МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ

НАСТАВЛЕНИЕ

ПО ДИАГНОСТИКЕ ТУБЕРКУЛЕЗА ЖИВОТНЫХ

Москва 2002

ПРЕДИСЛОВИЕ

Разработаны:

Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации

Всероссийским НИИ экспериментальной ветеринарии (ВИЭВ)

Всероссийским государственным НИИ контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВШКИ)

Центральной научно-методической ветеринарной лабораторией (ЦНМВЛ)

Институтом экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока (ИЭВС и ДВ)

Всероссийским НИИ бруцеллеза и туберкулеза животных

(ВНИИБТЖ)

Прикаспийским зональным научно-исследовательским ветеринарным институтом

Дальневосточным зональным научно-исследовательским ветеринарным институтом

ФГУП «Курская биофабрика фирма «БИОК»

НПО «Нарвак»

шпрадермоиальпебрально в верхнее веко;

дельфинам - н кожу спины в области переднего ласта; кошкам - в области внутренней поверхности уха; курам - в кожу бородки; индейкам - в подчелюстную сережку;

гусям, уткам - в межчелюстную складку или в складку кожи клоаки; страусам, кузуарам - в складку кожи клоаки;

фазанам (самкам), павлинам, попугаям, голубям, журавлям, цаплям, аистам, фламинго - в области наружной стороны голени на 1-2 см выше голеностопного сустава;

фазанам самцам - в пещеристое тело на голове птиц позади наружного угла глаза.

4.8.2. Перед введением туберкулина шерсть (волос) в месте иньскции выстригают, кожу обрабатывают 70%-ным этиловым спиртом. Вводить туберкулин в кожу, имеющую травматические повреждения, уплотнения и абсцессы. пораженную грибками, клещами или гельминтами, запрещается.

4.8.3. Учет и оценку реакции у крупного рогатого скота, буйволов, зебу-видных, яков, верблюдов, слонов, носорогов, бегемотов, оленей, маралов, антилоп, обезьян, сумчатых, дельфинов проводят через 72 часа после введения препарата; у коз, овец, свиней, собак, волков и других представителей хищных, кошек, пушных зверей - через 48 часов; у птиц - через 30-36 часов.

В неблагополучных по туберкулезу крупного рогатого скота пунктах допускается применение двойной туберкулиновой пробы. С этой целью животным, нс реагировавшим на первое введение туберкулина, препарат вводят повторно в день учета реакции в той же дозе и в то же место. Учет реакции на второе введение туберкулина проводят через 24 часа.

4.8.4. При учете реакции у каждого исследуемою животного пальпируют место введения туберкулина, у коз, овец, обезьян, сумчатых и пушных зверей сравнивают веки правого и левого глаза, у быков, слонов, носорогов,

бегемотов - левую и правую подхвостовые складки.

При обнаружении изменений в месте введения туберкулина у крупного рогатого скота (кроме быков), буйволов, зебувидных, яков, верблюдов, оленей, маралов, антилоп измеряют кутимстром толщину складки в миллиметрах и определяют величину ее утолщения в сравнении с толщиной складки неизмененной кожи рядом с местом введения препарата.

4.8.5. Животных счи тают реагирующими на туберкулин:

крупный рогатый скот (кроме быков), буйволов, зебувидных, верблюдов, оленей, маралов, антилоп - при утолщении кожной складки - на 3 мм и более независимо от характера припухлости (отечности, болезненности, повышения местной температуры); быков, слонов, носорогов, бегемотов, свиней, собак, волков и других представителей хищных, дельфинов, кошек, и птиц - при образовании припухлости в месте введения туберкулина; обезьян, сумчатых, овец, коз и пушных зверей - при видимом различии правого и левого века.

4.9. Симультанная аллергическая проба с применением туберкулина и комплексного аллергена из атипичных микобактерий (КАМ).

4.9.1.    Симультанную аллергическую пробу применяют для диагностики зуберкулеза у крупного рогатого скота при первичной постановке диагноза, а также для контроля за благополучием животных но туберкулезу в хозяйствах, где реакции на туберкулин обусловлены сенсибилизацией атипичными микобактериями.

Проба является групповой и дает возможность ориентироваться в ситуации по туберкулезу лишь в целом по стаду или группе (нс менее 6 голов) исследуемых животных.

4.9.2.    Симультанная проба заключается н одновременном (симультанном) введении животным двух аллергенов - ППД-тубсркулина для млекопитающих в стандартном растворе и комплексного аллергена из типичных микобактерий (КАМ) и определении достоверноеги различия в интенсивности

(степени проявления) реакций на эти аллергены.

4.9.3.    Под достоверностью различия понимают такое различие в величине показателей интенсивности реакций на туберкулин и КАМ, которое дает возможность с уверенностью не менее чем на 95% сделать заключение о состоянии по губеркулезу исследуемой группы живот ных.

4.9.4.    Проведение симультанной пробы допускается нс ранее, чем через 30 дней после последней туберкулинизации животных.

4.9.5.    Туберкулин и КАМ вводят, соответственно, с левой и правой стороны тела животных строго симметрично в дозе по 0,2 мл: крупному рогатому скоту (кроме быков) - внутрикожно в середине шеи, быкам - также внут-рнкожно в левую и правую подхвостовую складки.

4.9.6.    Учет и оценку реакций па туберкулин и КАМ проводят у крупного рогатого скота через 72 часа после инъекции аллергенов.

Реакцией считают припухлость в месте введения препарата, ощутимую при пальпации, независимо от ее характера (консистенции, температуры, болезненности и т.п.). При учете реакции у каждого исследуемого животного пальпируют место введения туберкулина. В случае обнаружения припухлости в место его инъекции, у этого животного прощупывают место введения КАМа и проводят измерение утолщения кожной складки.

Более выраженную реакцию на туберкулин при менее выраженной или отсутствующей на КАМ обозначают знаком «+» (плюс), менее выраженную реакцию на туберкулин - знаком «-» (минус), при одинаковых реакциях - знаком «-» (равенство).

Животных, нс реагирующих на туберкулин, нс учитывают независимо от наличия или отсутствия у них реакций на КАМ.

4.9.7.    Результаты оценки реакции на туберкулин в сравнении с реакцией на КАМ в знаках («+», «-», «=») записывают в ведомость учета симультанной пробы (табл.1) и с помощью табл. 2 определяют достоверность различия в интенсивности реакций у животных на туберкулин и КАМ в целом по группе.

13

По ведомости подсчитывают общее количество животных, реагирующих на туберкулин с оценкой реакций «+» и «-» (животных, реагирующих на аллергены в равной степени, в расчет нс берут), и таким обратом определяют показатель А табл. 2 (например 14). Затем подсчитывают отдельно количество знаков «+» и знаков «-» и по табл. 2 сравнивают поочередно результаты с показателем Б, соответствующим установленному показателю А (в примере: соответствующий показатель Б равен 12).

4.9.8.    Если количество знаков «+» равно или больше показателя Б, а также если при проведении пробы вообще не выявлено животных, реагирующих на КАМ, то это означает, что реакции на туберкулин выражены достоверно интенсивнее, чем на КАМ, и указывает на заражение животных возбудителем туберкулеза.

4.9.9.    Пели количество знаков «-» равно или больше показателя Б, значит у животных реакции достоверно более выражены на КАМ. Если при этом у всех реагирующих на туберкулин животных реакции интенсивнее выражены на КАМ и получены отрицательные результаты бактсриолшичсских исследований, группу скота считают благополучной по туберкулезу. Также благополучным по туберкулезу считают поголовье животных, среди которых при проведении симультанной пробы нс выявлено реагирующих на туберкулин.

4.9.10.    Могут быть случаи, когда при достоверно более интенсивной реакции на КАМ в целом по стаду (группе) у отдельных животных наблюдаются реакции на туберкулин при менее выраженной или совсем отсутствующей реакции на КАМ. Это может быть обусловлено парадоксальным проявлением реакций на аллергены или наличием туберкулезной инфекции на фоне сенсибилизации животных к туберкулину атипичными микобактериями. Для уточнения диагноза всех таких животных, а также реагирующих в равной степени на туберкулин и КАМ (при утолщении кожной складки па 3 мм и более), обязательно подвергают убою с патологоанатомичсскнм исследованием на туберкулез. При отсутствии характерных изменении проводят бактериологическое исследование и в случае получения отрицательного результата стадо (группу) животных считают благополучным но туберкулезу.

14

Таблица I

Ведомость учега симультанной пробы (пример)

Номер (кличка) животных, реагировавших на туберкулин Оценка реакции на туберкулин в сравнении с реакцией на КАМ: большая (+), меньшая (-), равная (=). | 17 1 114 316 - 2*9 * 32 - 174 » 2*5 232 ♦ 4*4 • 179 557 ♦ 343 • 5П - 17* 6 4 1$ - 1)1 * 14 ♦ 104 *0 * W * 40 * 1)9 2* - 7? ♦ Всего животных 25 Всего знаков «+» и «-» - 23 (показатель А табл. 2), в т.ч.: знаков «+» - 13 «- »- 10

В данном примере различие в интенсивности реакций на туберкулин и КАМ недостоверно, поэтому результаты симультанной пробы считают неопределенными.

15

Таблица 2 Определение достоверности различия реакций на туберкулин и КАМ

Показатель А Показа гель Б Показатель А Показатель Б Общее количество животных, реаги-руюших на туберкулин с оценкой реакции и *-я Минимум животных с большей «-*■» или меньшей «-я интенсивностью реакции на туберкул ни, при котором различие ■ реакциях достоверно Общее количество животных, ре а тирующих на туберкулин с оценкой реакции и «-» Минимум животных с большей к+я или меньшей «-* интенсивностью реакции на туберкулин, при котором различие в реакциях достоверно 1 2 3 4 6 6 31 22 7 7 32 23 8 8 33 23 9 9 34 24 10 9 35 24 II 10 36 25 12 10 37 25 13 11 38 26 14 12 39 27 15 12 40 27 16 13 41 28 17 13 42 28 18 14 43 29 19 15 44 29 20 15 45 30 21 16 46 31 22 17 47 31 23 17 48 32 24 18 49 32 25 18 50 33 26 19 51 33 27 20 52 34 28 20 53 35 29 21 54 35 30 21 55 36 56 36 78 49 57 37 79 49 58 17 НО 50 59 38 HI 50

16

УТВЕРЖДАЮ

НАСТАВЛЕНИЕ

по диагностике туберкулеза

животных

1. Обшие положения

1.1. Туберкулез - инфекционная, хронически протекающая болезнь животных всех видов и человека, характеризующаяся поражением органов и тканей с образованием в них туберкулов.

Возбудитель - бактерии из рода Mycobacterium, в который входят более 38 самостоятельных видов. Болезнь у животных вызывают микобактерии туберкулеза бычьего (М. bovis), человеческого (М. tuberculosis) и птичьего (М. avium) видов. Каждый из них является патогенным для животных соответствующего вида или человека, возможно и перекрестное заражение.

Микобактерии туберкулеза бычьего вида патогенны для крупного рогатого скота. К ним также восприимчивы все млекопитающие животные и человек. К возбудителю туберкулеза человеческого вила восприимчивы, кроме человека, свиньи, козы, кошки, собаки. Этот вид, в основном, сенсибилизирует крупный рогатын скот к туберкулину и лишь иногда вызывает незначительные очаги в отдельных лимфатических ухзах.

М. avium - возбудитель туберкулеза домашних и диких птиц. Он может вызывать патологические изменения у свиней. У крупного рогатого скота возбудитель туберкулеза птичьего вида вызывает кратковременную сенсибилизацию организма к туберкулину.

3

Отдельные виды атипичных микобактерий или их ассоциации могут вызывать сенсибилизацию крупного рогатого скота, свиней и птиц к тубер-кулинам, и в отдельных случаях патоморфологические изменения в лимфатических узлах у свиней, неотличимые от туберкулезных изменений

1.2.    При диагностике туберкулеза у животных используют эпизоото-

логический, клинический, патологоанатомический, гистологический, бактериологический,    аллергический    и молекулярно-генетический

(полимеразная цепная реакция - ПЦР) методы исследования.

Основными, обязательными методами исследования на туберкулез являются внутрикожная (у овец, коз и пушных зверей: норок, песцов, лисиц -пальпебральная, у лошадей - глазная)    туберкулиновая проба, пато

логоанатомическое и бактериологическое исследование.

В благополучных по туберкулезу хозяйствах с целью отбора животных для диагностическою убоя из числа реагирующих на туберкулин применяют одну из следующих проб: симультанную аллергическую пробу, офтальмо-пробу, пальпебральную и внутривенную туберкулиновую пробу.

1.3.    Диагноз на туберкулез считается установленным в следующих случаях.

1.3.1.    У млекопитающих животных (за исключением свиней):

-    при обнаружении на вскрытии изменений, характерных для туберкулеза;

-    при отсутствии видимых изменений или возникших затруднениях в определении характера изменений - при положительных результатах ПЦР и положительных результатах биологического исследования.

-    при выявлении бактериологическим исследованием возбудителя бычьего или человеческого вида;

-    при положительных результатах биологического исследования.

1.3.2.    У свиней:

-    при положительных результатах ПЦР и выявлении бактсриологиче-

ским исследованием возбудителя туберкулеза бычьего или человеческого вида.

1.3.3. У птиц:

-    при обнаружении на вскрытии характерных изменений, с подтверждением диагноза бактериоскопическим методом исследования;

-    при отсутствии видимых изменений или возникших затруднениях в определении характера изменений - при положительных результатах ПЦР;

-    при выделении культуры микобактерий птичьего вила (от попугаев -птичьего или человеческого видов).

1.4. Исследование животных на туберкулез проводят в порядке и сроки, предусмотренные Санитарными правилами СП 3.1.093-96 и Ветеринарными правилами ВП 13.3.1325-96, п.10 «Туберкулез», утвержденными Гос-комсанэпиднадзором и Минсельхозпродом России в 1996 г.

2. Эпизоогологическне данные

2.1. Контроль за эпизоотическим состоянием хозяйств по туберкулезу животных осуществляют по результатам ветеринарно-санитарной экспертизы убойного скота на мясокомбинатах и в хозяйствах, патологоанатомического вскрытия трупов павших животных, раулярного клинического обследования поголовья и аллергических исследований, проводимых по эпизоотологиче-ским и эпидемиологическим показаниям.

2.2.    К туберкулезу восприимчивы животные всех видов и возрастов. Основным источником возбудителя туберкулеза являются больные животные, выделениями которых контаминируется среда обитания, являющаяся длительное время резервуаром инфекции.

2.3.    Заражение туберкулезом животных происходит, в основном, через дыхательные пути или желудочно-кишечный тракт. Аэрогенное заражение чаще отмечают у взрослого скота в стойловый период. Телята, свиньи и птица заражаются чаще алиментарно при скармливании им необезэараженного мо-

5

лока, обрата и других кормов, контаминированиых возбудителем туберкулеза.

2.4.    Возникновению и распространению болезни способствуют высокая концентрация поголовья, неполноценное кормление, сырые, темные, плохо вентилируемые помещения, стойловое безвыгульное содержание, контамини-рованные микобактериями туберкулеза объекты внешней среды, нарушение правил карантинирования вновь поступивших животных, перегруппировка поголовья без учета эпизоотического состояния, отсутствие ветеринарно-санитарных пунктов на фермах и при летне-лагерном содержании животных.

2.5.    При диагностике болезни в первую очередь учитывают эпизоотическое состояние и степень распространения туберкулеза в районе, области (крас), эпизоотическое состояние хозяйства в прошлые годы, метод оздоровления, ввод нового поголовья, контакты благополучных стад с неблагополучными, завоз кормов и другие связи с неблагополучными хозяйствами, использование для выпойки нсобеззаражсиного молока и обрата, обнаружение патологоанатомических изменений, характерных для туберкулеза, у убитых или павших животных, выявление больных туберкулезом людей среди животноводов, наличие туберкулезных лечебно-профилактических учреждений на прилегающих территориях.

2.6.    При появлении эпизоотологичсских иди эпидемиологических показаний. дающих основание подозревать заражение животных туберкулезом, проводят комплекс исследований в соответствии с разделами настоящем» Наставления.

3. Клинический осмотр

При клиническом осмотре у крупного |югаiого скота определяют внешним кпд и унитлимоен. животного, ii|miiiivmmii.hdi |юж |1мнч1мыс лимфатические узлы ПОДЛОМИ иг ми.» |||Й*Т’||1|| «•••lill.it м.1 М О U'lMlMO. у коров-щами и млдвмменнмг •1ммф.н»*••«.     i     и    ..пт    признаки болезни

6

проявляются только при длительном течении процесса.

При туберкулезном поражении лимфоузлов может наблюдаться их увеличение и болезненность. Туберкулез легких проявляется кашлем, особенно но утрам. Туберкулез вымени характеризуется образованием горячих болезненных припухлостей и поражением налвммениых лимфоузлов. При туберкулезе кишечника возможна диарея.

У телок, заразившихся в раннем возрасте, признаки болезни могут проявиться лишь после первого-второго отела.

У кошек туберкулез может проявляться в виде язв » области головы, у порок - в вице язвенных поражений кожи головы, шеи, фудной и брюшной области.

У больных туберкулезом животных периодически повышается температура тела, волосяной покров становится тусклым, взъерошенным. Снижается упитанность - до полного истощения, падает аппетит.

Довольно часто больные животные не имеют никаких внешних признаков заболевания.

Аллергическое исследование

4.1. Сущность метода заключается в выявлении животных, инфицированных возбудителем туберкулеза или другими микобактериями, в аллергической пробе с туберкулином.

Основным методом исследования млекопитающих животных (за исключением лошадей, овен, коз и пушных зверей) и птиц является внутри-кожная туберкулиновая проба. В качестве дополнительных методов исследования у крупного рогатого скота применяют офтальмопробу, пальпебральное и внутривенное введение туберкулина, симультанную пробу с ППД-туберкулином для млекопитающих и комплексным аллергеном из атипичных микобактерий (КАМ) или ППД-туберкулином для птиц.

7

Применение симультанной пробы основано на видовой специфичности аллергии, проявляющейся более выраженными реакциями на аллерген, родственный но антигенному составу микобактериям, вызвавшим состояние сенсибилизации животных. При оценке реакций на туберкулин у животных необходимо учитывать, что проявление и характер внутрикожных реакций зависит от общего физиологического состояния организма, чувствительности животных к туберкулину и вида микобактерий, обусловившего сенсибилизацию организма.

Крупный рогатый скот, свиньи и другие животные, зараженные возбудителем туберкулеза бычьего вида, реагируют на ППД-туберкулин для млекопитающих. При этом у животных старых, а также с низкой упитанностью или при генерализованном туберкулезном процессе реакции на туберкулин могут быть слабо выражены или даже отсутствовать (анергия).

В благополучных по туберкулезу стадах крупного рогатого скота у животных может наблюдаться повыше«шая чувствительность к туберкулину для млекопитающих, обусловленная сенсибилизацией организма животных микобактериями туберкулеза птичьего вида, возбудителем паратуберкулеза или атипичными микобактериями (парааллергические реакции). По характеру проявления впутрикожные парааллергические реакции не отличаются от реакций на туберкулин у животных, зараженных возбудителями туберкулеза бычьего или человеческого видов, но более выражены на КАМ или туберкулин для птиц, что выявляется при проведении симультанной пробы. При повторных исследованиях парааллергические реакции часто выпадают.

4.2. Для аллергических исследований у млекопитающих применяют ПЦД-тубсркулин для млекопитающих, у птиц - П1 1Д-тубсркулин для птиц .

Каждый флакон с туберкулином н растворителем перед применением просматривают. При обнаружении и ни* каких либо примесей, нарушении целостности стекла или укупорки, «пеун*шип iitoiiiiitrii их выбраковывают. Препарат используют только к день нскрышм ||пмннк»и

8

4.3.    Для внутрикожного введения туберкулина используют безыголь-ные инъекторы или шприцы вместимостью 1-2 мл с бегунком и иглами для внутрикожных инъекций. Обезьянам, пушным зверям, кошкам и птицам туберкулин вводят только шприцем с иглой. Для нанесения туберкулина на конъюнктиву применяют глазные пипетки.

Шприцы, иглы и глазные пипетки стерилизуют кипячением без добавления дезинфицирующих веществ. Безыгольные инъекторы стерилизуют в соответствии с наставлением по их применению.

4.4.    Тубсркулинизации подвергают:

крупный рогатый скот, яков, лошадей и других представителей непарнокопытных, буйволов, свиней, овец, коз, собак, волков и других представителей хищных, кошек, обезьян, сумчатых - с двухмесячного возраста;

верблюдов, дельфинов, слонов, носорогов, бегемотов - с года;

маралов, оленей, антилоп, пушных зверей и птиц - с 6-месячного возраста.

Коров (нетелей), буйволиц, ячих, верблюдиц исследуют независимо от периода беременности; коз, овец, свиней, кобылиц, ослиц, сух, зебувидных и пушных зверей - нс ранее 1-го месяца после родов.

Нс разрешается исследовать туберкулинами животных в течение трех недель после вакцинации против инфекционных болезней и обработок против гельминтов.

4.5.    Очищенный ППД - туберкулин для млекопитающих в стандартном растворе, приготовленном на биопредприятии, применяют для тубсркулинизации млекопитающих животных.

Сухой очищенный ПЛД-тубсркулин для птиц непосредственно перед применением растворяют в растворителе микэбакгериальных аллергенов, рассылаемом биопредприятием вместе с аллергеном.

4.6.    Тубсркулины применяют при исследовании на туберкулез млекопитающим (кроме обезьян, кошек и пушных зверей: норок, песцов, лисиц) в

9

объеме 0,2 мл, обезьянам, кошкам, пушным зверям и птицам - 0,1 мл.

4.6.1. Для исследования обезьян стандартный раствор ШЩ-туберкулина для млекопитающих разводят в 10 раз (1 объем туберкулина в 9 объемах растворителя) стерильным физиологическим раствором pH 7,(Ж),5 или растворителем микобактсриальных аллергенов.

4.6.2. При исследовании птиц содержимое одного флакона с ПГЩ-губеркулином для птиц растворяют в одном флаконе растворителя объемом 20 мл.

4.7.    Туберкул и низанию животных разрешается проводить ветеринарным врачам или ветеринарным фельдшерам под контролем ветврача. Исследование проводят под контролем специалистов государственной ветеринарной службы.

4.8.    Внутрикожный метод туберкулинизации 4.8.1. Туберкулин вводят:

крупному рогатому скоту (кроме быков), буйволам, зебуБИдным, якам, оленям, маралам, антилопам - в середине шеи (в этой области нс разрешается вводить другие биологические препараты и лекарственные вещества); быкам, слонам, носорогам, бегемотам - в подхвостовую складку; верблюдам - в кожу брюшной стенки или области паха на уровне горизонтальной линии седалищного бугра;

свиньям - с наружной поверхности уха в 2-3 см от его основания; поросятам в возрасте 2-3 месяцев туберкулин допускается вводить в кожу поясничной области, отступая от позвоночника на 5-8 см, используя для этого только безыгольный инъектор;

овцам и козам - в нижнее веко под кожу, отступив от его края на 1,5-2

см;

собакам, волкам и другим представителям хищных - в области внутренней поверхности бедра или локтеиой складки.

обезьянам, сумчатым, пушным зверям (норкам, песцам, лисицам)