ГОСУДАРСТВЕННОЕ

САНИТАРНО-ЭПВДМИОЛОП1ЧЕСКОЕ НОРМИРОВАНИЕ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МЕТОДИЧЕСКИХ ДОКУМЕНТОВ, % Wfi* ,, НЕОБХОДИМЫХ ДЛЯ ОБЕСПЕЧЕНИЯ

ПРИМЕНЕНИЯ ФЕДЕРАЛЬНОГО ЗДКОН/Г^ ОТ 12.06.08 №00тФЗ    Мйе|

^3vf    V;

\№?<vtkW*^/y

44 V

■? л

Часть 14

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Сборник

методических документов, необходимых для обеспечения применения Федерального закона от 12 июня 2008 г. № 88-ФЗ «Технический регламент на молоко и молочную продукцию»

Часть 14

Продолжение таблицы

1 2 3 4 5 6 7 6 О-метил-О- фенил-S-npo- пилтиофосфат 190 190 1 мин 54 с 3 мин 0,53 0,85 1.0 0,2 7 О-Этил-О-ме- тил-Б-пропил- тиофосфат 127 4 мин 42 с 0,19 0,5 0,2 ■ 8 0,0-Диметил- S-пропилтио- фосфат 127 3 мин 30 с 0,14 0,5 0,1 9 О-Этил-О-ме- тилтиофосфат 127 2 мин 12 с - 0,09 2,0 2,0 - 10 0,0-Ди метил -тиофосфат 127 1 мин 42 с — 0,07 2,0 1,0 - Фаза - 3 % OV-101 на инертоне-супер [2], температура испарителя 225 °С 1 Г етерофос 190 2 мин 42 с - — 0,1 0,02 - * Для удобства работы можно приготовить смеси, в которых концентрация каждого соединения соответствует его концентрации, указанной и таблице для рабочих растворов. Смесь I: гетерофос, метаболиты №1,2,3,4, 6. Смесь И: гетерофос, метаболит № 5. Смесь III: метаболиты № 7,8, 9,10. ** В скобках указана концентрация раствора при работе с ДПР.

Условия хроматографирования. Хроматограф марки «Цвет» с ТИД и ДПР. Колонка стеклянная спиральная длиной 1 м с диаметром 3 мм, заполненная хроматоном N-AW-HMDS (0,16—0,20 мм) с 5 % SE-30 либо инертоном-супер N (0,16—0,20 мм) с 3% OV-101. Рабочая шкала электрометра при работе с ТИД 2 • Ю~¹⁰А, при работе с ДПР 20 * 10“¹²А. Скорость протяжки диаграммной ленты 240 мм/ч. При работе на ТИД расход газа-носителя (азота) 22 мл/мин, водорода - 14—17 мл/мин, воздуха - 400 мл/мин. При работе на ДПР расход газаносителя (азота) 60 мл/мин, расход на продувку детектора 150 мл/мин. Температура (°С): испарителя - 210, детектора - 230, колонки -190 и 127.

Время удерживания и пределы обнаружения исследуемых соединений при указанных условиях определения методом ГЖХ приведены в таблице 30.

Обработка результатов анализа. Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки. Для этого до и после анализа проб вводят в хроматограф по 3—5 мкл рабочих стандартных растворов. Измеряют высоту пиков и вычисляют среднее арифметическое из пяти

14

определений. Если при введении в хроматограф аликвотной части (3— 5 мкл) конечного экстракта пробы получаются слишком большие пики или происходит «зашкаливание», пробу разбавляют «-гексаном. Для определения гетерофоса и всех его метаболитов каждую пробу следует анализировать при двух температурах колонки (190 и 127 °С) используя соответствующие стандарты.

Содержание пестицида или его метаболитов в пробе (X, мг/кг, мг/л) рассчитывают по формуле

AV₂H_iVK

H₂V,P

А - количество пестицида или метаболита в стандартном растворе, введенном в хроматограф, мкг/мл;

V₂ - объем стандартного раствора, введенного в хроматограф, мкл;

Н₂ - высота пика стандартного раствора, введенного в хроматограф, мм;

Нi - высота пика исследуемого раствора, мм;

V/ - объем экстракта, введенного в хроматограф, мкл;

К- объем анализируемого экстракта, мл;

Р - навеска или объем анализируемой пробы, г (мл);

К ~ поправочный коэффициент, составляющий для мяса, молока и яиц 1,2; 1,4; 1,5 соответственно.

Требования безопасности. Соблюдают общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.

15

ББК 51.23 С23

С23 Сборник методических документов, необходимых для обеспечения применения Федерального закона от 12 июня 2008 г. № 88-ФЗ «Технический регламент на молоко и молочную продукцию».—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2010.—76 с.

ISBN 5—7508—0771—1

В сборник включены методические документы, содержащие правила и методы исследований (испытаний) и измерений, а также правила отбора образцов для проведения исследований (испытаний) и измерений, в соответствии с постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации Г. Г. Онищенко от 08.12.2008 № 67.

Настоящие «Методические указания» предназначены санитарно-эпидемиологических станций Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР к лабораторий других министерств и ведомств занижающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

«Методические указания» подготовлены Главным санитарно-эпидемиологическим управлением Министерства здравоохранения СССР, Государственной комиссией по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при Министерстве сельского хозяйства СССР, Всесоюзным научно-исследовательским институтом гигиены и токсикологии пестицидов (лаборатория аналитической химии пестицидов и лаборатория кибернетических исследований пестицидов в окружающей среде), Всесоюзным научно-исследовательским институтом химических средств защиты растений (сектор анализа пестицидов).

ББК 51.23

Технический редактор Г. И. Климова Подписано в печать 18.02.10

Тираж 200 экз.

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадковский пер., д. 18, стр. 5,7

Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован отделом издательского обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а Отделение реализации, телУфакс 952-50-89

© Роспотребнадзор, 2010 © Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2010

Содержание

кормах методом тонкослойной хроматографии................*..................................4

Нормативы и методы микробиологического контроля продуктов детского питания, изготовленных на молочных кухнях системы

здравоохранения.................................... 16

МеЮдические указания по выделению, идентификации и

количественному определению насыщенных, моно-, би-, три- и ряда полициклических ароматических углеводородов в пищевых

продуктах: № 4721—88.................. 23

Методические указания по обнаружению, идентификации и определению содержания деэоксиниваленола (вомитоксина) и

зеараленона в зерне и зернопродуктах...............................................................31

Временые методические указания по определеню митака в растительном материале, почве, воде, органах, тканях и молоке животных методами

тонкослойной и газожидкостной хроматографии.............................................45

Методические указания по обнаружению и определению содержания общей ртути в пищевых продуктах методом беспламенной атомной

абсорбции.................. 52

Атомноабсорбционные методы определения токсичных элементов в

пищевых продуктах и пищевом сырье........................ 60

3

Утверждено 08.06.87 № 4339-87 Методические указания по определению гетерофоса, этафоса и их метаболитов в биологическом материале, молоке, яйцах методом газожидкостной хроматографии**

Краткая характеристика препаратов. Характеристика гетерофоса приведена на с. 61, этафоса - на с. 65.

Характеристика метаболитов этафоса и гетерофоса приведена в табл. 28.

28. Характеристика метаболитов гетерофоса и этафоса

Химическое название Структурная формула Брутто формула Молекулярная масса О-Этил-О-фенил- фосфат о с2н5ох|| Р-ОН сйн5оу С8Н„04Р 202 О-Этил-S-пропил-фосфат О с2н5о х|| P-SC3H7 нет C5HI303PS 184 О-Этил-О-фенил-S- метилтиофосфат о с2н5о II P-SCHj C6HsO / C9H1303PS 232 О-Этил-О-фенилтио- фосфат О с2н50 И Р-ОН с6и5о/ CgHnOjPS 218 О-Этил-0,2,4-дихлор- фенилтиофосфт О с2н5о х|| P-SH 2,4С12С6НзО/ c8h9o3ci2ps 251,5

’ Разработаны: М.В. Письменной, М.А. Клисенко (ВНИИГИНТОКС) [1]; В.Р. Хаитовым, Г. Л. Холмухамедовой, А.Д. Сайфутдиновой (УзНИВИ) [2].

8

Продолжение

Химическое название Структурная формула Брутто формула Молекулярная масса О-МетшьО-фенил-S- пропилтиофосфат о сн3ох1| P-SC3H7 с6н5о C10HI5O3PS 246 О-Этил-О-метил-S- пропилтиофосфат О с2н5о х|| P-SC3H7 сн3о — CeHuOjPS 198 0,0-Диметил-8-про- пилтиофосфат О II (CH30)2P-SC3H7 C5H1303PS 184 О-Этил-Ометилтио- фосфат О с2н5о Хн P-SH сн3о^ C3H903PS 156 0,0-Диметилтиофос- фат О II (СНзОЬР-SH C2H703PS 142

Принцип метода. Методика основана на определении S-пропиль-ных ФОП (гетерофоса, этафоса и десяти их метаболитов) методом ГЖХ. Указанные соединения извлекают из субстратов смесью ацетона и 0,1 н. ЫС1 (9 :1) [1], гетерофос из молока и яиц извлекают смесью ацетона с этанолом (3 :1) [2|. Экстракты очищают перераспределением в системе жидкость - жидкость.

Определение методом ГЖХ проводят на хроматографе, снабженном ТИД и ДПР. Используют неподвижные фазы SE-30 на хроматоне N-AW-HMDS и 3 % OV-101* на инертоне-супер. Для разделения пестицидов и их метаболитов определение проводят в изотермическом режиме при двух температурах -190 и 127 °С.

Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 29.

9

Избирательность метода. Определению могут мешать ФОП, имеющие близкие времена удерживания.

Реактивы и растворы. Ацетон ч. Хлороводородная кислота ч., 0,1 н. водный раствор. н-Гексан ч., х.ч. Спирт этиловый, ректиф. Сульфат натрия безводный свежеприготовленный. Вода дистиллированная.

29. Метрологическая характеристика метода определения гетерофоса, этафоса и их метаболитов

Вещество Исследуемый объект Нижний предел обнаружения, мг/кг Сред нее значе ние опреде ления, % Отно ситель ное стан дартное откло нение Доверительный интервал среднего при Р~ 0,95, w-5, ±% Гетерофос » » Молоко Яйца Биологические субстраты* 0,002 0,002 0,001—0,01** 70 65 79 6,7 6.3 8.3 8.3 7,8 10.3 Этафос То же 0,005—0,05 83 12,2 15,1 Метаболиты О-Этил-О-фенил фосфат » 0,001—0,01 74 13,5 16,8 О-Этил-8-прогшлтиофос- фат » 0,005—0,05 79 13,6 16,9 0-Эгал-0-фенил-8-метил- тиофосфат » 0,005—0,05 81 8,1 10,1 О-Этил-О-фенилтиофос- фат » 0,05—0,5 70 3,8 4,7 0-Этил-02,4-дихлор- фенилтиофосфат » 0,01—0,1 74 11,1 13,7 О-Метил-О-фенил-S-npo- пилтиофосфат » 0,01—0,1 78 4,3 5,3 О-Этил-О-метил-8-про- пилтиофосфат » 0,01—0,1 84 10 12,4 0,0-Диметил-8-пропил- тиофосфат » 0,005—0,05 80 5,5 6,8 О-Этил-О-метилтиофос- фат » 0,05—0,5 81 10,9 13,5 0,0-Диметилтиофосфат » Г 0,05—0,5 78 13,8 17,1 * Расчет проведен суммарно для различных органов (печень, почки, мозг и др.). ** Приведены нижние пределы обнаружения в исследуемых объектах в зависимости от взятой навески (2—20 г).

10

Неподвижная фаза - 5 % SE-30 на хроматоне N-AW-HMDS (0,16— 0,20 мм), 3 % OV-101 на инертоне-супер (0,16—0,20 мм). Азот особой чистоты, содержание 0₂ не более 0,003 %. Водород. Основные стандартные растворы гетерофоса, этафоса и их метаболитов в «-гексане по 1000мкг/мл. Хранят в холодильнике бмес. Рабочие стандартные растворы гетерофоса, этафоса и метаболитов в «-гексане по 10 мкг/мл. Хранят в холодильнике в течение двух недель. Готовят серию стандартных растворов.

Приборы и посуда. Газовый хроматограф с ТИД и ДЭЗ марки «Цвет», «Газохром» и др. Микроизмельчитель тканей РТ-2 или мясорубка. Прибор для отгонки растворителей (ротационный вакуумный испаритель) типа ИР-1М. Микрошприцы на 10 мкл (МШ-10). Колбы: конические со шлифом и пробками вместимостью 100; 250 и 500 мл; круглодонные со шлифом для отгонки растворителей; мерные вместимостью 50 и 100 мл. Делительные воронки на 50; 100 и 250 мл. Воронки химические. Пробирки мерные со шлифом вместимостью 5 и 10 мл. Пипетки на 1; 5 и 10 мл. Микропипетки на 0,1 мл.

Подготовка к определению. Для проведения клинических исследований на содержание гетерофоса и этафоса отбирают 100 мл суточной мочи; 2 мл крови.

Подготовка хроматографической колонки для ТЖХ\ Колонку заполняют общепринятым в хроматографии способом, кондиционируют 48 ч при температуре на 20 °С выше рабочей температуры колонки.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстракта. Исследуемые органы и ткани (печень, почки, селезенка, легкие, головной мозг, мясо) измельчают в микроизмельчителе тканей или мясорубке. Отбирают 2—20 г средней пробы (для пищевых продуктов навеска 20 г), заливают в зависимости от взятой навески 15—250 мл смеси ацетона с 0,1 н. хлороводородной кислотой (9 :1) и оставляют на 1 ч, периодически перемешивая пробу стеклянной палочкой и встряхивая. Затем растворитель сливают в делительную воронку, фильтруя через вату. Заливают пробу новой порцией смеси и экстрагируют еще 30 мин. Экстракты объединяют. Пробу промывают смесью дважды порциями по 5—10 мл и смывы присоединяют к экстракту. В делительную воронку приливают 50 мл дистиллированной воды, перемешивают и добавляют 50 мл «-гексана. Осторожно встряхивают в течение 5 мин. Отделяют верхний «-гексановый слой, сливая его через безводный сульфат натрия (7—10 г), насыпанный на фильтр, вложенный в воронку. Из нижнего водного слоя экстрагируют ФОП «-гексаном еще два раза порциями по 40 мл, объединяя экстракты

И

с первым. Упаривают экстракт на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани 40—45 °С примерно до 1 мл. Переносят остаток в мерную пробирку со шлифом, ополаскивая колбу небольшими порциями (по 0,3—0,4 мл) w-гексана. Доводят объем в пробирке //-гексаном точно до 2 мл, перемешивают и аликвоту хроматографируют.

К 2—5 мл цельной крови, собранной в стаканы вместимостью 50— 100 мл, прибавляют при непрерывном перемешивании стеклянной палочкой безводный сульфат натрия до образования сухой массы (20 г). Затем приливают 30—40 мл диэтилового эфира и 10 мин перемешивают пробу с эфиром. Сливают эфир в колбу для отгонки растворителей, фильтруя через фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют еще раз. Эфирные экстракты объединяют, упаривают на ротационном испарителе при температуре бани 20—25 °С до объема 1—2 мл. Остаток упаривают досуха при комнатной температуре. К сухому остатку в колбе прибавляют 1 мл н-гексана и аликвоту хроматографируют.

Пробу мочи (20 мл) переносят в делительную воронку, разбавляют 20 мл дистиллированной воды, перемешивают и прибавляют 20 мл диэтилового эфира. Осторожно встряхивают 5 мин и дают отстояться. Отделяют верхний эфирный слой, сливая его через безводный сульфат натрия. Операцию экстрагирования повторяют дважды. Объединенные экстракты переносят в колбу для отгонки растворителей и далее поступают так же, как при экстракции из крови.

Из 10 г (мл) средней пробы молока, яиц, органов и тканей гетеро-фос извлекают 50 мл смеси ацетона с этанолом (3 :1) |2|. Экстрагируют при встряхивании в течение 20 мин, после чего экстракты помещают в морозильную камеру холодильника на 1 ч. Пробы фильтруют через бумажный фильтр в колбы для отгонки либо в фарфоровые чашки, промывают посуду и фильтр 20 мл экстрагирующей смеси. Фильтрат концентрируют под вакуумом на ротационном испарителе (температура бани 40 °С) или упаривают в фарфоровых чашках на водяной бане при температуре 40 °С в слабом токе теплого воздуха до объема 1—2 мл. Остатки фильтруют через бумажный фильтр в делительные воронки. Колбы для отгонки или фарфоровые чашки тщательно ополаскивают 10 мл смеси этанола с водой (1 : 3), фильтруют в те же делительные воронки, добавляют 25 мл дистиллированной воды и встряхивают 0,5—1 мин. Из водно-спиртового раствора гетерофос триады экстрагируют гексаном порциями по 30 мл в течение 2—3 мин при встряхивании. Объединенный гексановый экстракт сушат безводным сульфатом натрия, помещают в

колбы для отгонки или в фарфоровые чашки и концентрируют до объема 0,5 мл. Оставшийся растворитель отгоняют досуха при комнатной температуре. Сухой остаток растворяют в 5 мл этилового спирта и аликвотную часть (2—3 мкл) хроматографируют.

30. Время удерживания при различных температурах, пределы обнаружения и концентрации рабочих растворов гетерофоса, этафо-са и их метаболитов

№ п/п	Исследуемое соединение	Температура колон-ки, °С	Время удерживания		Относительное время удержи-ван ия	Концентрация рабочего раствора*, мкг/мл	Нижний предел обнаружения, нг
			ТИД ДПР				ТИД | ДПР
Фаза -5% SE-30 на хроматоне N-A W-HMDS[1], температура испарителя 210 °С
1	2	3	4		5	6	7
1	Гетерофос	190	3 МИН 36 с	-	1	0,2	0,1	_
	»	127	25 мин	-	1	2,0	1,0
2	Этафос	190	10 мин 36 с	4 мин 30 с	2,95	5,0 (0,1)**	1,2	0,1
Метаболиты
1	О-Этил-О- фенилфосфат	190	1 МИН 30 с	-	0,42	1,0	0,2	-
2	О-Этил-S-npo-пилфосфат То же	190 127	54 с 6 мин 15 с	-	0,25	0,5	0,1	-
3	О-Этил-О-фе- нил-в-метил- тиофосфат	190	2 мин 12 с		0,62	0,5	0,1
4	О-Этил-О-фе- нилтиофос- фат	190	2 мин 48 с		0,80	3,0	1,0
5	О-Этил-0,2,4- дихлорфенил- тиофосфат	190	5 мин 18 с	3 мин 24 с	1,46	5,0 (1)**	1,2	0,2

13