ГОСКОМИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬШ С ВРЕДИТЕЛЯМ. БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИЙ И СОРНЯКАМИ ПРИ МИНСЕЛЬХОЗЕ СССР

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИКРОКОДЕ ЧЕС ТЗ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ * КОРМАХ И ВНЕ&-НЕЙ СРЕДЕ

ЧАСТЬ ХЕ-я

Москва - 1983

ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬБЫ С ВРЕДИТЕЛЯМИ, БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИЙ И СОРНЯКАМИ ПРИ МСХ СССР

МБТОДИЧВСКИВ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕС1В ПЕС1ИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ,КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ

ЧАСТЬ ХШ

Данные методики апробированы и рекомендованы в качвотва официальных группой экспертов при Гоокомиосии ло химическим оредотвам борьбы с вредителями,болезнями растений и сорняками

при МСХ СССР

Москва-1983

-259-

ССДБРЖАНИЕ

ХЛОРОРГАНлЧЕСКИБ ПЕСТИЦИДЫ

I.Временные методические указания указания по

определению ХОП (ДДТ,ДДЗ,ДДД, -ГХЦГ) в рыбе и рыбной продукции методом газожидкостной хроматографии.

2. Методические указали® по определению ХОП и сим-триазиновых пестицидов при их совместном присутствии в почве с помощью Г1Х*

3* Временные методические указания по определению остаточных количеств митрана в воде,сливах и

^яблоках методом ТСХ.

ШЙОРОРГАНИЧВСКИВ ПЕСТИЦИДУ

1.    Мотодические указания по определению афоса в воздухе рабочей зоны методами ГЬХ и ТСХ.

2,    Временные методические указания по определению боя-стара в ботве и клубняах картофеля,листьях и стеблях хлопчатника,капусте,почве к водэ ТСХ и ГЗЕХ.

3* Методические указания по определению глифосата и его метаболита- аминометилфосфоновой кислоты методом хроматографии в воде,почве,растительном материале,

4.    Мотодические указания по определению остаточных количеств дурсбана в воде,почве,лесной растительности

и биосредах методом ТСХ.

5.    Временные методические указания по определению каун-тора в растениях сахарной свеклы и почве методом ТСХ,

260-

6* Методические указания по определению метилмеркалто-фоса в воде,почве,винограде и зеленой массе хмеля ГЖХ и ТСХ.    67

7.    Временные методические указания по определению о<$у-

нака методами ГЖХ и ТСХ в почЕе,растениях,воде водоемов.    76

8.    Зременные методические указания по определению протио-фоса в растительном материале,почве и воде методами

ГКХ и ТСХ.    82

9.    Временные методические указания по определению се-лекрона в растительной продукции,почве и воде ТСХ

и ГЖХ.    91

10.    временны» методические указания по определению хлоро

фоса энзимно-хроматографическим методом в листьях болладоны и траве мяты перечной.    90

11.    Методические указания по определению в зерне и про

дуктах его переработки ФОП.применяемых для обеззараживания зерна и зернохранилищ,хроматографическими методами.    ₁₀₅

АЗОТСОДЕРЖАЩИЕ ПЕСТИЦИД]

1.    Методические указания по определению остаточных количеств пкрекса,диносеба,каратака,ДНОКа в воде,почве.

и растительном материале    хроматографическими методами. цу

2.    Временные методические указания по определению байгой*

методом ГЗКХ в молоке.    138

3.    Временные методические указания по определению барнона в воде,почве,растениях методом ГЖХ.

- 261 -

4.    Методические указания по определению кронетона

в воде,почве,корнеклубнеплодах и растительном материале ТСХ,    *54

5.    Временные методические указания по определению ридо-

кила методой хроматограмм в воде,почве,растительном материале,    *50

6.    Временные методические указания по определению ров-

роля методом ТСХ в поде,почве,томатах,картофеле,винограде, виноградном соке и ринэ.    I6S

7.    Временные методические указания ронилана в растительной продукции,почве и воде ТСХ и    ГЖХ.    175

8.    Временные методические указания по определению эвисех-

та в растительной продукции,почве и в воде ТСХ,    182

9.    Временные методические указания по определению эти-

римала в растительной продукции,почве и воде ТСХ,    188

ПРОЧИЕ ПЕСТИЦИДЫ

I* Времонние методические указания по определению гора-нилбутирата методом ГИХ и ТСХ в почве,воде,корнеплодах и листьях сахарной свеклы.    *^5

2.    Временные методические указания по определению бром-

пропилата(неорона) в яблоках и цитрусовых методом газовой хроматографии.    206

3.    Временные методические указания по определению иллокса-на в воде и печво методом ГП.

4.    Временные методические указания по хроматографическому определению иэатрина в печво    и    воде.    217

5.    Временные методические указания по определению омаЯта методами Г££Х и ТСХ в почве,в воде и растениях.

6.    Методические указания по определению хлората магния в почве,воде,растениях(подсолнечнике,луке) и в воздухе полярографическим и хроматографическим (ТСХ) методами.

7.    Временные методические указания по определению оста точных количеств некоторых аналогов ювенильного гор иона (алтосида.алтозара и п-<5ром*енилового эфира гераниола) в растениях картофеля и почве методами ТСХ и Ш.

Дополнения

Л- 71938 от 20Л«СЗгТирах 2000 экз. .заказ Н» шз Типография ВАСИ:ИЛ

Настоящие методические указания предназначены для

санитарно-эпидемиологических станций и научно-исслодова-телъских учреждений Минздрава СССР,а также ветеринарных_вагрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других Министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания,кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качество официальных группой экспертов при Госкомиссни по химическим средствам борьбы с вредителями,болезнями растений и сорняками при ИЛ СССР.(Председатель группы экспертов - М.Д.Клисенко).

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования саяэпидслу^бы ИМПиТМ им.Мар-нпновского Е.Я. и лабораторным советом при Главней санитарно-эпидемиологическом управления Кик здрава СССР.

^ПУТВЕЙЙДАЮ^М Заместитель Главного Государственного санитарного врача СССР А.И.Зайченко 6 августа 1981 г М 2417-81г

Временные

методические указания по определению хлорофоса энзимно-хроматографическим методом в листьях белладонны и траве мяты перечной

I. Хлорофос /трихлорфом, дмптерекс, ногувон, дилокс, тугом, фосхлор/ применяется как контактный и кишечный инсектицид.

Действующее начало препарата - 0,0-лиметил-/1-оксм-2,2,2,-трмхлорэтил/-фосфонат.

Мол. вес 257,45

Хлорофос - белый кристаллический порошок. Растворимость в г на ЮОг в воде 12,3; в бензоле 15,2; в хлороформе 75. Трудно растворим в парафиновых углеводородах. Т.пл. 73-74°С, давление паров хлорофоса при 20°С составляет 7,8*10“^мм рт.ст, летучесть при 20°С - 0,11к!г/м³. Хлорофос устойчив в кислой среде и быстро гидролизуется б щелочной. ПДК б лоздухе рабочей зоны -0,5мг/м^э. ПДК в воде водоемов - 0,05мг/л. ДОК в растительных продуктах питания - 0,1-0,2мг/кг. Остатки хлорофоса в продуктах животноводства не допускаются. ДОК в лекарственных травах не установлены.

-$9-

2. Методика энзимно-хроматографического определения хлорофоса в листьях белладонны и траве мяты перечной

2.1. Основные положения.

2.1 Л. Принцип метода. Метод основан на извлечении хлорофоса из исследуемой пробы органическим растворителем, очистке экстракта^ и определении методом хроматографии в тонком слое с енэмм-иым проявлением поело активации препарата на пластинке . Хлорофос, угнетающий холинэстеразу, проявляется в виде белых пятен на голубом фоне.

2.1.2.    Метрологическая характеристика метода:

Диапазон определяемых концентраций - от Юнг до 50мг;

Предел обнаружения Юнг /0,01мкг/,    0,05мг/кг;

Среднее значение определения стандартных количеств пестицидов в беллодонне - 85%, в мяте - 75% из 5 параллельных определений; Стандартное отклонение^ «0,5 Относительное стандартное отклонение^ *5,8%

Доверительный интервал среднего при Р «0,95 м п *5 равен ± 0,61

2.1.3.    Избирательность метода

Прочие фосфороргакические пестициды определению ые мешают.

2.2. Реактивы и растворы Ацетон ч.д.а. ГОСТ 2603-79 Хлороформ х.ч. ГОСТ 20015-74 н-Гексан х.ч. ТУ 6-09-3375-76 Все растворители свежепврегьаниые.

Натрий сернокислый безводный х.ч. ГОСТ 416Г*79 Этиловый спирт ректификат 'ГУ 6-09-17-10-77 Индоксилацетат ч.д.а. ТУ 6-09-07-1156-78

-IOC-

Калий железистосинеродистый ч. ГОСТ 4207-65 -0,05 М р-р (2,Иг в 100 мл воды)

Калий желеэосинеродистый ч. ГОСТ 4206-75 -0,05 М р-р (I_t645r в 100мл воды)

Аммиак водный 2Ь% ч.д.а. ГОСТ 3760-79

Буферный раствор pH-8,69 - готовят раствор смеси ортофосфорной х.ч. ГОСТ 6552-80 ( 2 1мл), уксусной х.ч. ГОСТ 18290-72 (2,3мл) и борной ч.д.а. ГОСТ 9656-75 (2,47) кислот и доводят дистиллированной водой ГОСТ 6709-72 до I л. Для получения буфера pH-8,69 к 100мл указанной смеси прибавляют 62,5мл 0,2н р-ра едкого натра, который готовят растворением 0,800г ^/аОН ч.д.а. ГОСТ 4328-77 в дистиллированной воде в мерной колбе емкостью 100мл.

Ферментный препарат готовят из свежей однократно замороженной печени крупного рогатого скота, которую можно использовать в течение 6 месяцев при дапьнейшем ее хранении з холодильнике. 1г печени растирают в ступке с 9мл буферного раствора, фильтруют через вату и разбавляют полученную сыворотку (к 1мл сыворотки добавляют 4мл буферного раствора) и используют этот свежеприготовленный раствор для опрыскивания пластинок.

Силикагель марки КСК ТУ 6-09-2523-72 дробленный и просеянный через сито 100меш Се$0* -2Н₂0 ч.д.а. ГОСТ 3210-46 просушенный в сушильном гамфу при £*160°С в течение 6 часов

Хлороф-гс х.ч. ГОСТ 19856-74

2.2.1. Стандартные растворы хлорофоса.

(А)

Осмормой стандартный раствор хлорофоса - 100мкг/мл (10 мг

-101-

хммнчески чистого препарата /100%/ растворяют в 100мл ацетона); Рабочий стандартный раствор (Б) готовят разбавлением основного раствора ^ИА^И -1мл раствора "А" доводят в мерной колбе до 100мл ацетоном (содержание препарата составляет 1мкг/мл)

2.2.2.    Проявляющие реактивы

10мг индоксилацетата растворяют в 6мл этанола, прибавляют 6мл буферного раствора, 1мл раствора железосинеродистого калия м 1мл раствора жилезистосинеродистого калия. Проявляющий реактив готовят непосредственно перед опрыскиванием.

2.2.3.    Лекарственное растительное сырье Лист белладонны ГФ X издания, ст.276.

Листья мяты перечной обмолоченные ГОСТ 23-768-79

2.3.    Приборы и посуда

Колбы конические плоскодонные на 250мл ГОСТ 10394-72 Колбы круглодонные на 250мл со шлифом ГОСТ 10394-72 Воронки делительные на 500мл ГОСТ 8613-75 Воронки стеклянные ГОСТ 8613-75 Колбы мерные на 100мл ГОСТ 1770-74 Цилиндры мерные ГОСТ 1770-74

Мерные пробирки со шлифом ГХХ.Г 1770-74 ем. 5-Юмл Эксикаторы ГОСТ 6371-73 Камера для хроматографирования Стеклянные пластинки 9x12см Пульверизаторы стеклянные

Компрессорная установка УК-40-2, ЦРГУ 64-1-2749-73

Цикропипетки ГОСТ 1770-74

Испаритель ротациокмый ИР-IU ТУ -25-1I-917-76

-102-

Аппарат для встряхивания марки АВУ-I ТУ-64-1-24-51-72 Шкаф сушильный лабораторный ГОСТ 7366-55 Холодильники стеклянные лабораторные ГОСТ 9499-73 Шаровая мельница

2.4.    Подготовка к определению

2.4.1.    Приготовление пластинок

35г силикагеля КСК растирают с 2г гипса и 90мл воды дистиллированной до образования однородной массы. Состав указан на 12 пластинок. Юг суспензии наносят на пластинку и равномерно распределяют по поверхности. Сушат пластинки в строго горизонтальном положении, хранят в эксикаторе.

2.4.2.    Отбор проб

Для проведения исследований отбирается средняя проба лекарственного растительного сырья весом I кг. Из каждой пробы для анализа методом квартования отбирается три навески по Юг.

2.5.    Проведение определения 2.5.1. Экстракция

Юг пробы помещают в колбу с притертой пробкой, заливают 80мл хлороформа и экстрагируют 1,5 паса на аппарате для встряхивания. Хлороформный экстракт отделяют от растительной массы через бумажный фильтр, фильтрат собирают в колбу. Растительную массу на фильтре трижды промывают хлороформом по 30мл. Промывные порции хлороформа объединяют с фильтратом и отгоняют досуха на водяной бане при температуре не более 40°С. Остаток не должен содержать хлороформа, после чего обрабатывает его 3-4 раза теплой водой дистиллированной по 15-20мл, фильтрует через бумажный

фильтр

-юз-

”синяя лента”. Фильтрат собирают в делительную воронку. Из водного раствора хлорофос экстрагируют хлороформом трижды равным объемом. Хлороформные экстракты собирают вместе, сушат б/в сульфатом натрия, отфильтровывают, растворитель отгоняют до /%✓ 1мл. Переносят остаток в мерную пробирку с притертой пробкой, смывают хлороформом в колбу для отгонки и доводят объем экстракта в пробирке до 2мл и хорошо перемешивают.

2.5.2. Хроматографирование

Для уменьшения краевого эффекта с хроматографической пластинки снимают с краев вдоль направления движения растворителя (со стороны 12см) по 2-Змм слой адсорбента. Затем пластинку делят на 4 равные части. На I-ую и 3-ю полосы на расслоянии 1,5см от нижнего края наносят по 5-10мкл стандартного раствора ”Б”, т.е.

5нг и Юнг хлорофоса, на 2-ю и 4-ю - 2мкл и 40мкл соответственно пробы. Пластинку с нанесенными растворами помещают в хроматографическую камеру, в которую налита смесь ацетона с гексаном 1:1 за 30 минут до хроматографирования. Когда фронт растворителя поднимется на высоту 10см,пластинку вынимают из камеры и дают растворителю испариться. Затем пластинку опрыскивают разбавленным раствором аммиака (I ч.аммиака + 4 ч.воды) до слабого увлажнения слоя. Экспозиция 15 минут при комнатной температуре. После активации и высушивания .<ри комнатной температуре пластинки обрабатывают свежеприготовленным ферменткь.м раствором и выдерживают в течение 60 мин в насыщенном водными парами термостате при температуре 38°С (для увлажнения в сушильный шкаф ставят чашку Петри с водой). Поело инкубации пластинки обрабатывают проявляющим реактивом и помещают в термостат, при той ж& температуре. Хлорофос проявляется в течение Юмин., в г-.иде

бвлих пятом ма голубом фона.    С⁷=0,34

/

Чувствительность определения - 0,01 мкг на пластинке, что при навеске Юг и общем объеме зкстракта 2 мл составляет 0,05 мг/кг. В случае необходимости чувствительность метода можно увеличить до 0,025мг/кг за счет уменьшения общего объема экстракта до 1мл.

2.6. Обработка результатов анализа.

Количественное определенно проводят путем сравнения площадей пятен пробы и стандартов. Причем, если пятио меньшего объема пробы (2мкл) четко видно и приближается по площади к пятну стандарта 5нг, количественный расчет проводят по этому пятну пробы. Пропорциональная зависимость площади пятна от концентрации соблюдается в пределах от Юнг до 50нг.

Содержание препаратов в пробе (мг/кг) рассчитывают по формуле;

х £    '    V    • юоо

Sr ■ Tfr • Р

Ji - содержание препарата в стандарте, мкг

Sf - площадь пятна стандарта, мм*

о

- площадь пятна пробы, мм*” й - объем экстракта, нанесенного на пластинку, мкл У - общий объем экстракта, мл £ - масса пробы, взятой для анализа, г

3.0.    Требования боэопаси^>сти.

Соблюдаются требования безопасности обычно рекомендуемые для работы с химическими реактивами и Ф0С. Обработку пластинок индоксилап^татом следует проводить в вытяжном шкафу.

4.0.    Настоящие методические указания разработаны Письменной К.В. /'ВКИИПШГОКС, Киев/,

Крамаренко Г.И., Горлачевой С.С. 'ШР. Москва/