ГОСКОМИССИЯ по ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬБЫ С ВРЕДИТЕЛЯМИ, БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИЙ И СОРНЯКАМИ ПРИ МИНСЕЛЬХОЗЕ СССР
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ
Часть XV-я
Москва — 1984 г.
107
'ТШЕРВДАЮ"
Заместитель Главного Государственного санитарного врач$ СССР А,И .ЗАЙЧЕНКО п24 "авгуота 1983 г,
* 2836-83
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРШШШ)
КН-77 В ВОДЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
I. Краткая характеристика препарата
Активное вещество КН-77 - 4-мет11л-7-окси-8-метилен~бис-(jj -хлорэтил)-аминокумарин.
КН-77 представляет собой порошок светло-желтого цвета. Растворим в хлороформе, ацетоне. Выпускается в виде 80^-99^ порошка. ЦДК в воде не установлена.
2, Методика определения КН-77
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении КН-77 из воды хлороформом,отгонке растворителя и хроматографировании в тонком слое сорбента.
В качестве сорбента используют закрепленный гипсом силикагель КСК либо пластинки " S",
Проявление хроматограммы можно осуществить диазоитированной сульфаниловой кислотой (сорбент-силикагель КСК, красные пятна) либо смесью 1% водного раствора железосинеродистого калия и 1% спиртового раствора хлорного железа в соотношении 1:1 (пластин-
IC8
Количественное определение КН-77 производится путем сравнения интенсивности окраски и размера пятен пробы и стандартных растворов*
2.1.2. Метрологическая характеристика метода
Диапазон определяемых концентраций 1-20 мкг. Нижний предел обнаружения 0,005 мг/л.
Размах варьирования 75-100$
Среднее значение определения - 90$
Стандартное отклонение -9,2$
Относительное стандартное отклонение 10$
2.1.3. Избирательность метода
Определению не мешают наполнители технического препарата.
Хлороформ,хч., ГОСТ 20015-74
Гексан,хч.,ТУ 6-09-3375-78
Спирт метиловый,хч.,ГОСТ 6995-77
Этилацетат,хч.,ГОСТ 2230-76
Спирт этиловый,96%,ТУ 6-09-I7I0-77
Эфир диэтиловый (для наркоза).фармакопея СССР
Натрий сернокислый безводный,чда..ГОСТ 4166-76
Вата гигроскопическая
Железо хлорное,ч.,ТУ 6-09-01-828-76,1$ раствор в этиловом спирте Калий железосинеродистый,хч,,Г0СТ 4206-75,1$ раствор в дистиллированной воде
Проявляющий реактив ЖЕ; Смешивают в соотношении 1:1 1$ водный раствор железосинеродистого калия и 1$ слиртовый раствор хлорного железа. Раствор устойчив в течение 5-6 часов.
Калий гидроокись,хч.,ГОСТ 6-01 301-74,10$ водный раствор Натрий гидроокись,хч.,Г0СТ 4328-77, 15$ водный раствор Сульфаниловая кислота,чда.,ГОСТ 5821-7У Натрий нитрит.ГОСТ 4197-74, 10$ водный раствор Соляная дислота,хч.>ГОСТ 3118-77,разбавленная дистиллированной водой в соотношении 1:1
109
Приготовление диазотированной сульфаниловой кислоты. 5 г сульфаниловой кислоты растворяют в 25 мл 10$ водного раствора гидроокиси калия. Раствор охлаждают в течение 30 мин в холодильнике и смешивают с 20 мл 10$ водного раствора нитрита натрия. Полученный раствор постепенно, по каплям, при перемешивании прибавляют к предварительно охлажденной в холодильнике, разбавленной дистиллированной водой,соляной кислоте (смешивают 10 мл, конц. соляной кислоты с 5 мл дистиллированной воды). Температура реакционной смеси не должны быть выше 8°0. Образующуюся диазони-евую соль отсасывают на воронке Бюхнера, промывают последовательно 10-15 мл ледяной воды, этилового спирта, диэтилового эфира и высушивают при комнатной температуре в затемненном месте. Хранят соль в холодильнике, в банке из темного стекла.
Проявляющий реактив №2* Готовят растворением 1,25 г диазотированной сульфаниловой кислоты в 15$ водном растворе гидроокиси натрия в мерной колбе на 100 мл. Применяют свежеприготовленный раствор.
Дистиллированная вода, ГОСТ 7602-72
Силикагель КСК, ГОСТ 3956-76, раздробленный и просеянный через сито 100 меш
Кальций сернокислый (СаЛ O^ZYL^O), ГОСТ 3210-77,высушенный в течение 6 часов при температуре 160°С и просеянный Пластинки "Силуфол" (ЧССР)
Стандартный раствор КП-77 в ацетоне с содержанием 50 мкг/мл. Готовят растворением 5 мг хч. препарата в ацетоне в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике. Годен к употреблению в течение 2-х месяцев,
2.3. Посуда и приборы
Баня водяная,ТУ 64-1-2850-76
Воронки химические,диаметр 6 см,ГОСТ 8613-75
Воронка Бюхнера,диаметр 13 см,ГОСТ 9147-73
Воронки Делительные,емк.500 мл,ГОСТ 10054-75
Вакуумный водоструйный насос,ГОСТ 10396-75
Испаритель вакуумный ротационный,ИР-1М,ТУ 25-П-917-74
Камера для опрыскивания,ТУ II-4I3-70
Катлера душ хроматографирования размером 150 х 200 мм
Колба Бунзена емк.,500 мл,ГОСТ 6514-75
по
Колбы мерные емк. 50, 100 ил, ГОСТ 1770-74 Колбы н/ш емк. 250 мл, I0U мд, ГОСТ 10394-72 Колбы круглодонные н/ш емк. 100 мл, ГОСТ 10394-72 Микропипетки емк. 0,1, 0,2 мл, ГОСТ 1770-74 Пластинки стеклянные размером 9 х 12 см Пипетки емк. I, 5, 10 мл,Г0СТ 1770-74
Цилиндры градуированные емк. 25, 50, 100 мл, I л, ГОСТ 1770-74 Часовое стекло
Чашка фарфоровая, ГОСТ 9147-73
Ступка фарфоровая с пестиком
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-74
Сито капроновое (размер отверстий 0,0149 им (100 меы)
Эксикатор (для хранения пластинок), ГОСТ 6371-73
2.4, Подготовка в определению
2.4.1. Приготовление шгаехинол
14 г просеянного силикагеля смешивают в ступке с I г сернокислого кальция и суспендируют смесь в ступке в 40 мл дистиллированной вода. Периодически помешивая, полученную суспензию равномерно наносят на 7-8 тщательно вымытых стеклянных пластинок размером 9 х 12 см. Сушат пластинки при комнатной температуре в течение 17-18 часов, хранят в эксикаторе над слоем*iu}'А и (гранулированный силикагель КСК, 100 г).
2.4.2. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Заместителем Главного Государственного санитарного врача СССР 21.08,1979 г. sa #2051-79.
2.5. Проведение определения
2,5*1. Экстракция
В делительную воронку емкостью 500 мл помещают 200 мл исследуемой воды, подкисляют до pH 3-4 разбавленной соляной кисло** той, экстрадируют КН^Ш^иями хлороформа по 25 мл в течение 2-3 мин каждый раз. После четкого разделения фаз экстракты
m
объединяют в другой делительной воронке, промывают 25 мл дистиллированной воды.
Очищенный экстракт фильтруют через слой безводного сернокислого натрия (7-6 г) в химической воронке в колбу или фарфоровую чашку.
Растворитель испаряют на водяной бане до объема I мл. Остаток растворителя удаляют током сухого воздуха с помощью резиновой груши. Сухой остаток растворяют в I мл ацетона.
2.5.2. Хроматографирование
Полученный концентрат при помощи стеклянного калЙйяра коли-чественно> наносят на хроматографическую плас
тинку, покрытую тонким слоем сорбента (силикагель КСК, пластинки "Силуфол")* Рядом с пробой наносят по 0,02, 0,06, 0,2 мл стандартного раствора, что соответствует содержанию 1,0, 3,0, 10,0 мкт КН-77 в пятне. После нанесения пробы и стандартного раствора пластинку 15-20 мин выдерживают на воздухе. Затем помещают в хроматографическую камеру, куда за 10 мин до хроматографирования наливают подвижный растворитель.
При использовании пластинок и " применяют смесь раст
ворителей, гексан-этилацетат в соотношении 1:1 (25 мл), при использовании силикагеля КСК в качестве сорбента применяют смесь растворителей хлороформ-метиловый спирт в соотношении 25:0,1 (25,1 мл).
После подъема фронта растворителя на высоту 10 см от линии старта хроматографирование прекращают. Пластинку помещают в камеру для опрыскивания и после испарения растворителя (выдерживают 15-20 мин) обрабатывают одним из проявляющих реактивов в зависимости от применяемого сорбента. Расход проявляющего реактива на пластинку " it ■ и составляет 5-6 мл, на пластинку с си
ликагелем КСК - 8-10 мл.
На пластинке " Situjot. » КН-77 проявляется в виде синего пятна 0,42-0,45, на силикагеле КСК красного пятна (че
рез 3 мин после обработки слоя), 0,50-0,55.
2.6. Обработка результатов анализа
Количество препарата в пробе определяют сравнением интенсивности окраски и площади пятен пробы и стандартного раствора.
112
Измерение площади производится с помощью миллиметровой бумаги. Прямолинейная зависимость между площадью пятна и содержанием КН-77 в пятне соблкщается в интервале I-I0 мкг. При более высоком содержании препарата в пробе воды хроматографируют аликвотную часть концентрата.
Содержание КН-77 в анализируемой пробе в мг/л вычисляют по формуле
Р . 5,
А - количество КН-77 в пятне стандарта, близком по окраске к пятну пробы,мкг;
- площадь пятна препарата стандарта,близкого по окраске к пятну пробы, мм,
площадь пятна препарата пробы, мм^;
Р - объем анализируемой пробы, мл;
2.7. Требования техники безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе о органическими растворителями и токсическими веществами.
2.8. Методика разработана А.М.Шмигидиной, Л.Е.Запорожец,
Н.В.Суперсон, ВНИИ гигиены и токсикологии пестицидов, полимерных и пластических масс,г.Киев
