Купить бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее
Цена на этот документ пока неизвестна. Нажмите кнопку "Купить" и сделайте заказ, и мы пришлем вам цену.
Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"
Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.
Оборудование и материалы
1. Экстракция
2. Обнаружение, идентификация и определение содержания дезоксиниваленола в экстракте
3. Обнаружение, идентификация и определение содержания зеараленона
Дата введения | 01.01.2021 |
---|---|
Добавлен в базу | 12.02.2016 |
Актуализация | 01.01.2021 |
27.06.1990 | Утвержден | МЗ СССР |
---|---|---|
Разработан | Научно-исследовательский институт медицинского профиля |
Чтобы бесплатно скачать этот документ в формате PDF, поддержите наш сайт и нажмите кнопку:
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО НАДЗОРА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
РОССИЙСКИЙ РЕСПУБЛИКАНСКИЙ ИНФОРМАЦИОННО-АНАЛИТИЧЕСКИЙ ЦЕНТР
МЕТОДЫ АНАЛИЗА ЧУЖЕРОДНЫХ ВЕЩЕСТВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ
(Сборник нормативных материалов)
Москва, 1994 г.
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО НАДЗОРА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
РОССИЙСКИЙ РЕСПУБЛИКАНСКИЙ ИНФОРМАЦИОННО-АНАЛИТИЧЕСКИЙ ЦЕНТР
МЕТОДЫ АНАЛИЗА ЧУЖЕРОДНЫХ ВЕЩЕСТВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ
(Сборник нормативных материалов)
Москва, 1994 г.
ш — масса зеараленона (в нг), в V4 мкл очищенного экстракта, оцененная по ТСХ При приведенных в скобках объемах и навесках формула содержания зеараленона выражается следующим образом:
С *0,0025 хюмг/кг
Пели интенсивность окраски пятна зеараленона в экстракте выше интенсивности окраски пятна стандарта, соответствующего 20 мкл стандартного раствора (200 нг зеараленона), то на пластинку следует нанести либо меньшее количество экстракта (уменьшить объем V^), либо разбавить раствор В бензолом (увеличить объем V3), внеся соответствующие коррективы в расчетную формулу.
3.4. Обнаружение и количественное определение зеараленона с помощью ВЭЖХ
Условия ВЭЖХ: подвижная фаза гексан—эфир—уксусная кислота (65:35:1), скорость подвижной фазы 1,5 мл/мин или петро-лейный эфир (т. кип. 40—70° С)—эфир—уксусная кислота (50:50:1), скорость подвижной фазы 2 мл/мин. Рекомендуется использовать перегнанный гексан или петролейный эфир и эфир, профильтрованный через слой оксида алюминия (5 см). УФ-детектор устанавливается на длину волны 283 мн, шкала чувствительности 0,005 Е.О.П. Шкала самописца 10 мВ. Если используется флуориметри-ческий детектор, то длина волны на линии возбуждения устанавливается около 283 нм, а на линии эмиссии — фильтр от 420 нм (или 440 нм в случае монохроматора на линии эмиссии).
Для калибровки прибора в инжектор с помощью микрошприца вводят 2 и 5мкл стандартного раствора, что соответствует 20 и 50 нг зеараленона. Для каждого количества стандарта определяют высоту пика на хроматограмме. При описанных условиях ВЭЖХ время выхода пика зеараленона составляет 5—7 мин.
В инжектор хроматографа вводят 10 мкл раствора В. При наличии пика, совпадающего по времени выхода со стандартом, определяют его высоту (h06P.).
Расчет концентрации зеараленона в образце проводят по формуле:
VixV3xmxhcT. .
Ce V2xV4xMxho6p.xl000 мг/кг’где-
С — концентрация зеараленона в образце в мг/кг,
Vi — объем водно-ацетонитрильной смеси для экстракции в мл (125 мл);
V2 — объем водио-ацетонитрнльного фильтрата, взятый для анализа, в мл (50 мл);
Уз — объем очищенного экстракта перед ВЭЖХ (раствор В) в мкл (500 мкл);
52
V4 — объем очищенного экстракта (раствор В), внесенный в хрома тограф, в мкл (20 мкл);
М — навеска образца, взятая для анализа, в г (25 г); щ — масса стандарта зеараленона, введенная в хроматограф в нг, Ьст. — высота пика, соответствующая данной массе стандарта, мм; Ьобр.— высота пика зеараленона из образца в мм.
Если пик зеараленона в образце выходит за пределы шкалы самописца, анализ проводят повторно после разбавления раствора В бензолом, т. е. после увеличения объема Уз.
При ВЭЖХ зеараленона чувствительность УФ- и флуоримет-рического детектора примерно одинаковы. Преимуществом флуори-метрического детектора является его селективность (меньшее количество посторонних пиков на хроматограмме).
53
I МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКОТОКСИНОВ *
1. Методика определения афлатоксинов в пищевых продуктах методом тех.................................... 3
2. Методика определения афлатоксинов в пищевых продуктах с
помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии ... 11
3. Методика определения афлатоксинов в продуктах животного
происхождения ................................. 19
4. Методика определения содержания патулииа в фруктовых и
овощных соках и пюре............................ 26
5. Методика определения мпкотоксина патулииа в продуктах
переработки плодов и овощей ....................... 31
6. Методика определения зсарпленопл в пищевых продуктах .... 37
7. Методика определения дсзоксинивалспола (вомитокспна) в зерне
и зернопродуктах................................ 41
8. Методика определения дсзоксинниллснола и зсараленона в зерне
и зернопродуктах ............................... 45
9. Методика определения Т-2 токсина в пищевых продуктах и
продовольственном сырье.......................... 53
10. Методика определения охратоксина А в пищевых продуктах ... 57
11. Методики определения мпкотокеппои: Т-2 токсина, зсараленона
(Ф-2) и охратоксина А............................ 63
II. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУЖЕРОДНЫХ ВЕЩЕСТВ 77
12. Атомно-абсорбционные методы определения токсинных элементов в пищевых продуктах и пищевом сырье.............. 77
13. Методика определения мстил-этилмсркурхлорида в пищевых
продуктах, кулннарно обработанных ................... 93
14. Методика определения содержания общей ртути в пищевых
продуктах методом беспламенной атомной абсорбции....... 97
15. Методика по определению хрома в овощных консервах...... 103
16. Методика определения содержания гистамина в рыбопродуктах
(флуоромстричсский метод)......................... 105
17. Метод выделения, идентификации и количественного определения
гистамина в рыбопродуктах (колориметрический метод)...... ПО
18. Методика определения нитратов и нитритов в молоке и молочных
продуктах..................................... 114
19. Методика определения жиратов и нитритов в плодовоощной
111. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ СТИМУЛЯТОРОВ РОСТА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ
20. Методика определения остаточных количеств
Диэтилстильбэстрола в продуктах животноводства и в
консервированной продукции........................ 124
биологических жидкостях .......................... 133
21. Методика определения остаточных количеств
Эстрадиола-17/? в продуктах животноводства ............. 138
22. Методика определения антибиотиков тстрациклинового ряда методом тонкослойной хромато<рафии (качественный анализ) ... 142
23. Методика определения антибиотиков тетрацикл и нового ряда
<]»луоримстричсским методом (количественный анализ) ...... 143
24. Определение летучих N-нитрозаминов в продовольственном сырье
и пищевых продуктах........................ . . . ]4<з
Брагина И. В., Орехова II. Л- — специалисты лаборатории физико-химических методов исследований Российского Республиканского информационно-аналитического центра.
Состав и тел и:
Под редакцией: Подуповой JI. Г. — заместители Главного государственного санитарного врача РФ, заслуженного врача РФ.
Подписано к печати. 21.11.94.
Формат 60 х 88/16. Бумага офсетная. Уел. псч. л. 9,8. Уел. кр.-огг. 9,8. Тираж 1000 экз. Зак. 220.
Изготовлено в Московской типографии № 11 Комитета по печати РФ. 113105, Москва, ул. Нагатинская, 1,
ВВЕДЕНИЕ
Загрязнение пищевых продуктов токсичными чужеродными веществами является частью глобальной проблемы загрязнения окружающей среды, поэтому в настоящее время очень важным аспектом является определение микропримесей загрязняющих веществ в продуктах питания и снижение их содержания. В последние годы все больший приоритет приобретают исследования по определению таких токсикантов как различные микотоксины (афла-токсины, патулин, зеараленон, вомитоксин, трихотецены и др.), соли тяжелых металлов, нитриты, нитраты, N-нитрозамины и др.
Настоящий сборник включает в себя ранее изданные Методические указания по определению наиболее приоритетных загрязнителей пищевых продуктов, разработанные научно-исследовательскими институтами медицинского профиля и утвержденные Главным санитарно-эпидемиологическим управлением Минздрава СССР и ГКСЭН РФ.
В соответствии с Постановлением Госкомсанэп ид надзора Российской Федерации от 06.02.92 г. № 1 *0 порядке действия на территории Российской Федерации нормативных актов бывшего Союза ССР в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения» на всей территории Российской Федерации действуют общесоюзные санитарные правила и нормативные акты впредь до принятия соответствующих нормативных актов Российской Федерации в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения.
Сборник предназначен для санитарно-гигиенических лабораторий центров Госсанэпиднадзора, НИИ и учреждений гигиенического профиля, кафедр гигиены питания медицинских институтов и институтов усовершенствования врачей, а также может быть использован лабораториями других организаций, занимающихся исследованиями пищевых продуктов.
Будем признательны за все критические замечания и пожелания, направленные на улучшение данного Сборника или составление аналогичных Сборников по другим разделам исследований пищевых продуктов.
Л. Г. Подунова
МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДЕЗОКСИНИВАЛЕНОЛА И ЗЕАРАЛЕНОНА В ЗЕРНЕ И ЗЕРНОПРОДУКТАХ*
Оборудование и материалы
1. Аппарат для встряхивания проб типа АВУ-6С по ТУ 64-1-2151-78 или аналогичный.
2. Ротационный испаритель ИР-1М по ТУ 25-11-917-76 (завод «Химлабприбор») с ловушкой или аналогичный испаритель.
3. Мельница лабораторная электрическая ЭМ-ЗА по ТУ 46-22-236-79 или аналогичная.
4. Прибор для флуоресцентного анализа витаминов в растворе (модель 833) ТУ 64-1-1080-78 или диагностическая лампа ОЛД-41 или «-Люминоскоп» ЛПК-1.
— Методические указания по обнаружению, идентификации и определению содержания дезоксинивапснола (вомитоксина) и зсаралсноиа в зерне и зерномродуктах, уш. М3 СССР 27 июня 1990 г. № 5177-90
45
5. Жидкостной хроматограф с УФ-детектором с переменной длиной волны (для анализа зеараленона возможно также использование флуориметрического детектора) колонка и предколонка с силикагелем с размером частиц 5 мкм, длина колонки 25 см, предколонки — 4,5 см, внутренний диаметр —4,6 мм.
6. Микрошприцы МШ-10 на 10 мкл, микрошприцы на 10 и 25 мкл для ВЭЖХ.
7. Стеклянные камеры для ТСХ с притертыми крышками.
8. Пластинки для ТСХ «Силуфол» размером 15 X 15 см или 20 х 20 см, производство ЧСФР.
9. Колбы плоскодонные конические, 250 мл, 11Ш 29, тип КнКШ 250-29/32, ГОСТ 10394-74.
10. Колбы грушевидные на 100 мл с НШ 14,5, тип ГрКШ-50-14/23 по ГОСТ 10394-74.
11. Колбы грушевидные на 10—20 мл с НШ 14,5, тип ГрКШ-50-14/23 по ГОСТ 10394-74.
12. Колбы мерные на 100 мл, тип 2-100-2 по ГОСТ 1770-74.
13. Цилиндры мерные на 100 мл с притертой пробкой, тип 2-100 по ГОСТ 1770-74.
14. Воронки делительные ВД2-250 по ГОСТ 8613-75.
15. Колонка стеклянная хроматографическая 220 х 15 мм.
16. Распылитель стеклянный с грушей.
17. Стандартные растворы дезоксиниваленола в этилацетате с концентрацией 25 нг/мкл каждый, стандартный раствор зеараленона в бензоле с концентрацией 10 мг/мкп.
18. Ацетонитрил «ч» по ТУ 6-09-3534-74.
19. Ацетон «чда* по ГОСТ 2603-79.
20. Бензол «чда» по ГОСТ 5955-75.
21. Гексан «ч» по ТУ 6-09-3375-78 или гептан «чда» по ГОСТ
5.395-70.
22. Изопропиловый спирт (пропанол-2) «хч* поТУ 6-09-1710-77.
23. Кислота уксусная «чда* по ГОСТ 61-75.
24. Кислота муравьиная «ч* по ГОСТ 5848-73.
25. Метанол «чда» по ГОСТ 6995-77.
26. Толуол «чда» по ГОСТ 5789-78.
27. Хлороформ для наркоза или по ГОСТ 3610-51.
28. Этанол по ТУ 6-09-1710-77.
29. Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат) «чда* поГОСТ 22300-76.
30. Эфир диэтиловый по ГОСТ 6265-52.
31. Эфир летролейный (т. кип. 40—70° С) по ТУ 6-02-1244-83.
32. Алюминий оксид нейтральный для хроматографии по Брокману, «Реанал», (Венгрия) № 01125 или алюминий оксид для хроматографии по ТУ 6-09-916-75.
33. Алюминий хлористый, 6-водный «чда» по ГОСТ 3759-75.
34. Натрий сернокислый, безводный «чда» по ГОСТ 4166-76.
35. Натрий кислый углекислый «чда» по ГОСТ 83-79.
46
36. Натрий хлористый «осч* по ТУ 6-09-3658-74.
37. Прочный синий В-соль (диазоль синий С) или прочный фиолетовый В-соль для гистологии, «Хемапол», ЧСФР.
38. Уголь активированный Р.72.270.3.
При отборе пробы для анализа следует руководствоваться требованиями ГОСТ 13586.3-83 «Зерно. Правила приемки и методы отбора проб*. Отобранную пробу измельчают в течение 1—2 мин. в лабораторной мельнице или кофемолке. Навеску 25 г измельченного зерна или муки помещают в плоскодонную коническую колбу на 250 мл, добавляют 20 мл воды и затем 105 мл ацетонитрила. Встряхивают на аппарате для встряхивания проб в течение 30 минут. Полученную смесь фильтруют через бумажный складчатый фильтр в мерный цилиндр. Отбирают 25 мл фильтрата для анализа на дезоксиниваленол и 50 мл фильтрата для анализа на зеараленон.
2.1. Очистка экстракта
В стеклянную хроматографическую колонку на дно помещают кусочек ваты, насыпают 0,75 г порошка активированного угля и сверху — слой 0,75 г оксида алюминия. Над слоем оксида алюминия помещают кусочек ваты. Осторожно помещают в колонку 25 мл экстракта, соответствующие 5 г исходного образца (при анализе кукурузы наливают 15 мл экстракта, соответствующие 3 г исходного образца). Отбирают элюат и, не давая колонке просохнуть, добавляют 10 мл смеси ацетонитрил—вода (84:16). Объединенные элюаты фильтруют через бумажный складчатый фильтр в грушевидную колбу на 50 мл, бумажный фильтр промывают 5—10 мл изопропилового спирта в ту же колбу и фильтрат упаривают на ротационном испарителе до объема 5—7 мл. Добавляют около 20 мл изопропилового спирта и повторно упаривают на ротационном испарителе досуха. Остаток в колбе после упаривания не должен содержать капель воды. Остаток растворяют в 200 мкл этил ацетата и плотно закрывают стеклянной пробкой (раствор А).
2.2. Обнаружение и количественное определение дезоксиниваленола с помощью одномерной ТСХ
На пластинке «Силуфол* проводят тонкую карандашную линию в 1,5—2 см от нижнего края пластинки. На эту линию на расстоянии 2 см друг от друга с помощью микрошприца наносят 2, 5, 10 и 20 мкл раствора А. Между пятнами экстракта на расстоянии 1 см
47
от них на ту же линию наносят 2, 4, 6 мкл стандартного раствора дезоксиниваленола (50, 100 и 150 нг дезоксиниваленола). Пластинку помещают в камеру для ТСХ и элюируют в системе гексан—ацетон (3:2) на расстоянии 15 см. Пластинку извлекают из камеры, сушат на воздухе 3—4 минуты и опрыскивают 10%-ным раствором хлористого алюминия в этаноле. Пластинку нагревают в сушильном шкафу в течение 5—7 минут при 105° С, затем рассматривают в длинноволновом УФ-свете. Дезоксиниваленол проявляется в виде пятен с синей флуоресценцией с Rf0,25—0,30. Наличие в экстракте пятен, соответствующих по цвету флуоресценции и хроматографической подвижности стандарту дезокси- ниваленола, свидетельствует о возможном наличии этого токсина в образце.
Для количественного определения сравнивают интенсивность флуоресценции разных количеств стандартов дезоксиниваленола с интенсивностью флуоресценции их-пятен в образце, визуально оценивая количество нг токсинов в нанесенных на пластинку объемах раствора А. Концентрацию дезоксиниваленола в образце рассчитывают по формуле:
.. Vjxm
L = vIxMxToOO МГ/КГ’ 1 дс:
Vi — объем раствора А в мкл (200 мкл);
V2 — объем раствора А, нанесенный на пластинку в мкл; m — масса дезоксиниваленола (в нг) в V2 мкл раствора А, оцененная визуальным сравнением со стандартом на ТСХ-пластинке;
М — аликвотная навеска образца, соответствующая раствору А (5 г для пшеницы, 3 г для кукурузы).
Если интенсивность флуоресценции пятна дезоксиниваленола в экстракте выше интенсивности флуоресценции пятна дезоксиниваленола, соответствующего 6 мкл стандартного раствора, то следует разбавить раствор А этилацетатом, т. е. увеличить объем Vi, внеся соответствующие коррективы в расчетную формулу.
Окончательное заключение о наличии и уровне загрязнения образца дезоксиниваленолом принимается только на основе данных двумерной ТСХ.
2.3. Подтверждение наличия и количественное определение дезоксиниваленола с помощью двумерной ТСХ
Пластинку «Силуфол» размечают тонкими карандашными линиями, не повреждая слоя силикагеля. В правом нижнем углу на расстоянии 12 мм от краев пластинки наносят с помощью микрошприца 20 мкл раствора А. В левом нижнем углу пластинки наносят 2, 4 и б мкл стандартного раствора дезоксиниваленола, 2 и 5 мкл раствора А. В верхнем правом углу пластинки наносят 2, 4 и 6 мкл стандартного раствора дезоксиниваленола, 10 и 20 мкл раствора А. Пластинку помещают в камеру для ТСХ со смесью гексан—ацетон (3:2) и элюируют ее в 1-ом направлении до достижения фронтом
4S
растворителя тонкой карандашной линии, проведенной в 4 см от верхнего края, пластинку извлекают из камеры и сушат на воздухе. Затем проводят элюирование пластинки во 2-ом направлении смесью эфир—гексан—изопропиловый спирт—вода (77:18:4,5: 0,5). После достижения фронтом растворителя карандашной линии, проведенной в 4,5 см от верхнего края пластинки, ее извлекают из камеры и сушат на воздухе. Обнаружение и количественное определение проводят аналогично п. 2.2.
2.4. Обнаружение и количественное определение дезокснннваленола с помощью ВЭЖХ
Условия ВЭЖХ: подвижная фаза гексан—изопропанол—вода (85:25:1,5), скорость подвижной фазы 1,0 мл/мин. Рекомендуется использовать перегнанные растворители, фильтруя их через бумажный складчатый фильтр перед использованием. УФ-детектор устанавливается на длину волны 224 нм, шкала чувствительности 0,005 Е.О.П. Входное напряжение самописца 10 мВ.
Для калибровки прибора в инжектор с помощью микрошприца вводят по 2 и 4 мкл стандартных растворов, что соответствует 50 и 100 нг дезоксиниваленола. Для каждого количества стандарта определяют высоту пика на хроматограмме. При описанных выше условиях ВЭЖХ время удерживания пика дезоксиниваленола составляет от 5 до 6 мин. в зависимости от изменений в составе подвижной фазы.
В инжектор хроматографа вводят 10 мкл раствора А. При наличии пика, совпадающего по времени удерживания с каким-либо стандартом, определяют его высоту (hoop). Расчет концентрации дезоксиниваленола в образце проводят по формуле:
„ Vixmxho6p.
^ ~ VaxMx lOOOxhcr ЫГ^КГ| где:
Vi — объем раствора А, мкл (200 мкл);
V2 — объем раствора А, внесенный в хроматограф, в мкл (10 мкл); ш — масса стандарта дезоксиниваленола, введенная в хроматограф, в нг,
М — аликвотная навеска образца, соответствующая раствору А (5 г для пшеницы, 3 г для кукурузы);
Ьст. — высота пика, соответствующая данной массе стандарта, в мм; hoGp.— высота пика дезоксиниваленола из образца, в мм.
49
Есл и п и к дезокси н и вал енол а в образ це выходит за п редел ы ш кал ы самописца, анализ проводят повторно после разбавления раствора А этилацетатом, т. е. после увеличения объема Vi.
4-220
3.1. Очистка экстракта
В делительную воронку на 500 мл помещают 50 мл фильтрата, добавляют 50 мл гексана (или гептана), насыщенного ацетонитрилом (гексан, насыщенный ацетонитрилом готовят следующим образом: в делительную воронку на 500 мл помещают 200 мл гексана и 30 мл ацетонитрила, интенсивно встряхивают и после расслоения жидкостей отделяют верхний слой, содержащий гексан). Встряхивают, после разделения слоев отбрасывают верхний гексановый слой. Нижний ацетонитрильный слой дважды встряхивают с 30 мл гексана, насыщенного ацетонитрилом, каждый раз отбрасывая верхний гексановый слой. К обезжиренному ацетонитрильному экстракту в делительной воронке добавляют 100 мл дистиллированной воды и 50 мл бензола. Встряхивают и после разделения слоев отделяют верхний бензольный слой. Если полного расслоения жидкостей не происходит, добавляют 10 мл насыщенного раствора хлорида натрия и смесь еще раз слегка встряхивают. Водный слой экстрагируют еще дважды 30 мл бензола, бензольные слои объединяют и сушат безводным сульфатом натрия. После фильтрования упаривают в грушевидной колбе на 100 мл на ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 45° С. Сульфат натрия промывают 10 мл бензола в ту же грушевидную колбу и упаривают раствор досуха. Остаток растворяют в 500 мкл бензола — раствор В.
3.2. Обнаружение л идентификация зеараленона с помощью одномерной ТСХ
На пластинке «Силуфол* проводят тонкую карандашную линию на расстоянии 12 мм от нижнего края пластинки. На эту линию на расстоянии 2 см друг от друга наносят с помощью микрошприца 5 и 10 мкл раствора В. Между пятнами экстракта на расстоянии 1 см от них на ту же линию наносят 5, 10 и 20 мкл стандартного раствора зеараленона (50,100 и 200 нг зеараленона соответственно). Аналогично готовят вторую пластинку «Силуфол*. Обе пластинки помещают в камеру для ТСХ и элюируют в системе гексан—ацетон (7:3). Пластинки извлекают, сушат на воздухе 3—4 мин.
Для обнаружения пятен зеараленона на 1-ой пластинке используют опрыскивание 10%-ным раствором хлорида алюминия в этиловом спирте с последующим нагреванием в сушильном шкафу при температуре 100—105° С в течение 10 минут. Обнаружение на пластинке пятен, соответствующих по цвету флуоресценции (синий) и хроматографической подвижности пятнам стандар-
тов зеараленона, свидетельствует о возможном наличии зеараленона в образце.
Для подтверждения наличия зеараленона 2-ую ТСХ-пластинку опрыскивают 1%-ным раствором прочной синей В-соли или прочной фиолетовой В-соли в дистиллированной воде, затем пластинку немедленно опрыскивают 5%-ным раствором углекислого натрия до появления красно-бордовой окраски пятен стандарта зеараленона. Обнаружение на пластинке пятна, соответствующего по цвету и хроматографической подвижности стандартам зеараленона, подтверждает наличие зеараленона в образце.
3.3. Количественное определение зеараленона с помощью двумерной ТСХ
Пластинку «Силуфол» размечают тонкими карандашными линиями, не повреждая слоя силикагеля. В правом нижнем углу на расстоянии 12 мм от краев пластинки наносят с помощью микрошприца 20 мкл раствора В. В правом верхнем углу наносят 3 и 7 мкл стандартного раствора зеараленона, 10 и 20 мкл раствора В; в левом нижнем углу наносят 5 и 10 мкл раствора зеараленона, 2 и 5 мкл раствора В. Пластинку помещают в камеру для ТСХ со смесью гексан—ацетон (7:3) и элюируют в 1-ом направлении до достижения фронтом растворителя тонкой карандашной линии, проведенной в
4.5 см от верхнего края пластинки. Пластинку извлекают и сушат на воздухе 5 мин. Затем проводят хроматографию во 2-ом направлении в системе толуол—этилацетат—хлороформ—85% муравьиная кислота (45:25:25:5) до достижения карандашной линии, проведенной в
4.5 см от верхнего края пластинки. Пластинку извлекают из камеры, сушат и обнаруживают пятна по флуоресценции после обработки раствором хлорида алюминия как описано в п. 3.2. Сравнивая интенсивность окраски разных количеств стандарта зеараленона с интенсивностью окраски пятна зеараленона в экстракте (раствор В), определяют количество нг зеараленона в экстракте.
Содержание зеараленона в образце рассчитывают по формуле:
с
VixV3Xm ——————— мг/кг, где;
V2XV4XMXIOOO ' *
С — концентрация зеараленона в образце в мг/кг;
Vi — объем водно-ацетонитрильной смеси для экстракции в мл (125 мл);
V2 — объем водно-ацетонитрильного фильтрата, взятый для анализа, в мл (50 мл);
V3 — объем очищенного экстракта перед ТСХ (раствор В) в мкл (500 мкл);
V4 — объем очищенного экстракта (раствор В), наносимый на пла стинку, в мкл (20 мкл);
М — навеска образца, взятая для анализа, в г (25 г);
51