хранят в эксикатор-

2*4*2* Подготовка проб*

Отбор проб производится в соответствии с “Унифицированны ми правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции,про дуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов¹', утв*№2051-79 от 21*09*1979.

2*5* Проведение определения*

2*5.1* Экстракция и очистка экстракта*

Навеску анализируемого объекта (20 г,мяса кур или 5 г, желтка яйца) тщательно измельчаютСжелток перемешивают) п гг. ыещают в коническую колбу,приливают 20 мл смеси ацетона я во ды(1:1) и экстрагируют п течение Т часа при перемени вании про бы,Экстракцию повторяют дважды по 30 мнн*в тех же условия?.

- Тб -

Фильтруют пробы через бумажный фильтрСсиняя лента) на воронке Бюхнера либо через стеклянный фильтр ШоттаМ.Экстракт помещают в холодильник на 2 часамильтруют экстракт,фильтр промывают смесью ацетона и воды(1:1),Объединяют фильтраты,прибавляют дис-диллированную воду (100 мл).Проводят переэкстракцию пестицида в н-гексак*Для этого к ацетоно-водному экстракту добавляют 30-40 мл н-гексана и встряхивают 2-3 минЛосле разделения слоев гексановый отделяют,а к ацетоно-водному прибавляют такое же количество н-гексана,как указано выше.Зстряхивают снова 2-3 мин* и слои разделяют. Лере экстракцию в н-гексан повторяют ещё раз#. Гексановые экстракты объединяют,сушат безводным сернокислым натрием и упаривают до небольшого объема (1-2 мл) на ротационном испарителе.Из данного объема аликвотную часть (10-30 мкл) наносят на пластинку или 3-5 мкл вводят в газовый хроматограф*

2*5*2*. Определение энзим^но-хроматографическим методом*

Па пластинку,покрытую тонким слоем силикагеля или на плао-тинку ^иСилуфол” на расстоянии 1,5 см от нижнего и бокового края наносят 5-10 мкл стандартного раствора актеллика с концентрацией 5,0 мкг/мл,что соответствует 0,02-0,05 мкг действующего начала. На расстоянии I,5-2,0 см от точки нанесения стандартного раствора наносят анализируемую пробу.Производят хроматографирование в системе растворителей н-гексон>ацетон=9:1. Сушат пластинку на воздухе и активируют ларами брома.Для этого пластинку на I мин. помещают в эксикатор,насыщении;! пара’-'п, брома.После удаления избытка брома с пластинки С — 60 мин.) производят ингибирование. Для этого пластинку опрыскивают свежеприготовленным ферментным раствором и инкубируют в течение 40-60 мин* в насыщенном водными парами термостате при температуре 38°С.Для увлажнения в термостате ставят чашку Петри с водой.После инкубации пластинку опрыскивают проявляющим раствором (индоксилацэтат) и снова помещают пластинку в термостат,нагретый до 36°С на 2-3 мин.Лктел-лик проявляется в виде белых пятен на голубом фоне с величиной 1Ц=0,52.

Количественное определение производят путем сравнения площади пятна с наиболее близкой к ней по величине площадью стан-

- 17 -

Дарта,

Содержание препарата в пробе (мг/кг) рассчитывают по форму-^ле:    А'5₂*У-Ю00

P'Sj У j

А - количество препарата в стандарте,мкг,

Sj- площадь пятна стандартами^

S 2~ площадь пятна пробы,мм^

- объем экстракта,нанесенного на пластинку,мкл У - общий объем экстракта,мл Р - масса пробы,взятой для анализам*

2,5*3*. Определение методом газо-жидкостной хроматографии*

Из подготовленного экстракта пробы отбирают аликвотную часть (3-5 мкл) и вводят в испаритель хроматографа*

Условия хроматографирования гхроматограф с пламенно-фотометрическим детектором;

стеклянная колонка длиной 100 см и диаметром 3 мм,заполненная 5?SE-30 на хроматоне V-AW ~Д<1С£ (0,16-0,20 мм).Температура испарителя - 220^, температура колонки - 190<Ъ; скорость газа-носителя(азота) - 4Q хд/мкн,, скорость водорода - 66 мд/мин., скорость воздуха - 120 мд/кин*,

время удерживания актеллика в указанных условиях - 4 мин.

35 сек.,

входное сопоотивление - Ю^ом,

о

шкала множителя - 4 • 10“ в,

шкала по току -    4    * 10“^ а,

скорость движения ленты самописца - 240 ми/ч*

Условия хроматографирования при использовании хроматографа с термоионным детектором приведены з сборнике "Методические указания по определению микроколичеств пестицидов в продуктах питания, корм ах и внешней среде**, ч*XI, 1981 г*, с*296-303.

- 18 -

Содержание препарата в пробе (ыг/кг) рассчитывают по фор« муле:    ‘

У_г- Б

А - количество препарата в стандарте,мкг/мл

Hj- высота пика стандарта,ьш

Hg- высота пика препарата в проба,мм

Yj“ объем стандартного раствора,введенного в хроматограф, мкл

У2^ объем анализируемого раствора,введенного в хроматограф, мкл

Ъу- объем экстракта пробы для анализа,мл

Р - навеска пробы,г,

2*6. Обработка результатов анализа приведена в разделах 2*5,2* и 2*5*3,

3. Требования техники безопасности*

Соблюдать требования техники безопасности,обычно рекомендуемые для работы с органическими растворителями,бромом*

Настоящие методические указания подготовлены:

Н*И,Киселевой и С,И*Гнед (ВИИИГИНТОКС, г*Киев)*

5* Дополнение,

Настоящие методические указания рекомендуются в дополнение к "Зязимно-хроматографическому методу определения фосфорорга-нических пестицидов в растительных продуктах и биосубстратах¹', разработанному М,В*Писъь1ештй (8НИЩЖГ0НС,г*Киев),утв*.19 октября 1979 г* за £2086-79 и к "Методическим указаниям, по определению актеллика в растительном материале,в почве а в водз хроматографией в тонком слое и на газовом хроматографе",разработанным Т*М*ПеЯровой,Ю*БДедреевым (ВШИ заняты растений, г#Лениаград), Красных А «А ,(Все российский НИИ защиты растений, пос*Рамшзв,Воронежской обл*),утв*19 октября 1979_{г> за} С85-79,

6* Методкческиа указания апробированы в институтах .* Всесоюзный институт защиты растений, г. Лзяянграт (Напоре 1,V,^>; Всесоюзный институт рксчеримгкгальнс* ветеринарии, г Vockfp (Полякове Я,И.).