МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР

ГЛАВНОЕ УПРАВЛЕНИЕ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКОЙ ПОМОЩИ ДЕТЯМ И МАТЕРЯМ

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОМУ КОНТРОЛЮ ГРУДНОГО МОЛОКА

г. Москва, 1984 г.

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР

ГЛАВНОЕ унравиеше ЛВЧЕБНО-ПРОШАШЧЕСКОЙ ПОМОЩИ ДЕТЯМ И МАТЕРЯМ

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

До бактериологическому контролю грудного молока

г.Москва, 1984 г.

8

они могут бк^ь окрашенными в красный цвет о на лчием металлического блеска или без него (лактозоположительные), бесцветными (лактозоотрицательными), могут приобретать розовый или сероватый оттенок с более или менгз выраженным темным центром.

Диаметр и окраска колоний могут варьировать не только в зависимости от родовой принадлежности, но и от массивности роста.

В среднем диаметн колоний составляет 1-2 мм, мелкие росинчатые

/ ¹ бесцветные колонии характерны для /О'Struct¹ cnXcxoto£UUti^ ^±

Колонии рода Sf    ,    нероящихся    представителей    рода

9ъо£са$ , родов    ,    $а1тапл£2&    чаще    имеют    неболь

шие размеры; 9'ьс£ша гтига1Ш$ъ 9u>£tuS киС^агсз дают вуалеобразкый рост, а представители родов X&fcU&'a' и EjvitxcScict&t/ чаще образуют сочные, слизистые розовые колоний диаметром 2-3 мм. По две колонии каждой разновидности засевают обычным порядком в пробирки с комбинизованнымь. средами (Клиглера, Олькеницкого или трехсахарную среду, модифицированную в Московской городской СЭС). При использовании среды Клиглера одновременно делают посев тех же колоний в среду с мочевиной по Преусу или в среду Кристенсена с мочевиной. При использовании комбинированных сред в состав которых входит мочевина, дополнительный посев в названные среды с мочевиной также желателен, поскольку дает более надежные результаты, в частности при из;, гении представителе!' рода JZi&ltitUJL' . Среды Клиглера, Олькеш цсого и Московской горСЭС содержат реагенты, необходимые для выявления продукции сероводорода.

ВИД 9&iUtofTUHUis cwtugiricscu На чашках со средой Эндо 9s агхи^тсяа¹ растет в виде мелких бесцветных колоний, отличающихся от представителей семей ства £nd&bo£ad,eAAcaxa- положительной цитохромоксидазной активностью.

э

В случае наличия подобных колоний их обвивают на скошенный питательный агар. Пробирки с отсея^шми культурами помещают на 18-20 час. при 37°С.

Третий-четвертый день

РОД    о еа t^uig

У отсеянных на скошенный питательный агар культур стафпо-кокка в первую очередь изучают морфологию и отношение к окраске по Граму. При наличии в мазках грамполсиштельных кокков правил'-но-округлой формы,располагающихся гроздьями, кучками неправильной Форш шш тетрадами, у них определягт плазмокоагулирупцую активность в реакции коагуляции плазмы (РПК). Если культура дает пигментированный _voct, типичную морфологию, полспительную деци^о-вителлазную реакцию и РПК, она идентифицируется как CUl ttug и не требует дальнейшего изучения. Если культура не обладает децитовителлазной активностью, но коагулирует плазму, то при наличии у нее шотиента и типичной морфолггии она может быть также идентифицирована как

Если культура обладает лицитовите олазной активностью, но не коагулирует плазму, необходимо повторно поставить РЧС, В случае повторного отрицателы )го ;ззультата РПК необходимо определить наличие 1-2 дополнительных видовых признаков; продукцию ДНК-азы, фибринолизина, хлопьеобразувдего фактора, ферментацию маннита в аэробных условиях, лизоцимную активность (бактериологу предоставляется право выбора теста). Для ускорения получения отчета повторную постановку РПК и определение других видов их признаков можно проводить параллельно. Культура не коагулирующая плазму, но при типичной морфологии обладающая 2-3 перечисленными свойствами, может быть вдентифицирована гдк S, u.U'Xz+ig (коагулазонегативный вариант).

10

В том c.jy^ae, если культура н относится к виду £. CUVUUS, можно думать о принадлежности ее к £ e^dz^mtdM или £. ^yi 'tofiiiyti си $. В этом случае ставят реакции, позволяющие провести межвидовую иденти^.исацию двух указанных видов; опреде-ляют способность микроба ферментировать маннит в аэробных уело* виях, продуцировать фаофатазу и определяют его отношение к ново-биоцину (см.приложение). Если исследуемая культура не ферментирует маннит в аэробных условиях, обладает фосфатазой и чувствительна к новобиоцину, то ее следует отнести к S*. tfU cic^/rudxS.

Если исследуемая культура ферментирует маннит в аэробных условиях, не обладаем фосфатазой и устойчива к новобиоцину, то она относится к £.    культура    отличается    от типичных пред

ставителей этих видов стафилококков полному свойству, она может рассматриваться как вариант того же вида.

Ш1ЕЙСТВ0 £siсеял Предварительная идентификация представителей семейства £д^г^^а/{^^си^4епроводится по результатам посева в комбинированные углеводные среды и среды с мочевиной (по Преусу или Кристенсену).

Микробы семейства    на    поверхности

скошенной части комбинированной среда влажн й, однородный опалесцирующий рост без пигментообразования (зе исключением некоторых представителей рода StxxaiLcu , образующих розово-красный пигмент). Облигатнш свойством всех представителей этого семейотва является ферментация глюкозы с образованием кислых продуктов, что проявляется в изменении окраски столбика среда (цвет зависит от используемого в среде индикатора, а также интенсивности кисло-тообразования). Окраска столбика среда не меняется, если выделены такие представители семейства Zntewdou&vtQ. teat, которые

II

одновременно о ферментацией глюкозы способны гидролизовать мочевину (на среда Олькеницкого, на трс.ссахарной среде в модификации МосгорСЭС). В этих случаях кислые продукты ферментации г.-£>козы нейтрализуются щелочными продуктами гидролиза мочевины.

Неизменная окраска столбика среда, не содержащей мочевины (Клиглере\ свидетельствует о выделении микробов, не относящихся к семейству L/UxёсиЫчл с '<ie. Нар ту оценкой кислотолбразования в столбике учитывают наличие разрывов среды (отслаивания ее от стенок или дна пробирки), что говорит о ферментации глюкозы с образованием газообразных продуктов    и    др.

(см.табл.1).    Cd.xrP,aU>v_:

Почернение, появляющиеся в средней или в нижней части столбика, имеет место при бразовании выделенным микробом сероводорода, что свойственно представителям родов SclZ/tu ъсССа^ СНх&ёах^&с,

£d 'LCt' >4    ituLgcttis.    xsZaict    ,

Способность ферментировать лактозу (или сахарозу в трех-сахарной среде) оценивают по изменению окраски скошенной части комбинированной среда. Обычно лак'т'озоположительными бывают представители родов £s Ых tC'C > Хёс.2 $ с а 62 сь % Oot %о ё' > Ifvtxacicuit&x • Ферментация лактозы чаще коррелирует с ферментацией сахарозы. В неясных случаях следует проверить эти свойства путем посева культур в средь Гисса с соответствующими углеводами.

Таким образом, на третий день исследований по результатам посева в комбинированную среду с мочевиной или (лучше) в комбинированную среду и среду с мочевиной по Преуоу (или по Кристенсену) возможен-учет четырех признаков, характеризующих выделенную культуру. После регистрации результатов и микроскопии окрашенных по Граму мазков (предст.ивители семейства i-a^x-wiaeUxcictuX' -грамотрицательные, бесспоровые юлкие палочки) возможно предпо

ложительное заключение о родогой принадлежности выделенных микро-

12

бов (см. таб~. Т)- Для идентификации родовых rjynn семейства LsvU юваЖсга^ха.с, * сходных но указанным выше признакам, используют дополнительные тесты, минимально необходимые для установления родовой принадлежности i ткробов из семейства LnMxc>Ba<^tQAiiia^ (см.нижнюю часть табл. I). Посев в среду с мочевиной (по Преусу или по Кристенсену) не повторяют, если он был использован на 1-ом этапе).

В случае выделения лактозоотрицательной, безгазовой культуры, не гидролизующее мочевины и не образующей сероводород к числу дополнительных родовых тестов следует добавить ацетатный (для идентификации представителей рода tscM lochia* и представителей рода SJiipUCcL ). Ear* по предварительным данным не исключена принадлежность культуры к роду Лсфиа wmjetzi/ua целесообразно сделать посев в 2 пробирки со средой Кларка, одну из которых оставить до следующего дня при комнатной температуре (см.табл.1)^х.

Дополнительным признаком в пользу выделения Jtaenia может быть особенно бурное образование каталазы (проба с 13% Н2О2 на предметном стекле) в сравнении с представителями других родов семейства    .

Также на четвертый день учитывают результаты посева на нитратную среду Симонса, индолообразование, тест на фенилаланин-дезаминазу, гидролиз мочевины (в среде Преуса или Кристенсена), ставят реакцию с метиловым красным и реакцию Фогеса-Проскауэра с культурой на среде Кларка, выращенной при 37°С, а в с^:учае предположения о выделении Лй/sioCL и с культурой, выращенной при комнатной температуре. Для представителей рода ЛсфпсО, , выращенных i 22°С характерна отрицательная реакция с метиловым красным, в отличие от положительной реакции, которая отмечается о культурами, выращенными при 37°С.

Ч£ ■    ¹

дшшыми^Тв пр£^^енй?^сп^°^{азБ0ЛИТЬ в соответствии с} указаниями.

13

Тест на днзиндекарбоксилазу при отрицательном результате (желтое окрашивание в опытной и koi рольной пробирке) оставляют, залив стерильным вазелиновым маслом, для дальнейшей инку идеи (до 4-х суток)* При отсутствии роста и изменения окре ,ки среда Симонса или ацетатной среды окончательный учет откладывают еще ша сутки.

Определение по минимальному набору дифференцирующих тестов четырех родовых труш(&с/л tec/ua,    Лп^/ий    StmatCc^\

каждая из которых представлена согласно классификации Берги (русский перевод УШ издания, 1980г.) одним видом, позволяет одновременно сделать заключение о виде выделенной кулз ?ypt Ssc/Ubltbu ooli, idurCi t iU i<iccil' ijixdLfa, Э-l CiL tUvu*(^cl, Sex-uv /лав^^/^Хс^од^зргают на этом этапе серологическому изучению о поливалентными и OK-групповыми агглютипрующими сыворотками. При положительных результатах (пробах на стекле) ставят два ряда развернутой реакции агглютинации с живой (для выявления К-анти-гена) и кипяченой в течение I часа культурой (для определения 0-грушювой принадлежности) в соответствии с общеизвестными рекомендациями.

вдентифицируют по биохимическим реакциям в соответствие с табл. Наличие красного и розового пигмента подтверждает принадлежность культуры к виду S. ma^tctsc^ns , но его отсутствие не исключает такого же заключения. Серологическую характеристику указанных бактерий не дают, ввиду угсутствия производственного выпуска соответствующих сывороток.

Ответы о выделении представителей родов    Л&^/и'а

" ^{в по}^^{авляш1ем} большинстве случаев могуть быть даны на 1втвертый дг \ъ. В табл.1 приведены биохимические реакции одного вида из рода    ydbisttiia    Идентифика

ции этого вида (также в типичзшх случаях) заканчиваются на

14

четвертый дег’>. Определение К-аятиг^на пока еще не обеспечено производственным выпуском антикапсульных сывороток,

В этот же день культуры, относимые по совокупности биохимических реакций к родам ‘ cuj Sa£//u^}Cilгоёа.Аи>1щ испытывают в реакциях с родовыми агглютинирующими сыворотками. Одновременно продолжается биохимическое изучение их в дополнительных тестах п^г зволяющих провести внутриродовую идентификацию в семействе £vi(см.табл.2),

В связи с неразработанностью внутриродовой идентификации liM^itvCcb ответ по этой группе ограничивают определением рода.

£*ИД    ЛчС U &Q' *Ги {ИХ Cl $    OCX иф I ПЛ^}£Со

На третий день исследования изучают морфологию и отношение к окраоке по Граму культур, подозрительных на принадлежность к виду ?Ltu<Lcmcnu± acting моиВ случае обнаружения грамотри-цательной цитохромоксидазоположительной культуры, усилия бактериолога должны быть направлены на выявление пигмента пиоционина.

Для этой цели исследуемую культуру засевают на чашку Петри со специальными средами (питательный агар с глицерином или со "средой А") и ставят в термостат на 18-20 час при 37°С. Если через сутки изучаемая культура дает пигментированный рост, обладающий запахом фиалок, и "радужным" лизисом, то mqjl.o дать ответ о выделении Jsiiutorrwfuif ae^/uupu/uⁱs^_l Для подтверждения наличия пигмента пиоциаяина ставят пробу с хлороформом. Появление синего окрашивания подтверждает наличие шюционина. Определенная часть ?£ Си, uufyiwsa не образует пиоциаяина. Для подтверждения принадлежности безпигментных вариантов к виду Л. CUtU^lflc&CL следует поставить ряд дополнительных тестов. Если изучаемая культура дает "радужный" лизис, растет при 7^42°С и при рИ-5,6 не растет на 6,5# концентрации JF&CC и окисляет глюкозу, то

JS

на 5-е сутки может быть выдано заключение о выделении Л CU/Xiifyi-

яма.

Пятый день.

семейство

Учитывая биохимические .зты внутриродовоЧ идентификации (по табл.2), при необходимости повторно оценивают тест на лизин-декарбоксилазу, резуль.аты посева на среду Симонса, ацетатную среду (посевы третьего дня исследования). В случае постановки развернутых радов агглютинации о £ CoZo учитывают результаты.

На основании всей совокупности использованных тестов делают заключение о родовой и видовой принадлежности выделенных культур, а при изучении серологических характеристик о принадлежности к той или иной С-серогруппе или серовару².

16

ШТАТШЧЫЕ СРЕДИ, МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ И ИДЖ^ИКМДОИ ВШРГЮРГАЮВМОВ ИЗ ПОЛНОГО МОЛОКА

I. ГОРГ/ТОПЬНЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ ВЬЩЕЖНИЯ СТАФИЛОКОККОВ

^лточно-солевой_ага£ СЖСА). К растопленному и остуженному до 45-50°С питательному агару (ПА) с 7,5? MlCC (pH 7,2-7,4) добавляют 2Q? по объему стерильной желточной взвеси (1 желток куриного яйца на 200 мл физиологического раствора)* Для лучшего эмульгирования желательно использовать колбы со стеклянными бусами. После тщательного перемешивания среду разливают в стерильные чашки Петри. ЖСА можно хранить в холодильнике в течение нескольких дней.

Молодо-солевой агар_(МСА)* К растопленному и остуженному до 45-50°С ПА с 7,5?    7,2-7,4)    добавляют IQ? по объему

стерильного молока. Тщательно перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри. Среду модно хранить в холодильнике несколько дней*

2. МЕТОДЫ ШШНТ®ИКАШИ РОДА

Проба на_каталазу. На предметное стекло наносят кашпо 3? перекиси водорода и эмульгируют в ней исследуемую культуру. Образование пузырьков газа свидетельствует о наличии каталазной активности.

Способность роста при 45°С проверяют на ПА, разлитом в чашки Петри. По^ев испытуемых культур проводят штрихами на сек-торг чашки. Петля не должна содержать большого количества культуры, поэтому для посева рекомендуется использовать взвесь агаровой культуры в физиологическом растворе. Учет чеоез 24-48 часов инкубации при 45°С. В зависимости от интенсивности роста результаты оцениваются +, + и -•

17

Способность роста на_среде_с IOJK    изучают    на    плотной

питательной среде с    Посев    и    учет проводят так же,

как и при постановке предыдущего теста.

3. МЕТОДЫ ВДЕНТИ&ИКАЩИ видов

Реакция плазмокоагудяции ставится в соответствии с "Наставлением по применению плазмы кроличьей нитратной, выпускаемой предприятием по производству бактерийных препаратов Белорусского ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии".

Определение ДНК-азной активности^ К растопленному 1,55? ПА (pH 8,6) добавляют ДНК из расчета 2 мг на I мл среды. ДНК предварительно растворяют в 5 мл стерильной дистиллированной воды, к которой добавляют несколько капель 2 И. Все тщательно перемешивается и прогревается 1,5 часа в кипящей водяной бане (или стерилизуют текучим паром 30 минут). Перед разливом в чашки добавляют к среде С&С&2 из расчета 0,8 мг на I мл среды (1,2 мл 105? стерильного раствора СаС&2 ^на *50 мл агара). Посев культур производят на поверхность подсохшей среды бляшками. После 18-20 часовой инкубации при 37°С поверхность среды орошают 5-7 мл I иЦФ * выдерживают 5-10 минут, сливают кислоту и учитывают результаты. Полимерная ДНК образу т водимый на глаз преципитат. Вокруг культур, образующих ДНК-азу, - прозрачные зоны. Можно орошать посеви 3l!r1Cl' с добавлением метиленовой сини. Это дает возможность более быстрого и отчетливого чтения результатов.

Модификация метода_определения_^1ЩК-азнрй_активности (метод А.А.Т^ояшкина). В реакции используется натриевая соль ДНК производства Олайнского завода химреактивов Латвийской ССР. Предварительно готовят рабочий раствор ДНК. С этой целью к 100 мг ДНК добавляют 10 мл дистиллированной воды, 0,5 мл 0,2 !\f раствора f/isОН, Для лучшего растворения ДНК пробирку

Методические рекомендации подготовлены оотрудниками:

Центрального научно-иооледовательокого инотитута эдидемио-логил ь1инздрава СССР (директор Покровский В.И.).

Мооковокого научно-иооледовательокого инотитута эпидемиологии и микробиологии ш. .Г.Н.Габричевокого Минздрава РСФСР, (директор Никитин Д.П),

Центрального ордена Ленина инотитута усовершенствования врачей (ректор Ковригина М.Д),

Моокотокого ордена Трудового Краоного Знамени НИИ педиатрии и детокой хирургии Минздрава РСФСР (директор Вельтищев Ю,Е),

Главным управлением здравоохранения Моогориополкома.

Министерствам здравоохранения Сопных респуб лик разрешается

размножить методические рекомендации в необходимых количествах.

18

нагревают на водяной бане, либо оставляют на ночь ври 37°С.

I мл рабочего раствора ДНК добавляют к 10 мл расплавленного 2% питательного агара (рН=7,2-7,4), смесь тщательно перемеаг^вают. стерилизуют текучим пяром в течение 30 минут или при 0,5 атм -20 мин. Срок хранения 1-2 месяца. При постановке опыта столбики агара с ДНК растапливают, добавляют 0,1 мл стерильного 10% раствора CaC^g, перемешивают и выливают на ^лой хорошо подсушенного питательного агара, предварительно разлитого в чашш; Петри, снова подсушивают и засевают. Методика посева п учета результатов та же, что и в классической методике.

Фибринолитическая активность^ Стерильную человеческую плазму (из свежей крови с антикоагулянтом) добавляют к расплавленному 2% питательному агару в концентрации I5-2U*, тщательно перемешивают и прогревают в течение 4-5 минут на водяной бане при 65-70° до помутнения среды, обусловленного свертыванием фибрина. Среду разливают в чашки и после ее застывания :юевают исследуемые культуры бляшками. Результаты учитываются через 24 часа инкубирования посевов при 37°С по образованию вокруг бляшек прозрачных зон, обусловленных лизином фибрина.

Реакция хл с\ ^образования. На предметное стекло наносят каплю цитратной глазмы человека или кролика и растирают в ней исследуемую культуру. Параллельно для контроля культуру растирают также в кашг, физиологического раствора. При наличии в контроле равномерной ./ути, а в плазме - хлопьев, реакцию считают положительной. Хлоптеобраэование можно также наблюдать при постановке реакции ко-агу ляции,

^зод1тшая_активность. К 1,5-2$ питательному агару (прозрачному) добавляют убитую 15-минутным кипячением куль туру

из расчета 2 млрд клеток на I мл агара. После тщательного перемешивания среду разливают в чашки, подсушивают

МЕТОДИЧЬоТШЕ РЕКОМВДАВДИ

ПО БАКТЕРИОЛОгаЧЕСКОМУ КОНТРОЛЮ ГРУДНОГО МОЛОКА

В настоящее время в связи с высоким уровнем заболеваемости женщин маститом в послеродовом периоде повышается возможность передачи возбудителя инфекции ребенку с грудным молоком. Этиология маститов может быть различной, однако, ведущее значение до настоящего времени остается за auxtusk

В ряде случаев после проведения соответствующего лечения при сохранении у женщины лактации встает вопрос о возможности возобновления грудного вскармливания. Решение этого вопроса возможно лишь после проведение бактериологического исследования грудного молока, позволяющего установить количественный и качественный состав выделенных микроорганизмов.

Кроме того, в последние года показана возможность выделения £.    и S, e^cL^x/ruiUs ^в массивном количеств из

грудного молока практически здоровых женщин, чт^ может иметь значение при отборе доноров. Эпидемиологическая оценка этому явлению до настоящего времени не дана, J одной стороны, нельзя исключить того обстоятельства, что вскармливание ребенка молоком, содержащим стафилококки, может привести к возникновению у него различных, и, в первую очередь, кишечных проявпений стафилококковой инфекции. С другой стороны, далеко не во всех

2

случаях обнаружение в молоке этих микроорганиг юв является показанием к отмене грудного вскармливания.

Общеизвестно, что в последние года в этиологии послеродовых инфекционных заболеваний значительно возросла роль так называемых условно-патогенных представителей семейства

( S^wfirbococcCuctat, ?uudom&'Uida'Ceu^ (эндометрит, пиелонефрит, флебит, кишечные заболевания). Принципиальная возможность выделения представителей этих семейств с грудным молоком показана работами отечественных и зарубежных исследователей.

Все сказанное свидетельствует о необходимости введения критериев оценки эгощемиологичес: эй опасности микробной обсеменен-яости грудного молока женщин с целью определения противопоказаний к возможности грудного вскармливания ребенка.

Настоящие методические указания предназначены для врачей -бактериологов санитарно-эпидемиологических станция и лечебнопрофилактических учреждений, педиатров и хирургов.

Издание данного документа диктуется необходимостью унгфици-ровать бактериологические методы исследования грудного молока выработать единые подходы к оценке* полученных данных.

ОБСЛВДШШ КОНТИНГЕНТЫ

Обязательному бактериологическому контролю подлежит груд-ноем молоко:

1,    Доноров грудного молока. Обследование проводится однократно перед зачислением женщин в группу доноров. Предварите тьно женщина обязана пройти тслнический осмотр у врача женской консультации.

2.    Женщин, переболевших любой формой мастита, а также различными инфекционно-воспалительными заболеваниями с локализацией на молочной железе и вне ее (трещины, сосков, эндо-

метрит, флебит, острые кишечные заболевания и др») после клинического выздоровления.

3. Женщин, имеющих детей первых двух месяцев жизни с упорными диареями и тяжелыми формами гнойно-септических заболеваний (сепсис, деструктивная пневмония, остеомиелит, абсцесс, псевдо-фурункуле^, флетоны).

Для проведения бактериологичес on исследования грудною молока женщине выдается направление на бланке детского лечебного учреждения, в котором указываются: I. фамилия, имя, отчество; 2. Диагноз матери (в случае ее болезни); 3. диагноз ребенка (в случае его болезни); 4. да.а выздоровлен. л мь..ери;

5. цель исследования.

МЕТОД ЗАБОРА МОЛОКА

Отбор проб грудного молока производится в базовой поликлинике или больнице в специально выделенном помещении, в котором должны быть лабораторный стол, холодильник, умывальник, бактерицидные лампы.

В день обследования утром женщина принимает душ и надевает чистое белье. Перед сцеживанием молока она моет руки с мылом, тщательно обрабатывает соски и околососковую область молочных желез отдельными ват.лши тампонами, смоченными 70° этиловым спиртом (каждая железа обрабатывается отдельным тампоном) Молоко из правой и левой мо-^чной желез исследуется также отдельно. Перше 5-10 ш сцеженного молока выливаются, последующие 3-4 мл оцеживаются в стерильные пробирки. Пробирки закрывают отерильными ватными пробками и в таком виде доставляют в лаборатории. Следует стремиться к тому, чтобы от момента сцеживания молока до начала его исследования проходило не более 3 часов. В течение этого времени пробирки хранятся в холодильнике

4

Молоко, сцеженное накануне, исследованию не подлежит. Доставленное в лабораторию молоко засевают на ряд селективных питательных сред (см. раздел схема бактериологического исследования).

ВЫДАЧА ОТВЕТА

В ответе необходимо указать:

1,    Вид выделенных микробов;

2,    массивность обсеменения ими молока, взятого отдельно

из правой и ^вой грудной железы (немассивный рост - менее 250 КОЕ в I мл_х массивный ро с    50_и_б о л е е_К0Е_в_1__мл).

(КОЕ - колониеобразушая единит т).

Рекомендации по всгармливанию в ответе бактериолога не даются. Окончательный ответ выдается на 4-5 день.

По просьбе педиатра предварительно может быть ввдан ориентировочный ответ на 2-3 сутки.

Ориентировочный ответ выдается после определения массив-гости и характера роста на дифференциально-диагностически!:: средах; определения морфологии, тинкториальных свойств, постановки каталазного и щтохромоксидазното тестов.

ОЦЕНКА ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ ВРАЧОМ-ПЕЩИАТРОМ I, ^ля^дон оров^грудн о го молока^

Женщина не может быть донором:

а)    при обнаружении массивного роста £. оигсим ;

б)    при повторном выделении даже единичных колоний представителей с ;мейства:

avucyincsa-.    ^{иливида}

2^ Для женщин^ переболевших любой формой мастита, а также различными инфекционно-воспалительными заболеваниями с лока-

5

лщадией_на молопной_делезе или вне ^е^Стршщны сосков^ эндометрии флебит_А острые_ки^ечше з; ^олеваяия, _пие л онефрит^, имеющих ^opoBHxj^eTeft^

Кормить нельзя в следующих случаях:

а)    при обнаружении в молоке массивного роста X CLUxcus

б)    ^ри повторном выделении даже единичных колоний представителей семейства    -uu    cte^    или вида 3$га,М)/ти>-

ms а£хц^ги>б<Ъ'

3._Дяя_матередети_которых_больны гаойно-септичесетья ^заболеваыдгош^или^диареяьш различной этиологии*

При отсутствии у ребенка кише^-лых поркений : эрш ь нельзя^

а)    при обнаружении в молоке массивного роста S, (Шхш$

б)    при повторном выделении даже единичках колоний представителей семейства    или    в^да    Уши&апиншё

При наличии у ребенка кишечных поражений кормить нельзя^

а)    при обнаружении в молоке массивного роста стафилококков любого вида$

б)    при повторном выделении единичных колоний представите

лей семейства inivtoc и cU'iAcxtii или вида !?stactvгти>/utsf QJtMtyinvsa,-

Если результаты анализов из правой и левой молочных желез отличаются, то тактика врача определяется данными худших показателей.

Следует иметь в виду, что окончательно решать вопрос о возможности грудного вскармливания в каждом конкретном случае, выходящем за рамки излаженного выше, имеет право педиатр.

Для уменьшения обоемененности молока микробами из рода Ям^Ау&соесий матери следует рекомендовать прием 1-% спиртового раствора хлорофиллипта по 25-30 кап. 3 раза в день в

6

течение 10³J⁴ дней с последующим повторным бактериологическим анализом молока. Дети эа этот период переводятся на искусственное вскармливание в соответствии с возрастом, а матери рекомендуется сцеживать молоко. После пов орного анализа молока, который проводится через 10-14 дней, вновь решается вопрос о возможности возобновления грудного вскармливания в соответствии с критериями, изложеннг'ш вше.

На период прекращения кормления грудью (10-14 дней), по Усмотоению педиатра, можно рекомендовать материнское пастеризованное молоко.

Молоко пастеризуют в молочны . бутылочках емкостью не иолее 200,0 мл предварительно прокипяченных в течение 15-ти

Бутылочки с налитым в них грудным молоком закрывают стерильными ватными пробочками и помещают в кастрюлю с водой, (уровень вода в кастрюле должен быть выше уровня молока в бутылочке). ®°ДУ нагревают до кипения и кипятят в течение 5 минут. Бутылочки с волоком после пастеризации остужают и хранят в холодильни е ври +4°С не более суток. Перед кормлением молоко подогревает на Водяной бане.

СХЕМА БАКШЭДОДОгаЧЕСЖОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ГРУДНОГО МОЛОКА Первый день

Исследуемые пробы молока в количеств^ 0,2 мл засевают на селективные солевые среды (желточно-солевой или молочно-солевой вгар) для выделе³ля микробов рода    среду

Эядо для выделения представителей семейства £п£&соваиб1ьхАгеал' и ^яда 7$.    ³.

7

Чашки Петри с засеянным материалом помещают на 18-20 часов в термостат при 37°С.

Второй день.

Просмотр чашек, фиксация журнале характера и массивности роста колоний. Производится подсчет колоний на чашке. Число выросших колоний умножает .я на 5 (при посеве 0,2 мл), т.к. массивность обсеменения выражаете,. количеством колониеобразуюаил единиц (КОЕ) в 1,0 мл исследуемого молока. В случае наличия в 1,0 мл молока 250 КОЕ и более микробов обсемененность характеризуется как массивная, в случае менее 250 КОЕ - как немассивная. При неоднородном росте регистрируется каждая разновидность колоний отдельно на каждой дифференциально-диагностической среде.

РОД    cities

Колонии стафилококков на солевых средах круглые, слегка выпуклые, маслянистые, блестящие, имеют размеры от I до 3 мм в диаметре.

£    в    большинстве    случаев    образует    золотистый

пигмент различной интенсивности, но мс зт не иметь пигмента,

£ epidtxmtixis и £ $ufi\vfdiytLcu$ чаще образуют беоциотные или белые колонии. На желточне-соливом агаре значительная часть штаммов Ss CUioMi* образус радужный венчик вокруг колоний (положительная лецитовктеллазная реакция). Для дальнейшего исследования пересевают на ског энный агар не менее 2-х колоний каждого вида. Пробирки помещают в термостат при 37°С на 18-20 часов.

СЕМЕЙСТВО Zrd^w&cU't'lestCLttat Колонии семейстта    среде    Эндо выпук

лые с правильными очертаниями к*/га более или менее мутные;

1

Такие чашки необходимо ттополнительно инкубировать при комнатной температуре еще 18-20 часов.

2

При несоответствии совокупности биохимических характеристик выделенных культур данным, приведенным в таблицах I и 2, проверяют чистоту культуры, а также ее принадлежность к се-мейству Л^и^обаФгасеасъ таете на цитохромокевдаэу (лучше с индикаторными буыашками С Б).

3

При подозрении на возможность обнаружения в молоке представителей других семейств микроорганизмов производится посев Дополнительно на кровяной или шоколадный агар.