ВМУ 2420-81
Временные методические указания по хроматографическому измерению концентраций розалина в воздухе рабочей зоны

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРОПРОМЫШЛЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

Государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ИМЕНИ К. А. ТИМИРЯЗЕВА

ЦЕНТРАЛЬНЫЙ институт агрохимического ОБСЛУЖИВАНИЯ СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ РЕГУЛЯТОРОВ РОСТА В РАСТИТЕЛЬНОЙ ПРОДУКЦИИ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

(Часть 1)

МОСКВА АГРОПРОМИЗДАТ 1986

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРОПРОМЫШЛЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР Государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ИМЕНИ К: А. ТИМИРЯЗЕВА

ЦЕНТРАЛЬНЫЙ ИНСТИТУТ АГРОХИМИЧЕСКОГО ОБСЛУЖИВАНИЯ СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ РЕГУЛЯТОРОВ РОСТА В РАСТИТЕЛЬНОЙ ПРОДУКЦИИ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

(Часть 1)

МОСКВА АГРОПРОМИЗДАТ 1986

осить несъедобные части растений, остатки материала вымыть, обсушить. крупные овощи разделить на 4 части и взять '/«. Пробу измель-

вертинок срезать и отбросить поверхность предыдущего среза, отбросить несъедобные листья, измельчить и выделить средний образец

Отбросить несъедобные части, растения вымыть, очистить, измельчить и выделить средний образец

Отбросить непригодные части, измельчить, перемешать и отвесить средний образец

Измельчить целые растения, перемешать и отвесить средний образец Отбросить несъедобные части, растения измельчить, перемешать и отвесить средний образец. Для лука и лука-порея с каждой штуки взять половину

-J 00

Макси миль-яи величина Величина средней Подготовка среднего образца Величина пола млн пар- Растительный материал Способ отбор» проб • пробы влв среднего образца, кг таи при отбо- исходного образца ре проб 5 га Лук-резамец, лук-ба- ПД (целые растс- Лук. лук-порей — 0.5—1 кг, лук-ре- То же 0,25 тун, лук-порей в ран- ния) ней стадии развития залец, лук-батун — 0,25 кг 5 га Фасоль, горох, бобы То же 0,5—1 кг бобов Семена выделить, нзмель- 0,5 чигь и выделить средний образец 50 га Фасоль «зеленый боб» » 0.5 кг Целые бобы измельчить, перемешать и выделить средний образец 0,5 0.5 20 га/ЗОт Помидоры, перец ПД (целые раете- Мелкие овощи Овощи вымыть, нзмель- ния) 0,5—2 кг, крупные — 2 кг чить и выделить средний образец 0,5 20 га/500 т Огурец н бахчевые То же 10 овощей, масса Овощи вымыть, нзмель- пробы крупных чить и выделить средний бахчевых — образец, из крупных бах- 0,5—3 кг чевых взять вырезки 0,25—0,5 5 га Спаржа » 0,5 кг Растения вымыть, измельчить и выделить средний образец После удаления листо- 5 га Ревень ПД (выборочно 2 кг (без листовых 0.5 листья) пластинок) вых пластинок растения вымыть, высушить и выделить средний образец Грибы _ Шампиньоны и дру* К (руководство- Не менее 0,5 кг Грибы измельчить, пере- 0.5 гне грибы ватъея правилами мешать к отвесить сред- сбора грибов) ний образец Плодово-ягодные, орехоплодные, виноград 200 га/500 т Семечковые До 30 деревьев — До 30 деревьев — Плоды почетвертовать. выборочно, свыше 30 ПД в завися- 5 кг, до 1 га — от каждого плода взять 7 кг. 1—10 га — ■/«, четвертинки нзмель- мости от площади. 10 кг, 10—30 га — чить, перемешать и от- с 20—30 деревьев 12 кг, свыше 30 га весить средний образец (плоды следует снимать с разных сторон дерева, с - 15 кг разной высоты и глубины кроны) До Косточковые персик. До 30 деревьев — До 30 деревьев — Плоды поделить попо- 0.5 200 га/200 т абрикос, слива выборочно, свыше 4 кг; до 1 га — лам, от каждого взять 30 деревьев — 6 кг, свыше — 1 га половину без косточки. ПД с 15-20 де- 8 кг измельчить, перемешать ревьев и выделить- средний об- То же раэец До Косточковые вишня До 30 деревьев — Косточки удалить, пло- 0.5 200 га/100 т черешня, слива 1,5 кг; до 1 га — ды измельчить, переме- 2 кг. свыше 1 га — шать и отвесить средний 2.5 кг образец Орехи (грецкие, ле- » До 30 растений — Из орехов вынуть ядра, 0,25—0,5 шина) 1 кг, свыше 30 — измельчить их. переме- 1,5 кг шать и отвесить средний ч (О образец

g    Продолжение

Максимальная величина поля или партии при отборе проб	Растительный материал	Способ отбора проб •	Величина средней пробы или исходного образца	Подготовка среднего образца	Величина среднего образца, кг
Юга	Смородина, крыжовник	До 30 кустов пробу взять с каждого куста с разной его стороны н глубины, свыше 30 кустов — метод СС с 25—35 кустов	До 30 кустов не менее 1 кг (с крупными плодами — не менее 1.5 кг), свыше 30 кустов — не менее 1.5 кг	Из тщательно перемешанного исходного образца взять половину, измельчить ее, перемешать и отвесить средний образец	од
До 200 га	Виноград	СС, боковые части кистей	1,5 кг	Взять отдельные от основания боковые части кистей, тщательно перемешать исходный образец и взять половину, измельчить ее, перемешать и отвесить средний образец	0.5
До 1 га	Земляника, малина	ПД	До 500 м* — 1,5 кг, 500 м* — 0,25 га-2.5 кг, свыше 0,25 га — 2,5 кг	Тщательно перемешать исходный образец, взять половину, измельчить ес, перемешать и отвесить средний образец	0.5

• В приложении приняты следующие услояиые обозначения способа отбора проб: ПД __ по диагонали; СС — по смежным сторонам поля; К — метод конверта; ОШ — отбор штук.

Приложение 2

Максимально допустимые уровни (МДУ) регуляторов роста в пищевых продуктах, предельно допустимые концентрации (ПДК) в воде водоемов и в воздухе рабочей зоны, утвержденные Министерством здравоохранения СССР

Регулятор роста	МДУ, мг/кг	ПДК В воде водоемов, мг/л	ПДК в воздухе рабочей зоны и ОБУВ, мг/м*
Г идрел	Томаты, огурцы, картофель, яблоки, черешня, мандарины, хлопковое масло — 0,15	0,25	1,0
Днгидрел	—	0,05	0,8
ДЯК	Яблоки — 3,0	0,05	1,7
Кампо-зан М	Томаты, огурцы, зерно хлебных злаков — 0,5	3,0	—
Кротоно- лактон-сы-	Зерно (пшеница, кукуруза) — 0,2
рец МГ-натрия	Картофель, свекла, лук, чеснок, морковь, томаты, арбузы (в кожуре), табак — 8,0	—	—
Хлорхолин- хлорид	Томаты, яблоки, груши, виноград — 0,05, зерно хлебных злаков — 0,1	0,2	0,03
Фоспинол	Картофель — 0,2	—	3,0

СОДЕРЖАНИЕ

Определение микроколичеств регуляторов роста в растительной продукции, воде и почве......

Методические указания по определению кампозана М (этефо-на) и его производных (гидрела, дигидрела) в яблоках, огурцах, томатах, семенах хлопка и хлопковом масле методом газожидкостной хроматографии.........

Методические указания по определению хлорхолинхлорида в растительной продукции, воде и почве методом тонкослойной ионообменной хроматографии.......

Временные методические указания по определению пикса и морфонола в воде, почве и растительных образцах методом

тонкослойной ионообменной хроматографии .....

Методические указания по определению ДЯКа, ГМК-Na, гидрела и дигидрела в воде и растительном материале унифицированным спектрофотометрическим методом Временные методические указания по определению гибберси-ба в воде и почве методом тонкослойной хроматографии Временные методические указания по определению дикурина в воде методом тонкослойной хроматографии .

Временные методические указания по определению гаметана в зерне методом газожидкостной хроматографии

Определение микроколичеств регуляторов роста растений в воздухе рабочей зоны ........

Методические указания по фотометрическому определению

ДЯКа в воздухе рабочей зоны........

Временные методические указания по фотометрическому определению ГМК-Na в воздухе рабочей зоны.....

Методические указания по спектрофотометрическому измерению концентраций дигидрела в воздухе рабочей зоны Методические указания по фотометрическому измерению концентраций гидрела в воздухе рабочей зоны .....

Временные методические указания по хроматографическому измерению концентраций розалина в воздухе рабочей зоны

Приложение 1. Отбор проб растительного материала на корню ................

Приложение 2. Максимально допустимые уровни (МДУ) регуляторов роста в пищевых продуктах, предельно допустимые концентрации (ПДК) в воде водоемов и в воздухе рабочей зоны, утвержденные Министерством здравоохранения СССР

УДК 632.95.028(0.83.131)

Методические указания по определению микроколичеств регуляторов роста в растительной продукции и объектах окружающей среды (под ред. кандидата сельскохозяйственных наук И. К. Бли-новского и доктора биологических наук В. Ф. Ладонина) включают разработки ВНИИ гигиены и токсикологии пестицидов, полимерных и пластических масс и его филиала (г. Ереван), Московской сельскохозяйственной академии имени К. А. Тимирязева, ВНИИ химических средств защиты растений. Института физиологии растений АН СССР, Института физиологии растений АН УССР, Научно-исследовательского зонального института садоводства Нечерноземной полосы, Московского государственного университета имени М. В. Ломоносова, Новосибирского института органической химии СО АН СССР, Узбекского НИИ санитарии, гигиены и профзаболеваний.

Методические указания одобрены лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Министерства здравоохранения СССР и утверждены заместителем Главного государственного санитарного врача СССР в качестве официальных.

Методические указания предназначены для специалистов контрольно-токсикологических лабораторий, санитарно-эпидемиологических станций, осуществляющих контроль за применением регуляторов роста растений, и научно-исследовательских лабораторий, занимающихся определением микроколичеств регуляторов роста при разработке технологий их применения.

Члены редколлегии: Ю. А. Бунятян, М. А. Клисенко, М. И. Лунев, С. В. Лопатко.

Методические указания по определению микроколичеств регуляторов роста в растительной продукции и объектах окружающей среды (часть 1)

Зав. редакцией А. Я- Рогачева Редактор Р. А. Антипина Технический редактор Е. Э. Пчурова Корректор Н. Я. Туманова

Сдано в набор 24.05.85. Подписано к печати. 06.02.86. Т03074.

Формат 84х 108'/|з. Бумага тип. № 3. Гарнитура литературная. Печать высокая. Уел. печ. л. 4,2. Уч.-изд. л. 4,63. Уел. кр.-отт. 4,41.

Тираж 6000 экз. Заказ Л*« 3322. Бесплатно.

Ордена Трудового Красного Знамени ВО «Агропромиэдат* 107807, ГСП, Москва, Б-53. ул. Садовая-Спасская, 18.

170000, г. Калинин, Студенческий пер., 28.

Обл. типография.

© Государственный агропромышленный комитет СССР, 1986

Успехи, достигнутые в последние годы в области разработки теоретических основ и практического использования регуляторов роста и развития растений, определили их как самостоятельное и перспективное направление химизации земледелия.

В настоящее время применение синтетических регуляторов роста (химического, микробного или растительного происхождения) в целях повышения урожайности, устойчивости к неблагоприятным факторам внешней среды, качества и сохранности продукции становится важным звеном в технологиях возделывания многих сель^ скохозяйственных культур.

Разработанная в нашей стране целевая комплексная научно-техническая программа создания и широкого внедрения регуляторов роста растений, обеспечивающих повышение урожайности и качества сельскохозяйственных культур, нацеливает усилия химиков и биологов на поиск и создание препаратов, действующих на такие важнейшие процессы жизнедеятельности растений, как рост стебля (повышение устойчивости к полеганию, устранение перерастания рассады, ограничение крон многолетних растений и кустарников, увеличение биомассы и др.); плодоношение (ускорение у многолетних культур, повышение завязываемости и др.); устойчивость к стрессовым воздействиям (засухе, низким температурам, переувлажнению); рост корней (стимуляция при размножении черенками, рассадой, пересадке растений и др.); созревание (ускорение или замедление); накопление и распределение ассимилятов (повышение интенсивности фотосинтеза, усиление оттока ассимилятов к зерновкам, плодам); опадение плодов и листьев (облегчение механизированной уборки и дефолиация); покой (повышение лежкости при хранении или стимуляции прорастания); сексуализация (регулирование пола растений в сторону увеличения женских или мужских цветков); рост и дифференциация тканей (при размножении оздоровленного посадочного материала и в селекции).

При всем многообразии действия регуляторы роста и развития растений могут быть определены как вещества, которые влияют на жизненные процессы растений, не оказывая токсического действия, и не являются источником питания (в отличие от пестицидов и удобрений).

Большинство регуляторов роста в зависимости от культуры, времени и норм применения имеет многоцелевое назначение. Так, этиленпродуценты могут использоваться для торможения роста стебля (рожь, ячмень), стимулирования плодоношения (яблоня), ускорения созревания (вишня, томат), повышения лежкости (картофель, свекла), сдвига пола (огурец, плодовые культуры, хлопчатник), образования отделительного слоя (облегчение механизированной уборки и дефолиация).

Широкий спектр действия регуляторов роста предполагает постоянное расширение сферы их применения в растениеводстве. При этом увеличивается потенциальная опасность загрязнения имц сельскохозяйственной продукции и объектов окружающей среды. Постановлением Совета Министров СССР о дополнительных мерах но усилению контроля за применением в народном хозяйстве пестицидов и регуляторов роста растений в целях недопущения вредного воздействия их на здоровье населения предложено ужесточить требования к применению в народном хозяйстве пестицидов и регуляторов роста растений, усилить контроль за соблюдением установленных правил хранения, транспортировки и применения их, разработать и осуществить дополнительные мероприятия по предотвращению загрязнения окружающей природной среды пестицидами, регуляторами роста растений и основными токсичными продуктами их разложения исходя из необходимости охраны здоровья населения.

В настоящие указания включены методы определения микроколичеств регуляторов роста растений, уже разрешенных для применения в сельском хозяйстве (или проходящих государственные испытания).

Учитывая важность отбора представительной пробы анализируемой растительной продукции, в указания включено извлечение из «Унифицированных правил отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденных Министерством здравоохранения СССР 21.08. 1979 г. (приложение 1).

Публикация подобных материалов будет осуществляться периодически, по мере внедрения в сельскохозяйственное производство новых регуляторов роста, разработки методов контроля за их применением и появления более совершенных и унифицированных методов определения микроколичеств препаратов в сельскохозяйственной продукции, кормах и объектах внешней среды.

Утверждаю:

заместитель Главного государственного санитарного врача СССР

А. И. ЗАЙЧЕНКО

6.08. 1981 № 2420-81

Временные методические указания по хроматографическому измерению концентраций розалина в воздухе рабочей зоны ¹

5-хлор-2-метилбензимидазол — действующее начало розалина.

1. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕПАРАТА

Структурная формула

Н

Эмпирическая формула С8Н₇Ы₂С1.

Молекулярная масса — 166,5.

Розалин — порошок светло-желтого цвета с температурой плавления 204—206°С. Хорошо растворяется в спирте, ацетоне, плохо в воде, хлороформе, бензоле. Применяется в виде 50%-ного смачивающего порошка.

Агрегатное состояние в воздухе — пары+ аэрозоль.

ОБУВ розалина 0,5 мг/м³ (расчетный).

2. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ

2.1. Основные положения

Определение основано на хроматографировании розалина в тонком слое силикагеля с последующим обнаружением зоны локализации розалина: 1) путем обработки смесью растворов бромфенолового синего и азот-

нокислого серебра' (с обесцвечиванием фона раствором лимонной кислоты); 2) с помощью паров йода и измерении оптической плотности растворов розалина при длине волны 246 нм.

Отбор проб проводится с концентрированием (силикагель). Предел обнаружения в анализируемом объеме пробы — 1 мкг, в воздухе — 0,25 мг/м³ (при отборе 4 л воздуха). Диапазон измеряемых концентраций 0,25— 5,0 мг/м³. Граница суммарной погрешности измерения ±17,2. Определению не мешают ГХЦГ, антио, рогор.

2.2.    Реактивы, растворы, материалы

Розалин х. ч.

Ацетон ч. д. а., ГОСТ 2603-79.

Бензол х. ч., ГОСТ 5955-75.

Гексан ч„ ТУ 6-09-3375—78.

Спирт этиловый 96%-ный, ТУ 6-09-17-10—77.

Бромфеноловый синий ч. д. а., ТУ 6-09-1058—76.

Серебро азотнокислое х. ч., ГОСТ 1277-75.

Лимонная кислота х. ч., ГОСТ 3652-69, 2%-ный раствор.

йод ч., ГОСТ 4159-79.

Вата обезжиренная.

Силикагель марки ACM.

Подвижная фаза: 1) бензол — ацетон (1 : 1); 2) этанол—гексан (1 : 1).

Проявляющий реактив № 1 готовят следующим образом: 0,05 г бромфенолового синего растворить в 10 мл ацетона и полученный раствор разбавить до 100 мл 0,5%-ным водно-ацетоновым (1:3) раствором азотнокислого серебра. Реактив хранится длительное время.

Проявляющий реактив №2 — пары йода (10 г йода насыпают в чашку Петри, слегка увлажняют и чашку помещают в эксикатор).

Стандартный раствор розалина в ацетоне (концентрация 100 мкг/мл) готовят, растворяя 10 мг химически чистого розалина в ацетоне в мерной колбе на 100 мл. Раствор устойчив в течение двух месяцев при хранении на холоде.

2.3.    Приборы и посуда

Аспирационное устройство, ТУ 64-1-862—77.

Трубки гофрированные, стеклянные, с рабочей длиной 55 мм (для наполнения их силикагелем).

70

Посуда стеклянная химическая, ГОСТ 1770-74.

Пипетки на 1, 2, 5, 10 мл, ГОСТ 20292-74.

Колбы мерные, ГОСТ 1770-74.

Туберкулиновые шприцы.

Баня водяная.

Хроматографическая камера, ГОСТ 10565-75.

Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 10391-74.

Пластинки для хроматографии Силуфол (ЧССР) размером 150x150 мм.

Спектрофотометр СФ-16, СФ-26.

2.4.    Условия отбора проб воздуха

Исследуемый воздух со скоростью 1 л/мин аспири-

руют через гофрированную трубку с силикагелем. Для определения 1/2 Г1ДК достаточно отобрать 4 л воздуха.

2.5.    Проведение определения

Гофрированные трубки с силикагелем промывают

ацетоном (20—30 мл) против потока поглощения, экстракт упаривают на водяной бане до небольшого объема (0,2—0,3 мл), остаток удаляют на воздухе.

Содержимое колбы после упаривания растворяют в 0,3—0,5 мл ацетона.

Последующую обработку пробы и количественное определение можно проводить двумя способами.

А. Пробу при помощи туберкулинового шприца количественно наносят на хроматографическую пластинку так, чтобы размер пятна не превышал 0,5 см (по диаметру). Колбу дважды промывают небольшими порциями (0,3 мл), которые также наносят в ту же точку. Справа и слева от пробы наносят стандартный раствор ро-залина, содержащий 1, 5, 10, 20 мкг препарата.

Пластинку помещают в камеру для хроматографирования, в которую предварительно (за 30 мин) налита система растворителей бензол — ацетон (1:1). Край пластинки погружают в растворитель не более чем на 0,5 см, после поднятия растворителя на высоту 10 см пластинку вынимают из камеры, оставляют на воздухе до полного испарения растворителей. Затем пластинку опрыскивают проявляющим реактивом № 1. Когда пластинка подсохнет, ее обрабатывают 2%-ным раствором лимонной кислоты. На желтом фоне проявляется синее пятно розалина (Rf=0,56±0,05).

Количественное определение содержания розалина в анализируемой пробе проводится визуально, по интенсивности окрашивания пятен на хроматограмме и пу-

71

тем измерения площади пятен стандартных растворов к проб.

Б. После отгонки растворителя содержимое колбы растворяют в 0,2 мл ацетона. Пластинку делят по длине на три параллельные полосы. На первую и вторую наносят в виде сплошной линии ацетоновый раствор экстрактов. Стенки колбы ополаскивают небольшими порциями ацетона (0,2—0,3 мл) и раствор наносят на те же полосы. На третью полосу наносят стандартный раствор розалина. Пластинку помещают в камеру, в которую за 2G—30 мин до хроматографирования наливают смесь растворителей этанол — гексан (1: 1). Когда фронт растворителей достигает высоты 10 см, пластинку вынимают из камеры и после удаления следов растворителя первую и вторую полосы закрывают стеклом и пластинку помещают в йодную камеру на 5—10 мин. Розалин обнаруживают на третьей полосе по темно-коричневому пятну на желтом фоне (Rf=0,60±0,07). По проявленной зоне отмечают участки силикагеля на первой и второй полосах и соскабливают участки с роза-лином в колбу на 100 мл. Элюируют 10 мл этилового спирта встряхиванием в течение 30 мин. Соответственно элюируют и зону чистого силикагеля и измеряют оптическую плотность элюата при 246 нм.

Для количественного определения строят калибровочный график по стандартам (приготовленным в ряде мерных колб) розалина с концентрацией 1, 2, 5, 10, 15 и 20 мкг/мл. Затем измеряют оптическую плотность растворов при 246 нм и строят калибровочный график D = f(C) (С —концентрация розалина). Количество розалина определяют либо по графику, либо сравнением оптических плотностей стандартного и анализируемого растворов.

Концентрацию розалина в воздухе (С) в мг/м³ вычисляют по формуле

р Сп ’ VI

V₂„‘V ’

где С„ — количество препарата в хроматографируемом объеме пробы, мкг; Vi — общий объем пробы, мл; V — объем пробы, взятый для хроматографирования, мл; V20 — объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям, л.

3. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ

Соблюдаются общие правила по технике безопасности, необходимые при работе с химическими реактивами и пестицидами.

72

Приложение 1

Отбор проб растительного материала на корню (из «Унифицированных правил отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроксхличеств пестицидов*, утвержденных заместителем Главного государственного санитарного врача А. И. Зайченко 21X56.1979 г. № 2051—79).

Кормовые культуры (на корню)

Кукуруза СС (не менее 18 Початки с 18 рас Зерно отделить, измель 0.25-0,50 растений) тений чить и отвесить средний образец Кормовые бобы пд 1000 бобов То же 0.5 -1.0

1

Временные методические указания разработали Т. И. Искан-даров, У. А. Маджидов, В. Д. Чола (УзбНИИ санитарии, гигиены и профзаболеваний).

69