Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации Государственные санитарно-эпидемиологические правила _ и    нормативы_

2.1.6. АТМОСФЕРНЫЙ ВОЗДУХ И ВОЗДУХ ЗАКРЫТЫХ ПОМЕЩЕНИЙ. САНИТАРНАЯ ОХРАНА ВОЗДУХА

Предельно допустимые концентрации (ПДК) микроорганизмов-продуцентов, бактериальных препаратов и их компонентов в атмосферном воздухе населенных мест

Гигиенические нормативы ГН 2.1.6.1763—03

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Методические указания

МУК 4.2.1767—03 МУК 4.2.1768—03 МУК 4.2.1769—03 МУК 4.2.1770—03 МУК 4.2.1771—03 МУК 4.2.1772—03 МУК 4.2.1773—03 МУК 4.2.1774—03 МУК 4.2.1775—03

Издание официальное

Минздрав России Москва • 2004

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Методические указания

МУК 4.2.1767—03 МУК 4.2.1768—03 МУК 4.2.1769—03 МУК 4.2.1770—03 МУК 4.2.1771—03 МУК 4.2.1772—03 МУК 4.2.1773—03 МУК 4.2.1774—03 МУК 4.2.1775—03

ББК51.21

M54

M54 Методические указания. - М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004. - 66 с.

ISBN 5—7508—0510—7

1.    Разработаны Российским государственным медицинским университетом (к. б. н. Н. И. Шеиной).

2.    Утверждены Первым заместителем министра здравоохранения Российской Федерации - Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 24 октября 2003 г.

3.    Введены в действие с I декабря 2003 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.21

ISBN 5—7508—0510—7

€> Минздрав России, 2004 €> Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004

МУК 4.2.1767—03

УТВЕРЖДАЮ Главный государственный санитарный врач Российской Федерации,

Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации Г. Г. Онищенко

24 октября 2003 г.

Дата введения: 1 декабря 2003 г.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод микробиологического измерения концентрации клеток Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177 -продуцента глюкоамилазы в атмосферном воздухе населенных мест

Методические указания МУК 4.2.1767—03

1. Общие положения и область применения

Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177 - продуцента глюкоамилазы в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне концентраций от 100 до 5 000 клеток в 1 м³ -воздуха.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 17.2.4.02-81 «Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ» и Р 8.563—96 «Методики выполнения измерений».

Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.

Методические указания одобрены и рекомендованы секцией «Гигиенические аспекты биотехнологии и микробного загрязнения окружающей среды» Проблемной комиссии «Научные основы гигиены окружающей среды».

9

МУК 4.2.1767—03

2. Биологическая характеристика Aspergillus awamori

ВНИИгенетика 120/177 и его гигиенический норматив

На 5 день развития на сусло-агаре штамм образует крупные ровные круглые колонии, средний диаметр которых составляет 0,5—1,0 см, а максимальный - 1,5—3,0 см. Край колоний ровный. Колонии гомогенные, гладкие, плоские.

При температуре 38—42 °С штамм-продуцент появляется на сусло-агаре в виде маленьких белых колоний уже на 1—2 дни. На 3 день в среду выделяется оранжево-желтый пигмент, процесс спорообразования идет интенсивнее. Образование конидиеносцев с конидиями придает колониям глубокий интенсивно-серый цвет. Колонии становятся опушенными и приподнимаются над средой.

Систематическое положение микроорганизма

Fungi imperfecti

Hyphomycetales

Mucedinaceae

Monoverticillata

Aspergillus

awamori

ВНИИгенетика 120/177

Штамм Aspergillus awamori 120/177 получен во ВНИИгенетика как мутант из Asp.awamori С529Д 466 и депонирован в ЦМПМ института. Штамм является продуцентом глюкоамилазы.

Штамм-продуцент растет на жидких и агаризованных средах. Оптимальная температура роста 27—30 °С, pH среды - 5,0—6,0, культивирование 7 суток. Для размножения используется агаризо-ванная среда Чапека, сусло-агар 5—6 °Б, картофельно-сахарозный агар.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) в атмосферном воздухе населенных мест - 200 кл/м³, пометка А.

3. Пределы измерений

Методика обеспечивает выполнения измерений количества клеток плесневого гриба в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне концентраций от 100 до 5 000 клеток в 1 м³ воздуха при доверительной вероятности 0,95.

МУК 4.2.1767—03

4. Метод измерений

Метод основан на аспирации из воздуха клеток плесневого гриба на поверхность среды сусло-агар и подсчета выросших колоний по типичным культурально-морфологическим признакам и яркому оранжево-желтому окрашиванию субстрата на 3 сутки.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818

(щелевой прибор Кротова)    ТУ 64-12791—77

Термостаты электрические суховоздушные

или водяные

Автоклав электрический    ГОСТ 9586-75

Бокс, оборудованный бактерицидными лампами Холодильник бытовой

Весы лабораторные, аналитические типа ВЛА-200 Микроскоп биологический с иммерсионной системой типа «Биолам» Л-211

20 и 35 мл

Пипетки мерные на 1,5 и 10 мл

Пипетки мерные на 1,5 и 10 мл

Колбы конические, вместимостью 250 и 500 мл

Секундомер

Барометр

Марля медицинская

Вата медицинская гигроскопическая

5.2. Реактивы, растворы

Среда сусло-агар: солодовое сусло (значение Баллинга от 5 до 6°) - 98 %,

И

агар-агар - 2 %, pH среды 5,0—6,0,

режим стерилизации: Р - 0,8 кгс/см²,40 мин

Спирт этиловый ректификат    ГОСТ 5962-67

Молочная кислота

(синоним-альфа-оксипропионовая кислота, для подавления посторонней

бактериальной флоры)    ГОСТ 490-79

6. Требования безопасности

При выполнении измерений концентрации клеток штамма-продуцента в атмосферном воздухе соблюдают следующие требования:

6.1.    Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2.    Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.

6.3.    «Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности» (1977).

6.4.    Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.

8. Условия измерений

Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 ± 5 °С), атмосферном давлении 630—800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80 %.

МУК 4.2.1767—03

9. Проведение измерения

9.1. Условия отбора проб воздуха

Для определения концентрации клеток плесневого гриба воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин на поверхность среды сусло-агар. Время аспирации воздуха (5— 20 мин) зависит от предполагаемой концентрации клеток штамма-продуцента.

Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска, прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.

9.2. Выполнение анализа

Метод предполагает учет количества типичных колоний, выросших на 3 сутки после посева проб воздуха, по культуральноморфологическим признакам и яркой оранжево-желтой пигментации среды. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний продуцента.

Агаризованную среду сусло-агар расплавляют, остужают до 50—60 °С, добавляют молочную кислоту из расчета 2 мл на 0,5 л среды (для подавления посторонней бактериальной микрофлоры), тщательно перемешивают и разливают по 10 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности.

Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.

После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат при температуре 38—42 °С (повышенная температура, способствует более быстрому росту колоний и плодоношений рода Aspergillus). Через 2—3 суток производят подсчет выросших типичных колоний продуцента. При необходимости культуру подвергают микроскопированию.

13

10. Вычисление результатов измерения

Расчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1 м³ воздуха производят по формуле:

ЛМ000    .    з

-кл1    м    ,    где

X - концентрация клеток продуцента в воздухе,

У - количество колоний продуцента, выросших на чашке,

1 ООО - коэффициент пересчета на 1 м³ воздуха,

V - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации).

11. Оформление результатов измерений

Результаты измерений оформляют протоколом по форме. Протокол №

количественного микробиологического анализа штамма-продуцента Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177 в атмосферном воздухе населенных мест

1.    Дата проведения анализа_

2.    Место отбора пробы_

3.    Название лаборатории_

4.    Юридический адрес организации_

Результаты микробиологического анализа

Шифр или № пробы Определяемый микроорганизм Концентрация, кл/м3

Ответственный исполнитель Научный руководитель

Содержание

Предельно допустимые концентрации (ПДК) микроорганизмов-продуцентов, бактериальных препаратов и их компонентов

в атмосферном воздухе населенных мест. ГН 2.6Л 763—03............................ 5

Метод микробиологического измерения концентрации клеток Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177 - продуцента глюкоамилазы в атмосферном воздухе населенных мест.

МУК 4.2.1767—03...... 9

Метод микробиологического измерения концентрации клеток Aspergillus terreus 44-62 - продуцента ловастатина

в атмосферном воздухе населенных мест. МУК 4.2.1768—03....................... 16

Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Bacillus subtUis 65 - продуцента нейтральной протеиназы и амилазы в атмосферном воздухе населенных мест

МУК 4.2.1769—03................... 23

Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Bacillus subtilis 72 - продуцента щелочной протеазы в атмосферном воздухе населенных мест.

МУК 4.2.1770—03....... 30

Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Bacillus subtilis 103 (4-15) - продуцента нейтральной протеазы в атмосферном воздухе населенных мест.

МУК 4.2.1771—03.......................... 37

Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Bacillus licheniformis 1001 - продуцента бацитрацина в атмосферном воздухе населенных мест.

МУК 4.2.1772-03.................................. 44

Метод микробиологического измерения концентрации клеток Candida tropicalis Y-456 - продуцента ксилита в атмосферном воздухе населенных мест.

МУК 4.2.1773—03....................... 51

Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Penicillium eanescens F- 832 ВКПМ продуцента ксиланазы в атмосферном воздухе населенных мест.

МУК 4.2.1774—03............................... 58

Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Trichoderma viride 44—11—62/3 -продуцента комплекса целлюлолитических ферментов в атмосферном воздухе населенных мест.

МУК 4.2.1775—03...... ...64