ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬБЫ С ВРЕДИТЕЛЯМИ, БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИИ И СОРНЯКАМИ ПРИ МСХ СССР

МЕТОДЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, ФУРАЖЕ, ПОЧВЕ И ВОДЕ

(ФОСФОРОРГАНИЧЕСКИЕ И ДРУГИЕ ПЕСТИЦИДЫ)

Часть II

Москва — 1968

ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬБЫ С ВРЕДИТЕЛЯМИ, БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИЙ И СОРНЯКАМИ ПРИ МСХ СССР

Утверждаю: Заместитель Главного санитарного врача СССР

Д. Н. ЛОРАНСКИЙ 23 августа 1967 г.

МЕТОДЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, ФУРАЖЕ, ПОЧВЕ И ВОДЕ

(ФОСФОРОРГАНИЧЕСКИЕ И ДРУГИЕ ПЕСТИЦИДЫ)

Часть II

ИЗДАТЕЛЬСТВО «КОЛОС»

Москва —1968

водой до нейтральной реакции по лакмусу промывных вод, рассыпают тонким слоем и сушат при комнатной температуре до влажности 15%.

Натрий сернокислый безводный, химически чистый.

Аммоний молибденовокислый 0,02 М раствор в 10 н. серной кислоте. 6,18 г реактива растворяют в 250 мл 10 н. серной кислоты. Раствор рекомендуется хранить в склянке из темного стекла.

Окисляющая смесь. Готовят путем растворения 0,5 г растертого в порошок марганцовокислого калия в 10 мл серной кислоты, уд. вес Г,84. Реактив хранят в склянке с притертой пробкой. Срок годности реактива 5 дней.

Гидразин сернокислый, 0,13%-ный раствор.

Калий фосфорнокислый однозамещенный, стандартный раствор, содержащий 0,001 мг фосфора в 1 мл. Готовят следующим образом; 0,2742 г однозамещенного фосфорнокислого калия растворяют в 250 мл дистиллированной воды, подкисленной несколькими каплями серной кислоты. Раствор годен в течение 2—3 недель. 1 мл его вносят в мерную колбу на 250 мл и доливают слегка подкисленной водой до метки. Раствор готовят непосредственно перед употреблением. 1 мл его содержит 0,991 мг фосфора.

Аппаратура и посуда

Установка для хроматографирования. Перед хроматографированием колонку (стеклянная трубка, зауженная книзу, 200x20 мм) заполняют адсорбентом. Для этого в узкий конец помещают небольшой ватный тампон и сверху наливают взвесь адсорбента в органическом растворителе в таком количестве, чтобы после оседания высота слоя его была 5 см. На слой адсорбента насыпают слой безводного сернокислого натрия.

Прибор для отгонки растворителя с пришлифованными колбами из термостойкого стекла на 100 мл и 15—20 мл.

Пробирки колориметрические.

Широкогорлые склянки с притертыми пробками.

Делительные воронки на 300—500 мл.

Пипетки, мерные колбы на 250 мл, мерный цилиндр на 100 мл.

Водоструйный насос или аспиратор.

Баня парафиновая.

Электроплитка.

Термометр на 200° С.

Трубки резиновые, зажимы.

Ход анализа

100 г измельченного на овощной терке продукта переносят в стеклянную банку с притертой пробкой или делительную воронку, добавляют 60—75 мл растворителя и энергично встряхивают в течение 25—30 минут. Экстракт сливают в колбу на 100—150 мл.

10

К исследуемой пробе продукта вновь прибавляют 20—25 мл рас-творителя и продолжают экстракцию еще 10—15 минут. Экстракты объединяют и хроматографируют через слой адсорбента и безводного сернокислого натрия, предварительно смоченные растворителем. При хроматографии фосфатиды растения задерживаются адсорбентом, инсектицид остается в элюате.

В таблице приведены растворители и адсорбенты, соответствующие определенным ядохимикатам.

Препарат	Растворитель	Адсорбент
Карбофос	Хлороформ	Окись алюминия
Метилмеркаптофос	Хлороформ	Окись алюминия
Препарат М-81	Хлороформ	Диатомит
Тиофос	Хлороформ	Окись алюминия, обработанная 2 н, соляной кислотой

После хроматографирования колонку промывают 15 мл растворителя. Фильтрат переносят в колбу перегонного аппарата на 100 мл и отгоняют на водяной бане растворитель до объема 10—15 мл. Оставшийся раствор количественно переносят в колбочку на 15—20 мл и испаряют досуха под небольшим разряжением водоструйного насоса. К сухому остатку добавляют 2,5 мл концентрированной азотной кислоты, 0,1 мл окисляющей смеси. Колбочку осторожно встряхивают и помещают в парафиновую баню, нагретую до температуры не выше 65—70°. Температуру бани медленно поднимают до 175—180° С ¹.

Исследуемый раствор нагревают до полного удаления паров азотной кислоты. После этого на электроплитке выпаривают оставшийся раствор досуха. Далее после охлаждения колбочки к сухому остатку прибавляют дистиллированную воду и раствор количественно переводят в колориметрическую пробирку, затратив на эту операцию 6—7 мл воды. Туда же вносят 1 мл 0,002 М раствора молибдата аммония. Пробирку встряхивают и нагревают на кипящей водяной бане в течение 10 минут. После охлаждения к раствору прибавляют 1,6 мл 13%-ного раствора сернокислого гидразина и доводят объем жидкости дистиллированной водой до 10 мл.

Пробирку вновь энергично встряхивают, нагревают на кипящей водяной бане 15 минут, охлаждают и сравнивают окраску исследуемого раствора с окраской растворов стандартной шкалы.

Стандартную шкалу готовят параллельно с пробой. Для приготовления ее в ряд колориметрических пробирок вносят 0; 1; 1,5... 5 мл стандартного раствора однозамещенного фосфорнокислого калия, что соответствует 0; 0,001; 0,0015 ... 0,005 мг фосфора. Объем жидкости во всех пробирках дистиллированной водой доводят до 7 мл, затем в пробирки со стандартными растворами вносят по 1 мл раствора молибдата аммония, пробирки встряхивают и помещают в кипящую водяную баню на 10 минут. После охлаждения растворов в каждую пробирку вносят 1,6 мл раствора сернокислого гидразина, дистиллированной водой объем жидкости доводят до 10 мл, пробирки энергично встряхивают и вновь помещают на 15 минут в кипящую водяную баню. По полученной серии стандартов строят калибровочный график, применяя при измерении величины светопоглощения красный светофильтр.

Количество препарата в мг/кг продукта вычисляют по формуле:

где

G — количество фосфора, найденное в пробе, мкг;

Р — навеска продукта, взятая для анализа, г;

К— коэффициент пересчета фосфора на исследуемый препарат. Значения К приведены в таблице.

Карбофос . . . , Метилмеркаптофос Препарат М-81 . , Тиофос.....

Определение в вине и виноградном соке

50 мл вина или виноградного сока помещают в склянку с притертой пробкой или делительную воронку емкостью 200—300 мл, прибавляют 50 мл серного эфира и энергично встряхивают в течение 10—15 минут. Эфирный экстракт с целью удаления влаги фильтруют через слой сернокислого натрия. Фильтрат собирают в колбочку перегонного аппарата и отгоняют растворитель. Дальнейший ход анализа и расчет аналогичны описанным выше, т. е. к сухому остатку прибавляют 2,5 мл азотной кислоты и 0,1 мл окисляющей смеси и т. д.

(1-нафтил-Ы-метилкарбамат)

Мол. вес 201,2

12

Химически чистый севин — кристаллическое вещество белого цвета со слабым запахом. Устойчив на свету при повышенных температурах (до 70°) и хранении. В щелочных растворах быстро гидролизуется. В воде нерастворим, растворим в большинстве органических растворителей.

ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ КАЧЕСТВЕННЫЙ И КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИЙ КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕВИНА В ПЛОДАХ

Принцип метода ²

Основан на экстракции севина петролейным эфиром или другим органическим растворителем, очистке экстракта от мешающих определению примесей, омылении раствором едкого натра до 1-нафтола и сочетании последнего в щелочной или кислой среде с диазотированным п-нитроанилином, в результате чего получается азосоединение синего цвета.

Чувствительность хроматографического метода меньше 1 мкг, а колориметрического — 0,03—0,1 мг/кг.

Реактивы и растворы

Эфир петролейный, точка кипения 40—90°, перегнанный (или бензол х. ч.).

Метанол х. ч.

Натрий хлористый х. ч.

Бензол перегнанный.

Бумага для хроматографии.

Ацетон х. ч.

Натрий едкий х. ч.

Спирт н-бутиловый х. ч.

п-Нитрофенилдиазоний солянокислый свежеприготовленный. К 0,02%-ному раствору п-нитроанилина в 0,1 н. соляной кислоте доливают в 10 раз меньшее количество 0,8%-ного раствора нитрата натрия. Раствор готовят в колбочке, погруженной в ледяную воду.

Стандартный раствор севина. 100 мг севина, х. ч., растворяют в мерной колбе в 100 мл петролейного эфира или бензола. 1 мл этого раствора переносят в мерную колбу емкостью 100 мл и доводят до метки тем же растворителем. 1 мл раствора содержит 10 мкг севина.

Приборы и посуда

Сосуд для хроматографирования на бумаге.

Колбы круглодонные на 100—150 мл с пришлифованными нисходящими холодильниками.

Воронки делительные на 250 мл.

Пипетки емкостью 0,1 мл.

Колориметр.

Пульверизатор стеклянный.

Ход анализа

Навеску в 100 г (из средней пробы в 1 кг) заливают петролей-ным эфиром или бензолом. Через 24 часа эфир сливают и плоды ополаскивают тем же растворителем.

Экстракт отгоняют почти досуха на водяной бане. Остаток в колбе растворяют в 20 мл метанола, раствор переносят в делительную воронку емкостью 250 мл и к нему добавляют 30 мл дистиллированной воды. При этом выпадают воск и красящие вещества, которые удаляют взбалтыванием с 10 мл петролейного эфира в течение 2—3 минут. Взбалтывание проводят 3 раза общим количеством 30 мл петролейного эфира. Чтобы избежать образование эмульсии, в делительную воронку всыпают 2—3 г хлористого натрия. Затем воднометаноловый раствор трижды взбалтывают с 200 мл бензола: первый раз со 100 мл, а во второй и третий — с 50 мл. Севин переходит в бензол. Замеряют объем бензольного экстракта, сушат его безводным сернокислым натрием и используют для хроматографического или колориметрического определения.

Хроматографическое определение

7з бензольного экстракта упаривают на водяной бане до объема 0,3—0,5 мл и остаток в количестве 0,1 мл переносят пипеткой на полосу хроматографической бумаги в определенную точку. Затем колбу дважды промывают 0,2—0,4 мл бензола, который также наносят в ту же точку бумаги. Диаметр пятен на бумаге не должен превышать 1 см.

Исследуемые растворы наносят на бумагу в точки, находящиеся на расстоянии 3 см от нижнего края и 2,5 см от боковых краев. Между собой точки нанесения должны быть на расстоянии 3 см друг от друга. Затем полосу бумаги погружают в сосуд для хроматографирования в подвижный растворитель (80% дистиллированной воды и 20% ацетона) на глубину 1,2 см от нижнего края, п жидкости дают подняться на высоту 15—16 см, на что уходит приблизительно 2 часа. Затем бумагу из сосуда вынимают и растворитель испаряют на воздухе, после чего его опрыскивают 1,5%-ным раствором едкого натра в смеси метилового и н-бутило-

14

вого спиртов (1:1), в результате чего севин омыляется до 1-нафтола.

Хроматограммы проявляют после испарения спирта путем опрыскивания бумаги смесью 0,1%-ного раствора п-нитроанилина в 0,1 н. соляной кислоте с 4%-ным водным раствором нитрата натрия. Смесь указанных растворов готовят в отношении 10 : 1 в колбочке, помещенной в ледяную воду. В результате опрыскивания бумаги раствором хлористоводородной соли п-нитрофеиилдиазония происходит сочетание с 1-нафтолом и появляются синие пятна в тех местах на бумаге, где находился севин.

При анализе чистого препарата пятна получаются в виде синих кружков. Rf для севина при 25° равен приблизительно 0,76, а для 1-нафтола — 0,5.

При анализе севина из растительной ткани или плодов получают синие полосы, идущие снизу вверх по длине полосы бумаги.

Колориметрическое определение

Полученный, как описано выше, бензольный экстракт упаривают на водяной бане и остаток растворяют в 5 мл метанола, К этому раствору доливают 1 мл 2%-ного водного раствора едкого натрия для омыления севина до 1-нафтола и охлаждают раствор ледяной водой.

В колбе, которая находится в ледяной воде, готовят раствор паранитрофенилдиазония: к определенному количеству миллилитров 0,02%-ного раствора п-нитроанилина в 0,1 н. соляной кислоте добавляют в 10 раз меньшее количество 0,08%-ного раствора нитрата натрия. К охлажденному в ледяной воде омыленному раствору севина прибавляют 1 мл свежеприготовленного раствора солянокислого паранитрофенилдиазония. В результате сочетания паранитрофенилдиазония с 1 -нафтолом получается азосоединение синего цвета. В колбу вливают еще 5 мл метанола и оставляют на 2 часа в холодильнике до полного проявления окраски.

Параллельно с пробой строят калибровочный график. С этой целью к экстрактам контрольного образца, соответствующим 100 г определяемого продукта, прибавляют 0,25; 0,5; 1,5 мл стандартного раствора севина, что соответствует 2,5, 5,0, 10, 15 мкг севина, и проводят колориметрическое определение так, как описано ниже. Колориметрирование проводят с оранжевым светофильтром.

Количество севина в мг/кг вычисляют по формуле:

P-Vi

где

G — количество севина, найденное по калибровочному графику, мкг;

Р — навеска продукта, г;

15

Ki — объем бензольного экстракта, взятый для колориметрического определения, мл;

V — общий объем бензольного экстракта, мл.

КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕВИНА В ЯБЛОКАХ, СЛИВАХ, ВИШНЯХ, КРЫЖОВНИКЕ, ЗЕМЛЯНИКЕ, ЧЕРНОЙ СМОРОДИНЕ

и плодово-ягодных консервах

Принцип метода ³

Севин извлекают из растительных пищевых продуктов хлороформом. От примесей освобождают в метаноловом растворе добавлением водного раствора хлористого аммония с последующим фильтрованием через бумажный фильтр и хроматографированием через слой окиси алюминия.

Выделенный севин гидролизуют едким кали и образующийся 1-нафтол сочетают с хлористым п-нитрофенилдиазонием, в результате чего образуется азосоединение синего цвета, по которому и определяют количество севина в пробе.

Точность метода ± 5—10%.

Реактивы и растворы

Хлороформ X. ч.

Метанол х. ч.

Аммоний хлористый х. ч., 2%-ный водный раствор.

Смесь метанола и 2%-ного водного раствора хлористого аммония (1 : 1).

Алюминия окись для хроматографии II активности.

Натрий сернокислый безводный х. ч.

Калий едкий 0,1 н. раствор в метаноле.

Натрия нитрит х. ч., 0,8%-ный водный раствор.

п-Нитроанилин.

п-Нитрофенил хлористый, свежеприготовленный. К 0,02%-ному раствору п-нитроанилина в 0,1 н. соляной кислоте доливают в 10 раз меньшее количество 0,8%-ного водного раствора нитрита натрия. Раствор готовят в колбе, погруженной в ледяную воду.

Стандартный раствор севина: 10 мг севина, х. ч., растворяют в 100 мл хлороформа. 10 мл этого раствора переносят в мерную колбу емкостью 100 мл и доводят до метки хлороформом. 1 мл раствора содержит 10 мкг севина.

Приборы и посуда

Фотоэлектроколориметр.

Водяная баня.

Водоструйный насос.

Установка для хроматографирования, состоящая из колонки (стеклянная трубка, зауженная книзу, 17X400 мм) и колбы Бунзена. В колонку помещают ватный тампон, затем слой окиси алюминия 5—7 см и затем слой безводного сульфата натрия 1,5—2 см. Подготовленную колонку промывают хлороформом (10—15 мл).

Центрифуга.

Аппарат для встряхивания.

Воронки делительные емкостью 150—250 мл.

Колбы конические емкостью 50, 100 и 250 мл.

Цилиндры мерные на 25, 50, 250 и 500 мл.

Пипетки на 1, 5 и 10 мл.

Сосуды для экстракции емкостью 1,5—2 л.

Ход анализа

Пробу исследуемого растительного продукта весом 1—1,5 кг измельчают, тщательно перемешивают и навеску 100 г заливают хлороформом и оставляют на 16—18 часов. Полученный экстракт фильтруют через бумажный фильтр в колбу и отгоняют хлороформ при 35—40° С над кипящей водяной баней с помощью водоструйного насоса. Последние порции растворителя отгоняют без нагревания.

Для растворения сухого остатка в колбу приливают 10 мл метанола и осторожно ее подогревают, погружая в горячую воду, слегка потирая дно стеклянной палочкой. Затем добавляют 10 мл 2%-ного раствора хлористого аммония и помещают колбу в холодильник (лучше в замораживатель) на 20—30 минут.

При добавлении водного раствора хлористого аммония растворимость «воска» и пигментов в метаноле резко уменьшается и они выделяются в виде хлопьев. После охлаждения содержимое фильтруют через тройной бумажный фильтр. Фильтрование идет быстрее при использовании водоструйного насоса. Для этого стеклянную воронку с пробкой и плотно прилегающим фильтром (лучше двойным) вставляют в пробирку с отводом, который подключают к водоструйному насосу.

Содержимое колбы количественно переносят в воронку, споласкивая колбу дважды (по 3—5 мл) смесью метанола и 2%-ного раствора хлористого аммония (1 : 1), охлажденной до 0—5° С.

Фильтрат из пробирки переносят в делительную воронку и экстрагируют севин хлороформом, энергично встряхивая первый раз с 25 мл, второй — с 15 мл. Хлороформенный экстракт хроматографируют через колонку. Сначала пропускают первую порцию

17

экстракта 25 мл, затем вторую— 15 мл и промывают 15 мл хлороформа.

Полученный фильтрат количественно переносят в колбу и отгоняют хлороформ досуха, используя водоструйный насос. К сухому остатку прибавляют 5 мл 0,1 н. метанолового раствора едкого кали и, помешивая стеклянной палочкой, оставляют на 5 минут.

Полученный в результате гидролиза севина 1-нафтол определяют следующим образом.

В колбу, где протекал гидролиз севина, добавляют 1 мл солянокислого раствора п-нитрофенилдиазония, приготовленного перед употреблением, как указано в разделе «Реактивы и растворы». При взаимодействии в щелочной среде 1-нафтола и солянокислого п-нитрофенилдиазония образуется азосоединение синего цвета. В колбу доливают еще 5 мл метанола и помещают в холодильник на 30 минут. Затем раствор фильтруют через бумажный фильтр и колориметрируют при оранжевом светофильтре (длина волны 590 ммк) в кювете с толщиной слоя 10 мм.

В качестве холостой пробы при колориметрировании используется дистиллированная вода.

Расчет содержания севина производят по предварительно построенному калибровочному графику.

Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика в колбы вносят 0,5; 1; 2,5; 5; 7,5; 10 мл стандартного раствора, содержащего 10 мкг севина в 1 мл хлороформа. Растворитель отгоняют на водяной бане с помощью водоструйного насоса и далее поступают, как описано для определения севина в растительной пробе с момента щелочного гидролиза.

Содержание севина в мг/кг продукта вычисляют по следующей формуле;

где

X — количество севина в продукте, мг/кг;

G — количество севина, найденное по калибровочному графику, мкг;

Р — навеска исследуемого продукта, г.

Определение севина в фруктово-ягодных компотах и маринадах

100 г исследуемой пробы (учитывать соотношение сиропа и ягод) после измельчения и тщательного перемешивания количественно переносят в колбу с притертой пробкой и заливают хлороформом с таким расчетом, чтобы покрыть навеску. Экстрагируют

18

севин путем встряхивания в течение 30 минут на аппарате для встряхивания. В случае образования стойкой эмульсии для разделения слоев следует воспользоваться центрифугой.

Центрифугирование проводят в течение 30 минут при 2500 об/мин. После центрифугирования удаляют верхний слой (сироп и ягоды) с помощью пипетки Мора и резиновой груши, а нижний, хлороформенный, сушат с помощью безводного сульфата натрия. Высушенный экстракт помещают в колбу для отгона растворителей и удаляют хлороформ на водяной бане с помощью водоструйного насоса. Дальнейший ход анализа аналогичен определению севина в сырых ягодах и фруктах.

КОЛОРИМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТЕТРАМЕТИЛТИУРАМДИСУЛЬФИДА (ТМТД) В ЗЕРНОПРОДУКТАХ

сн_3ч    усн₃

;nc-s-s-cn₄

сн/ ||    ||    ^хсн₃

S    S

Мол. вес 240,44

Мелкокристаллический порошок желтовато-серого цвета, со специфическим запахом.

Температура плавления 155—156° С.

Практически нерастворим в воде, но растворим в большинстве органических растворителей (слабо—в этиловом спирте, несколько лучше — в эфире, хорошо — в ацетоне, хлороформе). Устойчив при хранении. Но подвергается разложению в кислой и щелочной средах, под действием сильных окислителей разрушается до серной кислоты и углекислого газа.

Принцип метода

Метод основан на образовании комплексного соединения — тиу-рамата меди, окрашенного в салатный цвет, при взаимодействии катиона меди с тетраметилтиурамдисульфидом в спиртовом растворе.

При содержании тетраметилтиурамдисульфида от 5 до 40 мкг в 1 мл раствора окраска подчиняется закону Ламберта — Бера.

Чувствительность метода — 5 мкг в 1 кг анализируемого продукта.

19

Редакционная комиссия:

3. И. Богомолова, Ф. П. Вайнтрауб_f Ф. Г. Днтловицкая, М. А. Клисенко, Л, А. Стемпковская

Ответственный редактор Е. С. Косматый

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТМТД В ЗЕРНОПРОДУКТАХ

Реактивы и растворы

Спирт этиловый, 96%-ный.

Спиртовый раствор хлорида меди, 1,0%-ный. Тетраметилтиурамдисульфид чистый, перекристаллизованный. 2—5 г ТМТД растворяют в 5 мл хлороформа, добавляют 5 мл этанола при помешивании, образующийся осадок отфильтровывают, промывают спиртом и сушат при 100° С.

Стандартный спиртовый раствор ТМТД, 50 мкг/мл.

Приборы и посуда

Пробирки.

Колбы.

Микропипетки.

Фотоэлектроколориметр ФЭК-56.

Ход анализа⁴

Исследуемый образец весом 20 г помещают в колбу и заливают равным или двойным количеством этилового спирта, в зависимости от характера объекта, и экстрагируют в течение 30 минут при периодическом встряхивании. Экстракт фильтруют и замеряют объем фильтрата. К 5 мл экстракта добавляют 0,1 мл 1%-ного спиртового раствора хлорида меди, подогревают до 50—60° и фото⁴ метрируют через 20—30 минут при 440 ммк (синий светофильтр № 4), пользуясь кюветами шириной 10 мм. В качестве контроля используют экстракт, не обработанный хлоридом меди.

Для построения калибровочного графика в ряд пробирок вносят последовательно 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,6; 0,8 мл стандартного рас⁴ твора, что соответствует 5; 10; 15; 20; 30; 40 мкг ТМТД, доводят этиловым спиртом объем жидкости до 5 мл, затем добавляют в каждую пробирку 0,1 мл 1%-ного спиртового раствора хлорида меди, нагревают на водяной бане (50—60°) в течение 20 минут. Далее раствор фотометрируют в кювете с рабочей длиной 10 мм в сравнении с этиловым спиртом, к которому добавлен 0,1 мл 1 %-ного спиртового раствора хлорида меди.

Расчет анализа производят по формуле:

Р ■ Vi

где

X — количество ТМТД в анализируемом продукте, мг/кг;

ХЛОРОФОС (диптерекс) (0,0-диметил-2,2,2-трихлор-1-оксиэтил-фосфонат)

СН₃Оч

^ЧР-СН-СС1₃

I

он

Мол. вес 257,45

Белое твердое вещество с точкой плавления 78—80°С, растворяется в воде при 25° до 15,4%, а также в хлороформе, бензоле, н-гек-сане, ацетоне, этиловом спирте и др.

В водных растворах хлорофос наиболее устойчив при pH 1—5. При pH выше 7 он быстро подвергается гидролизу с образованием ДДВФ (0, 0,-диметил-2,2-дихлорвинилфосфат), который при pH S' интенсивно разлагается на продукты, не обладающие токсичностью.

ХРОМАТОПОЛЯРОГРАФИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ХЛОРОФОСА В РАСТЕНИЯХ

Принцип метода ⁵

Метод определения остатков хлорофоса (ХФ) основан на экстракции его из пробы хлороформом, очистке экстракта от примесей растительного происхождения и продуктов его распада.

Реактивы и посуда

Хлорофос очищенный.

Хлороформ медицинский очищенный. н-Гексан перегнанный.

Этиловый спирт перегнанный.

Стандартный раствор ХФ. Приготовляют ацетоновый раствор «с содержанием ХФ 100 мкг/мл.

ДДВФ стандартный раствор в ацетоне, 100 мкг/мл.

Сернокислый натрий безводный.

Резорцин, 2%-ный раствор.

Карбонат натрия, х. ч. раствор.

Хлорид лития, 0,01 н. раствор.

Тетраметил-аммоний бромистый, 0,01 н. раствор.

Хроматографическая бумага марки «Б» Ленинградской фабрики.

Колбы конические 700 мл с притертой пробкой.

Воронки 0 12—14 см.

Аппарат для встряхивания.

Пульверизатор стеклянный.

Микропипетка на 0,1 мл с ценой деления 0,01 мл.

Камера для хроматографирования.

Электрическая водяная баня.

Полярограф.

Ход анализа

Навеску растения 100 г измельчают на терке или в фарфоровой ступке, переносят в коническую колбу и заливают хлороформом. 'Содержимое колбы встряхивают примерно около 1—1,5 часа на аппарате для встряхивания. Жидкость отделяют фильтрованием, экстракты соединяют и обезвоживают безводным сернокислым натрием. Растворитель отгоняют почти досуха на водяной бане. 'Остаток растворителя удаляют теплым воздухом (60°). Сухой остаток обрабатывают 4—5 раз дистиллированной водой (по 5—6 мл). Водные экстракты соединяют вместе, переносят в делительную воронку и промывают н-гексаном 3—4 раза, для чего последнего берут по 15 мл. Гексановый слой удаляют, а из водного слоя экстрагируют ХФ хлророформом 4—5 раз. Каждый раз хлороформа берут по 30—40 мл.

Хлороформенные экстракты соединяют, и растворитель на водяной бане отгоняют до объема 0,5 мл. Дальше остаток экстракта хроматографируют при комнатной температуре 4—5 часов. Подвижным растворителем служит петролейный эфир (температура кипения до 70°), насыщенный метанолом. На листок хроматографической бумаги, разделенный двумя прорезями на три полоски (7 см шириной и 48 см длиной), наносят параллельно две пробы — юдну для количественного, а другую — для качественного определения ХФ; на третью полоску наносят стандартный раствор ХФ.

После хроматографирования полоски бумаги вынимают из камеры и сушат на воздухе до полного удаления паров подвижного растворителя. Затем по линиям прореза хроматограмму разрезают на три части. Одну из них оставляют для количественного определения ХФ, а вторую и третью проявляют для установления места положения ХФ на хроматограмме.

Проявителем служит смесь — 2%-ный водный раствор резорцина + 1,0 М раствор карбоната натрия. После опрыскивания хроматограмму помещают в сушильный шкаф при температуре 50—55° на 10—15 минут. При этом на хроматограмме пятно Хф окрашивается в розовый цвет.

В этих условиях можно хроматографировать смесь ХФ и ДДВФ. На хроматограмме проявляются два пятна:    первое

с /?/=0,14 для ХФ, а второе с /?/=0,76 для ДДВФ.

Для количественного определения остатков ХФ поступают следующим образом.

Пользуясь проявленной хроматограммой, на непроявленной хроматограмме черным карандашом отмечают участок отложения хлорофоса и вырезают его. Отрезанный кусочек бумаги разрезают на мелкие полоски, помещают их в пробирку с этиловым спиртом,, нагревают до 35° на водяной бане и экстрагируют из них ХФ. Экстракт количественно переносят в стаканчик для полярографи-рования, упаривают его досуха, прибавляют в качестве фона 3 мл; 0,01 н. водного раствора тетраметиламмонийбромида или 0,01 н. раствора хлорида лития и полярографируют.

Далее в электролизер прибавляют 0,1 или 0,2 мл стандартного-раствора с известным содержанием ХФ и снова полярографируют. По разности между высотой волны для испытуемого раствора-+ + стандарт и высотой волны испытуемого раствора находят высоту волны для проявленного стандарта.

Полярографирование проводят на полярографе любой маркш с выносным анодом, в качестве которого используют насыщенный каломельный электрод (потенциал его условно принимают за нуль). Анод с электролизером соединяют при помощи агар-агаро-вого ключа, приготовленного на растворе хлористого калия. Кислород из раствора удаляют пропусканием водорода в течение 20 мин. Водород получают электролизом 28—30%-ного раствора едкого-натра.

Измерение ведут при чувствительности гальванометра = или ¹ /20- Волна ХФ на фоне 0,01 н. раствора тетраметиламмонийбромида появляется при потенциале 0,72 вольта.

Содержание хлорофоса в мг/кг пробы рассчитывают по формуле:

X__h    ■    а

” (Л' — А) ■ Р ’

где

h — высота волны исследуемого раствора, мм;

h' — высота волны исследуемого раствора + стандартный раствор, мм;

а — количество ХФ, прибавленного со стандартным раствором, мкг;

Р — навеска растительной пробы, г.

Определение ХФ в яблоках и картофеле может быть проведено

S

полярографическим методом без предварительного хроматографического выделения его.

При полярографическом определении ХФ его извлекают из растительных проб хлороформом, растворитель отгоняют почти досуха, а следы растворителя удаляют теплым воздухом.

Из сухого остатка ХФ извлекают водным 0,01 н. раствором тет-раметиламмонийбромида или раствором 0,01 н. хлорида лития.

Раствор фильтруют через маленький бумажный фильтр. Фильтрат собирают и полярографируют, как описано выше.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ МЕТАФОСА И ТИОФОСА В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ

Принцип метода⁶

Метод определения метафоса и тиофоса в растительных пище-вых продуктах основан на экстракции препарата серным эфиром; отделении п-нитрофенола, могущего присутствовать в экстракте, путем промывания экстракта водным раствором едкой щелочи; щелочном гидролизе препарата с последующим колориметрическим определением в виде п-нитрофенолята.

Чувствительность определения — 0,05 мг/кг.

Реактивы и растворы

Стандартный раствор п-нитрофенола. 0,02 г п-нитрофенола (х. ч.) растворяют в мерной колбе на 100 мл дистиллированной водой. 10 мл этого раствора переносят в мерную колбу на 100 мл и доводят объем жидкости водой до метки. Стандартный раствор содержит 0,02 мг п-нитрофенола в 1 мл. Готовят его непосредственно перед употреблением.

Пергидроль, 30%-ный, х. ч.

Эфир серный, х. ч.

Натрий едкий, х. ч., 0,5%-«ый и 20%-ный водные растворы.

Натрий сернокислый безводный, х. ч.

Осветляющая смесь. Ее готовят путем смешения 45 г хлористого натрия и 5 г углекислого натрия. Реактивы хорошо перемешивают в ступке.

Приборы и посуда

Прибор для гидролиза — колба емкостью 50 мл с пришлифованным обратным холодильником.

Делительная воронка емкостью 250 мл.

Пробирки колориметрические.

Пипетки, мерные колбы на 100 мл, конические колбы и т. п.

Баня водяная.

Стеклянные фильтры № 1. Трубки резиновые, зажимы. Овощная терка.

Описание определения

150—200 г исследуемого продукта измельчают и экстрагируют в делительной воронке серным эфиром в течение часа.

Эфирную вытяжку отгоняют до объема 50—75 мл и переносят в сухую делительную воронку. Приливают 25 мл 0,5%-ного раствора едкого натра и энергично встряхивают 3—4 минуты. После разделения жидкостей отделяют водный слой и вновь промывают эфирный экстракт 0,5%-ным раствором едкого натра до тех пор, пока щелочной слой не будет бесцветным. К оставшемуся в делительной воронке эфирному раствору прибавляют 7—10 г безводного сернокислого натрия, несколько раз встряхивают и оставляют на 5—10 минут. После этого количественно переносят эфирный раствор в колбу прибора для гидролиза и медленно испаряют эфир на водяной бане досуха. К сухому остатку прибавляют 4—5 мл пергидроля, присоединяют колбу к холодильнику и кипятят до тех пор, пока жидкость в колбе не обесцветится. Колбу охлаждают, вносят по каплям 2 мл 20%-ного раствора едкого натра и осторожно нагревают с обратным холодильником 20 минут. В присутствии тиофоса (метафоса) раствор окрашивается в желтый цвет. После охлаждения вносят осветляющую смесь в таком количестве, чтобы она выпала в осадок. Жидкость несколько раз встряхивают и фильтруют через стеклянный фильтр № 1 в колориметрическую пробирку. Фильтрат промывают дистиллированной водой, доводят объем фильтрата до 10 мл. Через 20 минут сравнивают интенсивность окраски со стандартными растворами.

Стандартную шкалу готовят параллельно с пробой.

В ряд колориметрических пробирок вносят 0; 0,1; 0,2; 0,3; 1 мл стандартного раствора п-нитрофенола. Объем жидкости во всех пробирках доводят до 8 мл, прибавляют по 2 мл 20%-ного раствора едкого натра и оставляют на 20 минут. Шкала устойчива в течение 3—5 дней.

Можно пользоваться фотоколориметром любой системы. В этом случае по полученной серии стандартов строят калибровочный график, используя для измерений синий светофильтр.

Расчет анализа проводят по формуле:

V G • К

где

X — содержание тиофоса или метафоса в анализируемой пробе, мг/кг;

7

G — количество п-нитрофенола, найденное по стандартной шкале или калибровочному графику;

К — коэффициент пересчета п-нитрофенола, равный для мета-фоса 1,89 и для тиофоса 2,09;

Р — навеска пробы, г.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАРБОФОСА, МЕТИЛМЕРКАПТОФОСА, ПРЕПАРАТА М-81 И ТИОФОСА В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ

КАРБОФОС (малатион)

(1,2-дикарбэтоксиэтилдиметилдитиофосфат).

СН₃0

> Р - S — СН-СООС₂Н₆ СН₃Сг    I    Мол.    вес    330,37

СН₂СООС₂Н₈

Химически чистый дикарбэтоксиэтилдиметилдитиофосфат представляет собой маслянистую бесцветную жидкость со слабым неприятным запахом. Хорошо растворяется в органических растворителях, в воде нерастворим. Выпускаемый промышленностью препарат — густая жидкость от светло-желтого до темно-коричневого цвета с сильным неприятным запахом.

МЕТИЛМЕРКАПТОФОС (метилсистокс, метилдеметон)

(p-меркаптоэтилдиметилтиофосфат).

сн₃0_ч у⁵

Тионовый изомер    J>    Р — OCH₂CH₂SC₂H₅

CH_SCK

.    СН₃О_ч

Тиоловыи изомер \ Р - SCH₂CH₂SC₂H₅

СНзСК    Мол.    вес    230,29

Метилмеркаптофос — слегка окрашенная жидкость со специфическим неприятным запахом. Хорошо растворим в органических растворителях. Растворимость в воде тионового изомера — 0,03%, тиолового — 0,3%.

ПРЕПАРАТ М-81 (интратион) (0,0-диметил-р-этилмеркаптоэтилдитиофосфат).

СН₃Оч />

>Р- SCH₂CH₂SC₂H₆ СНоСК

1

При определении особое внимание следует обращать на температуру водяной бани при отгонке хлороформа и на начальную температуру парафиновой бани. При определении метилмеркаптофоса температура водяной бани при стгонке хлороформа не должна быть выше 65°. Вследствие летучести препарата повышение температуры водяной бани ведет к снижению процента определения до 40—45. Так же снижаются результаты определения, если начальная температура парафиновой бани выше 70°.

2¹

2

Разработан Н.-и. институтом защиты растений юго-западных районов Молдавской ССР (Л. М. Фукельман).

13

3

Разработан Институтом питания АМН СССР (3. Н. Богомолова).

4

Метод разработан ВНИИЭВ (А. В. Николаев, Л. И. Устименко).

20

5

Разработан Украинским н.-и. институтом защиты растений (Е. С. Косматый, И. Б. Миронова, Л. Т. Бугаенко).

3;

6

Разработан Киевским н.-и. институтом гигиены питания М3 УССР (М. А. КлИсеико).

6