ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО НАДЗОРА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

РОССИЙСКИЙ РЕСПУБЛИКАНСКИЙ ИНФОРМАЦИОННО-АНАЛИТИЧЕСКИЙ ЦЕНТР

МЕТОДЫ АНАЛИЗА ЧУЖЕРОДНЫХ ВЕЩЕСТВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

(Сборник нормативных материалов)

Москва, 1994 г.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО НАДЗОРА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

РОССИЙСКИЙ РЕСПУБЛИКАНСКИЙ ИНФОРМАЦИОННО-АНАЛИТИЧЕСКИЙ ЦЕНТР

МЕТОДЫ АНАЛИЗА ЧУЖЕРОДНЫХ ВЕЩЕСТВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

(Сборник нормативных материалов)

Москва, 1994 г.

2.3.2. Очистка и обнаружение афлатоксина Mi

ТСХ-очистку и обнаружение афлатоксина Mi проводят с помощью двумерной хроматографии на пластинках «Силуфол» аналогично пункту 1.3.2. В качестве растворитепей для развития хроматограмм используют в 1-ом направлении — гексан-эфир (1:2), во 2-ом направлении — смесь хлороформ-ацетон-изопропиловый спирт (35:10:5).

2.4. Тесты, подтверждающие наличие афлатоксина Mi в продукте

Тесты, подтверждающие наличие афлатоксина Mi в продукте, проводят аналогично п. 1.4.

2.5. Количественное определение афлатоксина Mi

ТСХ-определение содержания афлатоксина Mi проводят аналогично о. 1.5. В качестве растворителей для развития хроматограмм используют: в 1-ом направлении — смесь гексан-эфир (1:2), во 2-ом направлении — хлороформ-ацетон-изопропиловый спирт (85:10:5). После развития пластинки в обоих направлениях ее рассматривают в длинноволновом УФ-свете и сравнивают интенсивность флуоресценции афлатоксина Mi в экстракте с интенсивностью флуоресценции пятен стандарта, определяя количество нг афлатоксина Mi в пятне экстракта.

Содержание афлатоксина Mi в продукте рассчитывают по формуле:

... Vi • Vj-Vj-m ^C=v_rv/NVM ^мкг/кг'^глс:

С — концентрация афлатоксина Mi в мкг/кг или мкг/л;

Vi — объем водно-ацетоновой смеси в мл (410 мл для жидкого молока, 400 мл для сухого молока, 380 мл для сыра, 390 мл для масла);

V2 — объем водно-ацетонового фильтрата, взятый для анализа, в мл (275 мл):

Уз — объем водно-ацетонового фильтрата, раствора уксуснокислого свинца, раствора сернокислого натрия и воды (275 + + 20+ 10+ 200 = 505 мл);

\⁷4    —    объем    фильтрата после очистки уксуснокислым свинцом в

мл (350 мл);

Vs — объем раствора экстракта перед ТСХ в мкл (100 мкл);

Уб — объем экстракта, наносимый на ТСХ-пластинку, в мкл (20 мкл);

m — количество афлатоксина Mi в пятне экстракта в нг;

М — навеска продукта, взятого для анализа в г или мл (100 мл

ю

для жидкого молока, 10 г для сухого молока, 50 г для масла, 50 г для сыра).

С для жидкого молока С для сухого молока С для сыра С для масла

При приведенных в скобках величинах формула содержания афлатоксина Mi выражается следующим образом:

Если интенсивность флуоресценции афлатоксина Mi в пятне экстракта выше, чем интенсивность флуоресценции пятен стандарта афлатоксина Mi, то поступают так, как это описано в п. 15.

и

СОДЕРЖАНИЕ

I    МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКОТОКСИНОВ    *

1.    Методика определения афлатоксинов в пищевых продуктах методом тех.................................... 3

2.    Методика определения афлатоксинов в пищевых продуктах с

помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии    ...    11

3.    Методика определения афлатоксинов в продуктах животного

происхождения ................................. 19

4.    Методика определения содержания патулииа в фруктовых и

овощных соках и пюре............................ 26

5.    Методика определения мпкотоксина патулииа в продуктах

переработки плодов и овощей ....................... 31

6.    Методика определения зсарпленопл в пищевых продуктах    ....    37

7.    Методика определения дсзоксинивалспола (вомитокспна) в    зерне

и зернопродуктах................................ 41

8.    Методика определения дсзоксинниллснола и зсараленона в зерне

и зернопродуктах ............................... 45

9.    Методика определения Т-2 токсина в пищевых продуктах и

продовольственном сырье.......................... 53

10.    Методика определения охратоксина А в пищевых продуктах ...    57

11.    Методики определения мпкотокеппои: Т-2 токсина, зсараленона

(Ф-2) и охратоксина А............................ 63

II. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУЖЕРОДНЫХ ВЕЩЕСТВ 77

12.    Атомно-абсорбционные методы определения токсинных элементов в пищевых продуктах и пищевом сырье.............. 77

13.    Методика определения мстил-этилмсркурхлорида в пищевых

продуктах, кулннарно обработанных ................... 93

14.    Методика определения содержания общей ртути в пищевых

продуктах методом беспламенной атомной абсорбции....... 97

15.    Методика по определению хрома в овощных консервах...... 103

16.    Методика определения содержания гистамина в рыбопродуктах

(флуоромстричсский метод)......................... 105

17.    Метод выделения, идентификации и количественного определения

гистамина в рыбопродуктах (колориметрический метод)...... ПО

18.    Методика определения нитратов и нитритов в молоке и молочных

продуктах..................................... 114

19.    Методика определения жиратов и нитритов в плодовоощной

консервированной продукции........................ 124

биологических жидкостях .......................... 133

21.    Методика определения остаточных количеств

Эстрадиола-17/? в продуктах животноводства ............. 138

22.    Методика определения антибиотиков тстрациклинового ряда методом тонкослойной хромато<рафии (качественный анализ) ...    142

23.    Методика определения антибиотиков тетрацикл и нового ряда

<]»луоримстричсским методом (количественный анализ) ...... 143

24.    Определение летучих N-нитрозаминов в продовольственном сырье

и пищевых продуктах........................ .    .    .    ]4<з

Брагина И. В., Орехова II. Л- — специалисты лаборатории физико-химических методов исследований Российского Республиканского информационно-аналитического центра.

Под редакцией: Подуповой JI. Г. — заместители Главного государственного санитарного врача РФ, заслуженного врача РФ.

Подписано к печати. 21.11.94.

Формат 60 х 88/16. Бумага офсетная. Уел. псч. л. 9,8. Уел. кр.-огг. 9,8. Тираж 1000 экз. Зак. 220.

Изготовлено в Московской типографии № 11 Комитета по печати РФ. 113105, Москва, ул. Нагатинская, 1,

ВВЕДЕНИЕ

Загрязнение пищевых продуктов токсичными чужеродными веществами является частью глобальной проблемы загрязнения окружающей среды, поэтому в настоящее время очень важным аспектом является определение микропримесей загрязняющих веществ в продуктах питания и снижение их содержания. В последние годы все больший приоритет приобретают исследования по определению таких токсикантов как различные микотоксины (афла-токсины, патулин, зеараленон, вомитоксин, трихотецены и др.), соли тяжелых металлов, нитриты, нитраты, N-нитрозамины и др.

Настоящий сборник включает в себя ранее изданные Методические указания по определению наиболее приоритетных загрязнителей пищевых продуктов, разработанные научно-исследовательскими институтами медицинского профиля и утвержденные Главным санитарно-эпидемиологическим управлением Минздрава СССР и ГКСЭН РФ.

В соответствии с Постановлением Госкомсанэп ид надзора Российской Федерации от 06.02.92 г. № 1 *0 порядке действия на территории Российской Федерации нормативных актов бывшего Союза ССР в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения» на всей территории Российской Федерации действуют общесоюзные санитарные правила и нормативные акты впредь до принятия соответствующих нормативных актов Российской Федерации в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения.

Сборник предназначен для санитарно-гигиенических лабораторий центров Госсанэпиднадзора, НИИ и учреждений гигиенического профиля, кафедр гигиены питания медицинских институтов и институтов усовершенствования врачей, а также может быть использован лабораториями других организаций, занимающихся исследованиями пищевых продуктов.

Будем признательны за все критические замечания и пожелания, направленные на улучшение данного Сборника или составление аналогичных Сборников по другим разделам исследований пищевых продуктов.

Л. Г. Подунова

1. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКОТОКСИНОВ

МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ АФЛАТОКСИНОВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

Оборудование и материалы

1.    Мельница лабораторная (типа ЭМ-ЗЛ) или ко<1)емолка ЭКМ-

ЗУ.

2.    Весы технические по ГОСТ 19491-74.

3.    Аппарат для встряхивания проб АВУ-СС по ТУ 64-1-2451-78.

4.    Ротационный испаритель с ловушкой по ТУ 25-11-917-76 (завод «Химлабприбор»).

5.    Насос водоструйный по ГОСТ 10696-75.

6.    Саня водяная с электронагревателем.

7.    Прибор для флуоресцентного анализа витаминов в растворе (модель 833) МРТУ 64-1-10S0-63 или диагностическая лампа ОЛД-41.

8.    Микрошприц МШ-10 на 10 мкл или калиброванные стеклянные капилляры.

9.    Камеры для ТСХ с притертыми крышками, например, стеклянные четырехугольные сосуды 195 х 195 х 200 мм завода «Дружная горка».

10.    Пластины для ТСХ «Силуфол* размером 15 х 15 см, ЧССР.

11.    Силикагель для колоночной хроматографии с размером частиц 100—250 микрон (силикагель Л, ЧССР).

12.    Распылитель стеклянный с грушей.

13.    Цилиндры мерные на 100, 250 и 500 мл.

14.    Колбы плоскодонные конические на 500 и 1000 мл и круглодонные на 250 мл с НШ 29 и притертой пробкой.

15.    Колбы грушевидные с НШ 14 Д на 90—100 мл.

16.    Микропипетки на 0,1 мл.

17.    Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026-66.

18.    Колбы мерные на 100 мл по ГОСТ 1770-74.

19.    Воронки химические диаметром 150 мм по ГОСТ 8613-75.

20.    Делительные воронки на 250 или 500 мл по ГОСТ 8613-75.

21.    Колбы плоскодонные на 100, 250 или 500 мл по ТУ 48—52.

22.    Колонка стеклянная хроматографическая 300 х 15 мм.

23.    Афлатоксин В] или смесь афлатоксннов Bi, Bj, Gi и G2.

— Методические рекомендации по обнаружению, идситификации и определению содержания афлатоксиноо в пищевых продуктах, утв. М3 СССР 10.12.S0 г. N2 2273—S0.

3

24.    Лфлатоксин Мь

25.    Ацетон по ГОСТ 2603-7J.

26.    Гексан по ТУ 6-09-3375-73.

27.    Бензол по ГОСТ 5955-75.

28.    Ацетонитрил по ТУ 6-09-3534-74.

29.    Хлороформ медицинский или по ГОСТ 3160-51 «ХЧ¹.

30.    Эфир диэтиловый медицинский по ГОСТ 6265-52.

3 L. Вода дистиллированная.

32.    Кислота серная по ГОСТ 4204-77.

33.    Кислота лимонная по ГОСТ 3652-69.

34.    Кислота азотная концентрированная по ГОСТ 4461-67.

35.    Натрий сернокислый безводный по ГОСТ 4166-76, прокаленный.

36.    Натрий хлористый по ГОСТ 4233-66.

37.    Свинец уксуснокислый по ГОСТ 1027-67.

38.    Иод кристаллический по ГОСТ 4J59-64.

1. Определение афлатоксинов В„ В₂, G_A и G₂ в различных пищевых продуктах

1.1. Экстракция

Пробу продукта измельчают в течение 2 мин. в кофемолке (образцы с высоким содержанием жира: арахис, какао-бобы, орехи, семена масличных целесообразно перед измельчением замораживать (сухой лед, жидкий азот и др.). Берут навеску 25 г измельченного продукта в плоскодонную коническую колбу на 250 или 500 мл, тщательно перемешивают с 25 мл 10% раствора хлористого натрия. Добавляют 100 мл ацетона и встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 30 мин. Полученную смесь фильтруют через бумажный складчатый фильтр в мерный цилиндр, отбирают 50 мл фильтрата.

1.2. Очистка экстракта

К 50 мл фильтрата добавляют 20 мл 15% раствора уксуснокислого свинца и 30 мл дистиллированной воды, перемешивают и оставляют стоять на 10 мин. в темноте. Отфильтровывают образовавшийся осадок через бумажный складчатый фильтр, отбирают 80 мл фильтрата. Переносят в делительпую воронку, добавляют 40 мл гексана, встряхивают и после разделения слоев отделяют нижний водно-ацетоновый слой. Верхний гексановый слой отбрасывают. К водно-ацетоновому слою добавляют 30 мл гексана, встряхивают в делительной воронке, верхний гексановый слой отбрасывают. К водно-ацетоновому раствору добавляют 40 мл хлороформа, встряхивают в делительной воронке. После разделения слоев нижний хлороформный слой отделяют, а к верхнему вод-

4

но-ацетоновому слою добавляют 30 мл хлороформа и J5 мл ацетона. После встряхивания и разделения слоев нижний хлороформный слой отделяют. Объединенные хлороформные экстракты помещают в плоскодонную колбу на 100 мл с притертой пробкой, добавляют 5—7 г безводного сернокислого натрия, встряхивают и оставляют на 30 мин в темноте. Раствор фильтруют через кусочек ваты, помещенный в стеклянную химическую воронку, в грушевидную колбу на 90—100 мл с отростком. Плоскодонную колбу с сернокислым натрием споласкивают 5—10 мл хлороформа и отфильтровывают в ту же грушевидную колбу. На цилиндрическом отростке должна быть проведена метка на уровне 100 мкл. Хлороформный раствор упаривают на ротационном испарителе в вакууме водоструйного насоса при температуре бани не выше 50° досуха, вещество смывают со стенок хлороформом в калиброванный отросток до метки 100 мкл. Полученный раствор используют для определения содержания афла-токсинов с помощью ТСХ’ (раствор А).

1.3. Разделение и обнаружение афлатоксинов

1.3.1. Приготовление эталонного и рабочего раствора стандартов

Эталонный раствор смеси афлатоксинов готовят следующим образом: навески 1,0 мг кристаллического афлатоксина Вi, 1,0 мг афлатоксина Gi, 0,5 мг афлатоксина В2 и 0,5 мг афлатоксина G2 помещают в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки смесью бензол-ацетонитрил (98:2). Концентрация афлатоксинов Bi и Gi в эталонном растворе составляет 10 мкг/мл, а афлатоксинов В2 и G2 — 5 мкг/мл.

Рабочий раствор готовят разбавлением одного мл эталонного раствора в 9 мл хлороформа. Концентрация рабочего раствора — ¹

1 мкг/мл для афлатоксинов Bi и Gi и 0,5 мкг/мл для афлатоксинов В2 и 62.

При отсутствии стандартов афлатоксинов В2, Gi и G2, можно в качестве эталонного раствора использовать раствор афлатоксина Bi с концентрацией 10 мкг/мл, а в качестве рабочего раствора — раствор афлатоксина Bi с концентрацией 1 мкг/мл.

Все растворы стандартов хранят в холодильнике при температуре ниже 0°. Срок годности эталонного раствора до одного года, а рабочего раствора —до 4—5 месяцев. При хранении необходимо следить за тем, чтобы объем растворов не уменьшался за счет испарения растворителя.

1.3.2. Очистка и разделение афлатоксинов

Пластинку «Силуфол¹ размером 15 х 15 см размечают тонкими карандашными линиями. В правом нижнем углу пластинки на расстоянии 1,5 см от краев наносят с помощью микрошприца или стеклянного калиброванного капилляра 20 мкл раствора экстракта — раствора А. Наносить раствор следует постелен но, не допуская размывания стартового пятна более 4—5 мм. В правом верхнем и левом нижнем углах на расстоянии 1,5 см от краев пластинки наносят по 2 мкл рабочего раствора стандартов афлатоксинов. Пластинку помещают в камеру для ТСХ, в которую предварительно наливают смесь бензол-эфир-гексан (1:2:1), уровень растворителя должен быть на 1 см ниже нанесенных пятен. Развитие хроматограммы проводят в первом направлении до достижения фронтом растворителя карандашной линии, проведенной в 3 см от верхнего края пластинки, затем пластинку извлекают из камеры и сушат 5 мин. в темноте. Высушенную пластинку поворачивают на90° по часовой стрелке и помещают в камеру для ТСХ, в которую предварительно наливают смесь хлороформ-ацетон-бензол (9:1:1)¹. Проводят развитие пластинки во 2-ом направлении до достижения фронтом растворителя карандашной линии, проведенной в 3 см от верхнего края пластинки, затем пластинку извлекают и сушат 5 мин. в темноте. Рассматривают пластинку в длинноволновом УФ-свете. Обнаружение на пластинке пятен, соответствующих по хроматографической подвижности и цвету флуоресценции пятнам стандартов афлатоксинов, свидетельствует о возможном присутствии афлатоксинов в пищевом продукте. ²

1.4. Тесты, подтверждающие наличие афлато-ксинов в пищевом продукте

1- й тест

Стеклянную пластинку 20 х 20 см заливают 5—10% раствором йода в эфире, после испарения эфира пластинку с тонким слоем йода помещают над ТСХ-пластин кой на расстоянии 0,5—1,0 см и подвергают ее воздействию паров йода в течение 20—30 сек. Затем пластинку рассматривают в длинноволновом УФ-свете. Сохранение цвета и интенсивности флуоресценции пятен стандартов и соответствующих им пятен экстракта подтвер;кдает возможное наличие афлатоксинов в пищевом продукте.

2- й тест

ТСХ-пластинку опрыскивают раствором азотной кислоты в воде (1:2) и рассматривают ее в длинноволновом УФ-свете. Если цвет флуоресценции стандартов афлатоксинов изменяется с синего (Bi, Вг) или сине-зеленого (Gi, (Ь) на желтый, а цвет флуоресценции пятен экстракта не меняется на желтый, то афлатоксины в пробе отсутствуют. Если же цвет флуоресценции пятен экстракта также меняется на желтый, то это служит подтверждением возможного наличия афлатоксинов в пищевом продукте.

При проведении операций подтверждения ориентировочно оценивают количество афлатоксина в пятне экстракта путем сравнения интенсивности его флуоресценции со стандартом.

1.5. Количественное определение афлатоксинов

Если в экстракте обнаружены афлатоксины, то необходимо провести количественное определение. Пластинку «Силуфол* размером 15 х 15 см размечают тонкими карандашными линиями. В правом нижнем углу пластинки на расстоянии 1,5 см от краев наносят с помощью микрошприца 20 мкл экстракта (раствор А). В левом нижнем углу на расстоянии 1,5 см от краев наносят 2 мкл рабочего раствора стандартов афлатоксинов. В правом верхнем углу на расстоянии 1, 2 и 3 см от верхнего края пластинки и 1,5 см от правого края пластинки наносят соответственно 2,0; 4,0 и 6,0 мкл раствора стандартов афлатоксинов. ТСХ проводят в условиях, аналогичных п. 132.ПослеТСХ пластинку рассматривают в длинноволновом УФ-свете. Сравнивая интенсивность флуоресценции разных количеств стандартов афлатоксинов на пластинке с интенсивностью флуоресценции соответствующих пятен экстракта, определяют количество нанограмм (нг) афлатоксина в пятне экстракта.

Содержание афлатоксинов в продукте рассчитывают по формуле: ViV₃V₅m

-мкг/кг, где;

7

С — концентрация афлатоксинов в пищевом продукте в мкг/кг; Vi — объем водно-ацетоновой смеси в мл (125);

V2 — объем водно-ацетонового фильтрата, взятый для анализа, в мл (50 мл);

Уз — объем водно-ацетонового фильтрата и раствора уксуснокислого свинца в мл (100 мл);

V4 — объем фильтрата после очистки уксуснокислым свинцом в мл (80 мл);

V5 — объем очищенного раствора экстракта в хлороформе перед ТСХ (раствор А) в мкл (100 мкл);

Vo — объем раствора экстракта, наносимый на пластинку, в мкл (20 мкл);

m — количество афлатоксина в пятне экстракта, в нг,

М — навеска продукта, взятая для анализа, в г (25 г).

При приведенных в скобках объемах и навесках в 25 г, формула содержания афлатоксинов выражается следующим образом:

С * 0,625 -Шмкг/кг.

Пели интенсивность флуоресценции афлатоксинов в пятне экстракта выше интенсивности флуоресценции пятен стандартов, соответствующих 6,0 мкл рабочего раствора (6 иг афлатоксинов Bi и Gi и 3 нг афлатоксинов В₂ и G₂), то на пластинку следует наносить меньший объем экстракта V₆, например, 10 или 5 мкл. Пели и в этом случае интенсивность флуоресценции пятен экстракта выше, чем у стандартов, то следует разбавить хлороформный раствор экстракта (раствор А), т.е. увеличить объем V₅ до 200 и более мкл.

2. Определение афлатоксина Mi в молоке и молочных продуктах

2.1. Экстракция

Для анализа берут 100 мл жидкого молока или 10 г сухого молока, или 50 г масла, или 50 г сыра. Навеску масла растапливают и переносят в колбу для экстракции, сыр перед взятием навески измельчают с помощью терки. Анализируемый образец помещают в плоскодонную коническую колбу на 500 мл с притертой пробкой и добавляют водный раствор лимонной кислоты и хлористого натрия согласно таблице.

Продукт	Вес образца в г или объем в мл	Добавляемое количество воды в мл	Добавляемое количество лимонной кислоты и хлористого натрия в г
Молоко жидкое	100 мл	10	0,48 г лимонной кислоты и 4,0 г
Молоко сухое	10 г	100	хлористого натрия во всех слу-
Сыр	50 г	S0	чаях предварительно раство-
Масло	50 г	90	ряют в воде, добавляемой к анализируемому продукту

К полученной смеси добавляют 300 мл ацетона и встряхивают в течение 30 мин. на аппарате для встряхивания. Смесь фильтруют через бумажный складчатый фильтр в мерный цилиндр на 500 мл, отбирают 275 мл фильтрата.

2.2. Очистка экстракта

Экстракт переносят в плоскодонную коническую колбу на 1000 мл, добавляют 20 мл 15% водного раствора уксуснокислого свинца и 200 мл воды, встряхивают и оставляют в темноте на 10—15 мин. Затем добавляют 10 мл насыщенного раствора сернокислого натрия, встряхивают и фильтруют через бумажный складчатый фильтр в мерный цилиндр, на 500 мл. Отбирают 350 мл фильтрата и переносят в делительную воронку на 500 мл, добавляют 100 мл гексана и встряхивают. После разделения слоев верхний гексановый слой отбрасывают, к нижнему водно-ацетоновому слою добавляют 50 мл гексана, встряхивают в делительной воронке. После разделения слоев верхний гексановый слой отбрасывают, к нижнему водноацетоновому слою добавляют 100 мл хлороформа, встряхивают в делительной воронке. Нижний хлороформный слой отделяют, водно-ацетоновый слой повторно экстрагируют 50 мл хлороформа в делительной воронке. Объединенные хлороформные экстракты сушат безводным сернокислым натрием (5—10 г) в течение 30 мин. Высушенный экстракт фильтруют через химическую воронку с кусочком ваты в круглодонную колбу на 250 мл с НШ 29. Упаривают на ротационном испарителе до объема 10—20 мл. Содержимое колбы переносят в грушевидную колбу на 90—100 мл с калиброванным отростком (см. рис. 1) и упаривают досуха на ротационном испарителе. Вещество смывают со стенок колбы в калиброванный отросток хлороформом до отметки 100 мкл.

2.3. Обнаружение афлатокснна Mi

2.3.1, Приготовление рабочего раствора стандарта

Афлатоксин Mi поставляется в ампулах по 0,01 мг. Ампулу вскрывают и растворяют содержимое ампулы в 2 мл смеси бензол-ацетонитрил (9:1), переносят в мерную колбу на 10 мл, трижды промывают ампулу по 1 мл той же смеси, промывные растворы переносят в ту же мерную колбу. Доводят объем раствора в мерной колбе до метки смесью бензол-ацетонитрил (9:1). Полученный раствор содержит 1 мкг афлатокснна Mi в 1 мл и используется для ТСХ как рабочий раствор.

9

1

—При анализе некоторых продуктов хлороформный экстракт может содержать много жировых веществ. Это затрудняет нанесение экстракта на ТСХ-пластннку ввиду расплывания жирового пятна на старте, перегрузки пластинки и ухудшает разделение афлатоксинов. В этом случае целесообразно перед проведением ТСХ дополнительно очистить экстракт на хроматографической колонке с силикагелем (см. рис. 2). На дно колонки помещают маленький комочек ваты, затем безводный cquioKiicnbiil натрии (толщина слоя 3—4 мм), наливают суспензию енли кагеля в хлороформе (толщина слоя силикагеля около 20 мм) и сверху насыпают слой сернокислого натрия (15—20 мм). В колонку наливают 10 мл хлоро<]юрма, дают хло|кх|юрму стечь. Когда у)ювень хло|хх|юрма достигнет верхней границы сернокислого натрия, на колонку наносят раствор экстракта в 100 мкл хло|Ки|юрма, колбу из-под экстракта ополаскивают 2—3 мл хлороформа и наносят на ту же колонку. Когда уровень раствора экстракта коснется слоя сернокислого натрия, в колонку наливают 50 мл смеси хлороформ-ацетон (9:1). Хлороформ- ацетоновый раствор собирают в грушевидную колбу с отростком на 90—100 мл и упаривают раствор на |К>тац110нном испарителе досуха. Вещество смывают со стенок хлороформом в калиброванный отросток до метки 100 мкл. Далее полу-ченпый раствор анализируют с помощью ТСХ (раствор А).

5

2

—При развитии ТСХ-пластинки во 2-м направлении пятно афлатоксина Bi должно проходить примерно половину расстояния, пройденного фронтом растворителя. Если подвижность афлатоксина Bi ниже, то следует увеличить количество ацетона в смеси хлороформ-ацетон-бензал.

6