Определение остаточных количеств дикрезила в биологических средах методом тонкослойной хроматографии

ГОСУДАРСТВЕ ЛАМ КОМИССИЯ ПО ИШИЧЕОШ СРЕДСТВАМ ВОРЬВМ С ШЗДШВЯШ, БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИЙ й (ГОРШКАМИ ПШ ЙСХ СССР

МЕТОДЫ

ап издал ш я вдеотшчЕств весящов

В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ* КОРМАХ й ВНЕСШЕЙ СРЕДЕ

Ятт>Т

в в в, 19?! г,

ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ

ас яшчесш средствам борьбу с

ВРЕДИТЕЛЯМИ.БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИЙ И СОРНЯКАМИ ПРИ МСХ СССР

Утверждено

Заиестителеу Главного cauuTapuoi-o врача Союза ССР

Д.Н.Лоранешш 1971 г.

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ иИКРОКППИЧЕСТВ ПЕСТИЦДДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ,КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ

Часть У,

Данные методики апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкоуиссии по химический средствам борьбы с вредителями.болознями растений и оорнякауи при МСХ СССР

Москва 1971 г.

Ьнаиматический агар-диффуаный метод о ирода ланий    156

фосфороргаанчеоких инсектицидов в продуктах пииотого происхождения авторы: Неиокдонов А.А., Метелица В.К.

Производные карбаматов

Колориметрический метод опредепааиа вупрацшш~1 _э    162

купрьцина-Н, Манеоа, Маркина» ХМТД в воадухе» продуктах питания растительного происхождения и биологических средах авторы: Клисонко М*А«, Векатейн Л.Ш„,

Экспрессное определенно тетраизтилтяураидиоуаьфада    164

(ТМТД) в зерне и зернопродуктах автор: Николаев А.В*

Определение остаточных количеств дикреаила в биодо-    16?

гических средах методом тонкослойной хромалографин автор: Сивохин И.А.

Прочие соединения

Определение 2-*мвтокси-3,6~дихлорбензойной кислоты    172

методом газо~кидкостной хроматографии авторы: Рыжков А*А., Гейд Ю.П,_В Бабин Е.П., Свнри • денко А»С«» Чекавская Л,А.

Количественное определение дикеибы (дианаха,    179

беявеиа~Л) в растениях и в почве методой хроматографии в тонком слое

авторы: Березовский Ч.Я., Самоовах Л.С., Никотин В.В.

Определение диурона, ллнурона, монуронв, проланида,    184

солана, фалорана в воде, почве, овощах методом хрома -тографяи в тонком слое евтор: Оаыосват I.C.

Колориметрический метод определения которая* (пахтаройa)    JH8

в хлопковом масле

аяторц: Новикова К.Ф., Меивцер Ф.Р., Алдомнкч Т*В.

Качественное я количественное определение каптала и    193

фталаиа в лине, виноградном соке, листьях и ягодах винограда, в почве и воде авторы: Вайптрауб Ф.П., Дронь Л,Л,

Определение мельпрокса в воздухе    199

авторы: Сорокина Л.В*, Клнсопго М.А.

Определение прометриня в почве, воде и растительном    203

материале методом хроматографии в тонком слое автор: Дроздова О-А.

Определение фенаэона в свекле, почве и воде    207

авторы: Эгерт В.9., Лиелгалве А.А.

Определение хлората иагиня в препарате-дефолианте,    2.ТЗ

хлопковом масле, ироте, жмыхе, османах, ядрах оемян и волокне хлопчатнике

авторы: Талипов II). Т., "жиппбяова Р.Х., Халимова УЛ*₉ Белобородова Н.Ф.

ОПР МЕЛЕН И IS ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ДИКРЁЗИЛА В БИОЛОГИЧЕСКИХ СРЕДАХ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ*)

Характеристика препарата

Дикрезил - (смесь мета- и иара-крезиловшс эфиров^-метил карбсминовой кислоты) - представляет собой белое кристаллическое вещество с розоватым оттенком. Молекулярный вес 165,19. Температура плавления 48,5-45°С. Препарат хорошо растворяется в ацетоне, бензоле, хлороформе; в воде ьерастнорим.

Принцип метода

Метод основан на экстрагировании пестицида иэ исследуемы* проб, хроматографическом разделении в тонком закрепленном слое окиси алюминия, гидролизе дикрезила щелочью до креэолов и ооеди нении пооледних о дивэотированным лира-нитроанилином.

Сочетание диазотированиого пврв-нитроаиилина о продуктами щелочного гидролиза различных арил-//*-ыетилкарбам8Тов (севин, дикрезил, мв8урол) дает различную окраску, а хроматографическое разделение в подобранной системе растворителей - различную вели чину , что обеспечивает специфичность ые-ода. Так, севин и 1-нафтол на хроматограмме имеют величины fjf соответственно 0,5 и 0,29 и при проявлении окрашиваются в синий цвет./£^ ыезур> ло соответствует 0,71 и он проявляется в виде желтого пятна.

При проникании хроматограмм дикрезил и его метвболтч обнаруживаются в виде оранжевых пятен. Величина/^ ллн дииреЗяла при

Рннроботин Н.А.Сивохиным; Всесоюзный научи * н< ••пеловн*ель»:кий институт ветеринарной санитарии, Моским

Itf

этом составляет 0,55-0,60, а для мета- я пвра-крезвлов (основные метаболиты) - 0,32-0,84. Чувствительность методики 0,3 мкг в вене сенной пробе.

Реактивы и растворы

Окись алюминия квалификации "для хроматографии"; гипс чистый; пара-нитроанилин перекристаллизованннй из горячей воды; аэотиг -о-кислый натрий х/ч или ЧДА; бензол, метилэтилкетон, хлороформ, метанол (перегнанные); ледяная уксусная кислота; ооляиая кислота х/ч (лучше фиксанал); гидрат окиси калия х/ч или ЧДА; бутанол.

Приготовление реактивов

Реактив Н? I. 1,5-нормальныЙ раствор КОН в смеси метилового и Н-бутилового спиртов, вз гых в соотношении 1:1.

Реактив N? 2. а) 0,1%-ный раствор пара-нитроанилиня в 0,1 нор мольном растворе соляной кислоты.

б) 4%-ный раствор нитрита натрия.

Растворы "а" и "б" перед использованием смешивают в соотношении 10:1 (рвектив И? 1, а также растворы "а" и "б" готовятся впрок и хранятся в холодильнике).

Система растворителей для разгонки - бензол-метилэтилкетон в соотношении 19:1.

Стандартный 0,01%-ный бензольный раствор дикреэила (0,01 мл раствора содержит 0,001 мг дикреэила).

Стандартный 0,01%-пый раствор мета-крезола (0,01 мл раствора

содержит 0,00Г мг мета-крезвлв).

- /68-

Приборы и оборудование

Хроматографическая камера (герметически закрывающийся сгек-лннный цилиндр). Гомогенизатор для измельчения тканей. Бюксы емкостью 25-30 мл и делительные воронки на 100-200 мл. Микро-пипетки на ОД ил. Пульверизатор. Стеклянный или металлический валик о ограничительными кольцами для нанесения слоя сорбента нужной толщины. Станочек для фиксации пластинок при нанесении на них сорбента. Стеклянные пластинки 13 х 18 см (или другого размера) с матовой поверхностью. Сито 150 меш. Стеклянные колбы 0,5 л.

Описание определения

Приготовление хроматографических пластинок. 95 г окиси алюми нан (1-2 степени активности по Брокману) инактивируют путем добавления к ней 5 мл ледяной уксусной кислоты с последующим встряхиванием смеси в плотно закрытой колбе в течение трех минут. Ватам в смесь добавлнют 5 г гипса и еще раз хорошо перешивают. Смесь просеивают через сито 150 меш.

Приготовленный таким образом сорбент может сохраняться в кол бе с плотно закрытой пробкой длительное врет т* не теряя своих свойств.

На матовую поверхность стеклянной пластинки насыпают сорбент и с помощью валика наносят ровный слой толщиной 0,8 мм (толщина слоя соответствует высоте ограничительных колец).

/1яп получения закрепленного слоя сорбента, приготовленные -/*>9-

таким образом пластинки орошают дистиллированной водой из пульверизатора до полного насыщения сорбента, что отчетливо видно по появлению на слое глянцевой водной поверхности*

Высушивание пластинок проводят в горизонтальном положении при комнатной температуре (20-22°С) 12 часов.

Ход анализа. 5 г исследуемой ткани (печень, почка, мышца, кровь) гомогенизируют и заливают 10 мл хлороформа. Экстрагируют в плотно закрытых бюксах 2 часа при температуре 20-22°С. При однократном экстрагировании хлороформ извлекают иэ гомогенатов тканей 40-44% дикрезила. Из молока, мочи и меланжа препарат лучше экстрагировать в делительных воронках.

При определении дикреэила в молоке экстракцию проводят бензолом (10 мл молока + 20 мл бензола). Из молока за 2 часа экстрагируется 66% дикрозила.

В качестве экстрогонта дикрезила из мочи беретоп хлороформ, (10 мл мочи f ?0 ми хлороформа), при этом за 2 чаоа экстрагируется *»*•% препарата.

Для обнаружения дикрезила в яйцах кур в качестве опотрагентв берется Н-гексан из расчета на I часть меланжа 2,5 части Н-гекоена. Эе 2 часа Н-гекоан экстрагирует 30% дикрезила.

При экстрагировании из жидких сред (молоко, моча, меланж) на следует допускать сильного вотряхипамия их с экстрагентом - достаточно легкого покачивания делительной воронки.

Подле экстрагирования, анотрпкт от биологически* Пр«Л отделают фильтрованием черев обпиноиемные бумажные фильтры или осторожным сливанием и стакан. Полученные еиотракты выпаривают досуха иол стр.усй поил.ухо в вытяжном ыкаФу, Сухие остатки растворяют в мл мотрнолн и наносят на хроматографические пластинки но обще-•тгннтцм ярприляи тонносл''*Мкой хроматографии. Смывание сухого ос-

• //О

катка метанолом проводят 2-3 раза.

Для разгонки хроматографические пластинки с нанесенными пробами помещают в хроматографическую камеру с системой рь твори-тедей беьзол-ыетилэтилкетон.

После подъема фронта растворителя на высоту 10-12 см от лини^' отарта пластинкг вынимают из камеры, подсушивают на воздухе, обрабатывают иэ пульверизатора реактивом Ife I, затем онова подсушивают на воздухе. После обработки иэ пульверизатора реактивом ffe 2 (диазотированный пара-нитроанилин), при наличии в исследуемых пробах дикрезила или его метаболитов, на хроматограмме проявляются пятна оранжевого цвета. По величине ft-j? и окраске пятен проводится качественное определение дикрезила и его метаболитов*

Сравнение полученных на хроматограмме пятен со шкалой стандартов - с учетом процента экстракции препарата можно проводить сравнительное количественное определение содервания его в исследуемом материале.

Шкалу стандартов готовят параллельно с исследованием проб, для чего на хроматографическую пластинку наносят чистый стандартный раствор о содержанием в пробе I, 2, 5, 10, 15, 20 мкг препарате. После разгонки и проявления хроматограмм сравнивают пятна доследуемых проб со шкалой стандартов.

Метод позволяет обнаруживать от 0,5 иг/кг дикрезила в биологических оредах.

Пример расчета результатов анализа. При хроматографировании окотректа из 10 мл молока обнаружено 6 мкг дикрезила. Процент дистракции препарата за 2 часа соответствует 66.

JUU2SL * 9,1 мкг 66

В 10 мл молока содержится 9,1 мкг препарата, что соответствует 0,91 ыг/литр.

СОДЕРЖАНИЕ

Методические указания по разработке газо-хрома-тографичеоких методов анализа остаточных коли-чеотв пестицидов составлено Пивоваровым Г.А.

ХЛОРОРГАНИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ Определение хлорорганических ядохимикатов салдрина,    II

гексахлорана, гептахлора, ДДТ, ДДД,ДДЭ и д_г.) в воде, овощах, фруктах и биологических средах методом газовой хроматографии- авторы: Гиренко Д.Б., Клисенко М.А.

Определение ДДТ, ДДЭ.ДДД, линдана и ТХМ-3 в молоке и    18

молочных продуктах методом газовой хроматографии авторы: Молочников В.В., Мочалов В.И., Моргунова А.П.

Колориметрический метод определения ДДТ в молоке и    23

молочных продуктах

авторы: Молочников В.В., Мочалов З.И.

Определение остаточных количеств гекоахлорбутадиена    27

в вине, соке и воде методом гаэо-кидкоотной хроматографии о использованием детектора по захвату электоронов авторы: Пивоваров Г.А*, Гар К.А., Алексеева Е»М«, Тимофеева 0,Н., Шварцман Г.А.

Спектрофотометрическое определение гекоахлорбутадиена    33

(ГХБД) в воздухе

авторы: Гулько А.Г., Драновокая Л.М.

Определение в растительных ыаолах ДДТ, Гамиа-1ХЦГ и    36

др. хлорорганических пестицидов авторы: Клиоенко М.А., Юркова З.Ф_М

Определение ДДТ,ГХЦГ, альдрина и гексахлорбензола    38

в хлопковых шротах, обогащонннх и иеобогагдинных липидами авторы: Белова А,Б., Новикова Л.В.

Определение ДДТ,ГПХ и у -ГХЦГ в почве, сахарной овекла и 47 картофеле методом тонкослойной хроматографии авторы: Косматый Е.С., Грицаенко Н*Н._в

Колориметрический экспресс-метод определения ДДТ в    49

корне- и клубнеплодах автор: Стеилковская ЛоАо

Определение полихлорпинена в воде* почве, картофеле    58

свекле, ее ботве, мясе в присутствии ДДТ и других ялорорганкческих пестицидов и лсшшслоркамфена в почве авторы: Клисепко М,А., Верблюдова Н.Й., Косматый «ѻ,

Грицианко НоИ.

Определение остатков Ш в растениях методом тонко-    68

одойной хроматографии

авторы: Косматый 2*0*, Полонская ФЛ!._# Тверская Б*Ы«.

Определение кельтана в огурцах методой тонкослойной    66

хроматографии

авторы: Фомичева Л*Г., Ефимова Л.И.

Определение эфирсульфоната в винограде, соке, воде    71

вине методом ТСХ

авторы: Голубев Т«Й₀, Владимирова Л*Г._С Колобродова Ю»И.

Фосфороргаяические соединения

Определение апрекса и каратана в растительных продуктах 74 н воде

авторы: Клисепко М*А*, Им и гида на А„М*

Определение бутифооа в продуктах промышленной лереоа-    80

ботки хлопка-сырца измена» хлопчатника методом тонкослойной хроматографии

авторы: Талипов ШДа, Дзиянбаева Р.Х., Халимова У До,

Шейнина Р„И., Белобородова Н*Ф«

Полярографический метод определения метилнитрофооа    86

в растительной пробе и почве авторы: Патваыку Ф#И._# Сороковая ЛоВ*

З^ыашо-хроиатохтрафичеокий качественный s колоримотрмческиН 90 ноли явственный методы определения дояиашззрофооа в расти-яельяой пробе и почве автор: Иатраику ®д*

Определение трихлориетафооа-3 в молоке в молочных    &

продуктах с помощью тонкослойной хроматографии авторы: Молочников В.В., Серебренникова' В.А., Мочалов В,И.

Определение фоофамида, антио и карбофооа в воздухе    ЮЗ

методом газо-жидкоотной хроматографии авторы: Клиоенко М«А*, Гиренко Д.Б.

Определение сайфооа в воде, продуктах питания рао-    1°7

тительного происхождении, почве г. биологическом материале

авторы: Клисенко М*А«« Письменная М«В.

Определение оойфооа в воздухе методом хроматографии    П*

п тонкой слое

авторы: Клиоенко М.А,, Письменная М<В»

Определение остаточных количеств фталофооа и фона-    120

лона в_#растительном материале, почве и воде авторы: Новикова К.Ф», Мельцер Ф.Р»

Качественный и количоотвошшй методы определения    Г?.о

фозалона в яблоках» Яблоновых лйотш» почва и вода автор: Вндвпавняа Г.Ф»

ОпределеНИа фталофооа в молоке и мясе методом    133

тонкоовойной хроматографии

авторы: Заболотный К.Ф., Метелица в.К., Пспоклонои А.А.

Количественное колориметрическое опредоление хлорофооа    137

в молоке

автор: СтемпковокаН Л,А.

Определение емндофоов в молоке и *яое авторы: Непоклонов А. А.» Метелица В.К.

Определение байтокса в молоко и мной    jcjft

авторы: Ролз А.П., Непоклонов А.А,

;i9