ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРОПРОМЫШЛЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

Государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ИМЕНИ К. А. ТИМИРЯЗЕВА

ЦЕНТРАЛЬНЫЙ институт агрохимического ОБСЛУЖИВАНИЯ СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ РЕГУЛЯТОРОВ РОСТА В РАСТИТЕЛЬНОЙ ПРОДУКЦИИ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

(Часть 1)

МОСКВА АГРОПРОМИЗДАТ 1986

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРОПРОМЫШЛЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР Государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ИМЕНИ К: А. ТИМИРЯЗЕВА

ЦЕНТРАЛЬНЫЙ ИНСТИТУТ АГРОХИМИЧЕСКОГО ОБСЛУЖИВАНИЯ СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ РЕГУЛЯТОРОВ РОСТА В РАСТИТЕЛЬНОЙ ПРОДУКЦИИ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

(Часть 1)

МОСКВА АГРОПРОМИЗДАТ 1986

миллиметровой бумаги. Прямолинейная зависимость между площадью пятна и содержанием дикурина в пятне соблюдается в интервале 1—10 мкг. При более высоком содержании препарата в пробе воды хроматографируют аликвотную часть концентрата.

Содержание дикурина в анализируемой пробе (С, в мг/л) вычисляют по формуле

р А * S2

^ P-S| ’

где А — количество дикурина в пятне стандарта, близком по окраске к пятну пробы, мкг; $j — площадь пятна препарата стандарта, по окраске близкого к пятну пробы, мм²; S2 — площадь пятна препарата пробы, мм²; Р — объем анализируемой пробы, мл.

3. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсическими веществами.

Приложение 1

Отбор проб растительного материала на корню (из «Унифицированных правил отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроксхличеств пестицидов*, утвержденных заместителем Главного государственного санитарного врача А. И. Зайченко 21X56.1979 г. № 2051—79).

Кормовые культуры (на корню)

Кукуруза СС (не менее 18 Початки с 18 рас Зерно отделить, измель 0.25-0,50 растений) тений чить и отвесить средний образец Кормовые бобы пд 1000 бобов То же 0.5 -1.0

осить несъедобные части растений, остатки материала вымыть, обсушить. крупные овощи разделить на 4 части и взять '/«. Пробу измель-

вертинок срезать и отбросить поверхность предыдущего среза, отбросить несъедобные листья, измельчить и выделить средний образец

Отбросить несъедобные части, растения вымыть, очистить, измельчить и выделить средний образец

Отбросить непригодные части, измельчить, перемешать и отвесить средний образец

Измельчить целые растения, перемешать и отвесить средний образец Отбросить несъедобные части, растения измельчить, перемешать и отвесить средний образец. Для лука и лука-порея с каждой штуки взять половину

-J 00

Макси миль-яи величина Величина средней Подготовка среднего образца Величина пола млн пар- Растительный материал Способ отбор» проб • пробы влв среднего образца, кг таи при отбо- исходного образца ре проб 5 га Лук-резамец, лук-ба- ПД (целые растс- Лук. лук-порей — 0.5—1 кг, лук-ре- То же 0,25 тун, лук-порей в ран- ния) ней стадии развития залец, лук-батун — 0,25 кг 5 га Фасоль, горох, бобы То же 0,5—1 кг бобов Семена выделить, нзмель- 0,5 чигь и выделить средний образец 50 га Фасоль «зеленый боб» » 0.5 кг Целые бобы измельчить, перемешать и выделить средний образец 0,5 0.5 20 га/ЗОт Помидоры, перец ПД (целые раете- Мелкие овощи Овощи вымыть, нзмель- ния) 0,5—2 кг, крупные — 2 кг чить и выделить средний образец 0,5 20 га/500 т Огурец н бахчевые То же 10 овощей, масса Овощи вымыть, нзмель- пробы крупных чить и выделить средний бахчевых — образец, из крупных бах- 0,5—3 кг чевых взять вырезки 0,25—0,5 5 га Спаржа » 0,5 кг Растения вымыть, измельчить и выделить средний образец После удаления листо- 5 га Ревень ПД (выборочно 2 кг (без листовых 0.5 листья) пластинок) вых пластинок растения вымыть, высушить и выделить средний образец Грибы _ Шампиньоны и дру* К (руководство- Не менее 0,5 кг Грибы измельчить, пере- 0.5 гне грибы ватъея правилами мешать к отвесить сред- сбора грибов) ний образец Плодово-ягодные, орехоплодные, виноград 200 га/500 т Семечковые До 30 деревьев — До 30 деревьев — Плоды почетвертовать. выборочно, свыше 30 ПД в завися- 5 кг, до 1 га — от каждого плода взять 7 кг. 1—10 га — ■/«, четвертинки нзмель- мости от площади. 10 кг, 10—30 га — чить, перемешать и от- с 20—30 деревьев 12 кг, свыше 30 га весить средний образец (плоды следует снимать с разных сторон дерева, с - 15 кг разной высоты и глубины кроны) До Косточковые персик. До 30 деревьев — До 30 деревьев — Плоды поделить попо- 0.5 200 га/200 т абрикос, слива выборочно, свыше 4 кг; до 1 га — лам, от каждого взять 30 деревьев — 6 кг, свыше — 1 га половину без косточки. ПД с 15-20 де- 8 кг измельчить, перемешать ревьев и выделить- средний об- То же раэец До Косточковые вишня До 30 деревьев — Косточки удалить, пло- 0.5 200 га/100 т черешня, слива 1,5 кг; до 1 га — ды измельчить, переме- 2 кг. свыше 1 га — шать и отвесить средний 2.5 кг образец Орехи (грецкие, ле- » До 30 растений — Из орехов вынуть ядра, 0,25—0,5 шина) 1 кг, свыше 30 — измельчить их. переме- 1,5 кг шать и отвесить средний ч (О образец

g    Продолжение ¹

Максимальная величина поля или партии при отборе проб	Растительный материал	Способ отбора проб •	Величина средней пробы или исходного образца	Подготовка среднего образца	Величина среднего образца, кг
Юга	Смородина, крыжовник	До 30 кустов пробу взять с каждого куста с разной его стороны н глубины, свыше 30 кустов — метод СС с 25—35 кустов	До 30 кустов не менее 1 кг (с крупными плодами — не менее 1.5 кг), свыше 30 кустов — не менее 1.5 кг	Из тщательно перемешанного исходного образца взять половину, измельчить ее, перемешать и отвесить средний образец	од
До 200 га	Виноград	СС, боковые части кистей	1,5 кг	Взять отдельные от основания боковые части кистей, тщательно перемешать исходный образец и взять половину, измельчить ее, перемешать и отвесить средний образец	0.5
До 1 га	Земляника, малина	ПД	До 500 м* — 1,5 кг, 500 м* — 0,25 га-2.5 кг, свыше 0,25 га — 2,5 кг	Тщательно перемешать исходный образец, взять половину, измельчить ес, перемешать и отвесить средний образец	0.5

УДК 632.95.028(0.83.131)

Методические указания по определению микроколичеств регуляторов роста в растительной продукции и объектах окружающей среды (под ред. кандидата сельскохозяйственных наук И. К. Бли-новского и доктора биологических наук В. Ф. Ладонина) включают разработки ВНИИ гигиены и токсикологии пестицидов, полимерных и пластических масс и его филиала (г. Ереван), Московской сельскохозяйственной академии имени К. А. Тимирязева, ВНИИ химических средств защиты растений. Института физиологии растений АН СССР, Института физиологии растений АН УССР, Научно-исследовательского зонального института садоводства Нечерноземной полосы, Московского государственного университета имени М. В. Ломоносова, Новосибирского института органической химии СО АН СССР, Узбекского НИИ санитарии, гигиены и профзаболеваний.

Методические указания одобрены лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Министерства здравоохранения СССР и утверждены заместителем Главного государственного санитарного врача СССР в качестве официальных.

Методические указания предназначены для специалистов контрольно-токсикологических лабораторий, санитарно-эпидемиологических станций, осуществляющих контроль за применением регуляторов роста растений, и научно-исследовательских лабораторий, занимающихся определением микроколичеств регуляторов роста при разработке технологий их применения.

Члены редколлегии: Ю. А. Бунятян, М. А. Клисенко, М. И. Лунев, С. В. Лопатко.

Методические указания по определению микроколичеств регуляторов роста в растительной продукции и объектах окружающей среды (часть 1)

Зав. редакцией А. Я- Рогачева Редактор Р. А. Антипина Технический редактор Е. Э. Пчурова Корректор Н. Я. Туманова

Сдано в набор 24.05.85. Подписано к печати. 06.02.86. Т03074.

Формат 84х 108'/|з. Бумага тип. № 3. Гарнитура литературная. Печать высокая. Уел. печ. л. 4,2. Уч.-изд. л. 4,63. Уел. кр.-отт. 4,41.

Тираж 6000 экз. Заказ Л¹« 3322. Бесплатно.

Ордена Трудового Красного Знамени ВО «Агропромиэдат¹ 107807, ГСП, Москва, Б-53. ул. Садовая-Спасская, 18.

170000, г. Калинин, Студенческий пер., 28.

Обл. типография.

© Государственный агропромышленный комитет СССР, 1986

Успехи, достигнутые в последние годы в области разработки теоретических основ и практического использования регуляторов роста и развития растений, определили их как самостоятельное и перспективное направление химизации земледелия.

В настоящее время применение синтетических регуляторов роста (химического, микробного или растительного происхождения) в целях повышения урожайности, устойчивости к неблагоприятным факторам внешней среды, качества и сохранности продукции становится важным звеном в технологиях возделывания многих сель^ скохозяйственных культур.

Разработанная в нашей стране целевая комплексная научно-техническая программа создания и широкого внедрения регуляторов роста растений, обеспечивающих повышение урожайности и качества сельскохозяйственных культур, нацеливает усилия химиков и биологов на поиск и создание препаратов, действующих на такие важнейшие процессы жизнедеятельности растений, как рост стебля (повышение устойчивости к полеганию, устранение перерастания рассады, ограничение крон многолетних растений и кустарников, увеличение биомассы и др.); плодоношение (ускорение у многолетних культур, повышение завязываемости и др.); устойчивость к стрессовым воздействиям (засухе, низким температурам, переувлажнению); рост корней (стимуляция при размножении черенками, рассадой, пересадке растений и др.); созревание (ускорение или замедление); накопление и распределение ассимилятов (повышение интенсивности фотосинтеза, усиление оттока ассимилятов к зерновкам, плодам); опадение плодов и листьев (облегчение механизированной уборки и дефолиация); покой (повышение лежкости при хранении или стимуляции прорастания); сексуализация (регулирование пола растений в сторону увеличения женских или мужских цветков); рост и дифференциация тканей (при размножении оздоровленного посадочного материала и в селекции).

При всем многообразии действия регуляторы роста и развития растений могут быть определены как вещества, которые влияют на жизненные процессы растений, не оказывая токсического действия, и не являются источником питания (в отличие от пестицидов и удобрений).

Большинство регуляторов роста в зависимости от культуры, времени и норм применения имеет многоцелевое назначение. Так, этиленпродуценты могут использоваться для торможения роста стебля (рожь, ячмень), стимулирования плодоношения (яблоня), ускорения созревания (вишня, томат), повышения лежкости (картофель, свекла), сдвига пола (огурец, плодовые культуры, хлопчатник), образования отделительного слоя (облегчение механизированной уборки и дефолиация).

Широкий спектр действия регуляторов роста предполагает постоянное расширение сферы их применения в растениеводстве. При этом увеличивается потенциальная опасность загрязнения имц сельскохозяйственной продукции и объектов окружающей среды. Постановлением Совета Министров СССР о дополнительных мерах но усилению контроля за применением в народном хозяйстве пестицидов и регуляторов роста растений в целях недопущения вредного воздействия их на здоровье населения предложено ужесточить требования к применению в народном хозяйстве пестицидов и регуляторов роста растений, усилить контроль за соблюдением установленных правил хранения, транспортировки и применения их, разработать и осуществить дополнительные мероприятия по предотвращению загрязнения окружающей природной среды пестицидами, регуляторами роста растений и основными токсичными продуктами их разложения исходя из необходимости охраны здоровья населения.

В настоящие указания включены методы определения микроколичеств регуляторов роста растений, уже разрешенных для применения в сельском хозяйстве (или проходящих государственные испытания).

Учитывая важность отбора представительной пробы анализируемой растительной продукции, в указания включено извлечение из «Унифицированных правил отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденных Министерством здравоохранения СССР 21.08. 1979 г. (приложение 1).

Публикация подобных материалов будет осуществляться периодически, по мере внедрения в сельскохозяйственное производство новых регуляторов роста, разработки методов контроля за их применением и появления более совершенных и унифицированных методов определения микроколичеств препаратов в сельскохозяйственной продукции, кормах и объектах внешней среды.

Утверждаю:

заместитель Главного государственного санитарного врача СССР

А. И. ЗАЙЧЕНКО

24.08. 1983 № 2836—83

Временные методические указания по определению дикурина в воде методом тонкослойной хроматографии ²

1. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕПАРАТА

4-метил-7-окси-8-метилен-бис-(р-хлорэтил)-аминоку-марин — действующее вещество препарата дикурин (КН-77). Растворим в хлороформе, ацетоне. Выпускается в виде 80—99%-ного порошка светло-желтого цвета.

Структурная формула

СН_Ч

^H0ks/4₀J = °

H₂C-N(C₂H₄C1)₂

Эмпирическая формула Ci3Hi₈0₃Cl₂N.

Молекулярная масса — 309.

ПДК в воде не установлена. Дикурин проходит испытания на хлопчатнике и рассаде огурцов.

2. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода. Метод основан на извлечении дикурина из воды хлороформом, отгонке растворителя и хроматографировании в тонком слое сорбента;

в качестве последнего используют закрепленный гипсом силикагель КСК или пластинки Силуфол.

Проявление хроматограммы можно осуществить диазотированной сульфаниловой кислотой (на сорбенте силикагеле КСК — красные пятна) или смесью 1%-ного водного раствора железосинеродистого калия и 1%-но-го спиртового раствора хлорного железа в соотношении 1 : 1 (пластинки Силуфол — синяя лента).

Количественное определение дикурина производится путем сравнения интенсивности окраски и размера пятен пробы и стандартных растворов.

2.1.2.    Метрологическая характеристика метода. Диапазон определяемых концентраций — 1 — 20 мкг. Предел обнаружения 0,005 мг/л. Размах варьирования — 75—100%. Среднее значение определения — 90%. Стандартное отклонение ±9,2%. Относительное стандартное отклонение — 10%.

2.1.3.    Избирательность метода. Определению не мешают наполнители технического препарата.

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон х. ч., ГОСТ 2603-79.

Хлороформ х. ч., ГОСТ 200/15—74.

Гексан х. ч„ ТУ 6-09-3375—78.

Спирт метиловый х. ч., ГОСТ 6995-77.

Этилацетат х. ч., ГОСТ 2230-76.

Спирт этиловый, 96%-ный, ТУ 6-09-1710—77.

Эфир диэтиловый (для наркоза), фармакопея СССР.

Натрий сернокислый безводный ч. д. а., ГОСТ 4166—

76.

Вата гигроскопическая.

Железо хлорное ч., ТУ 6-09-01-828—76, 1%-ный раствор в этиловом спирте.

Калий железосинеродистый х. ч., ГОСТ 4206-75, 1%-ный раствор в дистиллированной воде.

Проявляющий реактив № 1 (смешивают в соотношении 1 : 1, 1%-ный водный раствор железосинеродистого калия и 1%-ный спиртовой раствор хлорного железа; раствор устойчив в течение 5—6 ч).

Калий гидроокись х. ч., ГОСТ 6-01-301-74, 10%-ный водный раствор.

Натрий гидроокись х. ч., ГОСТ 4328-77, 15%-ный водный раствор.

Сульфаниловая кислота ч. д. а., ГОСТ 5821-78.

43

Натрий нитрит, ГОСТ 4197-74, 10%-ный водный раствор.

Соляная кислота х. ч., ГОСТ 3118-77, разбавленная дистиллированной водой в соотношении 1 : 1.

Диазотированная сульфаниловая кислота [5 г суль-фаниловой кислоты растворяют в 25 мл 10%-ного водного раствора гидроокиси калия. Раствор охлаждают в течение 30 мин в холодильнике и смешивают с 20 мл 10,%-ного водного раствора нитрита натрия. Полученный раствор постепенно, по каплям, при перемешивании прибавляют к предварительно охлажденной в холодильнике разбавленной дистиллированной водой соляной кислоте (смешивают 10 мл концентрированной соляной кислоты с 5 мл дистиллированной воды). Температура реакционной смеси должна быть не выше 8°С. Образующуюся диазониевую соль отсасывают на воронке Бюхнера, промывают последовательно 10—15 мл ледяной воды, этилового спирта, диэтилового эфира и высушивают при комнатной температуре в затемненном месте. Хранят соль в холодильнике, в банке из темного стекла].

Проявляющий реактив № 2 (растворяют 1,25 г диа-зотированной сульфаниловой кислоты в 15%-ном водном растворе гидроокиси натрия в мерной колбе на 100 мл, применяют свежеприготовленный раствор).

Дистиллированная вода, ГОСТ 7602-72.

Силикагель КСК, ГОСТ 3956-76, раздробленный и просеянный через сито 100 меш.

Кальций сернокислый, ГОСТ 3210-77, высушенный в течение 6 ч при температуре 160°С и просеянный.

Пластинки Силуфол (ЧССР).

Стандартный раствор дикурина в ацетоне с содержанием 50 мкг/мл (готовят, растворяя 5 мг химически чистого препарата в ацетоне в мерной колбе на 100 мл; раствор хранят в холодильнике; годен к употреблению в течение двух месяцев).

2.3. Посуда и приборы

Баня водяная, ТУ 64-1-2850—76.

Воронки химические, диаметр 6 см, ГОСТ 8613-75.

Воронка Бюхнера, диаметр 13 см, ГОСТ 9147-73.

Воронки делительные на 500 мл, ГОСТ 10054-75.

Вакуумный водоструйный насос, ГОСТ 10396-75.

Испаритель вакуумный ротационный, ИР-1М, ТУ 25-11-917—74.

44

Камера для опрыскивания, ТУ 11-413—70.

Камера для хроматографирования размером 150Х Х200 мм.

Колба Бунзена на 500 мл, ГОСТ 6514-75.

Колбы мерные на 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Колбы со шлифами на 250, 100 мл, ГОСТ 10394-72.

Колбы круглодонные н/ш на 100 мл, ГОСТ 10394—

72.

Микропипетки на 0,1, 0,2 мл, ГОСТ 1770-74.

Пластинки стеклянные размером 9X12 см.

Пипетки на 1, 5, 10 мл, ГОСТ 1770-74.

Цилиндры градуированные на 25, 50, 100 мл, 1 л, ГОСТ 1770-74.

Часовое стекло.

Чашка фарфоровая, ГОСТ 9147-73.

Ступка фарфоровая с пестиком.

Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-74.

Сито капроновое [размер отверстий 0,0149 нм (100 меш)].

Эксикатор (для хранения пластинок), ГОСТ 6371—-

73.

2.4.    Подготовка к определению

2.4.1.    Приготовление пластинок. 14 г просеянного силикагеля смешивают в ступке с 1 г сернокислого кальция и суспензируют смесь в ступке в 40 мл дистиллированной воды. Периодически помешивая, полученную суспензию равномерно наносят на 7—8 тщательно вымытых стеклянных пластинок размером 9Х Х12 см. Сушат пластинки при комнатной температуре в течение 17—18 ч, хранят в эксикаторе над слоем гранулированного силикагеля КСК (100 г).

2.4.2.    Отбор проб производят в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08. 1979 № 2051—79.

2.5.    Проведение определения

2.5.1. Экстракция. В делительную воронку на 500 мл помещают 200 мл исследуемой воды, подкисляют до pH 3—4 разбавленной соляной кислотой, экстрагируют дикурин тремя порциями хлороформа по 25 мл

в течение 2—3 мин каждый раз. После четкого разделения фаз экстракты объединяют в другой делительной воронке, промывают 25 мл дистиллированной воды.

Очищенный экстракт фильтруют через слой безводного сернокислого натрия (7—8 г) в химической воронке в колбу или фарфоровую чашку.

Растворитель испаряют на водяной бане до объема 1 мл. Остаток растворителя удаляют потоком сухого воздуха с помощью резиновой груши.

2.5.2. Хроматографирование. Полученный концентрат при помощи стеклянного капилляра количественно (при помощи ацетона) наносят на хроматографическую пластинку, покрытую тонким слоем сорбента (силикагель КСК, пластинки Силуфол). Рядом с пробой наносят по 0,02; 0,06; 0,2 мл стандартного раствора, что соответствует содержанию 1,0; 3,0; 10,0 мкг дикурина в пятне. После нанесения пробы и стандартного раствора пластинку 15—20 мин выдерживают на воздухе. Затем помещают в хроматографическую камеру, в которую за 10 мин до хроматографирования наливают растворитель.

При использовании пластинок Силуфол применяют смесь растворителей гексан — этилацетат в соотношении 1 :1 (25 мл), при использовании силикагеля КСК в качестве сорбента применяют смесь растворителей хлороформ—метиловый спирт в соотношении 25:0,1 (25,1 мл).

После подъема фронта растворителя на 10 см от линии старта хроматографирование прекращают. Пластинку помещают в камеру для опрыскивания и после испарения растворителя (выдерживают 15—20 мин) обрабатывают одним из проявляющих реактивов в зависимости от применяемого сорбента. Расход проявляющего реактива на пластинку Силуфол составляет 5—6 мл, на пластинку с силикагелем КСК — 8—10 мл.

На пластинке Силуфол дикурин проявляется в виде синего пятна (Rf 0,42—0,45), на силикагеле КСК в виде красного пятна (через 3 мин после обработки слоя) (Rf 0,50—0,55).

2.6. Обработка результатов анализа

Количество препарата в пробе определяют сравнением интенсивности окраски и площади пятен пробы и стандартного раствора. Измеряют площадь с помощью 46

1

В приложении приняты следующие услояиые обозначения способа отбора проб: ПД __ по диагонали; СС — по смежным сторонам поля; К — метод конверта; ОШ — отбор штук.

2

Временные методические указания разработали А. М. Шленги-дина, Л. Е. Запорожец, Н. В. Суперсон (ВНИИГИНТОКС).