ГОСУДАРСТВЕ ЛАМ КОМИССИЯ ПО ИШИЧЕОШ СРЕДСТВАМ ВОРЬВМ С ШЗДШВЯШ, БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИЙ й (ГОРШКАМИ ПШ ЙСХ СССР

МЕТОДЫ

ап издал ш я вдеотшчЕств весящов

В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ* КОРМАХ й ВНЕСШЕЙ СРЕДЕ

Ятт>Т

в в в, 19?! г,

ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ

ас яшчесш средствам борьбу с

ВРЕДИТЕЛЯМИ.БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИЙ И СОРНЯКАМИ ПРИ МСХ СССР

Утверждено

Заиестителеу Главного cauuTapuoi-o врача Союза ССР

Д.Н.Лоранешш 1971 г.

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ иИКРОКППИЧЕСТВ ПЕСТИЦДДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ,КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ

Часть У,

Данные методики апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкоуиссии по химический средствам борьбы с вредителями.болознями растений и оорнякауи при МСХ СССР

Москва 1971 г.

9,

Чу бет вигильность газо-хроматографического метода анализа остаточных количеств пестицидов следует считать достаточной для практически* целей контроля, если она позволяет определять 0,01 мг/кг (0,01 ррyiv) хлорорга-нических и 0,05 мг/кг (0,05 рртО фосфорорганических пестицидов.

П. Ланные. которые должны содержаться в описании метода газо-жидкостного анализа остаточных количеств пестицидов

Помимо общего комплекса требований, предъявляемых к описаниям методических разработок любого характера, при изложении метода газо-жидкостной хроматографии остаточных количеств пестицидов необходимо уточнение следующих специальных вопросов:

I. Дать краткую характеристику используемых детекторов и условий их эксплуатации.

Злектронозахватный детектор: указать источник ионизации (Н®,»Л4 Ри. ^ и т.д.); привести чувствительность ЭЗД измеряемую на рабочей шкале в мг/оек или кул/мг вещества или в см высоты пика на количество пробы, с приведением полученного пика, прописанной нулевой линии и рассчета; описать условия работы - используемое питание, рабочую температуру детектора, газ-носитель, продувочный газ, скорости их расхода при 20°С и 760 мм рт.ст.

Термоионннй детектор: указать природу и способ применения соли щелочного металла, охарактеризовать чувствительность ТИД измеренную на рабочей шкале при используемой скорости газа-носителя, водорода и воздуха с указанием ионного тока и выразить в мг/сек или

-3-

ю.

кул/мг или в см высот» пика на количество введенной пробы, (приводится хроматограмма, прописанная нулевая линия и произведенный рассвет).

2. Привести параметры и условия работы колонки. Необходимо указать марку используемого носителя, дополнительную его обработку (силанизированне, обработка щелочью кислотой, растворителями) и зернение, а также при использовании импортного носителя возможности его замены отечественными.

Указать процент стационарной фазы по весу по отношению к носителю, природу фазы и марку.

Предлагается следующий образец описания используемой колонки. Например, "При определении использовалась

U -образная стеклянная колонка 1,2 м х 4 им с % метилсиликоном (SE-z’O) на силанизированном хромосорбе W 80-100 мет, при температуре 170°С, скорости тока газа-носителя 60 мл/мин".

3.    Указать параметры работы прибора: рабочую шкалу электрометра, (полноту регистрации выходного сигнала), шкалу самопишущего потенциометра, скорость лентопротпжво го механизма, уровень шума и дрейф нулевой линии.

*♦. Охарактеризовать ошибку и надежность метода:

Указать чувствительность метода, привести относительную или абсолютную ошибку, воспроизводимость. Привести харак терную хроматограмму определяемого вещества с рассветом’.

Ю-

СОДЕРЖАНИЕ

Методические указания по разработке газо-хрома-тографичеоких методов анализа остаточных коли-чеотв пестицидов составлено Пивоваровым Г.А.

ХЛОРОРГАНИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ Определение хлорорганических ядохимикатов салдрина,    II

гексахлорана, гептахлора, ДДТ, ДДД,ДДЭ и д_г.) в воде, овощах, фруктах и биологических средах методом газовой хроматографии- авторы: Гиренко Д.Б., Клисенко М.А.

Определение ДДТ, ДДЭ.ДДД, линдана и ТХМ-3 в молоке и    18

молочных продуктах методом газовой хроматографии авторы: Молочников В.В., Мочалов В.И., Моргунова А.П.

Колориметрический метод определения ДДТ в молоке и    23

молочных продуктах

авторы: Молочников В.В., Мочалов З.И.

Определение остаточных количеств гекоахлорбутадиена    27

в вине, соке и воде методом гаэо-кидкоотной хроматографии о использованием детектора по захвату электоронов авторы: Пивоваров Г.А*, Гар К.А., Алексеева Е»М«, Тимофеева 0,Н., Шварцман Г.А.

Спектрофотометрическое определение гекоахлорбутадиена    33

(ГХБД) в воздухе

авторы: Гулько А.Г., Драновокая Л.М.

Определение в растительных ыаолах ДДТ, Гамиа-1ХЦГ и    36

др. хлорорганических пестицидов авторы: Клиоенко М.А., Юркова З.Ф_М

Определение ДДТ,ГХЦГ, альдрина и гексахлорбензола    38

в хлопковых шротах, обогащонннх и иеобогагдинных липидами авторы: Белова А,Б., Новикова Л.В.

Определение ДДТ,ГПХ и у -ГХЦГ в почве, сахарной овекла и 47 картофеле методом тонкослойной хроматографии авторы: Косматый Е.С., Грицаенко Н*Н._в

Колориметрический экспресс-метод определения ДДТ в    49

корне- и клубнеплодах автор: Стеилковская ЛоАо

Определение полихлорпинена в воде* почве, картофеле    58

свекле, ее ботве, мясе в присутствии ДДТ и других ялорорганкческих пестицидов и лсшшслоркамфена в почве авторы: Клисепко М,А., Верблюдова Н.Й., Косматый «ѻ,

Грицианко НоИ.

Определение остатков Ш в растениях методом тонко-    68

одойной хроматографии

авторы: Косматый 2*0*, Полонская ФЛ!._# Тверская Б*Ы«.

Определение кельтана в огурцах методой тонкослойной    66

хроматографии

авторы: Фомичева Л*Г., Ефимова Л.И.

Определение эфирсульфоната в винограде, соке, воде    71

вине методом ТСХ

авторы: Голубев Т«Й₀, Владимирова Л*Г._С Колобродова Ю»И.

Фосфороргаяические соединения

Определение апрекса и каратана в растительных продуктах 74 н воде

авторы: Клисепко М*А*, Им и гида на А„М*

Определение бутифооа в продуктах промышленной лереоа-    80

ботки хлопка-сырца измена» хлопчатника методом тонкослойной хроматографии

авторы: Талипов ШДа, Дзиянбаева Р.Х., Халимова У До,

Шейнина Р„И., Белобородова Н*Ф«

Полярографический метод определения метилнитрофооа    86

в растительной пробе и почве авторы: Патваыку Ф#И._# Сороковая ЛоВ*

З^ыашо-хроиатохтрафичеокий качественный s колоримотрмческиН 90 ноли явственный методы определения дояиашззрофооа в расти-яельяой пробе и почве автор: Иатраику ®д*

Определение трихлориетафооа-3 в молоке в молочных    &

продуктах с помощью тонкослойной хроматографии авторы: Молочников В.В., Серебренникова' В.А., Мочалов В,И.

Определение фоофамида, антио и карбофооа в воздухе    ЮЗ

методом газо-жидкоотной хроматографии авторы: Клиоенко М«А*, Гиренко Д.Б.

Определение сайфооа в воде, продуктах питания рао-    1°7

тительного происхождении, почве г. биологическом материале

авторы: Клисенко М*А«« Письменная М«В.

Определение оойфооа в воздухе методом хроматографии    П*

п тонкой слое

авторы: Клиоенко М.А,, Письменная М<В»

Определение остаточных количеств фталофооа и фона-    120

лона в_#растительном материале, почве и воде авторы: Новикова К.Ф», Мельцер Ф.Р»

Качественный и количоотвошшй методы определения    Г?.о

фозалона в яблоках» Яблоновых лйотш» почва и вода автор: Вндвпавняа Г.Ф»

ОпределеНИа фталофооа в молоке и мясе методом    133

тонкоовойной хроматографии

авторы: Заболотный К.Ф., Метелица в.К., Пспоклонои А.А.

Количественное колориметрическое опредоление хлорофооа    137

в молоке

автор: СтемпковокаН Л,А.

Определение емндофоов в молоке и *яое авторы: Непоклонов А. А.» Метелица В.К.

Определение байтокса в молоко и мной    jcjft

авторы: Ролз А.П., Непоклонов А.А,

;i9

Ьнаиматический агар-диффуаный метод о ирода ланий    156

фосфороргаанчеоких инсектицидов в продуктах пииотого происхождения авторы: Неиокдонов А.А., Метелица В.К.

Производные карбаматов

Колориметрический метод опредепааиа вупрацшш~1 _э    162

купрьцина-Н, Манеоа, Маркина» ХМТД в воадухе» продуктах питания растительного происхождения и биологических средах авторы: Клисонко М*А«, Векатейн Л.Ш„,

Экспрессное определенно тетраизтилтяураидиоуаьфада    164

(ТМТД) в зерне и зернопродуктах автор: Николаев А.В*

Определение остаточных количеств дикреаила в биодо-    16?

гических средах методом тонкослойной хромалографин автор: Сивохин И.А.

Прочие соединения

Определение 2-*мвтокси-3,6~дихлорбензойной кислоты    172

методом газо~кидкостной хроматографии авторы: Рыжков А*А., Гейд Ю.П,_В Бабин Е.П., Свнри • денко А»С«» Чекавская Л,А.

Количественное определение дикеибы (дианаха,    179

беявеиа~Л) в растениях и в почве методой хроматографии в тонком слое

авторы: Березовский Ч.Я., Самоовах Л.С., Никотин В.В.

Определение диурона, ллнурона, монуронв, проланида,    184

солана, фалорана в воде, почве, овощах методом хрома -тографяи в тонком слое евтор: Оаыосват I.C.

Колориметрический метод определения которая* (пахтаройa)    JH8

в хлопковом масле

аяторц: Новикова К.Ф., Меивцер Ф.Р., Алдомнкч Т*В.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО РАЗРАБОТКЕ ГАЗО-ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИХ МЕТОДОВ АНАЛИЗА ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ^1}

В настоящее время становится очевидным, что без использования метода газовой хроматографии невозможно осуществление системы контроля за остаточными количествами пестицидов в продуктах питания, воде и почве.

Этот метод получает в нашей стране все большее распространение, чему также способствует выпуск отечественной специальной газо-хроматографической аппаратуры для анализа остаточных количеств пестицидов. Однако успешному внедрению в практику газо-хроматографических методов препятствует отсутствие единых критерией при выборе и оценке носителей, фаз, аппаратуры и рабочих условий хроматографирования. Отсутствие единого подхода к разработке и описанию методов значительно затрудняет также получение отдельными лабораториями данных сопоставимых для всей территории страны.

В связи с этим излагаются требования, которым должны соответствовать аппаратура, материалы, используемые методы обработки пробы, идентификации, количественной оценки и др. Приводится также перечень данных, которые должны быть включены в описание предлагаемых методов газо-хро мятографического определения остаточных количеств пестицидов.

^ Методические указания составлены ст. научным сотрудником Центрального института агрохимического обслуживания сельского хозяйства ПИВОВАРОВЫМ Г,А.

Обсуждены и рекомендованы группой экспертов и специалистами по газовой хромлтографии.

2.

I* Требования к газо-хроматографической аппаратуре, материалам и методам оценки при анализе остаточных количеств пестицидов»

Аппаратура. Для газо-жидкостной хроматографии остатков пестицидов могут использоваться как специальные газо-хроматографические установки (пестицидоаиализаторы), так и хроматографы различных марок имеющие высокочувствительные селективные детекторы*

Детекторы. В настоящее время в практике массовых анализов представляется возможным использовать для анализа остаточных количеств пестицидов два детектора:

I* Злектронозахватный (ЭЗД) - высокочувствительный к органическим соединениям способным к захвату электронов и в их числе особенно к галоидопроизводным*

2. Термоионный (ТИД) - высокочувствительный, селективный к фосфороргаиическим соединениям*

3* Пламенно-ионизационный (ПИД) - сравнительно высокочувствительный, но абсолютно неспецифический детехтор* Для анализа остатков пестицидов может найти ограниченное применение. Однако при параллельной работе с одним из вышеуказанных детекторов может дать ценную дополнительную информацию о составе пробы и содержащихся в ней метаболитах пестицидов.

Система термостатирования* Система термостатирова-ния должна обеспечивать установку температуры колоночного и детекторного термостатов в пределах от 50 до ?50°С при максимальном отклонении от заданной температуры + 3°С и стабильно поддерживать температуру при максимальном отклонении + ОД^С. Градиент температуры по длине колонки в термостатах не должен превышать 3°С*

-г-

3.

Блок программирования теипературы должен удовлетворять следующим требования: в диапозоне от 50 до 250° долм но обеспечиваться программирование температуры со скоростью по крайней мере Ю-20°С в минуту с погрешностью не превышающей +5# от установленного значения. При повторении программы ошибка не должна превышать 1%,

Регистрирующее устройство. Для оценки сигналов используются самопишущие потенциометры с диапозоном измере ния в границах I или 10 мв с допустимой погрешностью +5# от диапозона измерения, при вариации не превышающей половины абсолютного значения втой ошибки. Погрешность скорости перемещения диаграммной ленты не должна превышать +% от заданной скорости.

При использовании интегратора данные (аналоговые или отпечатанные величины) должны однозначно относиться к отдельным хроматографическим пикам. Соответствующий данной площади интеграл должен воспроизводиться с ошибкой не более 0,5$.

Система подготовки газов, должна обеспечивать установку расхода газа-носителя от 20 до 200 мл в мин со стабильностью , при изменении входного давления на ± 10%; расход водорода - от 10 до 50 мл/мин, со стабильностью +0,1 мл в мин; расход воздуха - 100-400 мл/мин, со стабильностью +1%, при колебаниях входного давления +10*.

Требования к чистоте используемых газов.

Используемые газы должны быть квалификации? “особой чистоты", "Х'Г и "4^я. При отсутствии газа соответствующей чистоты его следует очищать обычным способом (например.

с помощью колонки заполненной активированным углем и молекулярным ситом).

Колонка. При анализе остаточных количеств пестицидов должны использоваться стеклянные колонки. При использовании колонок из нержавеющей стали или алюминия должно быть показано, что это не влияет на результаты анализа. Наиболее целесообразные размеры аналитических колонок - 1-2 метра при диаметре 3,5-4,5 мм, по возможности прямые или извитые с диаметром изгиба превышающим диаметр колонки не менее, чем в 10 раз.

Носители. Рекомендуется в данном анализе использовать однородный материал с инертной поверхностью, обрабо-танннй кислотой , силанизированный типа Хромосорба W . При работе с высокополярными смесями целесообразно использовать носитель типа ’’ромосорба , тефлон или стеклянные шарики. При применении колонок до 1,5 м рекомендуется использовать зерне*..*е 80-100 меш, (0,16 - 0,18 мм), при применении более длинных колонок - 60-80 меш (0,21 - 0,16).

Стационарная Фаза. Для газо-жидкостной хроматографии остаточных количеств пестицидов можно рекомендовать использование фаз с высокой термической стойкостью типа неполярных диметилсилоксановых полимеров или различной полярности фторсилоксановых, метилфечилсилоксановых, нитридсилоксановых.

Количество стационарной Фазы. Более рационально использовать легко нагруженные колонки с процентом фазы до 3-5 и только в исключительных случаях - до 12%. Большинство используемых в настоящее время пестицидов и их метаболитов м'-гут быть разделены на указанных выше стлционар-

- V -

5,

ных фазах (нипример, на дииетилсилоксановом полимере, трифторсиликоновом полимере и их смесях), а в случаях необходимости разделения сложной смеси или смеси изомеров можно использовать сочетание стационарных фаз (например, диметилсидоксановый полимер % ПЭГ - 20000 % апейзон

для разделения изомеров     ГХЦГ)    ;

2% СКТФТ-100 + % метилфенилсилоксанового полимера или 1,5 трифторсилоксанового полимера* для разделения изомеров и метаболитов ДДТ).

Дозирующее устройство. Используемые микрошпрццы на 1,10 и более мкл должны обеспечивать точность дозирования относительно максимального объема не менее + 1%. Дозирующие устройства газов должны работать с 1% точностью и воспроизводимостью* Целесообразным инъецируемым объемом жидкой пробы следует считать 3-5 мкл (то есть приблизительно ЧС$ объема шприца). При работе необходимо учитывать, что при помощи шприца можно ввести пробу двумя способами: в испаритель или непосредственно в колонку*

В испаритель пробу вводят в том случае, если могут обеспечить мгновенное испарение компонентов образца. В втом случае температуру испарителя можно увеличить без опасения вызвать распад материала, по крайней мере на 30-50° по отношению к компоненту имеющему наибольшую точку кипе ния* Для такой дозировки используется шприй с иглой дост игающей до середины испарителя. Непосредственно л хроматографическую колонку нужно вводить пробу в том случае, если при температуре превышающей температуру колонки про ба разрушается. Длина иглы используемая для такого введения должна быть достаточной, чтобы ев острие достигло

- S-

б.

стекловаты в верхней части колонки. При применении шприца «эмеритальным объемом которого является сама игла, возможен лить первый из названных способов введения^

Идентификация пестицидов. Идентификацию пестицидов в пробе рекомендуетоя проводить при использовании стандартов исследуемых веществ или по относительным временам уде рживания - отношению времени удерживания анолизируемого вещества к времени удерживания вещества взятого в качестве стандарта. В расчетах используется исправленное вр« мя удерживания, т.е. время удерживания измеренное от момента ввода пробы до момента появления максимума пика, за вычитом времени удерживания воздуха в условиях этого определения. В качестве стандарта для определения относительных времен удерживали *}хлороргани чес ких пестицидов рекомендуется использовать гвкоахлорбенэол, алдрин ; для фосфорорганических пестицидов - метафоо, гексахлорбензол, алдрин.

Так как небольшие изменения условий хроматографии так же влияют на стандарт, как и на определяемое вещество, то соотношение их времен удерживания остается посте явным, и, как правило, зависит ©олько от температуры колонки и типа используемой жидкой фазы. На этом основании рекомендуется метод идентификации пестицидов по относительным временам удерживания и графику с испол*.зеванием различных по полярности колонок

3) - Сакодынский К.И,_в Пивоваров Г. А.,

Материалы Всесоюзного Совещания по профилактики и

анализу остатков пестицидов. Таллин, 1971 г.

- 6-

7¹

Количественная оценка содержания пестицида в пробе

Количественную оценку рекомендуется проводить одииим из обычно применяемых методов;

I¹ По графику зависимости площадей (высот) пиков от веса введенной пробы ;

2. Методом внутреннего стандарта;

% Путем параллельного сравнению расчитываемого инка с пиком полученным от введения известного количества стандартного вещества, при условии, что пики близки по величине в определение ведется в диапозоне линейности детектора.

Учитывая, что диапозоны линейности ЭЗД и ТИЛ малы и при изменениях в режима., работы могут значительно меняться, т.к, существующие блоки стабилизации газовых потоков изо дня в день не гарантируют воспроизводимых результатов, предпочтительней использовать последний метод количественного раочета вещества в пробе.

Желательно, чтобы во воех случаях сигнал'используемый для количественной оценки был не менее 1/20 полной шкалы. Количественную оценку пиков хроматограммы рекомендуется проводить по площади пика, рассчитывая ее как произведение высоты пика на ширину измеренную на полувы-соте или вести расчет по высоте пиков. Последнее можно делать только в том случае, если условия хроматографии строго постоянны и времена удерживания отклоняются не более, чем на 0,5%, отсутствует перегрузка колонки и существует пропорциональность между высотой пика и количеством пробы.

Подготовка аналитической пробы. Подготовка анвлитичв¹-

8.

окой пробы проводится с помощью существующих стандартных приемов экстракции и очистки. Процент выхода определяется методом добавок. Необходимые в процессе подготовки пробы замеры выполняются с помощью таких приспособлений и таким образом, чтобы ошибка не превышала 1%, Конечный объем экстракта из которого берется аликвота для введения в колонку не должен быть менее 5 мл.

Реактивы. Для приготовления растворов, обработки пробы следует использовать материалы наиболее высокой аналитической чистоты или вещества специальной очистки с обозначением "для гаэо-хроматогра^ических целей".

Точность и ошибки иетода. Точность метода характеризуется относительной или абсолютной ошибкой. Под абсолютной ошибкой анализа понимают разницу между полученным результатом содержания пестицида в пробе и истинным (наиболее досю^ерным, например, внесенной навеской). Она выражается в абсолютных единицах и ее размерность отвечает размерности измеряемой величины - мг/л* мг/кг. Относительная ошибка - отношение абсолютной ошибки н точному значению определяемой величины. Относительная ошибка является отношением двух величин одинаковой размерности, а поэтому величиной безразмерной и выражается в процентах.

Надежность аналитического метода характеризуется повторяемостью, которая показывает - насколько близки результаты анализа при работе в одних и тех же условиях в руках одного исследователя. Воспроизводимость определяется тем, насколько хорошо результаты анализа совпадают при проведении его разными людьми в разных лабораториях.

- J-

1

?