Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1 

14 страниц

Купить бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Цена на этот документ пока неизвестна. Нажмите кнопку "Купить" и сделайте заказ, и мы пришлем вам цену.

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

 Скачать PDF

Оглавление

Оборудование и материалы

1. Экстракция

2. Обнаружение, идентификация и определение содержания дезоксиниваленола в экстракте

3. Обнаружение, идентификация и определение содержания зеараленона

 
Дата введения01.02.2020
Добавлен в базу12.02.2016
Актуализация01.02.2020

Этот документ находится в:

Организации:

27.06.1990УтвержденМЗ СССР
РазработанНаучно-исследовательский институт медицинского профиля
Стр. 1
стр. 1
Стр. 2
стр. 2
Стр. 3
стр. 3
Стр. 4
стр. 4
Стр. 5
стр. 5
Стр. 6
стр. 6
Стр. 7
стр. 7
Стр. 8
стр. 8
Стр. 9
стр. 9
Стр. 10
стр. 10
Стр. 11
стр. 11
Стр. 12
стр. 12
Стр. 13
стр. 13
Стр. 14
стр. 14

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО НАДЗОРА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

РОССИЙСКИЙ РЕСПУБЛИКАНСКИЙ ИНФОРМАЦИОННО-АНАЛИТИЧЕСКИЙ ЦЕНТР

МЕТОДЫ АНАЛИЗА ЧУЖЕРОДНЫХ ВЕЩЕСТВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

(Сборник нормативных материалов)

Москва, 1994 г.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО НАДЗОРА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

РОССИЙСКИЙ РЕСПУБЛИКАНСКИЙ ИНФОРМАЦИОННО-АНАЛИТИЧЕСКИЙ ЦЕНТР

МЕТОДЫ АНАЛИЗА ЧУЖЕРОДНЫХ ВЕЩЕСТВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

(Сборник нормативных материалов)

Москва, 1994 г.

ш — масса зеараленона (в нг), в V4 мкл очищенного экстракта, оцененная по ТСХ При приведенных в скобках объемах и навесках формула содержания зеараленона выражается следующим образом:

С *0,0025 хюмг/кг

Пели интенсивность окраски пятна зеараленона в экстракте выше интенсивности окраски пятна стандарта, соответствующего 20 мкл стандартного раствора (200 нг зеараленона), то на пластинку следует нанести либо меньшее количество экстракта (уменьшить объем V^), либо разбавить раствор В бензолом (увеличить объем V3), внеся соответствующие коррективы в расчетную формулу.

3.4. Обнаружение и количественное определение зеараленона с помощью ВЭЖХ

Условия ВЭЖХ: подвижная фаза гексан—эфир—уксусная кислота (65:35:1), скорость подвижной фазы 1,5 мл/мин или петро-лейный эфир (т. кип. 40—70° С)—эфир—уксусная кислота (50:50:1), скорость подвижной фазы 2 мл/мин. Рекомендуется использовать перегнанный гексан или петролейный эфир и эфир, профильтрованный через слой оксида алюминия (5 см). УФ-детектор устанавливается на длину волны 283 мн, шкала чувствительности 0,005 Е.О.П. Шкала самописца 10 мВ. Если используется флуориметри-ческий детектор, то длина волны на линии возбуждения устанавливается около 283 нм, а на линии эмиссии — фильтр от 420 нм (или 440 нм в случае монохроматора на линии эмиссии).

Для калибровки прибора в инжектор с помощью микрошприца вводят 2 и 5мкл стандартного раствора, что соответствует 20 и 50 нг зеараленона. Для каждого количества стандарта определяют высоту пика на хроматограмме. При описанных условиях ВЭЖХ время выхода пика зеараленона составляет 5—7 мин.

В инжектор хроматографа вводят 10 мкл раствора В. При наличии пика, совпадающего по времени выхода со стандартом, определяют его высоту (h06P.).

Расчет концентрации зеараленона в образце проводят по формуле:

VixV3xmxhcT. .

Ce V2xV4xMxho6p.xl000 мг/кггде-

С — концентрация зеараленона в образце в мг/кг,

Vi — объем водно-ацетонитрильной смеси для экстракции в мл (125 мл);

V2 — объем водио-ацетонитрнльного фильтрата, взятый для анализа, в мл (50 мл);

Уз — объем очищенного экстракта перед ВЭЖХ (раствор В) в мкл (500 мкл);

52

V4 — объем очищенного экстракта (раствор В), внесенный в хрома тограф, в мкл (20 мкл);

М — навеска образца, взятая для анализа, в г (25 г); щ — масса стандарта зеараленона, введенная в хроматограф в нг, Ьст. — высота пика, соответствующая данной массе стандарта, мм; Ьобр.— высота пика зеараленона из образца в мм.

Если пик зеараленона в образце выходит за пределы шкалы самописца, анализ проводят повторно после разбавления раствора В бензолом, т. е. после увеличения объема Уз.

При ВЭЖХ зеараленона чувствительность УФ- и флуоримет-рического детектора примерно одинаковы. Преимуществом флуори-метрического детектора является его селективность (меньшее количество посторонних пиков на хроматограмме).

53

СОДЕРЖАНИЕ

I    МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКОТОКСИНОВ    *

1.    Методика определения афлатоксинов в пищевых продуктах методом тех.................................... 3

2.    Методика определения афлатоксинов в пищевых продуктах с

помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии    ...    11

3.    Методика определения афлатоксинов в продуктах животного

происхождения ................................. 19

4.    Методика определения содержания патулииа в фруктовых и

овощных соках и пюре............................ 26

5.    Методика определения мпкотоксина патулииа в продуктах

переработки плодов и овощей ....................... 31

6.    Методика определения зсарпленопл в пищевых продуктах    ....    37

7.    Методика определения дсзоксинивалспола (вомитокспна) в    зерне

и зернопродуктах................................ 41

8.    Методика определения дсзоксинниллснола и зсараленона в зерне

и зернопродуктах ............................... 45

9.    Методика определения Т-2 токсина в пищевых продуктах и

продовольственном сырье.......................... 53

10.    Методика определения охратоксина А в пищевых продуктах ...    57

11.    Методики определения мпкотокеппои: Т-2 токсина, зсараленона

(Ф-2) и охратоксина А............................ 63

II. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУЖЕРОДНЫХ ВЕЩЕСТВ 77

12.    Атомно-абсорбционные методы определения токсинных элементов в пищевых продуктах и пищевом сырье.............. 77

13.    Методика определения мстил-этилмсркурхлорида в пищевых

продуктах, кулннарно обработанных ................... 93

14.    Методика определения содержания общей ртути в пищевых

продуктах методом беспламенной атомной абсорбции....... 97

15.    Методика по определению хрома в овощных консервах...... 103

16.    Методика определения содержания гистамина в рыбопродуктах

(флуоромстричсский метод)......................... 105

17.    Метод выделения, идентификации и количественного определения

гистамина в рыбопродуктах (колориметрический метод)...... ПО

18.    Методика определения нитратов и нитритов в молоке и молочных

продуктах..................................... 114

19.    Методика определения жиратов и нитритов в плодовоощной

111. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ СТИМУЛЯТОРОВ РОСТА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

20. Методика определения остаточных количеств

Диэтилстильбэстрола в продуктах животноводства и в

консервированной продукции........................ 124

биологических жидкостях .......................... 133

21.    Методика определения остаточных количеств

Эстрадиола-17/? в продуктах животноводства ............. 138

22.    Методика определения антибиотиков тстрациклинового ряда методом тонкослойной хромато<рафии (качественный анализ) ...    142

23.    Методика определения антибиотиков тетрацикл и нового ряда

<]»луоримстричсским методом (количественный анализ) ...... 143

24.    Определение летучих N-нитрозаминов в продовольственном сырье

и пищевых продуктах........................ .    .    .    ]4<з

Брагина И. В., Орехова II. Л- — специалисты лаборатории физико-химических методов исследований Российского Республиканского информационно-аналитического центра.

Состав и тел и:

Под редакцией: Подуповой JI. Г. — заместители Главного государственного санитарного врача РФ, заслуженного врача РФ.

Подписано к печати. 21.11.94.

Формат 60 х 88/16. Бумага офсетная. Уел. псч. л. 9,8. Уел. кр.-огг. 9,8. Тираж 1000 экз. Зак. 220.

Изготовлено в Московской типографии № 11 Комитета по печати РФ. 113105, Москва, ул. Нагатинская, 1,

ВВЕДЕНИЕ

Загрязнение пищевых продуктов токсичными чужеродными веществами является частью глобальной проблемы загрязнения окружающей среды, поэтому в настоящее время очень важным аспектом является определение микропримесей загрязняющих веществ в продуктах питания и снижение их содержания. В последние годы все больший приоритет приобретают исследования по определению таких токсикантов как различные микотоксины (афла-токсины, патулин, зеараленон, вомитоксин, трихотецены и др.), соли тяжелых металлов, нитриты, нитраты, N-нитрозамины и др.

Настоящий сборник включает в себя ранее изданные Методические указания по определению наиболее приоритетных загрязнителей пищевых продуктов, разработанные научно-исследовательскими институтами медицинского профиля и утвержденные Главным санитарно-эпидемиологическим управлением Минздрава СССР и ГКСЭН РФ.

В соответствии с Постановлением Госкомсанэп ид надзора Российской Федерации от 06.02.92 г. № 1 *0 порядке действия на территории Российской Федерации нормативных актов бывшего Союза ССР в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения» на всей территории Российской Федерации действуют общесоюзные санитарные правила и нормативные акты впредь до принятия соответствующих нормативных актов Российской Федерации в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения.

Сборник предназначен для санитарно-гигиенических лабораторий центров Госсанэпиднадзора, НИИ и учреждений гигиенического профиля, кафедр гигиены питания медицинских институтов и институтов усовершенствования врачей, а также может быть использован лабораториями других организаций, занимающихся исследованиями пищевых продуктов.

Будем признательны за все критические замечания и пожелания, направленные на улучшение данного Сборника или составление аналогичных Сборников по другим разделам исследований пищевых продуктов.

Л. Г. Подунова

МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДЕЗОКСИНИВАЛЕНОЛА И ЗЕАРАЛЕНОНА В ЗЕРНЕ И ЗЕРНОПРОДУКТАХ*

Оборудование и материалы

1.    Аппарат для встряхивания проб типа АВУ-6С по ТУ 64-1-2151-78 или аналогичный.

2.    Ротационный испаритель ИР-1М по ТУ 25-11-917-76 (завод «Химлабприбор») с ловушкой или аналогичный испаритель.

3.    Мельница лабораторная электрическая ЭМ-ЗА по ТУ 46-22-236-79 или аналогичная.

4.    Прибор для флуоресцентного анализа витаминов в растворе (модель 833) ТУ 64-1-1080-78 или диагностическая лампа ОЛД-41 или «-Люминоскоп» ЛПК-1.

— Методические указания по обнаружению, идентификации и определению содержания дезоксинивапснола (вомитоксина) и зсаралсноиа в зерне и зерномродуктах, уш. М3 СССР 27 июня 1990 г. № 5177-90

45

5.    Жидкостной хроматограф с УФ-детектором с переменной длиной волны (для анализа зеараленона возможно также использование флуориметрического детектора) колонка и предколонка с силикагелем с размером частиц 5 мкм, длина колонки 25 см, предколонки — 4,5 см, внутренний диаметр —4,6 мм.

6.    Микрошприцы МШ-10 на 10 мкл, микрошприцы на 10 и 25 мкл для ВЭЖХ.

7.    Стеклянные камеры для ТСХ с притертыми крышками.

8.    Пластинки для ТСХ «Силуфол» размером 15 X 15 см или 20 х 20 см, производство ЧСФР.

9.    Колбы плоскодонные конические, 250 мл, 11Ш 29, тип КнКШ 250-29/32, ГОСТ 10394-74.

10.    Колбы грушевидные на 100 мл с НШ 14,5, тип ГрКШ-50-14/23 по ГОСТ 10394-74.

11.    Колбы грушевидные на 10—20 мл с НШ 14,5, тип ГрКШ-50-14/23 по ГОСТ 10394-74.

12.    Колбы мерные на 100 мл, тип 2-100-2 по ГОСТ 1770-74.

13.    Цилиндры мерные на 100 мл с притертой пробкой, тип 2-100 по ГОСТ 1770-74.

14.    Воронки делительные ВД2-250 по ГОСТ 8613-75.

15.    Колонка стеклянная хроматографическая 220 х 15 мм.

16.    Распылитель стеклянный с грушей.

17.    Стандартные растворы дезоксиниваленола в этилацетате с концентрацией 25 нг/мкл каждый, стандартный раствор зеараленона в бензоле с концентрацией 10 мг/мкп.

18.    Ацетонитрил «ч» по ТУ 6-09-3534-74.

19.    Ацетон «чда* по ГОСТ 2603-79.

20.    Бензол «чда» по ГОСТ 5955-75.

21.    Гексан «ч» по ТУ 6-09-3375-78 или гептан «чда» по ГОСТ

5.395-70.

22.    Изопропиловый спирт (пропанол-2) «хч* поТУ 6-09-1710-77.

23.    Кислота уксусная «чда* по ГОСТ 61-75.

24.    Кислота муравьиная «ч* по ГОСТ 5848-73.

25.    Метанол «чда» по ГОСТ 6995-77.

26.    Толуол «чда» по ГОСТ 5789-78.

27.    Хлороформ для наркоза или по ГОСТ 3610-51.

28.    Этанол по ТУ 6-09-1710-77.

29.    Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат) «чда* поГОСТ 22300-76.

30.    Эфир диэтиловый по ГОСТ 6265-52.

31.    Эфир летролейный (т. кип. 40—70° С) по ТУ 6-02-1244-83.

32.    Алюминий оксид нейтральный для хроматографии по Брокману, «Реанал», (Венгрия) № 01125 или алюминий оксид для хроматографии по ТУ 6-09-916-75.

33.    Алюминий хлористый, 6-водный «чда» по ГОСТ 3759-75.

34.    Натрий сернокислый, безводный «чда» по ГОСТ 4166-76.

35.    Натрий кислый углекислый «чда» по ГОСТ 83-79.

46

36.    Натрий хлористый «осч* по ТУ 6-09-3658-74.

37.    Прочный синий В-соль (диазоль синий С) или прочный фиолетовый В-соль для гистологии, «Хемапол», ЧСФР.

38.    Уголь активированный Р.72.270.3.

1. Экстракция

При отборе пробы для анализа следует руководствоваться требованиями ГОСТ 13586.3-83 «Зерно. Правила приемки и методы отбора проб*. Отобранную пробу измельчают в течение 1—2 мин. в лабораторной мельнице или кофемолке. Навеску 25 г измельченного зерна или муки помещают в плоскодонную коническую колбу на 250 мл, добавляют 20 мл воды и затем 105 мл ацетонитрила. Встряхивают на аппарате для встряхивания проб в течение 30 минут. Полученную смесь фильтруют через бумажный складчатый фильтр в мерный цилиндр. Отбирают 25 мл фильтрата для анализа на дезоксиниваленол и 50 мл фильтрата для анализа на зеараленон.

2. Обнаружение, идентификация и определение содержания дезоксиниваленола в экстракте

2.1. Очистка экстракта

В стеклянную хроматографическую колонку на дно помещают кусочек ваты, насыпают 0,75 г порошка активированного угля и сверху — слой 0,75 г оксида алюминия. Над слоем оксида алюминия помещают кусочек ваты. Осторожно помещают в колонку 25 мл экстракта, соответствующие 5 г исходного образца (при анализе кукурузы наливают 15 мл экстракта, соответствующие 3 г исходного образца). Отбирают элюат и, не давая колонке просохнуть, добавляют 10 мл смеси ацетонитрил—вода (84:16). Объединенные элюаты фильтруют через бумажный складчатый фильтр в грушевидную колбу на 50 мл, бумажный фильтр промывают 5—10 мл изопропилового спирта в ту же колбу и фильтрат упаривают на ротационном испарителе до объема 5—7 мл. Добавляют около 20 мл изопропилового спирта и повторно упаривают на ротационном испарителе досуха. Остаток в колбе после упаривания не должен содержать капель воды. Остаток растворяют в 200 мкл этил ацетата и плотно закрывают стеклянной пробкой (раствор А).

2.2. Обнаружение и количественное определение дезоксиниваленола с помощью одномерной ТСХ

На пластинке «Силуфол* проводят тонкую карандашную линию в 1,5—2 см от нижнего края пластинки. На эту линию на расстоянии 2 см друг от друга с помощью микрошприца наносят 2, 5, 10 и 20 мкл раствора А. Между пятнами экстракта на расстоянии 1 см

47

от них на ту же линию наносят 2, 4, 6 мкл стандартного раствора дезоксиниваленола (50, 100 и 150 нг дезоксиниваленола). Пластинку помещают в камеру для ТСХ и элюируют в системе гексан—ацетон (3:2) на расстоянии 15 см. Пластинку извлекают из камеры, сушат на воздухе 3—4 минуты и опрыскивают 10%-ным раствором хлористого алюминия в этаноле. Пластинку нагревают в сушильном шкафу в течение 5—7 минут при 105° С, затем рассматривают в длинноволновом УФ-свете. Дезоксиниваленол проявляется в виде пятен с синей флуоресценцией с Rf0,25—0,30. Наличие в экстракте пятен, соответствующих по цвету флуоресценции и хроматографической подвижности стандарту дезокси- ниваленола, свидетельствует о возможном наличии этого токсина в образце.

Для количественного определения сравнивают интенсивность флуоресценции разных количеств стандартов дезоксиниваленола с интенсивностью флуоресценции их-пятен в образце, визуально оценивая количество нг токсинов в нанесенных на пластинку объемах раствора А. Концентрацию дезоксиниваленола в образце рассчитывают по формуле:

.. Vjxm

L = vIxMxToOO МГ/КГ1 дс:

Vi — объем раствора А в мкл (200 мкл);

V2 — объем раствора А, нанесенный на пластинку в мкл; m — масса дезоксиниваленола (в нг) в V2 мкл раствора А, оцененная визуальным сравнением со стандартом на ТСХ-пластинке;

М — аликвотная навеска образца, соответствующая раствору А (5 г для пшеницы, 3 г для кукурузы).

Если интенсивность флуоресценции пятна дезоксиниваленола в экстракте выше интенсивности флуоресценции пятна дезоксиниваленола, соответствующего 6 мкл стандартного раствора, то следует разбавить раствор А этилацетатом, т. е. увеличить объем Vi, внеся соответствующие коррективы в расчетную формулу.

Окончательное заключение о наличии и уровне загрязнения образца дезоксиниваленолом принимается только на основе данных двумерной ТСХ.

2.3. Подтверждение наличия и количественное определение дезоксиниваленола с помощью двумерной ТСХ

Пластинку «Силуфол» размечают тонкими карандашными линиями, не повреждая слоя силикагеля. В правом нижнем углу на расстоянии 12 мм от краев пластинки наносят с помощью микрошприца 20 мкл раствора А. В левом нижнем углу пластинки наносят 2, 4 и б мкл стандартного раствора дезоксиниваленола, 2 и 5 мкл раствора А. В верхнем правом углу пластинки наносят 2, 4 и 6 мкл стандартного раствора дезоксиниваленола, 10 и 20 мкл раствора А. Пластинку помещают в камеру для ТСХ со смесью гексан—ацетон (3:2) и элюируют ее в 1-ом направлении до достижения фронтом

4S

растворителя тонкой карандашной линии, проведенной в 4 см от верхнего края, пластинку извлекают из камеры и сушат на воздухе. Затем проводят элюирование пластинки во 2-ом направлении смесью эфир—гексан—изопропиловый спирт—вода (77:18:4,5: 0,5). После достижения фронтом растворителя карандашной линии, проведенной в 4,5 см от верхнего края пластинки, ее извлекают из камеры и сушат на воздухе. Обнаружение и количественное определение проводят аналогично п. 2.2.

2.4. Обнаружение и количественное определение дезокснннваленола с помощью ВЭЖХ

Условия ВЭЖХ: подвижная фаза гексан—изопропанол—вода (85:25:1,5), скорость подвижной фазы 1,0 мл/мин. Рекомендуется использовать перегнанные растворители, фильтруя их через бумажный складчатый фильтр перед использованием. УФ-детектор устанавливается на длину волны 224 нм, шкала чувствительности 0,005 Е.О.П. Входное напряжение самописца 10 мВ.

Для калибровки прибора в инжектор с помощью микрошприца вводят по 2 и 4 мкл стандартных растворов, что соответствует 50 и 100 нг дезоксиниваленола. Для каждого количества стандарта определяют высоту пика на хроматограмме. При описанных выше условиях ВЭЖХ время удерживания пика дезоксиниваленола составляет от 5 до 6 мин. в зависимости от изменений в составе подвижной фазы.

В инжектор хроматографа вводят 10 мкл раствора А. При наличии пика, совпадающего по времени удерживания с каким-либо стандартом, определяют его высоту (hoop). Расчет концентрации дезоксиниваленола в образце проводят по формуле:

„ Vixmxho6p.

^ ~ VaxMx lOOOxhcr ЫГ^КГ| где:

Vi — объем раствора А, мкл (200 мкл);

V2 — объем раствора А, внесенный в хроматограф, в мкл (10 мкл); ш — масса стандарта дезоксиниваленола, введенная в хроматограф, в нг,

М — аликвотная навеска образца, соответствующая раствору А (5 г для пшеницы, 3 г для кукурузы);

Ьст. — высота пика, соответствующая данной массе стандарта, в мм; hoGp.— высота пика дезоксиниваленола из образца, в мм.

49

Есл и п и к дезокси н и вал енол а в образ це выходит за п редел ы ш кал ы самописца, анализ проводят повторно после разбавления раствора А этилацетатом, т. е. после увеличения объема Vi.

4-220

3. Обнаружение, идентификация и определение содержания зеараленона

3.1. Очистка экстракта

В делительную воронку на 500 мл помещают 50 мл фильтрата, добавляют 50 мл гексана (или гептана), насыщенного ацетонитрилом (гексан, насыщенный ацетонитрилом готовят следующим образом: в делительную воронку на 500 мл помещают 200 мл гексана и 30 мл ацетонитрила, интенсивно встряхивают и после расслоения жидкостей отделяют верхний слой, содержащий гексан). Встряхивают, после разделения слоев отбрасывают верхний гексановый слой. Нижний ацетонитрильный слой дважды встряхивают с 30 мл гексана, насыщенного ацетонитрилом, каждый раз отбрасывая верхний гексановый слой. К обезжиренному ацетонитрильному экстракту в делительной воронке добавляют 100 мл дистиллированной воды и 50 мл бензола. Встряхивают и после разделения слоев отделяют верхний бензольный слой. Если полного расслоения жидкостей не происходит, добавляют 10 мл насыщенного раствора хлорида натрия и смесь еще раз слегка встряхивают. Водный слой экстрагируют еще дважды 30 мл бензола, бензольные слои объединяют и сушат безводным сульфатом натрия. После фильтрования упаривают в грушевидной колбе на 100 мл на ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 45° С. Сульфат натрия промывают 10 мл бензола в ту же грушевидную колбу и упаривают раствор досуха. Остаток растворяют в 500 мкл бензола — раствор В.

3.2. Обнаружение л идентификация зеараленона с помощью одномерной ТСХ

На пластинке «Силуфол* проводят тонкую карандашную линию на расстоянии 12 мм от нижнего края пластинки. На эту линию на расстоянии 2 см друг от друга наносят с помощью микрошприца 5 и 10 мкл раствора В. Между пятнами экстракта на расстоянии 1 см от них на ту же линию наносят 5, 10 и 20 мкл стандартного раствора зеараленона (50,100 и 200 нг зеараленона соответственно). Аналогично готовят вторую пластинку «Силуфол*. Обе пластинки помещают в камеру для ТСХ и элюируют в системе гексан—ацетон (7:3). Пластинки извлекают, сушат на воздухе 3—4 мин.

Для обнаружения пятен зеараленона на 1-ой пластинке используют опрыскивание 10%-ным раствором хлорида алюминия в этиловом спирте с последующим нагреванием в сушильном шкафу при температуре 100—105° С в течение 10 минут. Обнаружение на пластинке пятен, соответствующих по цвету флуоресценции (синий) и хроматографической подвижности пятнам стандар-

тов зеараленона, свидетельствует о возможном наличии зеараленона в образце.

Для подтверждения наличия зеараленона 2-ую ТСХ-пластинку опрыскивают 1%-ным раствором прочной синей В-соли или прочной фиолетовой В-соли в дистиллированной воде, затем пластинку немедленно опрыскивают 5%-ным раствором углекислого натрия до появления красно-бордовой окраски пятен стандарта зеараленона. Обнаружение на пластинке пятна, соответствующего по цвету и хроматографической подвижности стандартам зеараленона, подтверждает наличие зеараленона в образце.

3.3. Количественное определение зеараленона с помощью двумерной ТСХ

Пластинку «Силуфол» размечают тонкими карандашными линиями, не повреждая слоя силикагеля. В правом нижнем углу на расстоянии 12 мм от краев пластинки наносят с помощью микрошприца 20 мкл раствора В. В правом верхнем углу наносят 3 и 7 мкл стандартного раствора зеараленона, 10 и 20 мкл раствора В; в левом нижнем углу наносят 5 и 10 мкл раствора зеараленона, 2 и 5 мкл раствора В. Пластинку помещают в камеру для ТСХ со смесью гексан—ацетон (7:3) и элюируют в 1-ом направлении до достижения фронтом растворителя тонкой карандашной линии, проведенной в

4.5    см от верхнего края пластинки. Пластинку извлекают и сушат на воздухе 5 мин. Затем проводят хроматографию во 2-ом направлении в системе толуол—этилацетат—хлороформ—85% муравьиная кислота (45:25:25:5) до достижения карандашной линии, проведенной в

4.5    см от верхнего края пластинки. Пластинку извлекают из камеры, сушат и обнаруживают пятна по флуоресценции после обработки раствором хлорида алюминия как описано в п. 3.2. Сравнивая интенсивность окраски разных количеств стандарта зеараленона с интенсивностью окраски пятна зеараленона в экстракте (раствор В), определяют количество нг зеараленона в экстракте.

Содержание зеараленона в образце рассчитывают по формуле:

с

VixV3Xm ——————— мг/кг, где;

V2XV4XMXIOOO '    *

С — концентрация зеараленона в образце в мг/кг;

Vi — объем водно-ацетонитрильной смеси для экстракции в мл (125 мл);

V2 — объем водно-ацетонитрильного фильтрата, взятый для анализа, в мл (50 мл);

V3 — объем очищенного экстракта перед ТСХ (раствор В) в мкл (500 мкл);

V4 — объем очищенного экстракта (раствор В), наносимый на пла стинку, в мкл (20 мкл);

М — навеска образца, взятая для анализа, в г (25 г);

51