ШИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИИ СССР

Всесоюзный научно-исследовательский институт гигиены и токсикологии пестицидов, полимеров и пластических масс

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПЕСТИЦИДОВ В ОБЪЕКТАХ ОЮУЖАОЩВЙ СРЕДЫ И В 11РОДУКТАХ ПИТАНИЯ

СБОРНИК-МЕТОДИЧЕСКИХ УКАЗАНИЯ И РЕКОМЕНДАЦИЯ

I 9 9 О г

'УТВЕЩАЮ'

Заместитель Гяавногч Государственного санитарного врача CWP

В.И.ЧШЭТАЕ8 " ft ^п ИСНЯ Х88⁹ г.

5 *990-89

МВТОДИЧВСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПГЗДЕЯЕНИЮ В ОДНОЙ ПРОЕВ Ф(ХЖ)]ЮРГАНИЧБСКИХ И ХЛОРОГОЛИЧЕСКИХ ПБС7МЦИД0В, ПРЛМЕНЯШУХ НА ТОМАТАХ,ХРОМАТОГРАй»ИЧЕСКИМ11 МЕТОДАМИ

I* Краткая характеристика препаратов

физико-химические свсйсг а и ШСУ с?осфо органических (вОП)

я хлороргаявческих пестицидов (ХОП), применяема: на томатах, приведены в таблице I.I.

2. Методика определения, в томатах и томатной пасте ФОН и ХОП, применяемых на томатах.

2.1.    Основные положения

2.1.1.    Принцип метода

Метод сноиан на извлечении смеси ХОП и ФОП, Применяемых на тсюатах, из единой пробы томатов или томатной пасты водным ацетоном, перераспределения в хлоргЧ>ом, разделении экстракта на 2 равные части, рздшнпхяирш в одной из которых определяют ФОЛ в другой - ХОП путем соче акия хромато-апэииного метода (ТСХЭ), газожидкостной (1ХХ), тонкослойной хроматографии (ТСХ) п различных способов очистки экстрактов, как пока зано на схеме (рис. 2.1.).

2.1.2.    Метрологическая характеристик'' метода.

Метрологическая характеристика метода приведена в табл.2Л.

-/<2

2.3.    Приборы и посуда

Хроматографу марки "Цвет" или аналогичный с ДПР (ЭЗД) и *1ИД Прибор для отгонки растворителей (ротаииопннй вакуумный испаритель типа ИР-IM, ТУ 25-II-9I7-76)

Аппарат для встряхивания колб типа АВУ-€0,ТУ 64-1-2451-78 Колбы мерные вместимостью 25,50,100 мл,ГОСТ 1770-74 Колбы конический вмес-.имсстью 50,100,250 мл,ГОСТ 10394-'2 Колбы грушевидные вместимость!) 50 мл OKU! 50-I4/23TC,

ГОСТ 10384-72

Воронки химические «ГОСТ 8613-75 Делительные воронки на 50,250,500 lx,ГОСТ 6613-75 Пробирки мерные на шлирах, вместимостью 5 мл,ГОСТ 1770-74 Пипетки на 0,1; 0,2; 1;5;Ю мл,ГОСТ 1770-74 Микрошлриш но 10 мкл МШ-10,ТУ бВ-2.633,024

2.4.    Подготовка к определению

2.4.1.    Отбор проб

Отбор, хранение и доставка проб производится в соответствия с "Унифицированными правилами отборе проб сельскохозяйственной продукции, пищевых цродуктсв и объектов окружающей среды для определения микроколичостл пестицидов", утвержденных Заместителем Главного Государственного санитарного врача СССР *2051-79 от 21.08.79.

2.5.    Описание определения

2.5.1.    Экстракция

К 100 г измельченных томатов (20 г пасты) прибавить 100 мл (50 мл) смеси ацетон-водп 1:1 и экстрагировать з течение 30 минут на аппарате для встряхявгяня. Экстракт слить в делительную цоронку, фильтруя через вату, остаток в колоо промыть дважды по 20 мл смесью ацетон-вода 1:1 и присоединить к экстракту. Прибавить к экстракту 50 мл RgO и экстрагировать хлоре-фс^мил 3 х 40 мл, осторожно вотряхпвая. Хлороформ ые экстракты слить через фильтр "красная лента" с наоыиашшн на него слоем б/в. оульодата натрия. Разделить экстракт на две равные тастк: одна для определения СОЛ, другая - ХГЯ.

•V⁷/-

определение ФОН

2.5.2.1.    Предварительная идентификация. 1/2 часть экстракта упарить до ^ 0,5 :дл под вакуумом на ротационном испарителе при температуре баня не более 45°С. Остаток упарить досуха при комнатной температуре. Остаток растворить в 5 мл ацетона и провести предварительную идентификацию 40П хромато-8НЗЛШП4М методом по ’’Унифицированной методике определения остаточных количеств о.оо*юрорганических пестицидов £3222-85 от II.3.85 г.". Если хромато-энзимным методом установлено иапи-чие ФОГТ, аж-хиз проводят далее.

2.5.2.2.    Очистка экстракта

Ацетон (5 мл) из экстракта упарить досуха. К сухому остатку прибавить 2 мл смеои бензол-ацетон 1:3 п 0,1 г угля 0У-*, встряхнуть 2-3 минуты, отфильтровать через фильтр "красная лента", промыть уголь нисколько раз спесью растворителей (бензол-ацетон 1:3), общий объем 30 мл. Упарить экотракт до 0,5 мл, довести точно до 1-5 мл ацетоном,

2.5.2.3.    Ш ФСП Детектор термоионный ТЦД

Ввод проб в хроматограр через самоуплотняющуюся мембрану

Шкала электрометра 2.10"*^а

Скорость бумаги 240 юл/час

Стандартный раствор - смеоь ФОП £2 (2-5 мкл)

Вводимый объем пробы 2-5 мкл

Длина колонки I м

Диаметр колонки 3 мм

Скорость rasa-носителя азота 23 мл/мин

Скорость водорода 14-17 мл/мин

Скорость воздуха 400 мл/мин

Фаза - 5JSE-30 на хроматояе H-Aw'-HKlU , при исиильзоваг-нии этой „азы: h колонки-190°С, t испарителя-210°С

Фаза 3% 0(/ -17 на хромосом U-'HP, при использовании этой фазы i кол. -I80°C, t иси. - 2Ю°С

Для определения Фозалопа - ДПР, колонка стеклянная 0,5 м фаза 5% $ Е-30 на хроматоне К-АИМЩ$ , ^ кол. 220°С,

- 230°С,    £    д    -    240°С.

Для всех ФОЛ время удерживания относительно метаф.оса при различных условиях хроматографирования приведены в таблице 2.2.

2.5.2.4. ТСХ ФОП

После очистки (П.2.5.2.Я.) экстракт упарить до 0,3 кл. Слой на пластинке "Силуфол" разделить на полосы шириной 20 мм вдоль линии движения растворителя. На одну из полосок в точку на расстоянии 1,5 ом от нижнего края нанести количественно пробу ополаскивая колбу эфиром. Слева и справа от пробы нанести PC ФОП #1 в количестве 0,05-0,2 ил. Поместить пластинку в камеру, содержащую смесь ; ютворителей гексан-вцетон 3:1. После развития хроматограммы и высушивания на воздухе пластинку обработать проявляющим реагентом Jtt, сначала раствором "а^и, прогреть в сушильном шка^у при 150°С в течение 10 мин и обработать реагентом "б". Исследуемые пестициды проявляются в виде синих пятен (базудин красный) на белом Фоне. Величины

приведены в таблице 2.3.

2.5.3.    Определение ХОП

2.5.3. Х. Очистка экстракта

1/2 часть экстракта (п.2.5.1) упарить под вакуумом на ротационном испарителе при тешк_ятуре баш: ».з более 45°С. Оотаток упаоить досуха при комнатной температуре. Сухой остаток перенеоти в делительную воронку 10 ил н-гексана, прибавить в воронку 5 мл концентрированной серной кислоты и осторожно встряхнуть несколько раз. Отделять органический слой и повторить обработку серной кислотой до тех пор, пока кислота не стелет бесцветной. Экстракт промыть дистиллированной водой 2 х 10 мл. Н-гексановнй окотракт перенеоти в колбу для отгонки растворителей, сливая через слой 6/в Ыа«?О_д на воронке.

.(/•Ой ter°4*l .    „    *    ^н

ПромыТЬ 'Я=геЪсаиом 2 х 5 мл, присоед*..шть емкш к экот^ ракту. Упарить растворитель на ротационном испарителе при температуре бани не более 45°С до ~ 0,5 мл, довести точно до 1-2 мл и-гексаном. Из исследуемых ФОП при очнетко оерной кио-лотой остается ТХМ-З.

S3-

Величины Ry исследуемых ФОН и ХОН в различиих иодвижиих разах

Таблица 2.3,

№ : Пестицид пи: R,* в Щ :Хлороформ: • • • • • • cci4 srei ан-: аьетон : 3:1 н-гексаи I, Хлорофос 0,09 0 С 08 0 2. Фос^*амид 0,15 0 0,15 0 3. ДДО 0,27 0 0,16 0 4. La зудня 0,30 0 0.51 0 5. Хостаквик 0,34 0 0,24 0 6. Карбофос 0,43 0 0,34 0 7. Актеллик 0,58 0 0,55 0 8. Фозалон 0,69 0 0,36 0 9. Трихлорметафос 0,95 0,45 0,74 0,06 10. Кельтан 0,86 0,20 - 0,05 II. Дилор 1.0 0,85 - 0,3

2.5.3.2. ПСХ ХОТ

Детектор ДПР (ЭЗД)

Ввод проб в хроматограф через самоуплотняющую мембрану

Шкала алейрометра 20Л0~**а

Скорость бумаги 240 мм/Яас

Скороть газа-нооителя азота 60 мл/мин

Скорость продувочного rasa 150 мл/мин

Стандартный раствор - смесь ХОП #4 (2-5 мкп)

Объем вводимой пробы 2-5 мкл

Фаза Ъ% .< Е-30 на хроматоне Ы-АК-НМД$ # при использовании этой фазы:дляна колонки I м, диаметр 3 мм, t кол. 190°,

£ дет 230°С, I исп. 2Ю°С

Фаза смешанная: 1,5% ОУ-17+1,95£ £В-30 на хроматоно Ы-А W-Ш £ ₉ при использовании этой фазы: длина колонки 2 м, диаметр 3 мм, t кол.190°, ^ дет.230°С, t исп. 210°С.

Для ХОП и ФОП определяемых при 6том способе очистки время удерживания относительно метафоса привевдено в табл.2.2.,

2.5.3.3. ТСХ ХОП

После очистки (п.2.5.3.1.) экстракт упарить до 0,3 мл.

На пластинку "оклуфол" нанести прооу (см.п.2,5.2.4.Дополаскивая колбу п-гексаном. Справа и слева от пробы нанести PC ХОП *3 в количестве 0,05-0,2 мл и в эти же точки нанести стандартный раствор ТХМ-3 (р-р Ж5)-0,05-0,2 мл). Поместить пластинку в камеру, содержащую подвижную фаэу - четыреххлористый углерод. После развития хроматограммы и высушивания пластинки на воздухе, пластинку обработать проявляющим реагентом Я2 и поместить на 10 мин под УФ-свет (лампа ПРК-4) яа расстоянии 20 см от источника света. Исследуемые пестишфы появляются в виде темно-оерых пятен на светлом фоне. Величиш Rj приведены в таблице 2,

2.6. Обработка результатов анализа

2.6.1. Ш

Идентифицируют обнаруженные пестициды по времени удерживания (см.табл.2.2.). Количественное определение проводят метод соотношения оо стандартами но высоте хроматографических пиког

-Л*'

Таоляда I.I.

Характеристика авяллз ирусмых г ест анклав

а :Пествлд -.Структурная формула "“1ЕГ7К—г®».’*"8*™»*1": *«у, МГ/КГ aG: (смотав*) : :масса::ос : . :»**.рт.ст: :мг/л :орг. : :расгз.: СССР -.страаи-:члены СЭВ 1:2: 3 : 4 : _ 5 : 6 : 7 8 : О ; ю TUi : 5^^{av>jJ'0r'vli(Ws305,‘ " 5 га s w 0,2 2. Базуден , (CJLO)^ - 0 уГ-** jCa(GRJ93t4v4 89 40 Олазинон; ^ ^ ■» * (0,1) ас., ХЛЦ>, Агнэ. 0,5 3. 12ЭЭ . (QLO)oP - ОСЯ - CCI, UEUtopvoc) ° ^ * 221,0 35 v - 10000 (0,05) ас., «*. 06ЫЭ., мет. •* 0.1 4. KapCgoo^^O)^ -SOCOgCjHj 5 C^COgCjjHg 330.4 155- - 150 157 (0,7' ас., хлф »т. и др. 0,5 2,0

w? М*

S. Созако.ч    ССДО)*?    -<!CiU -n-367,8 -    47,

(Сеп*о*>о-вт,    ^    * I    I |! .jq

за-»»)    $

(poxop. .    Ц

ДР*еГЗМ)    £

8. Хкзрафэд (СЯдО^ ?— C*r7CLj 'тресхо_д*<-нО    J

9, Хостзкврк (СТ₃0)р Р ~ (геп-сиофг з)

2,1.3. Избирательность метода

Кал доказав на схеме (рис.2.1.) применение различных способов очистки экстрактов, а также сочетание хроматографических методов о использованием различных ^аз, детекторов и проявляющие реагентов позволяет идентифицировать при сов* местном присутствии перечисленные в таблице 1.1, ФОЛ и ХШ, применяемые на томатах.

2.2. Реактивы я растворы М* экстракции и очистки абстрактов

Ацетон, ч., ГОСТ 2603-79 н-Гексан,ч.,хч.,ТУ 6-09-3375-78 Четыреххлористый углерод,хч.,чда,ГОСТ 20288-81 Хлороформ, ада, ГОСТ 20015-74

Натрий сернокислый безводный ада, свежепрокшхешшй,ГОСТ 1166^-76 Вата гигроскопическая,обезжиренная эфиром Фильтры бумиюшв "красная лента"

Серная кислота конц., ГОСТ 4204-77 Уголь активированный ОУ-А

Лл: хромато-энзимного определения (ТСХЭ) см. "Методичеокие

указания по определ» шю пестицидов",1981,чаоть Х1,отр.109 Для ГХХ

Неподвижные фазы:

-    Ъ%5*Е-30 на хроматоне Ы-А«/-НЬЩ4 (0,16-0,20 им)_; Хеиалол.ЧССР

-    3£ 0"-17 на хромосорбе vv'KP (100Д20 мед)

-    1,5% 0V -17 + I,# ^В-30 на хроматоне Ы-АЪКМЩ? (0,16-0,20м*! Хемапол.ЧССР

Азот особой чистоты, содержание Og не более 0,003£#П)СТ 9293-74 Водород из баллона

Воздух из баллона или нагнетаемый компрессором

Ш та

Пластинки Силу фол, "Хемапол", ЧССР Серебро азотнокислое, х.ч.,Г0СТ 1277-75 Аммиак водный 25^-яый, ада., ГОСТ 3760-79 4-п(нитробен8влпь^яди ),ч.,ТУ 6-06-15-93-74 Тетраэтилэнпентемин,ч.,ТУ 6-09-05-804-79

tKomienTpapoBaHfle до /v 0,3 мл

ТСХ, 1№-н~гексан^ацетон 3:1, проявитель: 4-п(нитробензил~ лирицян) с ТЭТ1А

(хлооофоо,ДЩ» + фоофамвд,хоотяявик; карборос + роэалон, бавудин, актеллик,

тхм-з)

Проявляющие реагенты:

№1 в) 1%-ный 4-(п-нитрсбензил)-пиридин в апетоне: б) 10%-ннй тетраотпленнэвтаА ш в ацетоне.

>2 0,5 г е отнокислогс серебра растворяют в 5 мл диотяллигл~ ванной воды, прибавляют 0,5 мл аммиака и доводят ацетоном до 100 мл.

Все реагенты готовят перед употреблением.

Оосф орорганЕческпе пестициды: ак•*гляяк,базудпн,ДЦВХ>, ТХМ-3 карбофос, кос такой к ^ фозалон, г осфамцд, хл о рофос

Хлорорганяческие пестициды: дилор, кельтая.

Основные стандартные растворы каждого пестицида в ацетоне 1000 мкг/мл. Хранят в холодильнике в течение 6 месяцов.

И-⁴ основных стандартных растворов (ОСР) готовят рабочие смеси (PC) ФОЛ и ХОТ .для ТСХ п ГЖХ:

-    *1 - рабочая смесь - ОТ для ТСХ - взять по 2,5 мл из ОСР каждого пестицида внести в мерную колбу на 25 мл и довести до метки ацетоном. Содержание каждого пестицида в омеси 100 мкг/мл

-    HZ - рабочая смесь Ш1 для ШХ - взять 0,5 гал

PC ФОТ Й1, добавить 0,5 мл ОСР фосфамида, 0,5 мл ОСР карбофоса и довести смесь алетопом до 100 мл. Содержание в смеси актеллика, базудина, ДДВФ,трихлорметафоса~3, фозалона,хлорофоса- по 0,5 икг/мл, содержание фос^амяда и карбофоса по 5,5 мкг/мл.

-    №3 - рабочая смесь ХОП для TJX - бзять по 0,5 мл ОСР дилера и кельта«а и довести до 10 мл н-гексаном.Содержание каждого по 50 мкг/мл

-    JM - рабочая смесь ХОП для TSX - ваять 0,2 мл смеси ХОТ ЖЗ и довести до 100 мл н-гексапом. Содержанке каждого пестицида 0,1 мкг/мл

-    Л5 - стандарт ТХК-3 (для ТСХ анализа ЮТ) - взять 0,5 мл ОСР ТХМ-3 я довести до 10 мл н-гексаном.