ВМУ 3193-85
Временные методические указания по определению гаметана в зерне методом газожидкостной хроматографии

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРОПРОМЫШЛЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

Государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ИМЕНИ К. А. ТИМИРЯЗЕВА

ЦЕНТРАЛЬНЫЙ институт агрохимического ОБСЛУЖИВАНИЯ СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ РЕГУЛЯТОРОВ РОСТА В РАСТИТЕЛЬНОЙ ПРОДУКЦИИ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

(Часть 1)

МОСКВА АГРОПРОМИЗДАТ 1986

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРОПРОМЫШЛЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР Государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ИМЕНИ К: А. ТИМИРЯЗЕВА

ЦЕНТРАЛЬНЫЙ ИНСТИТУТ АГРОХИМИЧЕСКОГО ОБСЛУЖИВАНИЯ СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ РЕГУЛЯТОРОВ РОСТА В РАСТИТЕЛЬНОЙ ПРОДУКЦИИ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

(Часть 1)

МОСКВА АГРОПРОМИЗДАТ 1986

Приложение 1

Отбор проб растительного материала на корню (из «Унифицированных правил отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроксхличеств пестицидов*, утвержденных заместителем Главного государственного санитарного врача А. И. Зайченко 21X56.1979 г. № 2051—79).

Кормовые культуры (на корню)

Кукуруза СС (не менее 18 Початки с 18 рас Зерно отделить, измель 0.25-0,50 растений) тений чить и отвесить средний образец Кормовые бобы пд 1000 бобов То же 0.5 -1.0

осить несъедобные части растений, остатки материала вымыть, обсушить. крупные овощи разделить на 4 части и взять '/«. Пробу измель-

вертинок срезать и отбросить поверхность предыдущего среза, отбросить несъедобные листья, измельчить и выделить средний образец

Отбросить несъедобные части, растения вымыть, очистить, измельчить и выделить средний образец

Отбросить непригодные части, измельчить, перемешать и отвесить средний образец

Измельчить целые растения, перемешать и отвесить средний образец Отбросить несъедобные части, растения измельчить, перемешать и отвесить средний образец. Для лука и лука-порея с каждой штуки взять половину

-J 00

Макси миль-яи величина Величина средней Подготовка среднего образца Величина пола млн пар- Растительный материал Способ отбор» проб • пробы влв среднего образца, кг таи при отбо- исходного образца ре проб 5 га Лук-резамец, лук-ба- ПД (целые растс- Лук. лук-порей — 0.5—1 кг, лук-ре- То же 0,25 тун, лук-порей в ран- ния) ней стадии развития залец, лук-батун — 0,25 кг 5 га Фасоль, горох, бобы То же 0,5—1 кг бобов Семена выделить, нзмель- 0,5 чигь и выделить средний образец 50 га Фасоль «зеленый боб» » 0.5 кг Целые бобы измельчить, перемешать и выделить средний образец 0,5 0.5 20 га/ЗОт Помидоры, перец ПД (целые раете- Мелкие овощи Овощи вымыть, нзмель- ния) 0,5—2 кг, крупные — 2 кг чить и выделить средний образец 0,5 20 га/500 т Огурец н бахчевые То же 10 овощей, масса Овощи вымыть, нзмель- пробы крупных чить и выделить средний бахчевых — образец, из крупных бах- 0,5—3 кг чевых взять вырезки 0,25—0,5 5 га Спаржа » 0,5 кг Растения вымыть, измельчить и выделить средний образец После удаления листо- 5 га Ревень ПД (выборочно 2 кг (без листовых 0.5 листья) пластинок) вых пластинок растения вымыть, высушить и выделить средний образец Грибы _ Шампиньоны и дру* К (руководство- Не менее 0,5 кг Грибы измельчить, пере- 0.5 гне грибы ватъея правилами мешать к отвесить сред- сбора грибов) ний образец Плодово-ягодные, орехоплодные, виноград 200 га/500 т Семечковые До 30 деревьев — До 30 деревьев — Плоды почетвертовать. выборочно, свыше 30 ПД в завися- 5 кг, до 1 га — от каждого плода взять 7 кг. 1—10 га — ■/«, четвертинки нзмель- мости от площади. 10 кг, 10—30 га — чить, перемешать и от- с 20—30 деревьев 12 кг, свыше 30 га весить средний образец (плоды следует снимать с разных сторон дерева, с - 15 кг разной высоты и глубины кроны) До Косточковые персик. До 30 деревьев — До 30 деревьев — Плоды поделить попо- 0.5 200 га/200 т абрикос, слива выборочно, свыше 4 кг; до 1 га — лам, от каждого взять 30 деревьев — 6 кг, свыше — 1 га половину без косточки. ПД с 15-20 де- 8 кг измельчить, перемешать ревьев и выделить- средний об- То же раэец До Косточковые вишня До 30 деревьев — Косточки удалить, пло- 0.5 200 га/100 т черешня, слива 1,5 кг; до 1 га — ды измельчить, переме- 2 кг. свыше 1 га — шать и отвесить средний 2.5 кг образец Орехи (грецкие, ле- » До 30 растений — Из орехов вынуть ядра, 0,25—0,5 шина) 1 кг, свыше 30 — измельчить их. переме- 1,5 кг шать и отвесить средний ч (О образец

g    Продолжение ¹

Максимальная величина поля или партии при отборе проб	Растительный материал	Способ отбора проб •	Величина средней пробы или исходного образца	Подготовка среднего образца	Величина среднего образца, кг
Юга	Смородина, крыжовник	До 30 кустов пробу взять с каждого куста с разной его стороны н глубины, свыше 30 кустов — метод СС с 25—35 кустов	До 30 кустов не менее 1 кг (с крупными плодами — не менее 1.5 кг), свыше 30 кустов — не менее 1.5 кг	Из тщательно перемешанного исходного образца взять половину, измельчить ее, перемешать и отвесить средний образец	од
До 200 га	Виноград	СС, боковые части кистей	1,5 кг	Взять отдельные от основания боковые части кистей, тщательно перемешать исходный образец и взять половину, измельчить ее, перемешать и отвесить средний образец	0.5
До 1 га	Земляника, малина	ПД	До 500 м* — 1,5 кг, 500 м* — 0,25 га-2.5 кг, свыше 0,25 га — 2,5 кг	Тщательно перемешать исходный образец, взять половину, измельчить ес, перемешать и отвесить средний образец	0.5

Приложение 2

Максимально допустимые уровни (МДУ) регуляторов роста в пищевых продуктах, предельно допустимые концентрации (ПДК) в воде водоемов и в воздухе рабочей зоны, утвержденные Министерством здравоохранения СССР

Регулятор роста	МДУ, мг/кг	ПДК В воде водоемов, мг/л	ПДК в воздухе рабочей зоны и ОБУВ, мг/м*
Г идрел	Томаты, огурцы, картофель, яблоки, черешня, мандарины, хлопковое масло — 0,15	0,25	1,0
Днгидрел	—	0,05	0,8
ДЯК	Яблоки — 3,0	0,05	1,7
Кампо-зан М	Томаты, огурцы, зерно хлебных злаков — 0,5	3,0	—
Кротоно- лактон-сы-	Зерно (пшеница, кукуруза) — 0,2
рец МГ-натрия	Картофель, свекла, лук, чеснок, морковь, томаты, арбузы (в кожуре), табак — 8,0	—	—
Хлорхолин- хлорид	Томаты, яблоки, груши, виноград — 0,05, зерно хлебных злаков — 0,1	0,2	0,03
Фоспинол	Картофель — 0,2	—	3,0

УДК 632.95.028(0.83.131)

Методические указания по определению микроколичеств регуляторов роста в растительной продукции и объектах окружающей среды (под ред. кандидата сельскохозяйственных наук И. К. Бли-новского и доктора биологических наук В. Ф. Ладонина) включают разработки ВНИИ гигиены и токсикологии пестицидов, полимерных и пластических масс и его филиала (г. Ереван), Московской сельскохозяйственной академии имени К. А. Тимирязева, ВНИИ химических средств защиты растений. Института физиологии растений АН СССР, Института физиологии растений АН УССР, Научно-исследовательского зонального института садоводства Нечерноземной полосы, Московского государственного университета имени М. В. Ломоносова, Новосибирского института органической химии СО АН СССР, Узбекского НИИ санитарии, гигиены и профзаболеваний.

Методические указания одобрены лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Министерства здравоохранения СССР и утверждены заместителем Главного государственного санитарного врача СССР в качестве официальных.

Методические указания предназначены для специалистов контрольно-токсикологических лабораторий, санитарно-эпидемиологических станций, осуществляющих контроль за применением регуляторов роста растений, и научно-исследовательских лабораторий, занимающихся определением микроколичеств регуляторов роста при разработке технологий их применения.

Члены редколлегии: Ю. А. Бунятян, М. А. Клисенко, М. И. Лунев, С. В. Лопатко.

Методические указания по определению микроколичеств регуляторов роста в растительной продукции и объектах окружающей среды (часть 1)

Зав. редакцией А. Я- Рогачева Редактор Р. А. Антипина Технический редактор Е. Э. Пчурова Корректор Н. Я. Туманова

Сдано в набор 24.05.85. Подписано к печати. 06.02.86. Т03074.

Формат 84х 108'/|з. Бумага тип. № 3. Гарнитура литературная. Печать высокая. Уел. печ. л. 4,2. Уч.-изд. л. 4,63. Уел. кр.-отт. 4,41.

Тираж 6000 экз. Заказ Л*« 3322. Бесплатно.

Ордена Трудового Красного Знамени ВО «Агропромиэдат* 107807, ГСП, Москва, Б-53. ул. Садовая-Спасская, 18.

170000, г. Калинин, Студенческий пер., 28.

Обл. типография.

© Государственный агропромышленный комитет СССР, 1986

Успехи, достигнутые в последние годы в области разработки теоретических основ и практического использования регуляторов роста и развития растений, определили их как самостоятельное и перспективное направление химизации земледелия.

В настоящее время применение синтетических регуляторов роста (химического, микробного или растительного происхождения) в целях повышения урожайности, устойчивости к неблагоприятным факторам внешней среды, качества и сохранности продукции становится важным звеном в технологиях возделывания многих сель^ скохозяйственных культур.

Разработанная в нашей стране целевая комплексная научно-техническая программа создания и широкого внедрения регуляторов роста растений, обеспечивающих повышение урожайности и качества сельскохозяйственных культур, нацеливает усилия химиков и биологов на поиск и создание препаратов, действующих на такие важнейшие процессы жизнедеятельности растений, как рост стебля (повышение устойчивости к полеганию, устранение перерастания рассады, ограничение крон многолетних растений и кустарников, увеличение биомассы и др.); плодоношение (ускорение у многолетних культур, повышение завязываемости и др.); устойчивость к стрессовым воздействиям (засухе, низким температурам, переувлажнению); рост корней (стимуляция при размножении черенками, рассадой, пересадке растений и др.); созревание (ускорение или замедление); накопление и распределение ассимилятов (повышение интенсивности фотосинтеза, усиление оттока ассимилятов к зерновкам, плодам); опадение плодов и листьев (облегчение механизированной уборки и дефолиация); покой (повышение лежкости при хранении или стимуляции прорастания); сексуализация (регулирование пола растений в сторону увеличения женских или мужских цветков); рост и дифференциация тканей (при размножении оздоровленного посадочного материала и в селекции).

При всем многообразии действия регуляторы роста и развития растений могут быть определены как вещества, которые влияют на жизненные процессы растений, не оказывая токсического действия, и не являются источником питания (в отличие от пестицидов и удобрений).

Большинство регуляторов роста в зависимости от культуры, времени и норм применения имеет многоцелевое назначение. Так, этиленпродуценты могут использоваться для торможения роста стебля (рожь, ячмень), стимулирования плодоношения (яблоня), ускорения созревания (вишня, томат), повышения лежкости (картофель, свекла), сдвига пола (огурец, плодовые культуры, хлопчатник), образования отделительного слоя (облегчение механизированной уборки и дефолиация).

Широкий спектр действия регуляторов роста предполагает постоянное расширение сферы их применения в растениеводстве. При этом увеличивается потенциальная опасность загрязнения имц сельскохозяйственной продукции и объектов окружающей среды. Постановлением Совета Министров СССР о дополнительных мерах но усилению контроля за применением в народном хозяйстве пестицидов и регуляторов роста растений в целях недопущения вредного воздействия их на здоровье населения предложено ужесточить требования к применению в народном хозяйстве пестицидов и регуляторов роста растений, усилить контроль за соблюдением установленных правил хранения, транспортировки и применения их, разработать и осуществить дополнительные мероприятия по предотвращению загрязнения окружающей природной среды пестицидами, регуляторами роста растений и основными токсичными продуктами их разложения исходя из необходимости охраны здоровья населения.

В настоящие указания включены методы определения микроколичеств регуляторов роста растений, уже разрешенных для применения в сельском хозяйстве (или проходящих государственные испытания).

Учитывая важность отбора представительной пробы анализируемой растительной продукции, в указания включено извлечение из «Унифицированных правил отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденных Министерством здравоохранения СССР 21.08. 1979 г. (приложение 1).

Публикация подобных материалов будет осуществляться периодически, по мере внедрения в сельскохозяйственное производство новых регуляторов роста, разработки методов контроля за их применением и появления более совершенных и унифицированных методов определения микроколичеств препаратов в сельскохозяйственной продукции, кормах и объектах внешней среды.

Утверждаю:

заместитель Главного государственного санитарного врача СССР

А. И. ЗАЙЧЕНКО

3.01. 1935 № 3193—85

Временные методические указания по определению гаметана в зерне методом газожидкостной хроматографии ²

1. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕПАРАТА

Гаметан — отечественный препарат, обладающий гаметацидными свойствами.

Эмпирическая формула СбНмОаРБгК-

Молекулярная масса — 252.

Температура плавления 199—20РС. Твердое вещество, хорошо растворимо в воде. Гидролизуется в кислой среде с выделением сероводорода. В нейтральной среде слабо гидролизуется. При pH>7 стабилен.

МДУ гаметана в зерне в настоящее время не установлен.

2. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ

2Л. Основные положения

2.1.1.    Принцип метода. Метод основан на определении гаметана реакционной газожидкостной хроматографией в виде пентафторбензилового производного после извлечения препарата из зерна (пшеница, рожь) смесью ацетон—этанол (9:1). ГЖХ определение проводят с ТИД (колонка стеклянная 1000x3,5 мм, фаза 5% SE-30 на хроматоне N-AW-HMDS; время удерживания пентафторбензилпроизводного гаметана — 3,8 мин).

2.1.2.    Метрологическая характеристика метода. Диапазон линейной зависимости величины хроматографического сигнала от количества введенного в хроматограф препарата гаметана — 0,1—1,5 нг. Нижний предел обнаружения гаметана — 0,1 нг, в зерне —

0,02 мг/кг. Среднее значение определения (С) — 50,5%; стандартное отклонение (s) — 2,2%, доверительный интервал среднего при Р095 и п = 5 с учетом коэффициента пересчета на полноту экстракции (К-2)—98,0±1,8.

2.1.3. Избирательность метода. Другие фосфорорганические пестициды определению не мешают. При необходимости их можно идентифицировать до получения пентафторбензил производного гаметана. Относительное время удерживания пентафторбензилового производного гаметана по отношению к метафосу — 0,79.

2.2.    Реактивы и материалы

Гаметан х. ч.

Ацетон х. ч., ГОСТ 2603-79.

Этиловый спирт 96%-ный, ТУ 6-09-1710—77.

Фильтры бумажные, красная лента.

Натрия сульфат безводный ч. д. а., ГОСТ 4166-76.

Пентафторбензиловый спирт, ТУ ТРС 2139—69.

Фосфор трехбромистый ч., ТУ 6-09-870—78.

Бром х. ч., ГОСТ 4109-79.

Четыреххлористый углерод х. ч., ГОСТ 20288-74.

Хроматон N-AW-HMDS (0,16—0,20 мм) с 5% SE-30 (ЧССР).

Азот — газ особой чистоты, содержание Ог не более 0,003%, ГОСТ 9293-74.

Водород из баллона или получаемый из генератора водорода.

Воздух из баллона или нагнетаемый компрессором.

Основной стандартный раствор (№ 1) гаметана — 500 мкг/мл [готовят, растворяя 50 мг химически чистого препарата в 100 мл ацетона; хранят в холодильнике 2 месяца].

Рабочий стандартный раствор гаметана в ацетоне — 5 мкг/мл [готовят из раствора № 1; хранят в холодильнике не более семи дней].

2.3.    Приборы и посуда

Хроматограф марки «Цвет» с термоионным детектором.

Колонка хроматографическая стеклянная (1000Х Х3,5 мм), заполненная хроматоном N-AW-HMDS (0,16—0,30 мм) с 5% SE-30.

Прибор для отгонки растворителей (ротационный вакуумный испаритель), тип ИР-1М, ТУ 25-11-917—76.

49

Аппарат для встряхивания колб, АВУ-60, ТУ 64-1-2451—78.

Колбы мерные на 25, 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Колбы конические с притертыми пробками на 50, 250 мл, ГОСТ 10394-72.

Колбы грушевидные на 50 мл, ОКШ 50-14/23 ТС, ГОСТ 10394-72.

Холодильник стеклянный лабораторный, ХПТ, ГОСТ 9499-70.

Трехгорлая колба на шлифах (250 мл).

Воронки химические, ГОСТ 8613-72.

Воронки делительные на 100 и 20 мл, ГОСТ 8613—

75.

Пипетки на 1, 5, 10 мл, ГОСТ 1770-74.

Микрошприцы на 10 мкл, МШ-10, ТУ 5Е-2, 833.024.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1.    Отбор проб зерна производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08. 1979 г. № 2051—79.

2.4.2.    Получение пентафторбензилбро-м и д а. Собирают прибор — трехгорлую колбу на 250 мл, оборудованную мешалкой, обратным холодильником и капельной воронкой. Колбу охлаждают смесью лед—соль до 0—5°С, вносят в нее 60 мл четыреххлористого углерода, высушенного над безводным сульфатом натрия и 2 мл трехбромистого фосфора. По каплям при перемешивании прибавляют 1,05 мл брома. Образуется светло-желтый осадок пятибромистого фосфора. Затем также при охлаждении прибавляют из капельной воронки 3,9 г пентафторбензилового спирта, растворенного в 10 мл четыреххлористого углерода (прибавляют в течение часа). Охлажденную баню снимают и постепенно нагревают смесь на водяной бане до температуры кипения. Кипячение продолжают в течение 6 ч.

После охлаждения реакционную массу осторожно порциями выливают в стакан со 100 г тонкоизмельчен-ного льда (стакан со льдом также находится в ледяной бане). Когда лед растает, отделяют с помощью делительной воронки водный слой, а слой с четыреххлористым углеродом промывают водой несколько раз до

50

нейтральной реакции. Затем этот органический слой сушат над безводным сульфатом натрия в течение 16 ч, переносят в пробирку для отгонки растворителей и отгоняют четыреххлористый углерод при температуре бани 75—76°С. В колбе остается пентафторбензилбромид.

2.5. Проведение определения

2.5.1.    Экстракция. 25 г измельченного до ~2— 3 мм зерна (пшеница, рожь) помещают в коническую колбу со шлифом, заливают 50 мл смеси ацетон—этанол (9:1) и экстрагируют в течение 3 ч на аппарате для встряхивания. Фильтруют растворитель через бумажный фильтр (красная лента) с насыпанным на него слоем (4—5 г) безводного сульфата натрия. Зерно промывают дважды по 15 мл смесью ацетон—этанол (9:1) и присоединяют смывы к экстракту. Упаривают растворитель досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани 50—60°С.

2.5.2.    Получение пентафторбензилового производного гаметана. К сухому остатку в колбе прибавляют 10 мл ацетона, 0,2 мл 1%-ного раствора в ацетоне пентафторбензилбромида и 30 мкл 30%-ного водного (промытого бензолом) раствора углекислого кальция, хорошо встряхивают и нагревают с обратным холодильником при температуре бани 65—70°С в течение 20 мин. Профильтровывают через бумажный фильтр, точно доводят объем до 10 мл ацетоном и анализируют методом ГЖХ. Для повышения чувствительности можно упарить растворитель до 2 мл. Параллельно аналогичную реакцию проводят с рабочим стандартом.

2.5.3.    Газохроматографическое определение. Условия хроматографического определения: хроматограф «Цвет» с термоионным детектором и солевым наконечником Cs, Вг; колонка стеклянная спиральная (длина 1 м, диаметр 3 мм), заполненная хромато-ном N-AW-HMDS (0,16—0,20 мм) с 5% SE-30; рабочая шкала электрометра 2-20~¹⁰А; скорость протяжения ленты 240 мм/ч; температура испарителя 210, колонки 190°С; расход газа-носителя — 24, водорода — 14—17, воздуха — 400 мл/мин.

Вводят в хроматограф последовательно по 3—5 мкл стандартных растворов пентафторбензилового производного гаметана (полученного, как описано в п. 2.5.2),

51

содержащих 0,2—1 мкг/мл препарата, а затем такой же объем пробы. Нижний предел обнаружения —0,1 нг. Время удерживания пентафторбензилового производного гаметана — 3,8 мин.

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки по высоте или площади хроматографических пиков.

2.6. Обработка результатов анализа Расчет результатов анализа проводят по формуле

^    2-Сот-Уст-Н-У*

Нст-У-Р

где С — содержание препарата в пробе, мг/кг; Сет — количество препарата в стандарте, мкг/мл; У_ст — объем стандарта, введенного в хроматограф, мкл; Н_ст — высота (площадь) пика стандарта, мм (мм²); Н — высота (площадь) пика пробы, мм (мм²); У[ — объем экстракта пробы, введенный в хроматограф, мкл; У₂ — конечный объем экстракта пробы, мл; Р — масса анализируемой пробы, г; 2 — поправочный коэффициент на полноту экстракции.

3. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсическими веществами.

1

В приложении приняты следующие услояиые обозначения способа отбора проб: ПД __ по диагонали; СС — по смежным сторонам поля; К — метод конверта; ОШ — отбор штук.

2

Временные методические указания разработали М. В. Письменная, М. А. Клисенко (ВНИИГИНТОКС).