ВМУ 2424-81
Временные методические указания по определению протиофоса в растительном материале, почве и воде тонкослойной и газовой хроматографией

ГОСКОМИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬШ С ВРЕДИТЕЛЯМ. БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИЙ И СОРНЯКАМИ ПРИ МИНСЕЛЬХОЗЕ СССР

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИКРОКОДЕ ЧЕС ТЗ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ * КОРМАХ И ВНЕ&-НЕЙ СРЕДЕ

ЧАСТЬ ХЕ-я

Москва - 1983

ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬБЫ С ВРЕДИТЕЛЯМИ, БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИЙ И СОРНЯКАМИ ПРИ МСХ СССР

МБТОДИЧВСКИВ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕС1В ПЕС1ИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ,КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ

ЧАСТЬ ХШ

Данные методики апробированы и рекомендованы в качвотва официальных группой экспертов при Гоокомиосии ло химическим оредотвам борьбы с вредителями,болезнями растений и сорняками

при МСХ СССР

Москва-1983

-89-

A

X -----,    где

P

A - количество препарата, найденное по хроматограмме при оравнонии со стандартами, мкг;

Р - навеска исследуемой пробы, мг, или объем воды, мл;

X - содержание протиофоса в пробе, мкг/кг или мг/л.

2.5.3. Условия газожидкостного хроматографирования

С помощью микропприца аликвотную часть исследуемого раствора (1-5 мкл) вводят в испаритель хроматографа.

Для количественного определения протиофоса используют хроматограф с термоионным детектором(ДТИ) или по захвату электронов (ДЭЗ) или постоянной скорости рекомбинации (ДПР)-, фазы и носители описаны в разделе 2.4.2.

При работе с ДТП скорость газа-носителя - азота особой чистоты - 25 мл/мин, скорость водорода - 15-18 мл/мин, скорость воздуха -170 мл/мин. При работе с ДЭЗ (ДПР) скорость газа-носителя - 40-50 мл/мин, скорость продувки - 120-150 мл/мин. При работе как о ДТИ, так и о ДЭЗ (ДПР) скорость диаграмной ленты 600 мм/час, температура термостата колонок I80-200°С.

Время удерживания протиофосв в указанных условиях на колонке с 5%^Е-30 на хезасорбе АН'(0,250-0,360) при температуре колонки 20Q°C - 2 минуты 10 секунд при работе с ДПР.

Количественное определение протиофоса во введенной аликвоте проводят с помощью гр. дуировочного графика (см. 2.4.3.).

Содержание протиофоса в онализируемой пробе вычисляют по формуле:

С х К

X ------- ,    где

У х Р

X - содержание протиофоса в анализируемой пробе, мг/кг или мг/л;

С - общий объем pacjBODn.. мл:

-90-

У - объем аликвоты, вводимой в хроматограф, мкл;

К - количество препарата в аликвоте, определенное ло градуировочному графику, нг;

Р - навеска анализируемого вещества,г, или объем води, ил.

Если при введении в хроматограф получаются слишком большие пики или происходит "зашкаливание", готовят более разбавленные раствори, добавляя к конечному раствору пклвткоК известное количество гексана или разбавляя отобранную аликвоту до определенного объема. 2.6. Обработка результатов анализа приведена в 2.5.2. и 2.5,5.

3. Требования безопасности

Общепринятые требования при работе с горючими растворителями и фосфороргоническими пестицидами.

Методические указания разработаны:

Петрова Т.М., Красникова Н.Г., Мельникова З.В. - Всесоюзный научно-исследовательский институт защити растений, Ленинград,

-259-

ССДБРЖАНИЕ

ХЛОРОРГАНлЧЕСКИБ ПЕСТИЦИДЫ

I.Временные методические указания указания по

определению ХОП (ДДТ,ДДЗ,ДДД, -ГХЦГ) в рыбе и рыбной продукции методом газожидкостной хроматографии.

2. Методические указали® по определению ХОП и сим-триазиновых пестицидов при их совместном присутствии в почве с помощью Г1Х*

3* Временные методические указания по определению остаточных количеств митрана в воде,сливах и

^яблоках методом ТСХ.

ШЙОРОРГАНИЧВСКИВ ПЕСТИЦИДУ

1.    Мотодические указания по определению афоса в воздухе рабочей зоны методами ГЬХ и ТСХ.

2,    Временные методические указания по определению боя-стара в ботве и клубняах картофеля,листьях и стеблях хлопчатника,капусте,почве к водэ ТСХ и ГЗЕХ.

3* Методические указания по определению глифосата и его метаболита- аминометилфосфоновой кислоты методом хроматографии в воде,почве,растительном материале,

4.    Мотодические указания по определению остаточных количеств дурсбана в воде,почве,лесной растительности

и биосредах методом ТСХ.

5.    Временные методические указания по определению каун-тора в растениях сахарной свеклы и почве методом ТСХ,

260-

6* Методические указания по определению метилмеркалто-фоса в воде,почве,винограде и зеленой массе хмеля ГЖХ и ТСХ.    67

7.    Временные методические указания по определению о<$у-

нака методами ГЖХ и ТСХ в почЕе,растениях,воде водоемов.    76

8.    Зременные методические указания по определению протио-фоса в растительном материале,почве и воде методами

ГКХ и ТСХ.    82

9.    Временные методические указания по определению се-лекрона в растительной продукции,почве и воде ТСХ

и ГЖХ.    91

10.    временны» методические указания по определению хлоро

фоса энзимно-хроматографическим методом в листьях болладоны и траве мяты перечной.    90

11.    Методические указания по определению в зерне и про

дуктах его переработки ФОП.применяемых для обеззараживания зерна и зернохранилищ,хроматографическими методами.    ₁₀₅

АЗОТСОДЕРЖАЩИЕ ПЕСТИЦИД]

1.    Методические указания по определению остаточных количеств пкрекса,диносеба,каратака,ДНОКа в воде,почве.

и растительном материале    хроматографическими методами. цу

2.    Временные методические указания по определению байгой*

методом ГЗКХ в молоке.    138

3.    Временные методические указания по определению барнона в воде,почве,растениях методом ГЖХ.

- 261 -

4.    Методические указания по определению кронетона

в воде,почве,корнеклубнеплодах и растительном материале ТСХ,    *54

5.    Временные методические указания по определению ридо-

кила методой хроматограмм в воде,почве,растительном материале,    *50

6.    Временные методические указания по определению ров-

роля методом ТСХ в поде,почве,томатах,картофеле,винограде, виноградном соке и ринэ.    I6S

7.    Временные методические указания ронилана в растительной продукции,почве и воде ТСХ и    ГЖХ.    175

8.    Временные методические указания по определению эвисех-

та в растительной продукции,почве и в воде ТСХ,    182

9.    Временные методические указания по определению эти-

римала в растительной продукции,почве и воде ТСХ,    188

ПРОЧИЕ ПЕСТИЦИДЫ

I* Времонние методические указания по определению гора-нилбутирата методом ГИХ и ТСХ в почве,воде,корнеплодах и листьях сахарной свеклы.    *^5

2.    Временные методические указания по определению бром-

пропилата(неорона) в яблоках и цитрусовых методом газовой хроматографии.    206

3.    Временные методические указания по определению иллокса-на в воде и печво методом ГП.

4.    Временные методические указания по хроматографическому определению иэатрина в печво    и    воде.    217

5.    Временные методические указания по определению омаЯта методами Г££Х и ТСХ в почве,в воде и растениях.

6.    Методические указания по определению хлората магния в почве,воде,растениях(подсолнечнике,луке) и в воздухе полярографическим и хроматографическим (ТСХ) методами.

7.    Временные методические указания по определению оста точных количеств некоторых аналогов ювенильного гор иона (алтосида.алтозара и п-<5ром*енилового эфира гераниола) в растениях картофеля и почве методами ТСХ и Ш.

Дополнения

Л- 71938 от 20Л«СЗгТирах 2000 экз. .заказ Н» шз Типография ВАСИ:ИЛ

Настоящие методические указания предназначены для

санитарно-эпидемиологических станций и научно-исслодова-телъских учреждений Минздрава СССР,а также ветеринарных_вагрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других Министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания,кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качество официальных группой экспертов при Госкомиссни по химическим средствам борьбы с вредителями,болезнями растений и сорняками при ИЛ СССР.(Председатель группы экспертов - М.Д.Клисенко).

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования саяэпидслу^бы ИМПиТМ им.Мар-нпновского Е.Я. и лабораторным советом при Главней санитарно-эпидемиологическом управления Кик здрава СССР.

-П2-

УТВЕРКДЛЮ: Заместитель Главного Государственного санитарного врвча СССР

А.И.Зайченко

п 6 _и августа

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПРОТИОФОСА В РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ, ПОЧВС И ВОДЕ ТОНКОСЛОЙНОЙ И ГАЗОВОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ

I. Краткая характеристика препарата

1Л« Протиофос

1.2.    О-этил-₁^-д-пропил~0-(2_|^-д!1ХЛОрфенил)тионотиолфосфат

1.3.    Структурная формула:

1.4.    Синонимы: А/Т// Н629, токутион

1.5.    Технический продукт - бесцветная жидкость с температурой кипения 125-128°С. Растворимость в водо - 0,17 мг/100 г при 20°С. Хорошо растворим в органических растворителях.

Протиофос - контактно-кише .ный инсектицид, ЛДзд для крио -- 991 иг/кг. Эффективен против чешуекрылых, трилоов, червецов; обладает некоторой акарицмдной и афицидиой активностью.

-*3-

2.    Методика определения лротиофоса

2.1.    Основные положения

2.1.1.    Принцип метода

иетод основан на хроматографической (газожидкостная и тонкослойная хроматография) определении иротиофоса после экстракции из образца органическим растворителем, а для почвы - смесью ацетона с 0,05 н водный раствором хлористого кальция в соотношении 1:1, очистке путем переэкстракции, а также на колонке с окисью алюминия.

Хроматографическое определение в тонком слое проводится на пластинках со слоем силикагеля марки КСК или на пластинках "Силуфол". Хроматографируют в системе гексан-ацетон (4:1), проявляют пластинки 2,о-дибромхинонхлоримидои или другим реагентом, используемым для обнаружения фосфорорганических пестицидов.

Для газохроматографического определения попользуют термоионный детектор (ДТП) или детектор по захвату электронов (ДУЗ) или постоянной скорости рекомбинации (ДИР), колонка стеклянная о носителями и фазами, указанными в разделе 2.4.2.

2Л.2. Метрологическая характеристика метода

ТСХ    Ш

Минимально детектируемое количество Нилний предел определения Р - размах варьирования, %%

в растениях в почве в воде

о - среднее значение определения, %%

в растениях в почве

в воде

-*4-

- стандартное отклонение, % в растениях ± 5.3 ± 4,9 в почве ± 5,7 ± 5,2 в воде ± м ± 4,8 Доверительный интервал ореднего при о(. =0,95 и Л *5 - 2,571

2.1.3. Избирательность метода: другие ФОИ не мешают определению.

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, ч.д.а., ГОСТ 2603-79

Ацетонитрил, ч., ТУ 6-09-3375-78

Бензол, х.ч., ГОСТ 5955-75

Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78

Диметилформамид, ч., ГОСТ 5703-70

Хлороформ, х.ч., ГОСТ 2015-74

Кислота уксусная, чда, ГОСТ 61-69

Алюминий окись, для хроматографии, ч., ТУ 6-09-3916-75 Кальций хлористый, х.ч., ГОСТ 4T4I-76 Натрий сернокислый, безводный, ч.д.а., ГОСТ 4166-76 Палладий двуххлористый, ч., ТУ 6-09-2025-75 Серебро азотнокислое, ч.д.а., ГОСТ 1277-63 Бромфеноловый синий, водорастворимый, чда, ТУ 6-09-3II-70 2,6-дибромхинонхлоримид, ч., МРТУ 6-09-3665-67 Силикагель КСК или пластинки "Силуфол"    ЧССР)

5%.УЕ-30 на хроматоне /4/-Х^>г(0,Т25-0,160 мм)//^/^а^,ЧССР) 5%ХЕ-30 на хезасорбе А 1^(0,250-0,360 мм)    ССР/

3% 0У-225 us хроматоне //-7у*/(0,200-0,250 мм)    ЧССР/

5% ХЕ-60 на хроматоне /•/- Д \/\Г- (0J60-0.200 мм) Д^^л^ЧССР/ Азот особой чистоты Водород Сжатый воздух

-65-

Проязляюцие реагенты:

-    0,2%-ный раствор 2,6-дибромхинонхлоримида в гексане

-    0,2%-ный раствор палладии двуххлористого в снеси вода-ацетон (1:1) с двумя каплями концентрированной соляной кислоты

-    Бромфеноловый оиний : 0,03 г бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона, затем 0,5% водно-ацетоновым раствором азотнокислого серебра (I ч. воды, 3 ч. ацетона) смесь доводят до 100 мл; 5%-ный раствор уксусной кислоты.

Стандартный раствор протиофоса в н-гексане - I мкг/мл для ГКХ и 100 мкг/мл для ТСХ.

2*3* Приборы и посуда

Хроматограф ^иЦвет-106" или аналогичный прибор с детекторами термо-ионным (ДТИ), по захвату электронов(ДЭЗ) или постоянной скорости рекомбинации (ДПР)

Аппарат для встряхивания колб

Ротациониый вакуумный испаритель, МРТУ 42-2589-66, или аналогичный прибор для отгонки растворителей под вакуумом

Колбы конические со шлифами и пробками на 250-500 мл, ГОСТ 10394-72 Колбы круглодонные со шлифами на 100-500 мл, ГОСТ 10394-72 Воронки, ГОСТ 8613-75

Делительные воронки на 0,5-1,0 л ГОСТ 8613-75 Колбы мерные на 100 мл, ГОСТ 1770-74

Колонки для адсорбционной хроматографии(300x15 мы),МРТУ 42-2590-66

Хроматографическая камера

Пульверизаторы стеклянные

Пипетки на 0,1 и 1,0 мл, ГОСТ 20292-74

Почвенное сито

Микрошприц на 10 мкл

-.96-

Цилиндры мерные на 50-TQ0 мл, ГОСТ 1770-64 Колонки стеклянные ( 1000x3 мм)

2.4. Отбор проб и подготовка к анализу

2.4.1.    Отбор проб

Отбор проб производят в соответствии о унифицированными правилами отбора проб для определения микроколичеотв пестицидов в сельскохозяйственной продукции, продуктах питания и объектах окружающей среды , утвержденными Заместителем Главного Государственного овнитарного врача СССР 21.08.1979 №2051-79.

Растительную продукцию ( овощи: капусту, огурцы и др.; фрукты, зеленую массу растений) измельчают и отбирают квартованием среднюю пробу 25 г.

Почву в естественно влажном состоянии или воздушно-сухую тщательно перемешивают, измельчают, просеивают через почвенное оито и отбирают для анализа среднюю пробу 10-25 г.

Пробе воды - 100 мл.

2.4.2.    Приготовление хроматографических колонок.

Стеклянные хроматографические колонки (1000x3 мм) заполняют хро-матоном(0,200-0,250 ми), пропитанным 3# ОУ-225, хроматоном /У- Siifxi (0,125-0,Т60 мм), пропитанным 5%„ Е-30, либо 5% >Е-30 на хезясорбе AVV^O,250-0,360 мм) или 5% ХЕ-60 но хромптоне У-./У**'" (0,Т60-0,200 мм).

2.4.3.    Построение градуировочного графика.

Для количественного определения протиофоса во введенной вликвоте используют метод абсолютной калибровк., который заключается в построении графической зависимости высоты или площади хроматографического пики от содержания вещества в стандартной пробе. По оси ординат откладывают значения высот (площадей) хроматографических пиков в мм ( мм или ыкВ«сех), а по оси абсцисс - абсолютное количество исследуемого , соответствующее дачному лику.

-°7-

ГрвдуировочныИ график необходимо строить в день гаэохроиатогрпфи -чеокого анализа проб в тех же условиях, особенно при работе с ДТП.

£•5* Проведение определения.

2.5.1. Экстракция к очистка экстрактов

Из растительных проб протнофос извлекают 100 мл смоси ацетона с водой (1:1), из почвенных проб - 50 мл смеси ацетона с 0,05 н раствором .гористого кальция (1:1), из годы - хлороформом, порциями по 50 мл дважды и 25 ил. Экстрагируют при встряхивании по 30 минут. После этого растительные экстракты помещают в холодильную камеру иг.и в смесь соли и льда для вымораживания восков. Пробы далее фильтруют через бумажный фильтр. Из объединенного фильтрата нротиофос псроэкстрагируют в н-гексан, прибавляя последний порциями по 20 мл, каждый раз встряхивая в делительной воронко в течение 3-5 минут. Гексановые Фракции высушивают путем фильтрования через слой безводного сернокислого натрия, объединяют и концентрируют до небольшого объема(1,0-0,5 мл) под вакуумом при температуре 40°С.

Экстракты из растительных объектов в некоторых случаях нуждаются в дополнительной очистке. Для этого из пробы растворитель отгоняют полностью, к остатку прибавляют по 5 мл ацетонитрила дважды (вместо ацетонитрила можно использовать димотилформамид), каждый раз оливой растворитель в чистую колбу. К общему объему растворителя (1C мл) добавляют 40 мл дистиллированной воды. Затем в течение 3-5 минут производят пореэ?сстракцию протио^д оса в н-гексан равными объемами при встряхивании. Объединенный гексановый экстракт.высушивают безводным сернокислым натрием и концентрируют под вакуумом при 40°С.

Дальнейшую очистку растительных проб и проб из почвы производят на колонке (300x15 мы), заполненной последовательно сернокислым натрием (3-4 г), окисью алюминия (5 г) и снова сернокислым патриеы(2,г). Предварительно колонку ‘промывают хлороформом (30/40 мл). Протио’ос з-у.п-

-в8~

рую» бензолом (50 мл). Растворитель отгоняют под вакуумом до объема 0,3-0,5 мл. Количество инсектицида определяют хроматографическими методами. Для ГХХ очистка экстрактов из растений и почвы на колонках, как правило, не требуется.

2,5,2,. Условия хроматографирования в тонком слое

Проба с помощью капилляра или микрошшетки наносится на хроматографическую пластинку со слоем силикагеля или на "Силуфол". Параллельно на пластинку наносят серию стандартных растворов с содержанием 3, 5, 10 мкг действующего вещества протиофоса. Хроматографируют в системе гексан-ацетон (Ф:1), проветривают и опрыскивают одним из проявляющих реагентов;

-    Хроматограмму опрыскивают 0,2%-ным раствором 2,6-дибромхинонхлор-имида в гексане, затем нагревают в течение 30 секунд в термостате при температуре П0-120°С. Протиофоо проявляется в виде краоных пятен на белой фоне. Нижний предел определения протиофоса в листьях капуоты

-    0,5 мкг,

-    Хроиатогромму опрыскивают 0,2%-ным раствором хлориотого палладия. Протиофос проявляется в виде желтых пятен о коричневой окантовкой на светлом фоно. Нижний продел обнаружения протиофоса в листьях капусты

-    3 мкг.

-    Хроматограмму обрабатывают бромфеноловым синим с последующим обео-цвечеиием фона раствором лимонной кислоты. Протиофос проявляется в ви-№ серо-синих пятен нЬ желтом фоне. Нижний предел обнаружения прстио-j.008 в листьях капусты 5 мкг,

Значение протиофоса в системе н-гексан-ацетои(4:1) равно 0,52^0,02, в сиотеме бензол-хлорофори (1:1) 0,65+0,03 ( при температуре 18°С).

Содержание протиофоса в исследуемом объекте вычисляют по формуле: