ГОСКОМИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬШ С ВРЕДИТЕЛЯМ. БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИЙ И СОРНЯКАМИ ПРИ МИНСЕЛЬХОЗЕ СССР
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИКРОКОДЕ ЧЕС ТЗ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ * КОРМАХ И ВНЕ&-НЕЙ СРЕДЕ
ЧАСТЬ ХЕ-я
Москва - 1983
ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬБЫ С ВРЕДИТЕЛЯМИ, БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИЙ И СОРНЯКАМИ ПРИ МСХ СССР
МБТОДИЧВСКИВ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕС1В ПЕС1ИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ,КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ
ЧАСТЬ ХШ
Данные методики апробированы и рекомендованы в качвотва официальных группой экспертов при Гоокомиосии ло химическим оредотвам борьбы с вредителями,болезнями растений и сорняками
при МСХ СССР
Москва-1983
-259-
ССДБРЖАНИЕ
Стр,
I
12
23
29
36
46
54 * 61
ХЛОРОРГАНлЧЕСКИБ ПЕСТИЦИДЫ
I.Временные методические указания указания по
определению ХОП (ДДТ,ДДЗ,ДДД, -ГХЦГ) в рыбе и рыбной продукции методом газожидкостной хроматографии.
2. Методические указали® по определению ХОП и сим-триазиновых пестицидов при их совместном присутствии в почве с помощью Г1Х*
3* Временные методические указания по определению остаточных количеств митрана в воде,сливах и
яблоках методом ТСХ.
ШЙОРОРГАНИЧВСКИВ ПЕСТИЦИДУ
1. Мотодические указания по определению афоса в воздухе рабочей зоны методами ГЬХ и ТСХ.
2, Временные методические указания по определению боя-стара в ботве и клубняах картофеля,листьях и стеблях хлопчатника,капусте,почве к водэ ТСХ и ГЗЕХ.
3* Методические указания по определению глифосата и его метаболита- аминометилфосфоновой кислоты методом хроматографии в воде,почве,растительном материале,
4. Мотодические указания по определению остаточных количеств дурсбана в воде,почве,лесной растительности
и биосредах методом ТСХ.
5. Временные методические указания по определению каун-тора в растениях сахарной свеклы и почве методом ТСХ,
260-
6* Методические указания по определению метилмеркалто-фоса в воде,почве,винограде и зеленой массе хмеля ГЖХ и ТСХ. 67
7. Временные методические указания по определению о<$у-
нака методами ГЖХ и ТСХ в почЕе,растениях,воде водоемов. 76
8. Зременные методические указания по определению протио-фоса в растительном материале,почве и воде методами
ГКХ и ТСХ. 82
9. Временные методические указания по определению се-лекрона в растительной продукции,почве и воде ТСХ
и ГЖХ. 91
10. временны» методические указания по определению хлоро
фоса энзимно-хроматографическим методом в листьях болладоны и траве мяты перечной. 90
11. Методические указания по определению в зерне и про
дуктах его переработки ФОП.применяемых для обеззараживания зерна и зернохранилищ,хроматографическими методами. 105
АЗОТСОДЕРЖАЩИЕ ПЕСТИЦИД]
1. Методические указания по определению остаточных количеств пкрекса,диносеба,каратака,ДНОКа в воде,почве.
и растительном материале хроматографическими методами. цу
2. Временные методические указания по определению байгой*
методом ГЗКХ в молоке. 138
3. Временные методические указания по определению барнона в воде,почве,растениях методом ГЖХ.
- 261 -
4. Методические указания по определению кронетона
в воде,почве,корнеклубнеплодах и растительном материале ТСХ, *54
5. Временные методические указания по определению ридо-
кила методой хроматограмм в воде,почве,растительном материале, *50
6. Временные методические указания по определению ров-
роля методом ТСХ в поде,почве,томатах,картофеле,винограде, виноградном соке и ринэ. I6S
7. Временные методические указания ронилана в растительной продукции,почве и воде ТСХ и ГЖХ. 175
8. Временные методические указания по определению эвисех-
та в растительной продукции,почве и в воде ТСХ, 182
9. Временные методические указания по определению эти-
римала в растительной продукции,почве и воде ТСХ, 188
ПРОЧИЕ ПЕСТИЦИДЫ
I* Времонние методические указания по определению гора-нилбутирата методом ГИХ и ТСХ в почве,воде,корнеплодах и листьях сахарной свеклы. *^5
2. Временные методические указания по определению бром-
пропилата(неорона) в яблоках и цитрусовых методом газовой хроматографии. 206
3. Временные методические указания по определению иллокса-на в воде и печво методом ГП.
4. Временные методические указания по хроматографическому определению иэатрина в печво и воде. 217
5. Временные методические указания по определению омаЯта методами Г££Х и ТСХ в почве,в воде и растениях.
6. Методические указания по определению хлората магния в почве,воде,растениях(подсолнечнике,луке) и в воздухе полярографическим и хроматографическим (ТСХ) методами.
7. Временные методические указания по определению оста точных количеств некоторых аналогов ювенильного гор иона (алтосида.алтозара и п-<5ром*енилового эфира гераниола) в растениях картофеля и почве методами ТСХ и Ш.
Дополнения
Л- 71938 от 20Л«СЗгТирах 2000 экз. .заказ Н» шз Типография ВАСИ:ИЛ
Настоящие методические указания предназначены для
санитарно-эпидемиологических станций и научно-исслодова-телъских учреждений Минздрава СССР,а также ветеринарныхвагрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других Министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания,кормах и внешней среде.
Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качество официальных группой экспертов при Госкомиссни по химическим средствам борьбы с вредителями,болезнями растений и сорняками при ИЛ СССР.(Председатель группы экспертов - М.Д.Клисенко).
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования саяэпидслу^бы ИМПиТМ им.Мар-нпновского Е.Я. и лабораторным советом при Главней санитарно-эпидемиологическом управления Кик здрава СССР.
УТВЕРЖДАГ)
заместитель Главного Государственного санитарного врача СССР
А.И,Зайченко
22 октября 1981 г. К 2467-81
ВРЕМЕННОЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ 1Ю ОПРЕДЕЛЕНИЮ СЕЛЕКРОНА В РАСТИТЕЛЬНОЙ ПРОДУШИ, ПОЧВЕ И ВОДЕ ТОНКОСЛОЙНОЙ И ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ.
I. Краткая характеристика препарата Селекрон - О-этил-О-^-хлор-Д-бромфенил)-^-пропмлфосфат (поликроя, куракрон).
Мол. масса 373,6
Химически чистое соединение - светло-желтая жидкость, о температурой кипения ЮО°С. Растворимость в воде 20 мг/л. Хорошо раотьо-ряется в метаноле, метиленхлорядс, бензоле, гексане, хлороформе.
Препарат среднетоксичен для теплокровных животных. ЛДзд при оральном введении составляет 300 мг/кг.
Выпускается в форме 50^-ного концентрата эмульсии и 3^-ных гранул.
2. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕЛЕКРОНА
2.1. Основные положения.
2.1Л. Принцип метода.
Метод основан на извлечении селекрона из растительных лроб, почвы и воды органическим растворителем (ацетон, метанол, н-гексан), очистке экстракта путем вымораживания вооков или* колоночной хроматографией. Количественное определение проводят хроматографическими в тонком слое или газожидкостным методами.
2.1.2. Метрологическая характеристика метода. |
|
тех |
па |
Минимальное детектируемое количество |
1-2 мкг |
1-2 нг |
Нижний предел определения |
0,02 мг/кг |
0,001 мг/кг |
Р - размах варьирования, % в растениях |
86,0-91,5 |
86,0-91,5 |
d почве |
•2,5-97,5 |
92,5-97,5 |
С - среднее значение определения, % |
з растениях |
85,6 |
85,5 |
в почве |
95.0 |
95,0 |
С - стандартное отклонение, % |
а растениях |
05,5 |
85,5 |
в почве |
95,0 |
95,0 |
С - стандартное отклонение, Z |
з растениях |
2,5 |
2.5 |
в почве |
2,5 |
2,5 |
.Цоверительный интервал среднего при Р=Э5 |
/> |
|
чпя растений |
85,5-2, |
5 |
для почв |
95,5-2, |
5 |
|
2.1.3. Избирательность метода
Метод специфичен, другие фосфорорганичеокие соединения в дачных условиях хроматографирования определению не мешают.
2.2. Реактины и раотчори.
Натрий хлористый х.ч., ГОСТ 4233-77
Ацетон х.ч., ШОТ 2303-79
Окись алюминия, ч 17 6-00-0916-81
ннГексаи, х.ч., 17 6-09-3375-78
Хлороформ, х.ч., ТУ 6-09-4263-81
Серебро азотнокислое, х.ч., ГОСТ 1277-81
Метанол, х.ч., ТУ 3-09-1709-77
Натрий сернокислый, безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76
ОД'ЗОЛ ч.д.а., ГОСТ 595о-81
Аммиак, ТУ 6-09-1709-77
biJ122-30 на хроматоне VA iS- (чС'СР)
Кислота о рта {ос }\э риал, ч.# Г ЮТ 35о2-о0 Хлористый метилен, ч.л.а,, i7 6-09-3716-74 А»*.М01*ий Х.ЮГПСТЫЙ, X . Ч. . Рх' j Г 3773-7 I
-93-
Уголь активированный
Кислота соляная, х.ч., ГОСТ 3118-77
Азот особой чистоты в баллонах с редуктором ШСТ 9293-59 ОУ-225, нанесенный в количестве 0# на газ-хромQ (0,15-0,18 мм) Водород з баллонах с редуктором ГОСТ 3022-70 Силикагель для хроматографии 4 100/160 (ЧССР)
Стандартный раствор селекрона с содержанием 10 и 100 мкг препарата в н-гексане или ацетоне
Метилсиликон ХЕ-С0, нанесенный з количестве Ь% на силанизированный лроматонУ- A U/(0,2-25 мм) (чССР)
проявляющий реактив 0,5 г азотнокислого серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, прибавляют 7 мл аммиака и доводят до 100 мл ацетоном.
Осаждающий раствор. 5 г хлористого аммония растворяют в 1GQ мл дистиллированной веды, смешивают с 1C мл 85%-Кой ортофосфорной кислоты и доводят водой до одного литра.
2.3. Посуда и приборы.
Аппарат для встряхивания А8У-1, ТУ-64-1-1081-73 Испаритель ротационный ИР-IM, ТУ 25-II-9I7-74 Воронка делительная ЗД-З-250, ШОТ 8613-75 Сушильный шкаф
Стаканы химические на 100 и 250 мл ГОСТ 10394-74 Хроматографическая камера Камера для опрыскивания Опрыскиватель отеклянный
Колбы конические нормального шлифа ГОСТ 10394-72 Колбы остродонные UHT-50-I4/32 ТО, ШСТ 10394-72 Колбы мерные 100 мл ШСТ 1770-74 Пластинки
Воронки химические ГОСТ 8613-75
Микропипетки 0,1 мл, 0,2 мл ШСТ 20292-74
Прибор для облучения УФ-светом с лампой ПРК-4, любого типа
Газовый хроматограф ’’цвет 106й с термоионкым детектором
Микрошприц на 10 мкл MUJ-I0
Колонки хроматографические, отеклянные длиной 100 мм внутренним диаметром в мм
Колонка для адсорбционной хроаатогра&ии ЬО х i5 мм Секундомер
_Oi| -
Стекловата Бумажные фильтры
Холодильник "ЗИЛ" или другой марки
2.4. подготовка к определению
2.4.1. Подготовка колонки для адсорбционной хроматографии №1. Ь адсорбционную колонку помещают небольшой тампон из отекло-
ваты, затем 7 г силикагеля и сверху 7 г безводного сернокислого натрия. Колонку предварительно промывают 50 мл бензола. Л 2. можно использовать и другую колонку, которую заполняют следующим образом. Снизу помещают кусочек стеклоткани, затем слой безводного сернокислого натрия (2 см), далее окись алюминия второй степени активности (2 см), слой активироранного угля i.1,0 - 1,5 см) и с*.ова безводный сернокислый натрий. Через подготовленную колонку пропускают 30 мл н-гексана. Подготовка хроматографической колонки для FJtX.
Колонка заполняете), общепринятым хроматографии способом, предварительно в течение 48 часов продувается азотом при температуре 250°С
2.4.2. Отбор и подготовка проб.
Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб для определения микроколичеств пестицидов в оельокохозяйствонной продукции, продуктах питания и объектах окружающей среды", утвержденными заместителем главного Государственного оанигарногсг грача СССР 21.08.1979 г. № 2051-79.
2.5. проведение определения.
2.5.1. Экотракция и очистка Экстрактов.
Рода, 200 мл воды помещают в делительную воронку, прибавляв АО г хлористого натрия. Экотракцию селекрона провопят хлороформом (н-гексаном) трижды по три минуты, порциями по t>0 мл.
Экотрат объединяют, сушат над безводным сернокислым натрием и отгоняют досуха на ротш ионной испарителе при температуре 40°С. flesaa. растительный материал. Из 50 г воздушнооухой почвы, подкисленной 10 мл 0,1 ооляно.1. кислоты или измельченного растительного материала vкапуста; яблоки, зерно, сахарная овеклД, томаты, виноград) оелекрон экстрагируют тремя порциями ацетона, метанола пи» гексана по 50 мл в течение 30 минут.
-55-
Объединенний гексановый экстракт сушат безводным сернокислым натрием и концентрируют на ротационном испарителе до объема 0,2-и,з ши Остаток удаляют в токе воздуха.
метанольный или ацетоновый экстракты объединяют и концентрируют до 200 мл при температуре воды 35-40°С. К сконцентрированному раствору прибавляют 10 мл насыщенного раствора хлористого натрия и 50 мл дистиллированной воды. Из водно-ацетоновой или водно-метанольной смеси препарат экстрагируют тремя порциями хлороформа или хлористого метилена по ЬО мл. Экстракты объединяют, сушат над оезводным сернокислым натрием и отгоняют досуха при температуре воды 35-40°С.
2.5.2. Очистка экстракта. Сухой остаток из зерна, капусты, корней сахарной овеклы растворяют в Ь мл охлажденного ацетона.
В колбу приливают о мл дистиллированной воды и 25-30 мл осаждающего раствора. Колбу на 40 минут помещают в холодильник, иооле охлаждения содержимое колбы отфильтровывают через плотный бумажный фильтр. Из водно-ацетонового раствора селекрон экстрагируют тремя порциями н-гексана по 4U мл, в течение 3-х минут. Объединенный гексановый экстракт сушат над безводным сернокислым натрием и концетрпруют на ротационном испарителе до и,2-и#3 мл. Остаток удаляют в токе воздуха.
Пробы из почвы, томатов, вонограда, яблок очищают на хроматографической колонке #1. Остаток переносят с помощью 25 рал бензола (5x5 мл). Коэкстрактивные вещеотва вымывают из колонки 50 .мл бензола, препарат элюируют 100 мл смеси бензол:ацетон (9:1). Растворитель упаривают дооуха. Очистку из зеленой массы проводят на хроматографической колонке #2. Сухой остаток растворяют в 5 мл гексана и иереносят на колонку после чего иоиливают 20 мл н-гексана. Гексан отбрасывают. Затем через колонку пропускают 7Ь мл хлороформа, который концентрируют затем на ротационном «с-парителе до объема и,2-и,3 мл, остаток удаляют и токе воздуха.
2.5.4. .Условия определения тонкослойной хроматографией. Сухой остатик растворяют ъ 0,2-и,3 т н-гекоана, которой с помоацю микропипетки наносят на пластинку "Suujcl'* на расстоянии 2 см от нижнего края. Стенки колбы тщательно смывают несколькими каплями того же растворителя, который наносят " центр пятна.Параллельно наносят ряд стандартных растпорез пестицида. Пятна должны быть диаметром не более 0,5 см. Хроматеграфические пластинки ста-
-96-
вят в камеру для хроматографирования с ситемой подвижных растворителей гексан:ацетон, в соотношении 2:1, по объему. После подъема фронта подвижного растворителя на высоту 10 см, плаотинку вынимают из камеры, сушат на воздухе и помещают на 5 минут под источник /Ф-света. После этого ее опрыскивают проявляющим реактивом и снова облучают Уф-светом до четкого прояаления пятен пре-паоата, которые имеют темно-серую окраску. Величина/^/ селекрона в данных условиях хроматографирования равна 0,53-0,57.
Содержание препарата в исследуемой пробе вычисляют по форму
v _ А
л—р ,
X - содержание препарата в пробе мг/кг; мг/мл А - количество препарата, найденное в пробе, мкг Р - навеска исследуемой пробы, г; мл.
2.5.3. Условия определения газо-жидкостной хроматографии. Сухой остаток растверяит в 5-10 мл ацетона или н-гексана:и хроматографируют аликвоту (2-5 мкл).
Уело вия хромато графиро вания:
Хроматограф "Цвет-106й или аналогичный прибор с термоионным детектором.
Температурный режим колонки 190°С, испарителя 225°С,
Скорость газа-носителя (азот^ - 45 мл/мин, воздуха 500 мл/мин, 30 мл/мин.
—'2
Рабочая шкала электрометра 50 я 10 J а.
Скорость диаграммой ленты 240 мм/час.
Стеклянная хроматографическая колонка размером 1000 х 3 мм о 0У-225, нанесенной в количестве 2г% на газ-хром & . В качестве альтернативной колонки - ХЕ-60, нанесенный в количестве Ъ% на с иланизированный хроматон.
Линейность делектирования на ОУ-225 1-100 нг, на ХЕ-60 -2-130 нг.
Время удержания селекрона на ОУ-225 7i47^; ХЕ-60 - 4156^;
Можно использовать также хромаг ^графическую колонку с й~30 на хроматоне ^-Л |/-ДО!С J*.
Температура колонки 185°С; детектора - 200°С; испарителя -220°С.
Расход газов: азота - 25 мл/мин; водорода - 17-20 мл/мин; воздуха - 300 мл/мин. Шкала электрометра IX 10“10. Скорость движения лечты самописца - 2С0 мл/час.
-97-
Время удержания селекрона - 7*45П#
2.6. Обработка результатов анализа.
Содержание препарата в пробе определяют методом соотношения со стандартом по площади пика по формуле:
х - e№S*- iZ'
где X - количество препарата в пробе, мг/л или мг/кг;
С - концентрация стандартного раствора д.в. препарата, мкг/мл;
jj - площадь пика стандартного раствора препарата, введенного в хроматограф, мм?;
^ - площадь пика д.в. препарата в пробе, мм^; у - объем стандартного раствора, введенного в хроматограф, мкл;
12 - объем экстракта, введенного в хроматограф, мкл; ls - общий объем экстракта после упаривания, мкл;
Р - навеска анализируемой растительной пробы и почвы, г или объем анализируемой воды, мл;
1000 - коэффициент для перехода от мкг к мг.
2.7, Требования безопасности
При проведении исследований по вышеприведенной методике соблюдать правила предосторожности, необходимые при работе с ядовитыми, взрывоопасными и легковоспламеняющимися веществами.
3. Методические указания подготовлены:
1, Бунят^и Юрий Андреевич, Петросян Маргарита Суреновна -Армянский филиал вНИИГИНТОКСа
2. Красных Александр Алексеевич, Павлова Людмила Григорьевна, Логачев Владимир Федорович - Всероссийский НИИ защиты растений, Гамонь Воронежской области.