ГОСУДАРСТВЕННАЯ комиссия по химическим средствам БОРЬл'и
С ВРЕДИТЕЛЯМИ, БОЛЕЗШШ РАСГШы И СОРНЯКА,1И ПРИ МСХ СССР
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОДИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ Б ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ
Чаоть УП
Москва - 1976 г.
II
ОПРЕДЕЛЕНИЕ БОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТ/щИДОВ В ШСЕ, ШСОПРОДУКТАХ И ШчВОТНШ ЖИРАХ ХРОМАТОГРАФИЕЙ В
ТОНКОМ СЛОЕ
Принцип метода,
Метод основан на экстракции пестицидов из пробы ацетоном* первичной очистке экстракта от основной части жира "вымораживанием", окончательной адсорбционной очистке экстракта путем колоночной хроматографии на силикагеле АСК и последующей хроматографии очищенных и сконцентрированных экстрактов в тонком слое окисиалюг'ния или. силикагелл.
Чувствительность метода: С,02-0,08 мг/кг продукта*
Реактивы и растворы.
Гексан, хч.
Петролейный эфир, (температура кипения 40-70°), ч.
Ацетон, ч.
Бензол, чда.
Натрий сернокислый безводный, хч, просушенный при 150° в тел з-аие 5 часов.
Натрий сернокислый - водный раствор и насыщенный водный рас* вор.
Адсорбенты для тонкослойной хроматографии;
- окись алюминия П степени активности - адсорбент предварительно многократно промывают дистиллированной водой до отрицательной реакции на ион хлора и высушивают на воздухе, просеивают через сито 100 мош;
- силикагель марки КОК (очистку см. "Методы определения микроколичеств пестицидов в продуктах питания, почве и воде”,
М., I960);
- пластинки "Силуфол" (ЧССР), предварительно промытые водой в хроматографической камере и просушенные на воздухе, перед использованием активируют в.сушильном шкафу при 65° в течение 4 мин„
Кальций сернокислый, npocynetmutt при 150° в течение б час^ з.
х) Разработан Шуыковой И,А., Карповой И И,, Ликуновой С.А. и Рузанковой Л.Д. (Всесоюзный научно-исследовательский институт мясной промышленности)*
Утверждено 23 января 1975 г.,М 1222-75.
12
Стандартные растворы пестицидов:
- основной раствор: р,р-ДЛТ и р,р~ДДЭ по 16 мг и и ^ -ГХЩ* по 64 ит растворяют в 100 мл гексана;
* рабочие j астворы готовят путем разведения основного раствора гексаном в 4 и 8 раз*
Силикагель АСК.
Этиловый спирт, гидролизный, высшей очистки.
Проявляющий реактив:
ОД г азотнокислого серебра растворяют в I мл дистиллированной воды, добавляют 2 мл раствора аммиака (уд*вес 0,9) и доводят лбъем ацетоном до 20 мл.
Гигроскопическая вата, обезжиренная в аппарате Соколята.
Приборы и посуда.
Сито на 100 меш (диаметр отверстий 0Д4? мм).
Гомогенизатор или микроизмельчитель тканей.
Ртутно-кварцевая лампа (ПРК-2 или ПРК-4).
Прибор для отгонки органических растворителей или роторный испаритель.
Камера для хроматографирования (стеклянный сосуд с притертой крышкой или эксикатор).
Пульверизаторы стеклянные для опрыскивания пластинок.
Камера для опрыскивания.
Вани водяные.
Колбы с притертыми пробками на 260 мл.
Длительные воронки не 100, 250 и 600 мл.
Колбы мерные на 50 и 100 мл.
Пипетки на 5 и 10 мл.
Колбы круглодонные на 150, 250 и 500 мл.
Медицинские шприцы на X мл с делениями 0,020-0,025 «л для нанесения проб и стандартных растворов.
Стеклянные хроматографические волонки 400 х 20 мы.
Пластинки для ;фомдтографйи. Стеклянную пластинку 9x12 см моют водой с содой, хромовой сиесыо, дистиллированной'водой, сушат, перед использованием .ir-отирает спиртом.
13
Приготовление пластинок с тонким слоем адсорбента
Окись алюминия и сернокислый кальций тщательно небольшими порциями перетирают в фарфоровой ступке, переносят в колбу и встряхивают с бидистиллированной водой до образование однородной массы* Эта масса должна иметь консистенцию, позволяющую ей свободно растекаться по поверхности стеклянной пластинки без расслоения на твердую фазу и воду.
Так как различные партии адсорбента часто отличается по своим свойствам, количество добавляемой воды подбирают опытным путег, варьируя его а небольших пределах.
При это 1.1 критерием служит консистенция получающейся сорбционной массу:.
Соотношение компонентов - окись алюминия: сернокислый кальции: вода - 50.4:90 - 100; силикагель: сернокислый кальций; вода « 35:2:90.
10 г сорбционной массы (2 чайных ложки) наливают на пластинку и равномерно распределяют по всей поверхности. Пластинки сушат при комнатной температуре 18-20 часов и хранят в эксикаторе.
Описание определения
Подготовка пробы.
2G0-250 г образца 1-3 раза измельчают на мясорубке, тщательно перемешивают.
Рекомендуется дополнительное более тонкое измельчение образцов (кроме «провой ткани) в гомогенизаторе.
Экстракция .пестицидов и первичная очистка экстрактов.
25 г измельченного образца заливают 50 ш ацетона, тщательно перемешивают и нагревают на горячей водяной бане до заьппания растворителя,, Колбу охгпждают, добавляют в нее Ю мл с .лажденногс 1% раствора сернокислого натрия, перемешивают и охлаждают 30 минут и ледяной ^ане. Затем сливают ацетоновый с,ой в круглодонную колбу через слой обезжиренной Ьаты. Экстракцию ацетоном с последующим вымораживанием жира повторяют erne 2 раза. Из объединенных экстрактов отгоняют ацетон на
14
роторном испарителе или в приборе для отгонки органических растворителей температура бани не более 70+2°) и трижды экстрагируют ПетролеИным эфиром: порциями 20 мл, 10 мл и IG шь Продолжительность Т-Й экстракции ■ I .час, последующих - 15 минут* При этом каждый раз перемешивают содержимое в течение 2-х минут, дают слоям разделиться и слой петролейного эфира переносят в делительную воронку (емкость - 500 мл) с 40 мл 2% раствора сернокислого .натрия. Смесь осторожно перемешивают в течение 2 минут, дают слоям разделиться и водную фазу отбрасывают.
Для улучшении разделения слоев можно добавить несколько мл насыщенного раствора сернокислого натрия. Операцию промывки экстракта повторяют еще 2 раза, после чего петролейный эфир сливают в стакан с 20 г безводного сернокислого натрии, споласш вают делительную воронку дважды 5 мл петролейяоявго эфира. Подсушенный экстракт количественно переносят в мерный цилиндр на 50 ил и доводят петролеМшан эфире л до 30 мл. Стакан с сернокислым натрием сохраняют.
К о л о н о ч н ая хр о ыа т о гр афп я
Ь нижнюю часть хроматографической колонки помещают около 500 мг обезжиренной ваты. Затем насыпают силикагель АС К (75 мл длн очг.'тки экстрактов свиного жире и 70 мл - для всех остальных).
Силикагель слегка уплотняют постукиванием, колонку промывают 50 ил петролейного эфира и отжигают сорбент с помощью рези овой груши. Наносят на колонку 30 мл экстракта, дают жидкости стечь и снова отжимают сорбент. Прошедший через колонку растворитель отбрасывают.
Пестициды элюируют I10 мл смеси бензол-потролойный эфир (30:60), Злюирующу» смесь вносят порциями по 30 мл, споласкивая каждый раз цилиндр из-под экстракта и стаканчик с безводным сернокислым натрием, в котором под ушивали экстракт.
Злюат собирают в круглодонную колбу на 150 цд. Через 10 мин. после отекании последней порции растворителя отжимают сорбент с поиидьх) роз.цовой груии. 9
Злпат упаривают до объема ОД ыл и nanocf на хроиато-J р а»; л ч и с к уп пластинку.
15
Все органические растворители, остающиеся после упаривания проб и промывки колонок могут использоваться повторно после перегонки над активированным углей или азотнокислым серебром (I г/л).
Хроматография в тонкого слое.
Перед нанесением проб хроматографические пластинки размечают по трафарету, как показано на рис Л. Слой в В мм с вертикальных сторон удаляют, что способствует выравниванию фронта растворителя и улучшает разделение веществ.
Пробу и стандартные раствора наносят медицинским шприцом строго в одну точку, чтобы диаметр пятна не превышал 5-6 мм.
Для получения количественных данных каждый образец анализируют дважды: первый раз на пластинку по обе стороны от пробы наносят в три точки стандартный раствор с содержанием пестицидов I; 5 и 10 мкг (по ДдТ); второй раз содержание пестицидов в "стандарте" подбирается с учетом тайных первого определения .
Б случае необходимости проведения серийного анализа в производственных условиях можно наносить в одну точку стандартный раствор с содержанием ДДТ-0,5 мкг и три испытуемых пробы*
При необходимости количественной характеристики проб с остатками пести»|идс^0,5 мкг анализ повторяют, как .указано выше.
В качестве подвижного растворителя используют 1$~ый раствор ацетона в гексане*
Содержание остатков пестицидов определяют путем измерения на хроматограммах площадей пятен веществ исследуемой пробы и стандарта со строго одинаковой интенсивностью окраски. Для измерения площадей с хроматограммы снимают копию на кальку, просветленную вазелиновым маслом. Площадь пятен определяют путем наложения копий на кальке на миллиметровую бумагу.
Формула для расчета содержания остатков пестицидов в исследуемом образце (в мк/кг);
16
5 л . юоо
^ — .л
S,- 25. ЮОО
где Spl* площадь пятна вещества испытуемой пробы;
Зс- площадь пятна вещества стандарта;
А - содержание вещества в пятне стандарта в мкг; 25 - навеска образца, взятая для определения в г.