ВЫЯВЛЕНИЕ ПРОТИВОШИГЕЛЛЕЗНЫХ АНТИТЕЛ В СЛЮНЕ В ЦЕЛЯХ РАСШИФРОВКИ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ НЕУСТАНОВЛЕННОЙ ПРИРОДЫ И ДИАГНОСТИКИ ДИЗЕНТЕРИИ У ДЕТЕЙ СТАРШЕ ТРЕХ ЛЕТ И ВЗРОСЛЫХ

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

ЛЕНИНГРАД

1983

Ленинградский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт адидемнологни и микробиологии имени Пастера М3 РСФСР

"УТВЕРЖДАЮ" Зам,министра

Н.Т.ТруОилин 17 января 1983

ВЫЯВЛЕНИЕ ПРОТИВОШИГБЛЛЕЗНЫХ АНТИТЕЛ В СЛЮНЕ В ЦЕЛЯХ РАСШИФРОВКИ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ НЕУСТАНОВЛЕННОЙ ПРИРОДЫ И ДИАГНОСТИКИ ДИЗЕНТЕРИИ У ДЕТЕЙ СТАРШЕ ТРЕХ ЛЕТ И ВЗРОСЛЫХ

Метсщичеокие рекомендации

Ленинград 1983

-II -

виде кашлляра и загнуты под углом 90°. Струю изотонического раствора направляют под давлением в середину осадка эритроцитов, чем достигается их промывка. Затем пластины прибора Такачи помещают в подвеску, которую прикрепляют к ротору центрифуги ЦДС-2 (8); центрифугируют 3-4 мин. при 1000-1500 об/мин. (при отсутствии подвесок осаждение эритроцитов можно проводить, оставляя пластины на столе при комнатной температуре на 35-45 минут; после спонтанного оседания эритроцитов надосадочную жидкость удаляют и отмывание повторяют еще раз). Надосадочную жидкость удаляют и отмывание осадка эритроцитов повторяют дважды.

К отмытым осадкам пастеровской пипеткой с оттянутым и загнутым концом добавляют по 0,05 мл антисывороток к IgA и IgO в рабочем разведении,(антисыворотки к IgA и igQ выпускают Горьковский НИИЭМ и Московский НИИВС им.И.И* Мечникова, ИЭМ им.Гамалеи). Результат учитывают после 45-минутной экспозиции яри 37°С. Класо антител определяют по наличию достоверного 4-кратного и более выраженного по сравнению с результатом обычной РИГА прироста антител к исследуемому антигену после дооавления антиглобулинавых сывороток.

Все контроля, которыми сопровождалась постановка обычной РНГА, дважды отмывали изотоническим раствором и заливали 0,05 мл антисывороток к XgA и igG в рабочем разведении. При наличии гемагглютинации в контроле опыт не учитывают. Наличие гемагглютинации в контроле (изотонический раствор + эритроцитарный диагностикум + антисыво-

- 12

ротка к IgA или igG ) доказывает, что антисыворотка в рабочем разведении содержит антитела к исследуемому антигену и ее необходимо истощить соответствующим днагноо-тикумом•

Учет результатов РИГА* Реакция положительная (+) -эритроциты докрывают дно лунки ровным слоем С'зонтик"); реакция отрицательная (-) - эритроциты скапливаются в центре лунки, образуя компактную "пуговицу* о четко очерченными краями; реакция сомнительная (+) - "дуговицу" окружает узкая область агглютинированных эритроцитов* Учитывают только положительные результаты*

Сопоставляют титры антител, обнаруженных в обычной и модифицированной РИГА в парных ярооах слюны* Достввернкм считают изменение титра антител к одному из антигенов в 4 раза и более до сравнению с исходным* Нарастание титра противошигеллезных антител отмечается, главным образом, в течение первых двух недель болезни, на более поздних сроках регистрируется снижение титра*

Примеры постановки диагноза на основе иммунологического анализа слюны у больных ОКИ*

Пример I. Иммунологический диагноз основан на

данных обычной и модифицированной РИГА

- TQ _

В обычной РЫТА отмечена динамика антител к шигвллам Зонне; с титра 1:128 до 1:16 и 1:8, В модифицированной РИГА зафиксирован максимальный сдвиг IgA-антител: о 1:1024 до 1:64 и 1:16. Диагноз: дизентерия Зонне (от больного выделены шигеллы Зонне, клинически - острая ди-* зентерия, среднетяжелая форма).

Пример 2. Иммунологический диагноз поставлен по данным обычной РИГА

—— ——т —■———т----т——г-----• — т——т “Т -ТГ -V-----—

1'итры антител к антигенам

День ------------------------------------------

Проба бо-    Ш    и    г    е    л    л

слюны лез- ЭПКП ОШ ----------------------------

- 14

В обычной РИГА отмечено достоверное (16-кратное) нарастание титра антител к шигеллам Зонне* В модифицированной РИГА выявить природу антител не удалось. Диагноз: дизентерия Зонне (от больного выделены шигеллы Зонне, клинически - острая дизентерия, легкая форма).

Пример В* Иммунологический диагноз основан на результатах модифицированной РИГА

I

Зафиксировано достоверное нарастание титра ^Т£^А и антител к шигеллам Флекснера (от больного выделены шигел-лк Флекснера, клинически - острая дизентерия, среднетяжелая форма).

Иммунологическое испытание слюны позволяет также распознавать субклинические формы дизентерии*

Таким образом, яри иммунологическом испытании слюны сдвиг в уровнях протизошигеллезншс антител фиксируется учетом результатов обычной и модифицированной РИГА* Однако возможны ситуации, когда положительный ответ может быть

- 15 -

получен лишь при постановке одного из упомянутых тестов.

Интерпретация результатов * Иммунологический диагноз при исследовании слюны может оыть основан: I) на обнаружении достоверных изменений титров лротиэошигеллезных ан-* титед, что выявляется анализом парных проб слюны в динамике; 2) на констатации так называемого диагностического титра при однократном анализе слюны.

При исследовании в динамике (парные пробы) диагноз не представляет затруднения, если регистрируют 4-кратные и более выраженные изменения титра антител к одному из антигенов. Однако могут быть и иные ситуации. Так, возможно нарастание титра антител не к одному, а к двум и даже к трем и более взятым в реакцию антигенам, В этом случае диагностическим считают максимальный сдвиг.

Пример 4,

> —    т— — —— — V™ _т._ —_ — т---—г —---т— т f — Т Титры антител к антигенам День ------------------------------------ Проба бо-    Щ    и    г    е    л    л слюны лез- ЗПКП ОШ -------*---------------

НИ Флекснера Зонне РИГА 0 А РИГА G А РИГА о ""а I 5 8 8 8 2 2 4 2 4 4 2 10 8 8 8 2 4 16 8 16 128

В данном случае четырехкратное изменение титра антител к шигеллам Флекснера значительно уступает 32-

- 16 ~

кратному нарастанию титра IgA- антител к шигеллам Зонне* Кроме того» произошел 4-кратный сдвиг титра антител, выявляемых в обычной РИГА с антигеном Зонне* Диагноз: дизентерия Зонне*

Когда же нарастание титра антител к двум антигенам и более выражено в равной мере, диагноз на основании иммунологических данных не правомерен без дополнительного исследования (анализ новой пробы слюны через 4-5 дней).

Пример 5*

	День бо лез ни	-----	г--—	\	Титры	т---т----- антител к		г-----Т----г — антигенам
Проба слюны		огтслгт nrtr					Ш и г	е л л
					Флекснера			Зонне
		рнга’	G	А	РНГА	G	А	РНГА	G	А
I	5	8	8	16	2	2	4	2	2	4
2	10	8	16	16	2	2	8	2	2	2
3	15	8	16	16	4	8	32	2	2	4

В первых двух пробах слюны достоверных сдвигов в уровнях антител нет, однако на 15-й день болезни зарегистрировано достоверное нарастание титров антител к шигеллам Флекснера. Диагноз: дизентерия Флексннра.

При диагностике на основе однократного анализа слюны необходимо иметь оведения о титре дротивошигеллезных антител у здоровых людей, не подвергавшихся риску заражения иш-геллами, живущих на данной территории и обследованных в

тот же период времени, что и больные (известно, что уровень антител здоровых варьирует в зависимости от конкретной эпидемиологической ситуации)• Диагностическим титром считают максимальный титр антител у здоровых людей, зарегистрированный не более чем у 5% обследованных лиц*

Пример б,

IgA-антитела к шигеллам Войне в титре 1:8 и выше выявлены в слюне здоровых с частотой 13,1+3,0%, в титре 1:16 - 2,6+1,8%, в титре 1:32 не выявлены* Диагностическим является титр 1:16, который у здоровых практически не обнаруживается (Р < 0,05)*

Полученные в настоящее время данные свидетельствуют, что испытание парных проб слюны в обычной РИГА документы** рует диагноз менее чем у 20% больных с бактериологически подтвержденной дизентерией и менее чем у 10% больных о нерасшифрованными ОКИ* В модифицированной РИГА эффективность иммунологической диагностики повышается* При суммарном учете результатов обычной и модифицированной РИГА диагноз совпадает примерно в 70% бактериологически подтвержденных случаев дизентерии. У больных, где прямые поиски возбудителя не дали результатов, испытание слюны в обыч<* ной и модифицированной РИГА дозволяет доставить диагноз у одной трети обследованных. Однократный анализ слюны лиц из очагов дизентерии Зонне и учет диагностического титра дает возможность установить инфицирование шигеллами в 10-20%, по данным обычной РИГА, а по результатам модифициро-

- 18 •*

ванной - у половины обследованных, где инфекция передавалась пищевым путем (высокая вероятность риска заражения), и у одной пятой - из контактно-бытовых очагов дизентерии Уонне (низкая вероятность риска заражения)*

ПРИЛОЖЕНИЯ

Определение рабочего разведения антисывороток к иммуноглобулинам, Для постановки модифицированной РИГА используют коммерческие моноспецифические антисыворотки к иммуноглобулинам человека. До начала опыта необходимо оттитровать антисыворотки на наличие в них антител к антигенам исследуемых микроорганизмов. Титры этих антител должны быть ниже рабочего разведения соответствующей антисыворотки не менее, чем в 4 раза. При значительном уровне указанных антител следует адсорбировать антисыворотки гомологичным антигеном* Для этого антисыворотку, подлежащую адсорбции, прогревают 20 мин* при 56°С и добавляют осадок эритроцитов, сенсибилизированных соответствующим антигеном из расчета 0,1 мл осадка на I мл антисыворотки (1:10). После тщательного перемешивания смесь инкубируют УО мин. яри У7°С, затем удаляют эритроциты центрифугированием. Рабочее разведение антисыворотки устанавливают опытным путем при титровании стандартного субстрата (слюна, молозиво, сыворотка крови), заведомо содержащего антитела к исследуемым антигенам. Для этого в указанных субстратах титруют антитела к изучаемым антигенам в обыч-

- 19 -

ной и модифицированной РИГА с использованием антисывороток к иммуноглобулинам в разных разведениях. Наибольшее разведение антисыворотки, давшее максимальный прирост титров антител, считают рабочим. Для ориентировочной оценки рабочего разведения антисывороток, используемых при постановке модифицированной РИГА, можно исходить из указанного на упаковке предельного разведения антисывороток для радиальной иммунодиффузии, которое обычно в IQ-20 раз ниже рабочего разведения, применяемого для постановки модифицированной РИГА. Например, сыворотки против IgA и igG с предельным разведением для иммунодиффузии 1:25 имеют рабочее разведение в модифицированной РИГА соответственно 1:200 и 1:500* Для выбора оптимальной дозы антисыворотки следует поставить опыт не с одним, а с двумя-тремя ее разведениями.

Обеспечение воспроизводимости метода. В о сдрои з во ди-мость результатов оОычной и модифицированной РИГА зависит от стандартности эритроцитарных диагностикумов и антиснт вороток к иммуноглобулинам. Поэтому каждую партию диагностикумов следует испытывать с одной и той же гомологичной иммунной кроличьей сывороткой (т.е. с сывороткой против ЭПКП ОШ, шигелл Зонне и Фдекснера). Для РИГА можно брать только такие серии диагностикума, которые дают не более двукратного колебания конечного титра антител со стандартной гомологичной антисывороткой» При длительном применен нии одной и той же серии диагностикума контроль о агглю-

- 20 -

тинирующей сывороткой необходимо ставить не реже одного раза в неделю.

При работе с новыми сериями антиглобулиновых сывороток необходимо проверять йх рабочее разведение. Антисыворотки в рабочем разведении, хранящиеся при 4°С, можно использовать в течение месяца. Контроль разведения антисывороток производить не реже одного раза в неделю.

Растворы, используемые яри постановке РИГА, модифицированной до типу теста Кумбса.

Раствор олсевера: глюкоза - 2,05 г; цитрат натрия -0,83 г; хлорид натрия - 0,42 г;растворить в 100 мл дистиллированной воды, pH довести до 6,4 добавлением 10% раствора Лимонной кислоты; стерилизовать 15 мин. при 0*5 атм.

Забуференный изотонический раствор pH 7,2-7,4: хлорид натрия - 43,5 г, фосфат натрия двуаамещенный - 5,67 г, фосфат калия одноэамещенный - 2,04 г;растворить в 5 л дистиллированной воды.

- Э -

Методические рекомендации составлены в Ленинградском ордена Трудового Красного Знамени институте эпидемиологии и микробиологии им.Паствра М3 РСФСР (Директор института - Т*В,Перадве)

УДК 576*651.**9:616*935 Составители: кандидат медицинских наук В.Н«Колесникова, кандидат медицинских наук Т,Я.Геннадьева₊ доктор медицинских наук, профессор Л»Б«Хазе но он.

АННОТАЦИЯ

В методических рекомендациях описан опособ иммунологической диагностики и эпидемиологического анализа дизентерии, в основу которого положено определение наличия и классового состава противошигеллезннх антител в слюне больных, переболевших дизентерией, и контактных лиц в реакции непрямой гемагглютинацин, модифицированной по типу аятиглобулиновой пробы Кумбса с применением моноспецифн-ческих антисывороток к иммуноглобулинам человека. Эффективность иммунологического исследования слюны и сыворотки крови практически одинакова* Описанный метод позволяет исключить взятие крови, что связано о нарушением целости кожного покрова и опасностью парентерального инфицирования*

Метод может быть использован в научно-исоледовательокиг институтах, а также практических лабораториях больниц ж санитарно-эпидемиологических станций, занимающихся иммунологической диагностикой дизентерии и ев эпидемиологичес

ким анализом

- 21 -

ЛИТЕРАТУРА

I* Беликова-Алдакова В.Д., Ьдюмель Н.Ф., Жарикова А.Д, и др. - Ж. Микробиол,,1972, № 3, с,46-51.

2.    Гольдерман С.Я., Чернохвостова Б.Б., Субботина Ю.Л.

и др. - Ж. Микробиол., 1977, $ I, с,26-26.

3.    Колесникова Е.Н., Геннадьева Т.Я., Хаэенсон Л.Б. -

Ж. Микробиол., 1978, № 5, с.20-25.

4.    Кузьмин С.Н., Белая JU»А•, Кульберг А.Я. и др. - Ж.

МикробиоЛ,, 1978, № 6, с,66-7J.

5* Луллу А.В., Геннадьева Т.Я., Хаэеноон Л.Б. - Тр.НИИЭМ им.Пастера, Л1968, т.ЗЗ, с.288-292.

6.    Солодовников Ю.П., Калашникова Т.К,_Г Субботина ЮЛ,,

Ьобкина С.В. - Ж, Микробиол,, 1971, Л I, O.I3-I9.

7.    Хазенсон Л.Б., Шодудько Г.С., Николаева Т.А,, Генвадь-

ева Т.Я, - Сб. Эпидемиология, диагностика и профилактика кишечных, респираторных и лрнродноочаговых инфекций. - Л., 1975, с.35-36.

8.    Хазенсон Л.Б., Кукайя Э.М*, Матвеев В.А, и др. - Лао.

дело, 1977, ft 9, O.507-5II.

- 4 -

Дизентерия часто протекает в виде легких, стертых, атипичных, и бессимптомных форм. Это затрудняет ее выявление и диффереицировку от других острых кишечных заболеваний (ОКИ)* Лабораторная диагностика данной инфекции основы-» вавтся прежде всего на бактериологическом исследовании. Однако оно в ряде случаев, особенно на поздних сроках заболевания, мало результативно.

Это побуждает к разработке других методов диагностики, в частности, к определению специфических антител в биологических жидкостях обследуемых лиц. Чаще всего с втой целью используют реакцию непрямой гемагглютинации (РИГА). Как правило, испытанию подвергают онворотку крови (1,5,6). В то же время наличие дротивошигеллезных ан-тител документировано в экстрактах фекалий, смывах со стенок толстой кишки и слюна (2_?3,4_s7)_e Из перечисленных биологических жидкостей наиболее удоона для иммунологического анализа слюна. Это тем более оправдано, что по специфичности и частоте регистрации антительного сдвига слюна на уступает сыворотке крови (3). Установлено, что титры дротивошигеллезных антител в олюне достоверно отличаются от уровня здоровых с 4-б-го дней болезни. Пик обычно регистрируют на 2-й неделе, затем титры постепенно снижаются, но в ряде случаев сохраняются у переболевших в течение нескольких месяцев* Максимального уровня в слюне достигают антитела класса ig А. Уровень и частота в выявления ^xs^G - антител ниже, а ^т£^м - антитела встреча*** ются очень редко*

ются очень редко.

Простота взятия и обработки слюны, совпадающие результаты ее иммунологического исследования на против оишгеллез-ные антитела с испытанием в обычной и модифицированной РИГА сыворотки крови, делает упомянутый внешний секрет удобным материалом для диагностики и расшифровки ОКИ неустановленной природы. Иммунологическое исследование слюны на антитела к шигеллам целесообразно проводить у больных острой клинической дизентерией и больных прочими ОКИ, а также у контактных из очагов дизентерии в динамике о интервалом 6-7 дней.

МАТЕРИАЛЫ И АППАРАТУРА

1.    Микротитратор Такачи.

2.    Рефрижераторная центрифуга ЦДР-1.

3.    Центрифуга ЦЛС-2.

4.    Подвески к центрифуге ЦЛС-2.

5.    Насос водоструйный или электроотсасыватель хирургический переносной.

6.    Термостат.

7.    Замораживающий холодильник на -20°С или бытовой холодильник с морозильной камерой.

8.    Пробирки стеклянные емкостью 20 мл и центрифужные емкостью 10 мл.

9.    Пробирки из синтетических материалов емкостью 5 и 10 мл к ротору углового типа скоростной насадки

центрифуга ЦДР-I.

10.    Пипетки пастеровские,

11.    Пипетки мерные емкостью I мл, 2 мл и 10 мл.

12.    Забуференный изотонический раствор хлорида натрия pH 7,2-7,4.

13.    Человеческие эритроциты 0 группы или бараньи эритроциты.

14.    Раствор Олсевера или 2,5% раствор лимоннокислого натрия.

16, Антигены шигеллезные лиофилизированные.

16.    Моноспецифические антисыворотки к иммуноглобулинам А и а человека.

17,    Стандартные пластины полистироловые с лунками.

МЕТОДИКА

Взятие и обработка слюны. Слюну собирают без стимуляции из ротовой полости в стерильные стеклянные пробирки в количестве 3-5 мл (натощак или спустя 1,5-2 ч. после еды). Пробы после взятия центрифугируют I ч. при 4°С и 6000 об/мин. (При центрифугировании слюны следует соблюдать указанный температурный режим, так как обработка в обычных условиях приводит к потере антителыюй активности слюны. Описанную процедуру можно заменить замораживанием слюны после взятия; перед анализом пробу размораживают при комнатной температуре - при этом осадок отделяется спонтанно, а цадосадочную жидкость испытывают на

- 7 -

антитела). Надосадочную жидкость отделяют ж хранят при -20°С, либо в морозильной камере бытового холодильника. Перед опытом пробы размораживают при комнатной температуре и прогревают 30 мин, при 56°С.

При транспортировке пробирки оо слюной помещают в термос со льдом.

Сенсибилизация эритроцитов, В качестве антигенов используют свежеприготовленные эритроцитарные диагностику-мы. Можно использовать также коммерческие эритроцитарные диагностикумы производства Московского и Ленинградского НИШС, Для сенсибилизации эритроцитов применяют неочищенные или химические (очищенные) антигены, В качестве неочищенных антигенов используют надосадочную жидкость кипяченных в течение 2 ч. взвесей (40-50 млрд, бактерий в I мл) соответствующих шигелл в изотоническом растворе (Для сенсибилизации эритроцитов надосадочную жидкость разводят 1:5), Химические антигены получают до методу Воот-фаля воднофеноловым способом. Для получения рабочего разведения антигена 100-200 мкг препарата разводят в 10 мл изотонического раствора, полученную смесь кипятят 2 ч* на водяной бане.

Для сенсибилизации используют бараньи или человеческие эритроциты 0 группы. Кровь берут в стерильную пробирку, содержащую равный объем раствора Олсевера или 2,5)1 раствор цитрата натрия. В этой смеси эритроциты сохраняют жизнеспособность при 4°С в течение 2-3 вед. Эритроцй-

- 8 -

ты перед сенсибилизацией трижды отмывают десятикратным объемом изотонического раствора центрифугирование 5 мин, при 1000-1500 об/мин. Из отмытых эритроцитов готовят 10# взвесь* смешивают с антигенами в рабочем разведении в соотношении 1:1, инкубируют 45 мин. при 3?°С, после чего сенсибилизированные эритроциты трижды отмывают изотоническим раствором от избытка антигена. Затем готовят 10# взвесь, которая может храниться 2 нед. яри 4°С.

Бели диагностикум готовят из бараньих эритроцитов, то слюну необходимо ими предварительно адсорбировать. Для этого прогревают слюну на водяной бане 20 мин. яри 56°С, добавляют осадок трижды отмытых изотоническим раствором нативных бараньих эритроцитов (ОД мл осадка эритроцитов на I мл слюны), тщательно перемешивают и инкубируют 30 мин. при 37°0. После этоно смесь центрифугируют, над-осадочную жидкость отделяют и испытывают на антитела.

Обычно слюну исследуют по крайней мере с тремя антигенами, полученными из шигелл Зонне, Флексннра и ЭШШ ОШ.

Постановка обычной РИГА. Эритроциты, сенсибилизированные тем или иным антигеном, агглютинируются в солевой среде, если в испытуемой биологической жидкости содержатся гомологичяна антитела. Образующийся комплекс антиген-антитело выпадает в осадок. Испытуемые пробы слюны разводят о. коэффициентом 2 в изотоническом растворе в и -образных лунках пластин прибора Такачи в объеме 0,025 мл. В первую лунку помещают цельную слюну. Для постановки

опыта с каждым антигеном необходимо приготовить не менее двух одинаковых рядов разведений слюны, так как после учета результатов обычной РИГА в обоих рядах, один из них обрабатывают антисывороткой к i_gA , второй - к igo (антисыворотку к igM при испытании слюны использовать нецелесообразно из-за крайне редкого обнаружения т_ем -антител). При постановке опыта с двумя и более антигенами для экономии времени и получения воспроизводимых результатов испытуемую слюну разводят с коэффициентом 2 в лунках больших полистироловых пластин в объеме 0,2-0,4мл. Отсюда капельной пипеткой из прибора Такачи переносят жидкость в микропластины в объеме 0,025 мл (начиная о максимального разведения). Затем в каждую лунку добавляют равный ооъем 1,5% суспензии эритроцитарных диагности-кумов. Полученную смесь инкуоируют 45 мин. при Э7°С* после чего учитывают результаты.

Каждый опыт сопровождали следующими контролами:

1)    контроль несенсибиливированных эритроцитов - 0,025мл 1,5% суспензии несенсибилизированных эритроцитов + 0,025мл изотонического раствора;

2)    контроль сенсибилизированных эритроцитов - 0,025мл 1,5% суспензий сенсибилизированных эритроцитов + 0,025мл изотонического раствора;

3)    контроль на отсутствие спонтанной агглютинации не-сенсибилизированных эритроцитов исследуемым материалом: 0,025 мл исходного разведения слюны +■ 0,025 мл 1,5% сус-

In и

пензии несенсибилиаированных эритроцитов. При наличии гем-агглютинации в одном из контролей результаты опыта не учитывались.

Постановка модифицированной РИГА. Модифицированная РИГА ставится на основе теста Кумбса. При этом комплеко антиген (эритроцитарный диагностикум) - антитело, не выявленный визуально в обычной РИГА, обрабатывают сывороткой против антительного компонента комплекса, для этого используют антисыворотки к тяжелым цепям отдельных иммуноглобулинов (М, g , А ) . В случае, если не эритроцитарном диагностикуме адсорбировались малые количества гомологичных антител, не давших видимой агглютинации, обработка указанными антисыворотками способствует выявлению этих антител (укрудление комплекса антиген-антитело и вы-* падение его в осадок). В результате чувствительность РИГА повышается. Одновременно определяют иммунологический класс антител, для чего учитывают наличие гемагглю-тинации после добавления антисывороток в разведениях, где обычная РИГА дала отрицательный результаты. Увеличение титров в 4 раза и оолее после добавления антисывороток к иммуноглобулинам а , М и А дает требуемую информацию.

Из лунок, где не отмечено агглютинации эритроцитарного диагностикума, удаляют надосадочную жидкость и к осадку эритроцитов приливают десятикратный объем изотонического раствора (до объема 3/4 лунди). Для этого используют дастеровские пипетки, концы которых тонко оттянуты в