МИКОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА И КОРМОВ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ПРОВЕДЕНИЮ МИКОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА И КОРМОВ в ветеринарно-бактериологических лабораториях при диагностике микозов и микотоксикозов сельскохозяйственных животных

(Утверждены Государственной инспекцией по ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 24 июля 1959 года)

ИЗДАТЕЛЬСТВО МИНИСТЕРСТВА СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА СССР МОСКВА - 1959

Для выделения грибов Кандида в чистую культуру и дифференциации их от других дрожжевидных грибов, из присланного материала производят посевы на агар Литмана и глю-козный агар Сабуро и культивируют их при температуре 37°.

Из выделенной культуры на агаре Литмана или агаре Сабуро пересевают:

на жидкую среду Сабуро и культивируют при температуре 37°;

на морковно-картофельный агар с 2%-ной желчью или на кукурузный агар и культивируют при комнатной температуре;

на гипсовые блоки для выявления сумок (дифференциация от истинных дрожжей).

Для дифференциации видов используется также их биохимическая активность. С этой целью производят посев на цветной ряд, содержащий 1 %' глюкозы, мальтозы, сахарозы, лактозы, маннита. Названные сахара и спирты готовят обычным способом с реактивом Андредэ.

Морфология патогенных грибов Кандида в патологическом материале. Кандида альбиканс и другие виды Кандида в свежих препаратах имеют форму круглых, овальных, почкующихся клеток 2,5—6 микрон в диаметре, иногда в них обнаруживается мицелий с группами круглых мелких клеток — бластоспор.

В окрашенных препаратах обнаруживают грам-положитель-ные овальные почкующиеся, дрожжевидные клетки, мицелий и бластоспоры.

Дрожжевидные почкующиеся клетки обнаруживаются в большом количестве.

Культуральные свойства. На агаре Литмана колонии гриба Кандида альбиканс в отличие от других видов рода Кандида конусовидные, выпуклые, блестящие, вначале гладкие, позже шероховатые, иногда они покрываются радиально расположенными бороздками. Окраска колоний — от темно-синей до пурпурной. Колонии других видов Кандида — плоские, бледносиневатые с более темным центром.

На агаре Сабуро колонии гладкие, иногда с радиальными лучами. У некоторых штаммов колонии морщинистые. Цвет колоний кремовый.

Колонии состоят из овальных, круглых, почкующихся и не-почкуюшихся дрожжевидных клеток от 1 до 6 микрон в диаметре. Ближе к субстрату и в ответвлениях колоний в глубине среды обнаруживается псевдомицелий, состоящий из удлиненных клеток с гроздьями или с группами круглых, мелких клеток — бластоспор, ю

На морковно-картофельном агаре с желчью через 18—24 часа Кандида альбиканс образует толстостенные, круглые клетки — хламидоспоры, отличающие его от других видов Кандида.

На жидкой среде Сабуро — рост Кандида альбиканс — глубинный.

(Дифференциация видов Кандида по культуральным свойствам — см. приложение 1).

На гипсовых блоках грибы рода Кандида сумок не образуют.

Биохимические свойства. Грибы Кандида обладают биохимическими свойствами, разлагая некоторые из сахаров. Для дифференциации используется их способность сбраживать глюкозу, мальтозу, сахарозу, редко лактозу (таблица 1).

Таблица 1

Сахара Культура Глюкоза Мальтоза Сахароза Лактоза Candida albicans К+Г+ К4-Г+ К fr— к-г— То же tropicalis К+Г+ к+г+ К+Г+ к—г— э pseudotropicalis К+ГЧ- K-r- К+Г+ К+Г+ * Krusei К+Г+ К—г— К—Г— к-г- » paranrusei K4 Г± K-r— К-Г- к-г— » stellatoidea K + r-f K+r-f К + Г+ к—г— » guillermondi К-Г— К—Г— к-г— к—г—

Патогенность. Из лабораторных животных наиболее чувствительными к искусственному заражению Кандида альбиканс являются мыши (20-дневные) и кролики. Мышам внутри-брюшинно вводят густую (300000—500000 клеток в 1мл физиологического раствора) солевую суспензию дрожжевидных клеток гриба Кандида альбиканс, приготовленную из культуры в дозе 0,5 мл; кроликам — весом до 2 кг эту же суспензию в дозе 1 мл вводят внутривенно.

Свежевыделенная 48-часовая патогенная культура гриба вызывает гибель зараженных мышей в течение 2—7 дней, иногда смерть наступает на 9—10-й день после заражения. Единственными признаками заболевания могут быть: вялость, атаксия, лимфоцитопения. При вскрытии павших животных обнаруживаются мелкие белые узелки в печени, селезенке, легких, почках.

Вирулентные штаммы Кандида вызывают гиоель кроликов в период от 3 до 10 дней. В этот период могут наблюдаться депрессия, повышение температуры, исхудание, иногда паралич. На вскрытии обнаруживают множественные серо-белые узелки в корковом слое почек.

Если зараженные кролики не гибнут за 10 дней, их убивают и при обнаружении поражения почек в виде мелких узелков в корковом слое штамм гриба определяют как слабовирулентный. Слабовирулентные штаммы могут вызывать гибель кроликов и мышей на 21—30-й день после заражения.

В мазках, приготовленных из пораженных очагов павши.» или убитых животных, обнаруживают дрожжевилныс клетки, иногда и псевдомицелий.

Окончательный диагноз. Учитывая сапрофитный образ жизни грибов этой группы, окончательный диагноз устанавливают на основе эпизоотологических данных, клинических исследований, патологоанатомической картины вскрытия и полного лабораторного исследования. Исключение инфекционных заболеваний является обязательным.

При оценке результатов лабораторного исследования патологического материала необходимо учитывать место обнаружения гриба и количество обнаруженных дрожжевидных клеток при микроскопическом исследовании. Обнаружение в органах или тканях большого количества элементов гриба имеет решающее значение для лабораторного диагноза. Обнаружение Кандида в крови, моче и во всех закрытых очагах независимо от количества клеток является решающим фактором при постановке диагноза. При обнаружении Кандида в легких диагноз может быть поставлен только после исключения других легочных заболеваний; в данном случае решающее значение имеет гистологическое исследование.

Если результаты анализа дают основание подозревать кан-дидамикоз, то биологическое исследование проводят повторно.

Срок исследования — до 10 дней.

III. Эпизоотический лимфангоит

15. Возбудитель — Crvptococcus (Hystoplasma) farci-minosus.

В лаборатории диагноз на эпизоотический лимфангоит ставится на основании положительных результатов микроскопического исследования гнойного эксудата из абсцессов, язв.

Исследование материала производят в неокрашенных препаратах — в капле 50%-ного раствора глицерина (методом раздавленной капли между предметным и покровным стеклами).

Морфология гриба Cryptococcus f а т с i m i* nosus в патологическом материале. В гнойном эксудате, в гранулематозных поражениях, возбудитель болезни гриб Криитококкус фарциминозус обнаруживается в дрожжевидной и реже в мицелиальной форме. Дрожжевидные клетки (криптококки) овальные, яйцевидные с двуконтурной оболочкой находятся в лейкоцитах и обнаруживаются свободно лежащими. Размеры 3—4,5 микрона длины и 2,4—3,5 микрона ширины.

Мицелий слабо разветвлен, септированный, 2,1—4,2 микрона ширины.

Срок исследования—одни сутки.

IV. Аспергиллез

16. Возбудитель аспергиллеза — грибы рода Aspergillus. Основной вид Aspergillus fumigatus редко Aspergillus flavus, Aspergillus nigei.

Заболевание наблюдается у различных видов птиц: домаш них, диких, живущих в неволе, и редко у млекопитающих.

Клинически аспергиллез птицы характеризуется как острый или хронический микоз, часто протекающий в виде эпизоотических вспышек. Поражаются главным образом органы дыхания: легкие, трахея, воздухоносные мешки. Чаще болеет молодая птица.

Аспергиллез млекопитающих заболевание редкое и характеризуется развитием узелкового процесса в легких.

Основным источником микоинфекции в хозяйстве являются: зараженные инкубаторы, гнезда, почва, корма, яйца.

В большинстве случаев аспергиллез птиц (и млекопитающих) диагиосци-руется после ее гибели «ли убоя.

Патологоанатомические данные при хроническом аспергиллезе могут оказать существенную помощь в постановке диагноза на аспергиллез в хозяйстве.

Патологоанатомнческий диагноз. Острый аспергиллез птицы характеризуется эксудативной пневмонией; отечностью легочной ткани, иногда на поверхности и на разрезе обнаруживаются узелки сероватого цвета, в центре узелков — некроз. В воздухоносных путях — гнойно-катаральный эксудат.

Хронический аспергиллез птицы характеризуется образованием узелкового процесса. Гранулематозные образования чаше плотные на ощупь, на разрезе состоят из концентрических наслоений соединительной ткани и казеозной массы. В просветах бронхов, трахее, воздухоносных мешках обнаруживается развитие гриба — мицелия, иногда и органов спороношения, окрашенных в зависимости от вида возбудителя в зеленый различных оттенков или черный цвет.

При появлении заболевания и гибели птицы с клиникой и данными патологоанатомического вскрытия, подозрительными на аспергиллез, для микологического исследования в лабораторию направляют трупы птиц.

Микроскопия. При получении лабораторией трупа производят вскрытие его, микроскопическое исследование и высевы

из подозрительных гранулематозных или воспалительных оча гов для выделения возбудителя в чистую культуру.

Свежие неокрашенные препараты из эксудата, гранулематозных очагов, предварительно обработанных в капле 10%-ного раствора едкого натрия или в лактофеноле, исследуют под покровным стеклом. В препаратах обнаруживают многочисленные септированные гифы мицелия, иногда и органы спороношения.

Для окраски препаратов из пораженных очагов используют лактофуксин или хлопчатобумажную синь. Гранулематозную ткань, предварительно расщепленную, гной или соскоб помещают на предметное стекло, покрывают покровным стеклом и под него подводят несколько капель красителя. Через 3—5 минут иглой осторожно придавливают покровное стекло и рассматривают препарат при среднем увеличении микроскопа.

При окраске лактофуксином фон препарата розовый, мицелий гриба бледно-голубой. Хлопчатобумажный краситель окрашивает мицелий в синий цвет.

Лактофуксин готовят следующим образом: 0,1 г кислого фуксина растворяют в 100 мл молочной кислоты. Окраска длится 3—5 минут. Хлопчатобумажная синь представляет собой 1%-ный водный или молочнокислый раствор. Окрашивание длится 5 секунд.

Культивирование. Посевы производят на агар Чапека или агар Сабуро в пробирках. При наличии гранулематозных очагов посевы производят в бактериологические чашки. Небольшие кусочки пораженной ткани обжигают над пламенем горелки, из середины вырезают стерильными ножницами кусочки ткани, которые и раскладывают на поверхности агаровой питательной среды. Культивируют при температуре 37°.

Культуральные свойства. Колонии гриба Аспер-гиллюс фумигатус появляются на 2—3-й день. На агаре Чапека они бархатистые с выраженным воздушным мицелием, голубоватые, зеленые, с возрастом темнеющие. Конидиеносцы густо скученные, с перегородками или без них, на верхушке с бутыльча-тым вздутием до 20—30 микрон, в диаметре, в верхней части несущие одноярусные конидии, расположенные параллельно оси конидиеносца. Конидии в массе темно-зеленые, шаровидные, 2,5—3 микрон в диаметре. Цепочки конидий склеены в колонки.

Патологоанатомические данные, наличие типичных колоний в культуре и характерная микроскопическая картина в препаратах позволяют правильно поставить диагноз на аспергиллез.

Срок исследования до 7 дней.

И

V. Заболевания, вызываемые патогенными актиномицетами

17.    Резервуаром актиномицетов как патогенных, так и непатогенных являются: почва, растения, растительные остатки. Патогенные актиномицеты являются обитателями ротовой полости и желудочно-кишечного тракта здоровых животных.

В патогенезе заболевания имеют значение механические повреждения — ссадины, уколы.

Для лабораторного диагноза направляют:

экстирпированные пораженные лимфоузлы в 30%-ном водном растворе глицерина;

гной из абсцессов, стерильно взятый в пробирку;

для гистологического исследования — пораженные органы и ткани или части их в 10%-ном растворе формалина.

Материал для исследования должен быть свежий и по возможности получен асептическим путем.

Наличие патогенных актиномицетов в тканях и органах животных обнаруживают наблюдением в светлом поле обычного микроскопа. Материал из содержимого узла или абсцессов просматривают в капле физраствора или 50%-ном растворе глицерина. В случае надобности, если в содержимом абсцесса имеются твердые серовато-белые с зеленоватым оттенком зернышки, различимые невооруженным глазом (зерна эти представляют собой так называемые друзы), прибегают к мацерации и просветлению патологического материала 10%-ным раствором едкого натрия или калия и рассматривают в раздавленной капле. Если друзы находятся в состоянии распада, необходимо материал после обработки щелочью центрифугировать и исследовать полученный осадок.

Для дифференциации патогенных актиномицетов в тканях препарата необходимо окрашивать по Граму.

АКТИНОМИКОЗ

18.    Возбудитель — лучистый грибок Actinomyces bovis (анаэроб). Выделяемые из актиномикозных поражений другие микроорганизмы следует рассматривать как сопутствующие.

Лабораторный диагноз на актиномикоз ставится на основании результатов микроскопического исследования нативного-материала (гноя), окрашенного по Граму.

При отрицательном результате микроскопического исследования прибегают к выделению грибка Актиномицес бовис ш культуру.

Для выделения в культуру материал засевают на глюкозно-кровяной агар для анаэробного культивирования при температуре 37°. Для лучшего роста к среде добавляют 5—10% СОг.

В сомнительных случаях производят гистологическое исследование.

Морфология грибка Actinomyces bovis в патологическом материале. В актиномикозном гное друзы грибка Актиномицес бовис бывают часто в виде мелких желтоватых или сероватых зернышек, окрашивающихся по Граму положительно. При малом увеличении микроскопа обнаруживаются темно-синие гифы мицелия и розовые колбовидные вздутия и палочковидные элементы. Друзы большие.

Культуральные свойства. Рост грибка Актиномицес бовис появляется в период от 15 до 20 дней, иногда и позже в виде небольших белых или желтоватых колоний в толще агара.

Микроскопия. Клетки в виде изогнутых палочек, окрашивающихся положительно по Граму. В молодых культурах грибок имеет вид тонких гиф мицелия.

В субкультурах при культивировании Актиномицес бовис в аэробных условиях появляется аэробный вариант.

Обнаружение в мазках грибка в виде друз, окрашивающихся по Граму положительно, может служить основанием для окончательного ответа.

При отрицательном результате микроскопического исследования патологического материала окончательный ответ о результатах дают после полного микологического исследования.

Срок микроскопического исследования — одни сутки.

Срок микологического исследования — до 15—20 дней.

ПСЕВДОАКТИНОМИКОЗ (АКТИНОБАЦИЛЛЕЗ)

19. Возбудитель: лучистый грибок Proactino-myces lignieresi (Act i noba ci 1 lu s lignieresi).

Псевдоактиномикоз, или актинобациллез,—-хроничесхое заболевание сельскохозяйственных животных, клинически проявляющееся развитием одиночных «ли множественных абсцессов и опухолей. Поражаются кожа губ, морды, шеи, язык, подчелюстные, заглоточные, подкожные и другие лимфатические узлы. Могут поражаться и внутренние органы; легкие, печень, почки, селе зевка, мозг, вымя и желудочно-кишечный тракт. Болеют крупный рогатый скот и овцы.

Материал на актинобациллез исследуют путем:

просмотра мазков, неокрашенных и окрашенных по Граму, под микроскопом;

посевов на питательные среды для выделения грибка в чистую культуру.

Посевы производят на сывороточный, кровяной или мозговой агар и культивируют при температуре 37°.

Морфология Р го а с t i n o'nt у ces lignieresi в патологическом материале. В мазках из гноя обнаруживаются маленькие серо-желтые друзы, окрашивающиеся по Граму отрицательно. Друзы в 2—3 раза меньше друз грибка Актиномицес бовис. Иногда концы колбовидных вздутий удерживают окраску по Граму и могут ошибочно приниматься за грам-положительные микроорганизмы. При рассмотрении гноя под лупой друзы имеют вид тонких беловатых хлопьев.

При окраске по Гимза гриб имеет вид палочек или коккоба-цилл до 0,5 микрона длины, расположенных одиночно, парами, в цепочку и нитчатые формы внутри друз.

В патологическом материале Актиномицес бовис и Актино-бациллес лигниерези могут обнаруживаться одновременно.

Культуральные свойства. На косом сывороточном агаре рост появляется через 24 часа. Колонии круглые, гладкие, блестящие, бесцветные, опалесцирующие при проходящем свейте. Колонии состоят из коротких неподвижных грам-отрицатель-ных палочек. На кровяном агаре гемолиза нет. Молоко не изменяется. Лакмусовое молоко изменяется слабо. Желатину не разжижает.

Биохимические свойства. Для дифференциации грибка используется его способность сбраживать с образованием кислоты декстрозу, лактозу, сахарозу, ксилозу и левулезу. На средах с глюкозой и глицерином образование кислоты не постоянно.

Один просмотр мазков не может служить основанием для окончательного ответа даже при наличии друз, сходных с друзами Проактиномицес лигниерези.

Окончательное заключение дается после полного микологического исследования.

Срок исследования до 8 дней.

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ КОРМОВ ПРИ ДИАГНОСТИКЕ МИКОТОКСИКОЗОВ

20. Грибами, вызывающими микотоксикозы сельскохозяйственных животных, могут быть:

а) токсические грибы, поражающие корма как мертвый субстрат и являющиеся обычными сапрофитами; развиваются они на различных кормах, имеющих при заготовке или хранении повышенную влажность.

Поражаются грубые корма, зернофураж и продукты его переработки.

Из этой группы токсических грибов известны:

Стахиботрис альтернанс (Stachybotris alternans);

Дендродохиум токсикум (Dendrodochium toxicum);

Фузариум споротрихиелла (Fusarium sporotrichiella). Фуза-риум споротрихиелла вариант поэ, Фузариум споротрихиелла вариант споротрихиоидес;

Аспергиллюс (Aspergillus): Аспергиллюс фумигатус, реже — Аспергиллюс флавус, Аспергиллюс нидуланс, Аспергиллюс клаватус, Аспергиллюс нигер;

б) токсические грибы, поражающие растения во время их вегетации.

К этой группе относятся:

спорыньевые — виды рода Claviceps:

Клавицепс пурпуреа (Claviceps purpurea) — типичная спорынья ржи, поражает культурные и многочисленные дикие злаки, редко осоковые;

Клавицепс паспали (Claviceps paspali) паразитирует на дикорастущих злаках рода Паспалум в Закавказье (Paspalum di-gitaria и другие).

21.    Различают: корм зараженный (заспоренный) спорами токсических грибов. Заспоренный корм отравления не вызывает; корм пораженный — когда споры различных грибов, находящиеся в кормах, начинают интенсивно расти и размножаться, масса грибницы и спор постепенно увеличивается и происходит накопление токсических веществ. Корма, пораженные токсическими грибами, вызывают отравления животных.

22.    При постановке диагноза на микотическое отравление животных учитывают: эпизоотологическое состояние хозяйства, клиническое проявление болезни у животного, патологоанатомическую картину вскрытия.

Клиническая картина отравлений токсическими грибами часто не сопровождается характерными для их распознавания симптомами. Многие -из признаков болезни (нервные явления, гастроэнтериты и др.) являются общими для отравлений различными токсическими грибами, а также ядовитыми растениями и химическими ядами.

Диагностическое значение при клиническом исследовании больных животных могут «меть некоторые особенности клинического 'Проявления:    при

отравлении грибами Стахиботрис альтернанс и Фузариум споротрихиелла некротические процессы, изменения в морфологическом составе крови .и т. д. Однако клинический синдром и течение отравлений определяет ряд факторов: степень токсичности гриба, количество действующих начал гриба, попавшего в организм с кормом, возрастные и индивидуальные особенности, состояние защитных сил и других факторов, определяющих реактивную способность организма животного.

Патолагоанатомические изменения не дают основания для точного диагноза. Результаты вскрытия имеют значение только при учете и других данных, используемых для постановки диагноза.

Основанием для подозрения на отравление токсическими грибами являются внезапность и часто массовость заболеваний — заболевает одно за другим в течение короткого времени несколько животных при одинаковых условиях.

Болезнь не передается от одного животного к другому. Смена кормов обычно приостанавливает дальнейшее появление больных.

Окончательный диагноз на микотическое отравление устанавливается на основе полного микологического анализа кормов, воспроизведения экспериментального токсикоза при одновременном исключении инфекции и отравлений растительными и химическими ядами.

При подозрении на отравление лошадей грибом Стахиботряс альтериаис, помимо высылки материала в лабораторию для микологического исследования на месте производят клинико-лабораторные исследования (см. «Наставление по клинико-лабораторной диагностике стахиботриотокснхоза лошадей» от 14 августа 19”>4 г. Сборник «Ветеринарное законодательство». Издательство МСХ СССР. 1959 г.).

23.    При подозрении на кормовое отравление необходимо выслать в лабораторию для полного микологического исследования корма, подозреваемые как источник отравления. Посылают образцы всех кормов, которые входили в суточный рацион до отравления или гибели животных.

Взятие, упаковка и пересылка кормов

24.    Для микологического исследования пробы отбирают из среднего образца корма, которая должна характеризовать состояние корма в исследуемой партии.

Отобранные пробы кормов (грубых, зернофуража и др.), если они влажные, просушивают для предотвращения развития на них различной микрофлоры во время транспортировки и упаковывают.

Солома, сено. Для средней пробы сено или солому отбирают из разных мест партии в количестве не менее 5 кг на каждые 25 т нспресованного (скирда) и 50 т — прессованного По среднему образцу отбирают пробу для микологического анализа весом не менее 500 г и упаковывают в бумагу.

Зернофураж, комбикорм. Зерно для средней пробы отбирают порядком, предусмотренным ГОСТом 3040-55, а комбикорм—ГОСТом 8770-58. Для микологического анализа отбирают пробу в количестве не менее 1 кг. Пробы упаковывают в мешочки.

Силос. Независимо от типа силосных сооружений пробы силоса отбирают из различных мест, подозрительных по качеству

Разработаны Всесоюзным нйучно-исследо вательским институтом ветеринарной санитарии

(в количестве 1 кг) и помещают в чистые банки с плотно закрывающимися пробками.

Зеленая трава кормовых культур. Для установ ления токсических свойств грибов-паразитов, поражающих растения во время вегетации, необходимо перед взятием образцов для микологического анализа обследовать пастбище и дать оценку траве, т. е. установить примерный ботанический состав травостоя, определить господствующие в травостое растения. При взятии образцов учитывается характер травостоя, стадия вегетации растения. При обследовании пастбища необходимо обращать внимание на растения, пораженные грибами, а главное— на степень поражения и их массовость. Для оценки пастбищной травы и дальнейшего взятия образцов для исследования и при неоднородности травостоя или однотипности пастбища выделяется несколько модельных участков — размером каждый до I кв. м с растительностью, типичной для данного пастбища. Трава скашивается или срезается ножницами со всеми органами (листья, цветы, плоды, стебель). Затем траву сушат до воздушно-сухого состояния в помещении, а для определения вида растения собранные растения раскладывают и высушивают между листами бумаги.

При возникновении отравлений после пастьбы по стерне для микологического анализа берут из различных мест выпасных участков остатки соломы на корню (срезают) или составляют пробы из остатков неубранных зерновых.

Одновременно с материалом нарочным или почтой отправляют и сопроводительные документы, в которых указывается: характер содержания (стойловое, пастбищное) и условия корм ления животных.

Вместе с сопроводительными документами в лабораторию высылают подробную историю болезни животных, к которой прилагают акт вскрытия с подробным описанием патологоанатом мических изменений, а также сведения об исключении инфекци онных болезней и отравлений животных химическими и растительными ядами (если исследование проводилось).

25.    Лабораторное исследование кормов предусматривает их микологический анализ и токсико-биологическое исследование.

Микологический анализ кормов

26.    При поступлении проб корма в лаборатории производят органолептический анализ: цвет, запах, наличие заплесневе-ния грибов-паразитов (спорыньевых и др.);

люминесцентное исследование проб;

1.    Многие грибы наряду с болезнетворными бактериями и другими микроорганизмами вызывают заболевания сельскохозяйственных животных, грызунов, пушных и хищных зверей, полезных насекомых, рыб и человека.

Грибы могут быть возбудителями микозов, а также вызывать отравления (микотоксикозы) животных.

2.    Диагноз болезней, вызываемых грибами, ставится на основании комплекса исследований, в который входят:

а)    эпизоотологические данные;

б)    клинические или клинико-гематологические исследования

в)    данные патологоанатомического и гистологического иссл дований;

г)    лабораторные исследования патологического материала и кормов, имеющие в большинстве случаев решающее значение при диагностике микозов и микотоксикозов в комплексе исследований.

3.    Результаты микологических исследований патологического материала и кормов зависят от правильности сбора и пересылки материала, а также от техники его исследования.

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ПРИ ДИАГНОСТИКЕ

МИКОЗОВ

4.    Лабораторная диагностика микозов основана на обнаружении возбудителя в органах и тканях при одновременном учете эпизоотологических факторов, клинического проявления болезни и патологоанатомических изменений.

Диагностические методы и приемы обнаружения грибов-возбудителей микозов — в принципе такие же, какие используются при диагностике болезней, вызываемых бактериями.

I. Дерматомикозы (дерматофитозы)

5.    Диагноз на дерматомикозы устанавливается на основании клиники заболевания и результатов лабораторного исследования методами:

микроскопии патологического материала;

люминесцентного анализа;

определения вида гриба-возбудителя путем выделения его в чистую культуру.

6.    Для исследования в лабораторию направляют: волосы, чешуйки, корочки, взятые с периферии пораженного участка кожи, не подвергавшегося лечению.

Патологический материал упаковывают в пробирки или пакеты из пергаментной бумаги.

7.    Микроскопическое исследование.

Волосы, чешуйки или корочки помещают в 10%-ный раствор едкого натрия (калия) на 15—20 минут. После этого небольшой кусочек материала переносят препаровальной иглой в каплю 50%-ного -водного раствора глицерина на предметном стекле. Затем препарат покрывают покровным стеклом и исследуют сначала под малым (7Х), потом под большим (40Х) увеличением микроскопа.

Примечания: не рекомендуется пользоваться крепкими растворами щелочи «ли сильно подогревать препарат. То и другое разрушает расположение элементов гриба, что иногда приводит к диагностическим ошибкам.

При обработке материала лактофенолом (карболовая кислота — 20 г, молочная ««слота — 20 мл, глицерин — 40 мл, дистиллированная вода — 20 мл) сохраняется морфологическая структура и препараты могут храниться длительное время.

8.    Люминесцентный анализ. Для люминесцентного анализа патологического материала (как и других объектов) источником ультрафиолетовых лучей является ртутно-кварцевая стационарная или переносная лампа типа ПРК-4, со светофильтром (стеклом Вуда), задерживающим видимую часть лучей и пропускающим ультрафиолетовые лучи.

Люминесцентный анализ производят в затемненном помещении. Лампу включают в электросеть и спустя 3—5 минут приступают к исследованию. Изучаемый объект помещают на столик под ртутно-кварцевую лампу на расстоянии 20 см от светофильтра. Объектом исследования на дерматомикозы являются волосы.

9.    Культивирование. Для выделения грибов дермато-фитов в чистую культуру используют пораженные волосы, которые освобождают от корочек, измельчают на прокаленном над пламенем горелки стекле или в стерильной чашке Петри и петлей переносят на поверхность питательной среды — сусло-агар и агар Сабуро с глюкозой.

В пробирки засевают 1—2 кусочка волоса 1—2 мм длины на расстоянии 1 см один от другого. Засевают 8—10 пробирок и культивируют при комнатной температуре. Засевать чешуйки или корочки не рекомендуется, они содержат большое количество посторонней микрофлоры, загрязняющей посевы.

Для посева можно отбирать пораженные волосы с помощью микроскопа или волосы, дающие свечение (микроспорум) при облучении ультрафиолетовыми лучами.

Выросшие колонии исследуют микроскопически. Для этого стерильной петлей снимают кусочек мицелия вдоль краев колоний, кладут его на предметное стекло в каплю 50%-ного раство ра глицерина или лактофенола, покрывают покровным стеклом и исследуют.

10. Предварительный диагноз на дерматомикозы ставят на основании данных микроскопического и люминесцентного <на микроспорию) исследований патологического материала с обязательным указанием типа поражения волоса.

Срок микроскопического исследования — одни сутки.

Срок микологического исследования — 10—30 дней.

ТРИХОФИТИЯ (ТРИХОФИТОЗ)

11. Возбудители: грибы рода Trichophyton. Основные виды: Фавиформный трихофитон — Trichophyton faviforme.

Гриб поражает крупный рогатый скот, реже лошадей, собак и еще реже коз и овец.

Гипсовый трихофитон — Trichophyton gypseum поражав! крупный рогатый скот, лошадей, собак, кошек, морских свинок, мышей, обезьян, крыс, свиней. Встречается реже, чем фавиформный трихофитон.

Лошадиный трихофитон — Trichophyton equinum. Возбудитель трихофитии лошадей.

Морфология трихофитонов в патологическом материале. Гифы мицелия в волосе, с перегородками, располагаются правильными рядами по длине волоса. Споры одноклеточные круглые или овальные. Характерной особенностью грибов рода трихофитон является расположение спор в виде цепочек на волосе или внутри его и образование чехла из спор у основания волоса.

По расположению элементов гриба различают следующие типы поражений волоса:

a) Trichophyton ectothiix — цепочки из спор па волосе; у основания волос окружен чехлом из спор.

По размеру спор Трихофитон эктотрикс делят на две группы:    крупноспоровые — ectothiix megaspores — 5—8 микрон

(один из представителей этой группы— Trichophyton faviforme); мелкоспоровые — ectothrix microides — 3—4 микрона (представители — Trichophyton gypseum и др.);

6) Trichophyton endothrix—споры лежат только в волосе. Трихофитон эндотрикс является возбудителем трихофитии людей, реже животных (представитель — Trichophyton craterifor-me).

В чешуйках (в эпидермисе) мицелий дерматофитов ветвящийся, иногда густо переплетен, с развитием распадается на споры, располагающиеся цепочкой и группами.

Морфология трихофитонов в культуре.

Фавиформный трихофитон (Trichophyton faviforme). Колонии медленнорастущие; бугристые, складчатые, иногда с периферической мучнистой зоной, белые (вариант album); кожистые, гладкие, желтые, коричневые (вариант discoides). Лучистый рост мицелия в питательный субстрат. Мицелий септиро-ванный, разветвленный, ровный или ракетообразный. Многочисленные круглые или многогранные артроспоры расположены цепочкой. Микроконидии и макроконидии образуются на специальных средах.

Гипсовый трихофитон (Trichophyton gypseum). Колонии на среде Сабуро образуются на 4—5 день. Они имеют правильную округлую форму, мучнисто-порошковатые, звездчатые (вариант asieroides) или зернистые (вариант granulosum), цвет белый или кремовый, оборотная сторона колонии желтая или коричневая. По морфологии колонии могут варьировать от пушистых до мучнистых.

Культуры типа гипсового трихофитона состоят из разветвленного, септированного мицелия, концы которого имеют форму спиралей, узлов и колец. В мучнистых колониях — в большом количестве мелкие, круглые микроконидии, расположенные гроздьями и одиночно на гифах. Макроконидии имеют форму веретена и состоят из 3-^-8 клеток. Иногда обнаруживаются хламидоспоры.

Лошадиный трихофитон (Trichophyton equinum). Колонии на сусло-агаре белые, бархатистые, в дальнейшем на них появляются радиальные бороздки. Старые колонии мучнистые. По периферии мицелий образует в питательном субстрате лучистые отростки.

Микроконидии грушевидные на коротких ножках, возникают по бокам гиф. Макроконидии рудиментарные. Хламидоспоры промежуточные и концевые.

Кратеровидный трихофитон (Trichophyton crateriforme). Колонии густомучнистые в центре, бархатистые по периферии, поверхность колонии складчатая, часто с кратеровидной впадиной в центре. Цвет колонии белый, с возрастом кремовый. Микроконидии образуются в большом количестве по бокам гиф, 6

формы их грушевидные или булавовидные; располагаются кистями по ходу мицелия. Макроконидии образуются редко или совсем отсутствуют. Хламидоспоры промежуточные и концевые, обнаруживаются в большом количестве в старых культурах. Мицелий септированный, часто ракетообразный на концах.

МИКРОСПОРИЯ (МИКРОСПОРОЗ)

12. Возбудители. Пушистый микроспорум (Microsporum lanosum) поражает кошек, пушных и хищных зверей, собак.

Лошадиный микроспорум (Microsportim equinum) — возбудитель микроспории лошадей.

Гипсовый микроспорум (Microsporum gypseum) поражает лошадей, собак, кошек, крыс, мышей. Заражается этим грибком и человек. Обнаружен в почве, как сапрофит.

Морфология грибов рода Микроспорум в патологическом материале. Мицелий непрямой, ветвистый, перегородки редкие. Споры располагаются внутри волоса, вне его и на его поверхности беспорядочно-мозаично. Размер спор от 3 до 4,5 микрона в диаметре.

Люминесцентная диагностика. Этот метод диагностики микроспории основан на способности волос, пораженных грибами рода Микроспорум (Микроспорум ланозум, Микроспорум эквинум), давать яркое зеленое или фиолетовое свечение при облучении ультрафиолетовыми лучами.

При подозрении на микроспорию волосы помещают в пробирку или в бактериологическую чашку и ставят под ртутнокварцевую лампу для облучения.

Для выявления скрытых форм микроспории облучению под вергают весь волосяной покров животного, используя для этил целей переносные лампы. Этот метод важен также для диффе-ренциации микроспории и трихофитии, так как волосы, пораженные грибами рода Трихофитон, не люминесцируют. Следует иметь также в виду, что у животных черной масти пораженные волосы часто не люминесцируют. Флюоресцируют также вазелин, риваноль, салициловая кислота, поэтому исследование надо проводить до обработки животных различными препаратами.

Морфология грибов рода Микроспорум в культуре. Грибы — быстрорастущие; многоклеточные, толстостенные, веретенообразные, макроконидии характеризуют род.

Пушистый микроспорум (Microsporum lanosum). На агаре Сабуро образует колонии пушистые, круглые, часто с концентрическими кругами. С возрастом мицелий становится порошко-

видным, светло-желтого (до коричневого) цвета в центре. Оборотная сторона колонии красновато-коричневого (до оранжевого) цвета.

Колонии пушистого микроспорума, выделенные от пушных и хищных зверей — вначале гладкие, желтые, позже в них появляется белый, рыхлый, воздушный мицелий; оборотная сторона колонии оранжевая.

Микроскопия. Большие многоклеточные, веретеновидные макроконидии, состоящие из 6—12 клеток, имеют зубчато-ворси стую оболочку, у некоторых вариантов оболочка гладкая. В первичных культурах по бокам возникают в небольшом количестве маленькие микроконидии. Мицелий имеет иногда вид узло ватых органов, редко спиралей.

Лошадиный микроспорум (Microsporum equinum). Колонии часто кожистые, радиально-складчатые.

Микроскопия. Макроконидии более короткие и узкие.

Гипсовый микроспорум (Microsporum gypseum). Колонии быстрорастущие, порошковидные. Цвет светло-желтый до светло-коричневого. Некоторые штаммы образуют белый, ворсистый воздушный мицелий, который с возрастом становится порошковидным и светло-коричневым в центре с радиальными бороздками. Оборотная сторона колонии красновато-коричневого (до оранжевого) цвета.

Микроскопия. Макроконидии многочисленные, многоклеточ ные (4—6-клеточные), эллипсоидные. В первичных культурах макроконидии немногочисленные, одноклеточные, булавовидные. Иногда в культурах обнаруживают мицелий в виде спиралей, узловатых органов, а также хламидоспоры.

ОАВУС (ПАРША) ПТИЦ

13. Возбудитель: гриб Achorion (Trichophyton) galinae.

Морфология возбудителя фавуса в патологическом материале. Мицелий и споры не заполняют всего волоса, в нем также содержатся пузырьки воздуха. Мицелий в волосе преобладает. Споры имеют различную величину и располагаются группами.

Морфология гриба в культуре. Колонии белые, бархатистые, гладкие, с возрастом становятся складчатыми и растрескиваются. Иногда колонии розовые, красные.

Микроскопия. Мицелий септированный, иногда разветвленный. Макроконидии многоклеточные по бокам мицелия или на его концах (1—6-клеточные). Микроконидии расположены на Соковых ответвлениях мицелия.

II. Кандидамикоз (молочница)

14. Возбудители кандидамикоза сельскохозяйственных животных дрожжевидные грибы рода Candida. Основной вид Candida albicans, реже другие виды этого рода (Candida tropicalis, Candida stellatoidea, Candida guiller-mondi и др.). *

Заболевание наблюдается у птиц (кур, индеек) и редко у млекопитающих. Клинически кандидамикоз птиц характеризуется как подострый или хронический микоз, .иногда протекающий в «иде эпизоотических вспышек. Поражаются главным образом слизистые оболочки ротовой полости, пищевод, зоб; при генерализации процесса поражается кишечник, реже — другие органы.

Кандидамикоз млекопитающих характеризуется развитием маститов (крупным рогатый скот), энтеритов (свиньи) или поражаются органы дыхания.

Кандидамикоз встречается у животных всех возрастов. Молодые жиаот-ные «и птицы более 'восприимчивы к нему, чем взрослые.

Грибы рода Кандида обитают как сапрофиты у здоровых животных v птиц на слизистой оболочке ротовой полости, желудочно-кишечного тракта, верхних дыхательных путей. Они широко распространены в природе и живут на растениях, в почве, молочных продуктах, фруктах, овощах.

В большинстве случаев источник инфекции эндогенный. Заболевание чаще всего возникает у недоразвитых животных, на фоне других заболеваний, а также в результате неумелого применения антибиотиков.

Для прижизненной диагностики кандидамикоза у птицы производят соскобы со слизистой оболочки (если имеются налеты и серо-белые наложения, которые можно исследовать). Материал направляют на исследования в стерильных пробирках; иногда лучше доставить в лабораторию больную птицу.

Для посмертной диагностики в лабораторию направляют части различных пораженных органов или трупы птиц.

При массовых заболеваниях коров маститами молоко сдаивают из пораженных долей вымени в стерильные пробирки, которые срочно направляют в лабораторию. Перед взятием проб молока соски вымени тщательно протирают тампоном, смоченным в разведенном (50%-ном) спирте. Первую порцию молока, находящуюся в канале соска, сдаивают.

Для гистологического исследования материал консервируют 10%-ным раствором формалина.

Для микроскопического исследования из пораженных очагов соскобов со слизистых оболочек готовят препараты в капле 50%-иого водного раствора глицерина, нанесенной на предметное стекло. В случае необходимости (при наличии плотных корок) материал предварительно обрабатывают 10—15 минут в 10%-ном растворе едкого натрия и исследуют под большим увеличением (40Х) сухой системы микроскопа. Мазки окрашивают по Граму.