мищичвом ста?Ания ДЙ ОрЩВЛ^ВД ЭДШ^ЙНЕСТВ пеСТЯЦЙИОР В' ЯЮДУКТЛХ ЮТАЙИЯ.КОРМА): у. В1КШШЯ СРЙЛВ

Часть УЙЯ

Москва - 1Я^,?<7 г..

ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬБЫ С ВРЕДИТЕЛЯМИ, БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИИ И СОРИНКАМИ ПРИ МСХ СССР

Утверждено

Министорстиои здравоохранении СССР 1976 Г.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗ/ЛИН

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ Г1ЕС1И ЦИДОЬ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ .КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРьДК

Часть ЛИ

Дшпше иетодики апробирована и рекомендована и качестве офиниалышх группой экспертов при Госкомиссии по химический средствам борьба с вредителями,болезнями растений и соринками при МСХ СССР

Москва - 197? г,

.ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ /-/2,4-ДШОРФЕНОКСИ /-ЖСЛЯН0Г. МОЛОТЫ / 2,4-ДМ / В ВОДЕ, РАЗИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ W ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ

Краткая характеристика препарата

Белое криоталлическое вещество., яипя. 117 - П9°С. Растворимость в воде при 25°С 46 мг/л, :в.апетоне 10%, Растворима в оеязоле, этаноле и эфире. Соли щелочных металлов и аминные соли растворимы в воде, но в жесткой воде выпадают в осадок в виде кальциезых и магниевых солей. В растениях и почве 2,4 - ДМ образовывает 2,4-дихлор_деиоксиуксуоную кислоту / 2,4 - Д /.

и

Принцип метода

Метод основан на экстракции 2,4 - ДМ из анализируемой пробы органическим, растворителем с последующим определенном в виде метилового эфира 2,4 - ДМ с помощью газо-жидкостной и тоякоолойной хроматографии. При необходимости определения соде ржания в пробе солей 2,4 -ДМ используются методы, которые приведены ника, поскольку при экстракции из пробы соли 2,4-ДМ кислоту.

Чувствительность определения в воде 0,005 иг/л / газожидкостная хроматография /, 5 мкг в пробе /''тонкослойная хроматография /\ в растительном материале 0,01 мкг / газо-жид-коотная хроматография /, 5 мкг в пробе / тонкослойная хроматография /\ в сливочном масле 0,03 мг/кг / газо-жидкостная хроматография /,' 7 мкг в . робе / тинкоолойная хроматография /. Минимально детектируемое количеотво метилового эфира 2,4-да 8 нг, линейный динацичеокий диапазон до 70 иг метвдового эфире 2,4-ДМ.

Реяхткбы и растворы

Безводной сульфат натрия, х,ч.

Н~ге..сли, х,ч. / перегнанный / диэтилоаый спирт, х.ч.

Бикарбонат патрил, х.ч., 32-ш:й водный раствор Диметилсульфат, х.ч., 52-ный / ДЯ-объекныо / раствор в абсолютном метиловом спирте Метиловый спирт, абсолютный

Хлористый натрий, х.ч., насыщенный водный раствор Силиконовый эластомер s Е-30 Сериал кислота, 102-/шй водный раствор Соляная кислота, концентрированная, х.ч.

Смесь растворителей 1:1 ч. 102-ного водного раствора серной кислоты t 1,5 ч. 952-ного этилового спирта * 2,5 ч. потролей-иогс эфира + 7,5 ч. диэтилового э^яра Петролейный эфир, т.кяп. 40-70°С Н-гептан, х.ч.

Ацетон, х.ч.

Хрома тон W , 0,16 - 0,20 мм, промытый киолотой я саланязиро-вашшй ДМХС

Кальций сернокислый, х.ч., прокаленный при 160°С в течение 6 часов Силикагель КСК

Проявляющей реактив: в мерную колбу на 100 м" помещают 0,5 г азотнокислого серебра, 5 мл дистиллированной воды, 7 мл оммяа ка / 252-ныЙ водный раствор / я доводят до метки ацетоном Азотнокислое серебро, х.ч.

Аммиак, 252-ный водный раствор

Стандартный раствор 2,»,5 - Т / 2,4,5 трцхлорфенокснуксусная

кислота / в этаноле с содержанием 2,5 мкг/мл

Стандартный раствор 2,4-ДМ в метаноле с содержанием 25 мкг/мл

в дкэтиловом эфире о содержанием 50 мкг/мл.

фосфорно-вольфрамовая / фос^орно-молибденоввн / кислота, х.ч.

402-ннй водный раствор

Приборы и посуда

Газовый хроматограф о электронно-захватным детектором

/ ДРЕТ-5, ЦВЕТ-106» ССЧС-фирыы Шямадзу и др. /

Делительные воронки на 500» 1000 и 1500 мл

Стеклянная колонка длиной 20 ом и о внутренним диаметром 3 ом

Колба Буиэена иа 50С мл

Воронка Йохнера, диаметр 15 ом

Грушовидныв колбы на 100 мл

Адлерат для встряхивания

Ротационный испвритоль ИР-1

Колбы конические о пришлифованной пробкой на 250 мл Водяная баня

Контактный термометр на 100°С Мерные колбы на 10 н 100 мл Вакуумный водоструйный насос Холодильник Либиха Камора хроматографическая Микропипетки

Медицинокий шприц ка I мл Стеклянные дластинки 9x12 мм Сито капроновое» 100 меш Пульверизатор стеклянный

Ход анализа

Газо-аддкоотная хроматография.

Вода. Пробу воды / 250 - 1000 мл / помещают в делительную воронку» подкисляют соляной кислотой до pH ^ 3 / индикаторная бумага /| прибавляют I мл стандартного раствора 2*4*5 -Т / внутренний стандарт / и экстрагируют тремя порциями дн-этилового эфира / 100, 50 и 50 мл /.

Объединенный экстракт переносят в делительную воронку, прибавляют 75 мл З^-ного водного раствора бикарбоната натрия и вкстрагируют 3 минуты. После раослоения фаз ообирают нии-ний водный слой. Повторяют экотракцию еще двумя порциями раотвора бикарбоната. Объединенный экотракт промывают двумя Порциями до 50 мл петролейного эфира, отбраоывая этот эфир. Бикарбонатаый раствор подкисляют IOjf-ным водным раотвором оерной кислоты до pH ~3 и триады акотрагируюг ддэтнлрвым эфиром по 50 мл. Объединенный эфирный экстракт оуаят, продус-

кая через стеклянною колонку, заполненную безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляют на ротационном испарителе в грушевидной колбе на 100 мл; последние порции растворителя удаляют с помощью резиновой груши. Затем приливают в колбу 3 мл 52~ного раствора диметилсульфата в абсолютном метиловом спирте, тщательно ополаскивают стенки колбы; прибавляют I г безводного сульфата натрия, присоединяют к колбе обратный холодильник я помещают на водяную баню / температура 55°С / на 10 минут. / Диметилсульфат - сильный яд! Поэтому с этим реактивом необходимо работать под тягой а промывать использованную для реакций посуду раствором аммиака в метиловом спирте /. После окончания реакции метилирования колбу с содержимым охлаждают под водопроводной водой, прибавляют 3 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия, I мл а-гекоана, энергично встряхивают и после расслоения фаз вводят в хроматограф 3 мкл гексанового слоя.

Условия хроматографирования: стеклянная спиральная колонка / длина 2 м, внутренний диаметр 3 мм /, заполненная Хроматоном Л 0,16 - 0,20 мм, промытым кислотой и силанизи-рованным ДМХС с 5% SS-30; скорость газа-носителя / азот осо- . бой чистоты / через колонку - 50 мд/мин, скорость продувочного газа через детектор 150 мл/мин / хроматограф ЦВЕТ-106/, температура термостата колонок 190°С, температура термостата детектора постоянной скорости рекомби наци,. 220°С, температура испарителя 220°С, шкала электрометра 20*10“^а, окорость диаграммной ленты потенциометра 2-10 мм/час. Хроматографирование одной пробы проводят дважды. Порядок выхода из кололи хроматографируемых веществ: н-гексан / растворитель /, метиловый эфир 2,4,5-Т, метиловый эфир,2,4-ДМ. Абсолютное время удортлванил а этих условиях метилового эфира 2,4,5-Т - 5 мин. 60 сек, метилового эфира 2,4-JvM - 7 мин. 25 сек. Относительное время удерживания метилового эфира 2,4-ДМ. -г 1,18. Измеряют на хрома.огриммях высоты пиков метиловых эфиров 2,4-Д 1 и 2,4,5-Т, вычисляют среднее значение отношения этих выоот и по уравнению калиброгочного графика находят содержание 2,4-ДМ в воде.

Для построения калибровочного графика к пробам воды прибавляют I мл стандартного рлотворэ 2,4,8-Т, 5,10,(5,20 мкг

/в

2.4- ДО в виде раствора в метиловом спирте и далее поступают так, как опяоано выше. Для построения калибровочного графика ясполлзуют-водопроводную воду. Измеряют на хроматограммах высоты пиков метиловых эфиров 2,4-ДО и 2,4,5-Т, вычисляют среднее значение их отношения из трех параллельных определений

и строят график зависимости отношения выоот хроматографиче-оких пиков метиловых эфиров ДМ я 2,4,5-Т от концентрации

2.4- ДО в воде / мг/л/. Калибровочный график обрабатывают по методу наименьших квадратов и получают уравнение калибровочной прямой в виде

У = А + НХ,

где У - отношение высот хроматографичеоких пиков метиловых эфиров 2»4-ДО» и 2,4,5-Т.

X - концентрация 2в воде, мг/л А и В- коэффициенты, которые получают при обработке калибровочного графика по методу наименьших квадратов.

Растительный материал. 3 измельченную пробу / 50 г / вносят I мкл стандартного раотвора 2,4,5-Т и экотрэгируют тремя порциями по 50 мл смеси растворителей I в конической колбе о пришлифованной пробкой на аппарате для встряхивания. Продолжительность каждой экстракции - 15 минут. Пробы с низким содержанием влаги увлажняют перед экстракцией дистиллированной водой / 15 - 25 мл /.

После окончания последней экстракции пробу отфильтровывают на воронке Бюхнера под вакуумом, а остаток на фильтре промывают двумя порциями по 50 мл смеси растворителей П. Объединенный экстракт переносят в делительную воронку, прибавляют 15 мл 40^-ного водного раствора фосфорао-молибдено-вой / фосфорно-вольфрамовой / кислоты, 15 мл концентрированной ооляной кислоты в содержимое периодически встряхивают в течение 15 минут. После разделения слоев нижний / водный / слой однократно экстрагируют 30 мл смеси растворителей П, я этот экстракт объединяют с верхним сдоем. Объединенный экотракт переносят в делительную воронку, прибавляют 75 мл 3£-но-го водного раотвора бикарбоната натрия и далее посыпают так, как это описано при определения в воде.

Для построения калибровочного графика к пробам растатель-

яого материала прибавляют I мл стандартного раотвора 2,4,5-Т, 5,10*15 и 20 мкг 2,4-ДМ / в виде раствора в метиловом спирте/, ототавляют на 3 часа и далее поступают так, как это описано выше. Калибровочный график обрабатывают по методу наименьших квадратов я получают уравнение калибровочной прямой в виде

У = А + ВХ,

где У - отношение высот хроматографичеоких пиков метиловых эфиров 2,4-ДМ и 2,4,5-Т X - содержание 2,4-Д!/, в пробе, мг/кг А и В - коэффициенты.

Сливочное масло. К пробе масла / 25-50 г / прибавляют I мд стандартного раствора 2,4,5-Т, растворяют в 250 мл лет-ролейного эфира и триады экстрагируют 3£-ным водным раствором бикарбоната натрия / 3x75 мл /. Обь единенный водный экстракт промывают четырьмя порциями яетролейяого эфира, отбрасывая этот эфир. Бикарбонатный раствор подселяют 10#-нш водным раотвором серной кислоты до рН~3 и далее поступают так» как это описано при определении 2,4-ДМ в растительном материале.

Для построения калибровочного графика к пробам масла прибавляют I мл стандартного раствора 2,4,5-Т, 5,10,15 и 20 мкг

2.4- ДМ в виде раствора в метиловом спирте и далее поступают так, как это описано выше.

Тонкослойная хроматография

Вода. Подготовка пробы аналогична описанной выше. Конечный гексановый экстракт наносят на хроматографическую пластинку с тонким слоем силикагеля КСК, окредлеиного гласом с помощью капилляра или медициной ого шприца на I мл. Затем на хроматографическую пластинку наносят 5 и 10 мкг метилового эфира, 2,4-ДМ в виде раствора в диэтиловом эфире и проводят хроматографирование в системе растворителей н-гептан-ацетон в соотношении 9:3. После окончания процесса хроматографирования пластинку извлекают ив камеры и оушат на воздухе в вытяжном шкафу. Для обнаружения зон локализации метилового эфира

2.4- ДМ длаотияку обрабатывают проявляющим реактивом и облучают УФ-оветом в течение 10-15 минут. При наличии в пробе метилового Эфира S,4-ДМ на гумстияке появляется серо-черное

//J~

пятно на белом фоне о величиной u_t г* 0,41 - 0,42* Колмчествея-ное определение метилового эфира 2»4~ДМ проводят путем визуального сравнения размера и иитеноивности окраоки пятен стандарта о пятном пробы.

Перед проведением серийных анализов необходимо провести эксперименты по определение процента определения / процента возврата / 2,4-ДМ из проб воды, к которым были предварительно добавлены различные количества 2,4-ДМ. Возврат в пределах 80-85# считается удовлетворительным. Минимально детектируемое количество метилового эфира 2,4-ДМ на хроматографической пластинке 4 мкг.

Растителышй материал. Подготовка пробы и проведение определения аналогичны описанным вше.

Сливочное маоло. Подготовка пробы и проведение определения аналогичны описанным шлое.

Расчет результатов анализа

Для определения содержания 2,4-ДМ в пробе методом газожидкостной хроматографии используют следующую формулу

X г -Z " А .

В

где X - содержания 2,4-ДМ в пробе, мг/л иля мг/кг У*А,В - см.обозначения в текотв.

Для определения содержания в пробе метилового эфира

2,4-ДМ методом тонкоолойной хроматографии используют следующую формулу

д =, И⁵. А ...

a R

где Д - содержание 2,4-ДМ метилового эфира в пробе, мг/л или мг/кг

А - количество метилового эфира 2,4-Д в пробе, найденное визуальным сравнением со стандартом, мг а - объем или вео пробы / мл иди г /

Н - процент определения, найденный предварительно, %

Для определения содержания в пробе 2.4-ДМ вля ео натриевое оояж поадченныв результат необходимо соответственно ум-яоягть на 0,95 или 1,02.

//*