МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Департамент ветеринарии

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ДИАГНОСТИКЕ, ПРОФИЛАКТИКЕ И ЛЕЧЕНИЮ ПСЕВДОМОНОЗА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

Москва 2003

“УТВЕРЖДАЮ”

Руководитель Департамента ветеринарии

В. М. Авилов 17 августа 1998 г

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ДИАГНОСТИКЕ, ПРОФИЛАКТИКЕ И ЛЕЧЕНИЮ ПСЕВДОМОНОЗА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

Москва 2003

мука, куколки тутового шелкопряда, а у птицы - комбикорм. Не исключается возможность рассеивания во внешнюю среду возбудителя инфекции мышами и крысами, которые восприимчивы к этому заболеванию. Резервуаром синегнойной инфекции могут быть также лекарственные растворы, моющие антисептические растворы, кремы для рук и доения, инструментарий (хирургический, гинекологический).

Стационарное неблагополучие хозяйств тесно связано со скрытым но-сительством (выделением) псевдомонад и неблагоприятными для животных условиями содержания. Накоплению возбудителя во внешней среде способствует высокая концентрация белковых веществ, влажность, загрязненность навозом ферм, отсутствие или некачественная дезинфекция.

Возникновению псевдомоноза способствует черезмерное и бесконтрольное использование антибиотиков при лечении. Антибиотики подавляют конкурентоспособность микроорганизмов, и синегноная палочка, как малочувствительная к большинству антибактериальных препаратов, начинает быстро размножаться, вызывая в организме различные патологические процессы.

Пути передачи инфекции зависят от ряда факторов, включая степень патогенности самого возбудителя, его способность размножаться в окружающей среде и эффективности профилактических мероприятий.

Основные пути заражения - алиментарный и воздушно-капельный. Доказана также способность синегнойной палочки преодолевать плацентарный барьер, предварительно она вызывает воспаление плаценты, а затем происходит инфицирование плода. У животных с гемоэндотелиальным типом плаценты (свинья, обезьяна, собака, крольчиха, морская свинка) проницаемость барьера выше, чем у животных с десмохориальным типом (корова, овца, коза). При внутриутробном заражении новорожденные животные часто погибают в первые часы жизни.

В неблагополучных по псевдомонозу хозяйствах возможно перекрестное заражение молодняка различных видов животных.

Заражение свиноматок и коров происходит через инфицированную сперму или инструментарий при искусственном осеменении, а быков и хряков -при отборе спермы.

Немаловажная роль в распространении заболевания принадлежит обслуживающему персоналу: через руки, спецодежду, предметы ухода (ведра, скребки, щетки, метла и т.д.) возбудитель от больных животных или носителей передается здоровым.

Основным звеном в эпизоотической цепи псевдомоноза в птицеводстве является инкубаторий, при не соблюдении последовательности в технологии инкубации и основных ветеринарио-санитарных правил. Установлена прямая связь заражения птиц с поеданием корма, котаминированного возбудителем.

Обладая значительной подвижностью и ферментативными свойствами,

10

синегнойная палочка может за 18 ч проникать через скорлупу в желток яиц и вызывать гибель эмбрионов на любой стадии инкубации.

Псевдомоноз в хозяйствах чаще проявляется в виде энзоотических вспышек, заболеваемость при этом составляет 45-50% и более от числа находящихся в одном помещении, летальность может достигать 70%.

У норок болезнь проявляется в виде осенней энзоотии и протекает в сверхострой и острой формах. Песцы чаще болеют в апреле-июне, у лисиц закономерности в заболеваемости нет. В первую очередь погибают хорошо упитанные норки, особенно молодые самцы. В очаге инфекции заболеваемость норок колеблется в пределах 20-60% и сопровождается 100%-ной летальностью.

На фермах крупного рогатого скота, свиней и птицы пик заболеваемости в зимне-весенний. Это прежде всего обусловлено снижением сопротивляемости макроорганизма и благоприятными внешними условиями для возбудителя (повышенная влажность, умеренная температура, низкая солнечная инсоляция).

Среди быков и хряков-производителей на племстанциях и племпредп-риятиях, количество псевдомононосителнй может достигать круглый год 16-40% и выше.

ПАТОГЕНЕЗ

Механизм развития синегнойной инфекции сложный и до конца еще не расшифрован.

У выделенных из клинического материала штаммов возбудителя обнаружили наличие большого количества внеклеточных ферментов и токсических субстанций, многие из которых при определенных условиях связанных нарушением защитных сил организма хозяина, могут детерминировать их патогенность. Многофакторная природа патогенности Р.aeruginosa обеспечивает этим бактериям неуязвимость практически от действия любых защитных систем макроорганизма как естественных (тканевые барьеры, гуморальный и клеточный иммунитет), так и исскуствен-ных (иммунопрепараты, детоксицирующие и антибактериальные средства, дезинфектанты).

Одними из визуально ощущаемых и фиксируемых факторов патогенности являются пигменты (пиовердин, пиоцианин, пиорубин, меланин) и экстр ацеллюлярная слизь. Роль пигментов синегнойной палочки заключается не только в подавлении роста сопутствующей микрофлоры и обеспечении ее преимущества в микробной ассоциации, но и в неблагоприятном воздействии на макроорганизм. В частности пиоцианин угнетает пролиферацию лимфоцитов, нарушает функцию эпителия трахеи. У пиоцианина и пиовердина обнаружены сидероформные свойства, они участвуют в извлечении из тканей и органов макроорганизма ионов железа. Меланино-

11

вый пигмент повышает устойчивость P.aeruginosa к УФ-лучам и повышенной концентрации кислорода.

Экстрацеллюлярная слизь является функциональным аналогом капсулы. Слизь придает характерную вязкость бульонным культурам и колониям мукоидных штаммов. Существует определенная связь между тяжестью течения инфекции и выделением мукоидных штаммов бактерий. Как правило, штаммы, активно выделяющие слизь, являются более вирулентными, так как она подобно капсуле других бактерий обладает антифагоци-тарными свойствами. Кроме антифагоцитарной и токсической функций, внеклеточная слизь синегнойной палочки обладает способностью подавлять активность комплемента, участвует в процессах адгезии. Слизь синегнойной палочки играет активную роль в развитии диспепсических процессов у животных, в основе которых лежат усиление перистальтики кишечника, нарушение его всасывающей функции, развитие порозности сосудов с последующим выпотом крови в просвет кишечника. Выделенная и обработанная этанолом слизь обладает антигенной активностью, она способствует выработке иммунитета у лабораторных животных, наличие которого подтверждается как при заражении их гомологичным, так и гетерологичным серотипом возбудителя.

Наибольшее значение в патогенезе заболевания принадлежит экзотоксину А. Токсичность его для лабораторных животных превосходит таковую всех остальных выделенных компонентов синегнойной палочки. При местном введении очищенного экзотоксина А у белых мышей возникает характерная реакция - безэритемный отек, некротизирующийся в течение 2-3 дней, а при внутрибрюшном его введении (0,1 мкг) они погибают через 40-50 мин после инъекции. Под действием экзотоксина снижается активность фагоцитов, Т-лимфоцитов, бактерицидная активность сыворотки крови, падает количество эритроцитов, лейкоцитов и гемоглобина периферической крови, повышается проницаемость сосудистых стенок. Это происходит вследствие нарушений в системе нейрогуморальной регуляции, формирующейся в динамике развития токсического процесса, и непосредственного действия токсина на отдельные звенья иммуногенеза. Действие экзотоксина приводит к нарушению клеточных мембран и поражению ге-патоцитов, нарушется метаболизм тканей, происходит развитие гипоксии с последующей активацией процесса аэробного гликолиза в тканях печени и скелетной мускулатуры.

Существенную патогенетическую роль в развитии инфекции играет эндотоксин синегнойной палочки. По своей структуре это липополисахарид-но-белковый комплекс (ЛПС). Его летальные дозы для лабораторных животных находятся в пределах 0,01-0,1 мг/кг массы тела. Наибольшую токсичность связывают с липидной частью этого комплекса, при инактивиро-вании которой резко снижаются летальные, но сохраняются антигенные свойства эндотоксина.

12

Эндо токсин легко проникает в кровь и разносится по всему организму, нарушая постоянство внутренней среды организма и оказывая возбуждающее действие на интерореценторы. Повышение возбудимости парасимпатического отдела вегетативной системы вызывает сокращение гладкой мускулатуры. Со стороны желудочно-кишечного тракта это приводит к развитию рвоты и поноса, а сокращение гладкой мускулатуры бронхов обуславливает инепираторную одышку и эмфизему легких. Действуя на центральную нервную систему, эндотсксин синегноннон палочки вызывает развитие параличей, судорог, парезов. Повреждение клеток организма является следствием влияния эндотоксина на обмен веществ возбудимых тканей. Он подавляет активность некоторых тканевых окислительных ферментов и тем самым блокирует цикл Кребса, являющейся основным источником образования макроэкергетических соединений. Эндотоксин также нарушает механизмы свертываемости крови, понижает кровяное давление, повреждает клетки ретикулоэндотелиаяькой системы, способствуя тем самым значительному снижению напряженности естественного иммунитета.

К детерминантам патогенности относятся факторы, способствующие адгезии, инвазии, цитотоксичности. Адгезия P.aeruginosa к клеткам эпителия обеспечивается ворсинками. Все штаммы сикешойной палочки обладают адгезивной активностью, однако величина адгезии неодинакова. Наибольшая адгезия к клеткам макроорганизма нами установлена у серотипов 02, 07, 06 и 010.

Существенную роль в патогенезе заболевания играют ферменты протеаза и эластаза, которые подобно холерогену вызывают накопление жидкости в изолированном сегменте кишечника кролика. Кроме этого, протеаза может гидролизовать многие тканевые белки, а эластаза - расщеплять иммуноглобулин С.

Лейкоцвдик нарушает сердечную деятельность и проницаемость капилляров, понижает кровяное давление, вызывает лизис лейкоцитов.

Гемолизин растворяет липидный комплекс оболочки эритроцитов и вызывает некроз клеток печени.

Лецитиназа разрушает лецитин клеток и их мембран.

Для синегнойной палочки характерно разнообразие весьма тонких механизмов регуляции экспрессии факторов патогенности, активность которых направлена па быструю адаптацию микроорганизма к постоянно меняющимся условиям обитання. При пребывании бактерий во внешней среде факторы патогенности не синтезируются в полной мере, при попадании же во внутреннюю среду организма животных и человека начинается их интенсивный синтез, что способствует развитию инфекционного процесса. Сигналами для микроорганизма о попадании его во внутреннюю среду могут быть изменения температуры, pH среды, контакт с мембраной эукариотических клеток, распознавание которых осуществляют специфические рецепторы, локализованные в клеточной стенке бактерий.

в цитоплазму, где локализуются мишени их действия. Однако фактором, ограничивающим уровень их природной активности, является наличие у синегнойной палочки механизма активного выведения липофильных антибиотиков и их инактивирования.

Устойчивые штаммы синегнойной палочки значительно легче, чем чувствительные культуры, прилипают к эпителиальным клеткам слизистых оболочек пищеварительного, дыхательного и мочеполового тракта. Некоторые плазмиды, детерминирующие устойчивость F.aeruginosa к лекарственным препаратам, имеют широкий круг хозяев, включая представителей родов Escherichia, Enterobacter, Proteus, Salmonella и др. Эти обстоятельства представляют опасность не только в развитии колонизации си-яегнойной палочкой слизистых человека и животных, но и в возникновением в их организме полирезистектных бактериальных ассоциаций.

КЛИНИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ

Развитие симптомов заболевания связано в первую очередь с ферментами патогенности и токсинами синегнойпой палочки, а также «воротами» инфекции, действием на те или иные органы животных, а также их физиологическим состоянием организма. Наиболее тяжело болеют животные с пониженной естесгвенной резистентностью, пассажируясь через ослабленный организм, синегнойная палочка повышает свою вирулентность, после чего она способна поражать значительное поголовье. Как правило у взрослых животных заболевание проявляется нарушением воспроизводительной функции и протекает чаще подостро и хронически. У молодняка псевдомо-ноз протекает остро, с поражением желудочно-кишечного и респираторного тракта, иногда с поражением головного мозга. При внутриутробном заражении течение болезни характеризуется септическими явлениями со значительным отходом молодняка в первые дни жизни.

Инкубационный период псевдомонозной инфекции при сверхостром течении от 2 до 20 ч, редко более суток. В большинстве случаев псевдомоноз протекает остро, иногда подостро или хронически, и тогда инкубационный период длится от 2 до 14 суток, осложняя основное заболевание - гастрит, энтерит, бронхопневмонию, колибактериоз и т.д.

У телят заболевание протекает остро, в продромальный период отмечается эфемерная субфибрильная лихорадка. Температура тела редко поднимается выше 40°С на ранней стадии развития болезни и в дальнейшем находится в пределах 38-39°С. После первой или второй выпойки молозива у телят развивается понос. В случае внутриутробного заражения или заражения во время родов у новорожденного теленка уже через 3,5 ч после рождения появляются симптомы заболевания: сухое носовое зеркальце, отсутствие аппетита, вялость в движениях.

С развитием болезни отмечается самопроизвольная дефекация, кал жид-

15

кай, (юдкяистый, серо-жел того или жен го-зеленого цвета с примесью крови н слизи. Ввиду бметрой погери жидкости у теленка происходит обезвоживание организма с последующим развитием необратимых изменений во внутренних органах. В этот период у животных отмечается слабое, поверхностное дыхание, температура тела находится на низшей физиологической границе, а иногда и ниже, пульс очень слабый, Телята погибают в коматозном состоянии. При поражении головного мозга заболевание сопровождаете появлением симптомов, характеризующих поражение центральной нервной системы судорог, параличей, парезов, повышенной возбуди-мостью.

Продолжительность болезни 3-4 дня. Нередко инфекционный процесс приобретает хроническое течение, при котором больные телята длительное время выделяют возбудителя в окружающую среду. При дальнейшем выращивании телят в неблагоприятных условиях синегнойная палочка может быть одним из этиологических факторов развития бронхопневмонии, В этом случае заболевание протекает более тяжело, т.к. помимо синдрома сердечно-сосудистой недостаточности и гипоксии, наслаивается бактериальный токсикоз.

У коров заболевание проявляется в виде острых и хронических эндометритов, низкой оплодотворяемостью, абортами, рождением мертвого или нежизнеспособного приплода, маститом.

У быков-производителей чаще всего распространено длительное носи-тельсгво возбудителя, приводящее к развитию хронических воспалителл--вых процессов в органах моче-полового аппарата и органов воспроизводства ^семенниках и простате). У самцов, пораженных синегнойной палочкой, резко сни жается качество спермы, при этом одним из распространен -пых. видов аномалий является самоагтлютинация спермиев и наличие их н&тодопвеских форм.

Псевдоконоз свиней можно охарактеризовать как остро протекающую инфекционную болезнь в основном молодняка. Болеют поросята в любом возрасте, но чаще в подсосный период.

Кикнические проявления заболевания поросят зависят в первую очередь от ^входных ворот» инфекции. Протекать болезнь может сверхосгро, ост-оо, подостро и хронически. Если поросята инфицированы еще в утробе гдатерн ют сразу после рождения, то как правило заболевание имеет подострое течение. В этих случаях животные рождаются слабыми, гипстроф-ньшм, со слабым сосательным рефлексом. Обычно им доставались мало молочные доли вымени (соски). Не получая молока они быстро отстают в росте, щетина приобретает серый, тусклый цвет. У поросят развивается понос серо-зеленого цвета неприятного запаха, иногда с кровью. Иногда проявляются нервные признаки: дрожь, плавательные .движения конечное-гей. Температура тела в норме или на 0,5°С выше нормы. Заболевание длится 2- 3 дня к заканчивается гибелью с признаками интоксикации. Спустя 3-4

16

недели заболевание начинается на подсосных поросятах 10-15 дневного возраста. Они заражаются от свиноматок - носителей Р. aeruginosa, или от больных поросят раннего возраста или через инфицированные помещения, станки, предметы ухода, кормушки, спецодежду обслуживающего персонала. В данном случае энзоотическая вспышка протекает остро. Температура тела повышалась до 41°С, снижает иля полностью отсутствует аппетит* развивается конъюнктивит, ринит и профузный понос иногда с примесями крови и слизи. У некоторых поросят наблюдаются нервные явления. Они падают и совершают конечностями плавательные движения, отмечаются судороги, они ударяются головой о стенки станков, перегородки, полы, нанося ссадины и кровоподтеки, выявляемые при вскрытии. Продолжительность болезни 2-5 дней.

Энзоотии псевдомоноза у поросят после, отъема регистрируются реже, чем у подсосных. Эти энзоотии протекают также остро и лодосгро и причины их возникновения уже другие, чем у поросят подсосного периода. Причиной вспышки заболевания может быть мясокостная мука, которая дается в качестве белково-минеральной подкормки. Заболевание в этом случае начинается с лучших поросят, которые большей поедают обсемененной мясокостной муки и протекает остро. Первые 3 дня выделяются единичные больные, а потом по несколько десятков поросят. Лечение антибиотиками мало эффективно и через 2-3 дня поросята погибают. У поросят температура тела поднимается до 40,8*41,2°С, снижается аппетит (до полного отказа от корма), появляется жажда, шаткая походка. У некоторых животных понос со сгустками крови и слизыо.

У отдельных поросят развиваются клони чсские судороги. Нели болезнь затягивается, то поросята худеют, слабеют, отстают в росте. Признаки поражения желудочно-кишечного тракта как бы ослабевают, а пояшшотся признаки поражения дыхательных путей легких). Развшшегся кашель, одышка.

У свиноматок поевдомоноз сопровождаемся абортами, мертворожденными н синдромом мастит-, метрит-, агалактия <ММА) и, как правило, с массовыми осложнениями. При бактериологических исетедоваш^ях маточных выделений, часто выделяется целый букет *и:фоорганизмов: P.aeruginosa, Е. Coll, F.vilgaris, P.iairabieis, Streptococcus sip. И грибы (Aspergills, Candida ч ДР-).

Абортами проявляются за 15-20 дней до ожидаемых опоросов и мертво рождениями, рождением слабого приплода. Иногда обортированньте №> ды бывали разложившиеся, иногда целым*: с кровоизлияниями в точках, на сердце, гидроперикардиды, с перерожденной печенью. Родившнссг* поросята до 45-65% бывают слабыми, гипотрофнымн, у ти после npnv.fr ;а молозива отмечается диарея, обезвоживание и быстрая гибель. У сен «оматок после опороса отмечается повышение температуры тела ка 0,5-0,о°С к обильные слизисто-гнойные истечения из родополовых путей, маститы п

17

прекращение лактации на 20-25 день.

Слизисто-гнойные выделения у свиноматок через 5-7 дней прекращаются они приходят вовремя в охоту их осеменяют, выделения опять возобновляются и плодотворно оплодотворяются только 60-68%.

Хряки-производители инфицированные P.aeruginosa клинические признаки заболевания проявляют редко. У некоторых отмечается снижение половой активности, они не охотио идут на чучело и объем эйякулята, иногда бывает меньше, чем обычно. Только у отдельных регистрируется трудно излечимые баланопоститы, изъязвление слизистой препуциальной полости и при садке на чучело отмечаются кровянистые пенистые истечения из препуция. Качество спермы снижается по загрязненности и активности. Носительство определяется бактериологическими исследованиями спермы, смывов из препуциальной полости.

У овец псевдомоноз протекает в виде септицемии. Первоначально заболевают ослабленные животные, а затем по мере увеличения восприимчивых животных болезнь приобретает массовый характер. У больных овец отмечается постоянная лихорадка, потеря аппетита, увеличение частоты пульса я дыхания выделения из носовой полости. Нередко развиваются дерматиты и местами нарушается шерстный покров в области головы, живота и задних конечностей.

У пущиых зверей синегнойная инфекция протекает остро и сверхосгро. Клинические признаки проявляются незадолго до смерти. У норок болезнь проявляется плохим аппетитом, малой подвижностью, кровянистыми выделениями из ротовой и носовой полостей, пневмонией. Животных часто поднимают голову, стараясь облегчить дыхание, но вследствие нарастающего отека легких погибают. Иногда норки погибают без видимых признаков болезни.

Псевдомоноз у самок песцов проявляется массовыми абортами во второй половине беременности. После этого большинство погибает от развития сепсиса. У оставшихся в живых, из влагалища выделяется гнойная, густая жидкость, содержащая синегнойную палочку. У щенков болезнь проявляется сепсисом или поносом с наличием в каловых массах пузырьков газа. У некоторых животных, вследствие расхождения костей черепа выражена большеголовость, при этом пальпацией отчетливо ощущается флюктуация содержимого черепной коробки. У самцов заболевание проявляется гнойными воспалениями препуция и орхитами.

У птипы синегнойная палочка способна вызывать местные дифтероид-ные процессы в ротовой полости и гортани, подобные дифтериту кур. У цыплят заболевание чаще всего протекает остро, по типу токсикоинфек-ции, и характеризуется общим угнетением, поносом, слизистым истечением из клюва, периодическим вздутием зоба. Больные цыплята малоподвижны, нахохлившиеся, аппетит отсутствует, фекалии разжижены, пенистые, темно-зеленого цвета с примесью белых масс, периодически наблюдаются

18

судороги. Гибель наступает на 3-4-й день с момента появления клинических признаков. Широко распространено псевдомононосительство среди взрослой птицы и переболевших цыплят.

ПАТОЛОГОАНАТОМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ

На первый план выступают токсические и деструктивные явления, сопровождающиеся тяжелыми расстройствами кровообращения с выраженными воспалительно-пролиферативными изменениями во внутренних органах

При вскрытии павших телят в первую очередь обращает на себя внимание аигидремия, стаз крови в сосудах кишечника и брыжейки, катаральногеморрагическое воспаление слизистой тонкого отдела, иногда на ней встречаются точечные кровоизлияния и эрозии. Печень дряблая, бурого цвета, с участками просветления, что свидетельствует о наличии дистрофических изменений. На эндокарде, под капсулой почек и селезенки точечные и пятнистые кровоизлияния.

При питал о го а натомическо м обследовании трупов поросят, павших при подостром течении болезни отмечается в первую очередь явления токсикоза: значительные поражения печени и почек. Печень немного увеличена. Дряблая, у части глинистого цвета, под пальцами разрушается. Желчный пузырь иногда переполнен желчью. Вокруг портальной вены кровоизлияния. Если заболевание осложняется токсинами грибов, то желчный пузырь переполнен вязкой желчью с диффундированием ее в окружающие ткани.

Почки немкого увеличены, размягчены, с кровоизлияниями по поверхности и в корковом слое. Граница коркового и мозгового слоев сглажена, лоханка увеличена, иногда в лоханке сгустки гноя (пиелонефрит). Слизистая мочевого пузыря иногда с кровоизлияниями.

Слизистая желудка бывает отечна, иногда складчата и местами изъязвлена. Катарально-гемморагическое воспаление с кровоизлияниями. Слизистая тонкого и толстого отделов катарально воспалена, в толсгом отделе местами кровоизлияния с выпотом крови в просвет кишки.

Сердце дряблое, гидроперикардит, часто на миокарде кровоизлияния.

Лимфоузлы увеличены. Сочные с кровоизлияниями. Оболочки головного мозга отечны, сосуды инъецированы. Сверхострое и острое течение протекает реже и подобных паталогоанатомичеких изменений не устанавливали. Отмечали общий септический процесс с кровоизлияниями во внутренних органах и иногда в подкожную клетчатку.

Если течение болезни осложнялось сальмонеялеом, отечной болезнью к другими заболеваниями, то картина патвскрытия бывает мало характерна для какой-то одной инфекции.

У коров и свиноматок основные изменения обнаруживаются в матке и яичниках: серозно-катаральные, гнойно-некротические эндометриты и ги-

19

МЕТОДАЧЕС1ШП. Р'£КОаЖЩА15,ИИ ПОДГОТОВИЛА

Сотрудники Краснодарского НИВИ (Терехов В.И., Шипмцьш А.Г., Болоцкий И.А., Васильев А.К., Семенцов В.И., Пруцаков С.В., Васильев В.Ф., Богосьян А.А.), ВНИВИ патологии, фармакологии и терапии (Шахов А.Г., Бригадиров Ю.Н.), ВГНКИ(Уласов В.И.), Воронежского ГАУ (Артемов Б.Т., Шаронин С А.), МГАВМиБ (Воронин Е.С., Девришев Д.А,р Управления ветеринарии Краснодарского края (Ско-рмкор А.В.), Краснодарская краевая ветеринарная лаборатория (Ермакова Т.В.).

© Росоельхозакадемия, 2003 г.

поплазия и кистоз яичников. Нередко поражены яйцеводы, которые нахо дятся в стадии воспалительной инфильтрации, а на слизистой оболочке отмечено образование полипообразных выступов.

У быков и хряков-производителей хроническое воспаление препуция, уретры, семенников и их придатков. Нередко в семенниках и мочеполовом канале обнаруживается разростание фибринозной ткани и обширные кровоизлияния.

У норок патологоанатомические изменения регистрируются преимущественно в легких. Они отечны, темно-вишневого цвета, уплотнены и при опускании в воду кусочки легких тонут. В трахее и бронхах кровянистая пенистая масса. Селезенка увеличена, вишневого цвета. Печень дряблая, сухая, с признаками жировой дистрофии.

У абортировавших самок песца обнаруживают фибринозную инфильтрацию и некроз слизистой оболочки матки. В полости матки густая гноевидная жидкость. У павших щенков песца основные изменения находятся в кишечнике, который гиперемирован, местами на слизистой отчетливо просматриваются точечные кровоизлияния. При увеличении объема черепной коробки, в желудочках головного мозга обнаруживается скопление большого количества желтой, гноевидной, густой консистенции жидкости.

При вскрытии павшей птицы находят выраженное кровенаполнение внутренних органов, особенно печени, которая увеличена в размерах, дряблой консистенции, темно-красного цвета. Селезенка увеличена, пульпа рыхлая. Почки гштеремированы, отмечается значительное увеличение паренхимы. Сосуды брыжейки инъецированы, брюшина зеленоватого цвета, в кишечнике - признаки катарального воспаления.

Патологоанатомическая картина при псевдомонозе сходна с изменениями при других бактериальных инфекциях (колибактериозе, сальмонеллезе, стрептококковой инфекции), в ассоциации с которыми он может вызывать патологический процесс. Поэтому для окончательного решения вопроса об этнологии болезни в хозяйстве, необходимо проведение лабораторного исследования патологического материала, с определением патогенности выделенного возбудителя и его чувствительности к антибактериальным препаратам.

ДИАГНОЗ

С учетом разнообразия клинического проявления и патологоанатомн-ческих изменений при синегнойной инфекции решающее значение при постановке диагноза отводится бактериологическим исследованиям, в ходе которых не только выделяют P.aeruginosa, но и выясняют ее этиологическую роль.

При взятии патологического материала для выделения культуры синегнойной палочки соблюдают те же правила, что и при лабораторной диаг-

20

СОДЕРЖАНИЕ

i Введение.................................................................................................4

2.    Этиология.............................................................................................5

2^. Эпизоотология.....................................................................................8

4.    Патогенез.............................................................................................. И

5.    Клинические признаки заболевания................................................... 15

6.    Патологоанатомические изменения................................................... 19

7.    Диагноз.............................................................................................20

3.    Иммунитет...........................................................................................25

9 Профилактика................................ 26

10. Специфическая профилактика........................................................28

11. Лечение.................................................................................29

3

ВВЕДЕНИЕ

В последние годы все чаще появляются сообщения о выделении бактерий рода Pseudomonas из различного патологического материала. Широко распространенные в природе, они нередко являются возбудителями болезней растений, животных, птиц, а так же людей. Так, например, бактерии вида Р. aeruginosa вызывают пиодермию у овец, собак и кроликов; маститы, эндометриты, гибель эмбрионов, аборты у коров и свиноматок; септицемию у пушных зверей; их можно обнаружить в препу-циальной полости и сперме у быков и хряков, в хронических случаях ими поражаются семенники и придаточные половые железы.

Высокая устойчивость бактерий к условиям внешней среды, антагонистическая активность, резистентность к ряду применяемых в настоящее время химиотерапевтических препаратов и антибиотиков, а так же нарушения зоогигиенических и ветеринарных правил способствуют широкому распространению псевдомонад и повышают их роль в возникновении различных патологических процессов у животных и птиц.

Сложность изучения синегнойной инфекции и г i уальность этой проблемы обусловлены тем, что возбудитель - один из немногих видов бактерий патогенен не только для животных и человека, но для насекомых и растений.

О возрастающей роли синегнойной палочки в патологии человека и животных свидетельствуют многочисленные публикации отечественных и зарубежных исследователей, которые отмечают, что рациональная терапия болезней, вызываемых патогенными штаммами синегнойной палочки, представляет на современном этапе актуальную проблему.

В рекомендациях обобщены современные литературные сведения по этой проблеме и результаты многолетних исследований сотрудников Краснодарского НИВИ, ВНИВИ патологии, фармакологии и терапии. Воронежского аграрного университета и других научных учреждений.

4

этиология

Синегкойкая палочка (Pseudomonas aeruginosa) была впервые выделена в чистой культуре C.Gessard в 1882 г. и названа В.руосуапеа (палочка синего гноя). В 1889 г. A.Charrin продемонстрировал патогенность микроорганизма не только для человека, но и животных.

Р.aeruginosa по определителю бактерий Берджи (1997) относится к роду Pseudomonas, семейства Pseudomonadaceae .

Синегнойная бактерия - это прямая иля слегка изогнутая палочка размером 0,5-1 х 1,5-3 мкм, хорошо окрашивается анилиновыми красками, гра-мотрицательна, аэроб. В мазке располагается одиночно, парами или короткими цепочками. Подвижна, имеет 1-3 полярных, биполярных или боковых жгутиков, но имеются и безжгутиковые формы. Установлено присутствие фибрилярных (пиленых) структур, спор не образует, обнаружены капсульные и бескапсульные варианты синегнойной палочки. Обладает способностью образовывать внеклеточную капсулоподобную слизь. Хорошо растет на простых и искусственных питательных средах. Дополнительных факторов роста не требует. Оптимальная температура роста 37°С, однако может расти в диапазоне от 5-7 до 43°С. Предпочитает нейтральную реакцию среды (pH 7,2-7,5), но может размножаться при pH 4,5 и 9,0. Рост на мясо-пелтонном бульоне через 18-24 ч, характеризуется равномерным помутнением с образованием небольшого осадка и серовато-серебристой пленки.

На мясо-пептонном агаре, средах Эндо или Плоскирева можно различить 5 типов колоний:

-    плоские неправильной формы;

-    колонии, напоминающие колонии E.coli в S-форме;

-    складчатые («цветок маргаритки»);

-    слизистые;

-    точечные, карликовые.

При культивировании на питательных аэедах P.aeruginosa выделяет ароматическое вещество триметиламин, запах которого напоминает цвет липы, жасмина, земляничного мыла или карамели. У беспигментных штаммов запах может иметь горьковато-прогорклый оттенок.

Пигментообразование - характерный признак синегнойной бактерии. Она выделяет ряд пигментов: сине-зеленый - пиоцианин, желто-зеленый -флюоресцин, красный - пиорубин, черный - меланин, но диагностическое значение имеет только пиоцианин, так как его образует исключительно синегнойная палочка. В некоторых случаях встречаются апигментные штаммы синегнойной палочки, доля которых может составлять 10-20%. Для выявления пиоцианина у штаммов псевдомонад их посев следует проводить на среды, содержащие 2-5% глицерина или маннита, ионы магния и калия и культивировать при температуре 30-37°С. В жидких питательных

5

средах его идентифицируют* используя тест' с хлороформом.

Отличительной особенностью синегнойкой палочки является низкая требовательность к питательным веществам. Она может размножаться даже в дистиллированной воде, ассимилируя азот воздуха.

Синегнойная палочка обладает низкой сахаролитической активностью, но выраженными протеолитическими свойствами (табл.1), она пептонизи-рует лакмусовое молоко, разжижает желатину, свертывает сыворотку и яичный белок, восстанавливает нитраты в нитриты, гидролизирует казеин, обладает гемолитическими свойствами.

У многих штаммов P.aeruginosa прн росте на плотных питательных средах наблюдается феномен радужного лизиса, который характерен только для данного микроорганизма. Феномен, как правило, в той или иной степени выражен у каждого отдельно взятого штамма и поэтому может служить для внутривидовой дифференциации.

Синегнойная палочка весьма устойчива во внешней среде, особенно влажной (воде, моче, кале), и может месяцами сохраняться вне организма, однако через 2-3 недели патогенность ее снижается. Жизнеспособна бактерия и в растворе такого антисептика как фурацилин, поэтому свеже приготовленный раствор нитрофурана можно хранить только одни сутки. В подсыхающем патологическом материале она выживает в течение нескольких недель. Высушивание убивает ее за 2-3 дня, замораживание и оттаивание через 7-10 суток, палочка сохраняет свою жизнеспособность в замороженной сперме (-196°С) год и более.

Бактерия нестойка к обычным дезосредствам 0,25%-ному формалину, 0,5%-ному фенолу и едкому натру, 1-2%-ным растворам креолина и лизола. Выраженным дезинфицирующим действием в отношении возбудргтеля псевдмоноза обладают хлорсодержащие препараты (0,25%-ный р-р ДП-2 и 1%-ный р-р хлорамина, при экспозиции 5 минут) и 0,25% р-р метацида (по-шсепта). Кипячение убивает ее в течение 1-3 мин.

Синегнойная палочка имеет сложную антигенную структуру, состоящую из нескольких компонентов. Основными являются: устойчивое к формалину, термо лабильное вещество, напоминающее жгутиковый Н-антиген, и вещество, аналогичное О-антигену кишечных бактерий, устойчивое к спирту и высокой температуре

О-антиген представляет собой сложный макромолекулярный комплекс липополисахарида (Л ПС) с белками и липидами клеточной стенки. Л ПС является структурным компонентом О-соматического антигена и обусловливает его О-групповую специфичность. В настоящее время структура О-спецкфических полисахаридных цепей практически всех известных типов ЛПС уже изучена.

Кроме Н-антигшов у штаммов синегнойкой палочки идентифицировано два типа пилей: полярные и неполярные, с последними связывают передачу плазмидной лекарственной резистентности.

6

Таблица 1 Дифференциально-диагностические признаки некоторых бактерий рода Pseudomonas

Признак P.aerugi- rtosa Р. fluore-scens Р. cepacia Р. putida Р. stut-геп P.maltophyiia P.dimi-nuta Р. mallei P.pseu- domaliei P.alcali- genes Подвижность 4- + + + 4- 4- 4- 4- 4- 4- Пиоцианин + - - - -• - • - - - Флюоресцеин 4- + - ± 4- + - - - - Оксидаза (индофенол оксидаза) 4- + + 4- 4- _ 4- + ± 4- Разжижение желатины + + ± - - 4- 4- - 4- + Гемолиз + ± - - - - - - ± - Росг при 5°С . + . ± ± _ . при 42°С + - ± - - + - 4- 4- на ацетамидном агаре + - + - ' - - - - 4- ± Образование кислоты из глюкозы ч- + . 4- 4- 4- _ 4- 4- + лактозы - - + - - - - ± 4- маннита ± 4* + ± 4- - - 4- 4- - мальтозы - ± ± ± 4- - ± 4- ± ± галактозы ± + 4- 4- 4- - - 4- 4- - фруктозы ± + ± 4* + 4- - 4- 4- - Восстановление нитратов до нитритов + + . ± ± ± ± ± Восстановление нитратов до азота 4- 4- . Аргининдегидролаза 4' ч- - + - - - 4- 4- - Лизиндекарбоксилаза - - 4- - - 4- - - - - брнитиндекарбоксилаза - - ± - - - - - - -

Типирование бактерий осуществляют, используя О- и Н-сыворотки, пи-оциньг, бактериофаги. Общепризнанным является серологическое типирование по термостабильному соматическому О-антигену. В 1976 году Международной ассоциацией микробиологических обществ был предложен набор стандартных антигенных штаммов. Основу набора составляют 12 штаммов английской коллекции Хабса и 4 дополнительных штамма Мик-кельсона. В кашей стране серотипировакие культур синегнойной палочки рекомендуется проводить методом агглютинации на стекле с использованием набора, состоящего из поливалентных сывороток к 15-групповым О-антигенам или моновалентными сыворотками к 23 факторам О-антигена. В настоящее время серотипирование осуществляется по 20 0-антигенам. Серотипирование позволяет выявлять преобладание тех или иных вариантов синегнойной палочки, сопоставлять идентичность штаммов выделенных от больных животных и из объектов внешней среды или предполагаемых источников их содержания (сперма, корма и др.).

Методы пиоцинотипироваиия основываются на следующих положениях:

-    пиоцины различных штаммов синегнойной палочки по-разному действуют на индикаторные штаммы;

-    штамм-продуцент пиоциокина резистентен к образуемому им пиоциа-кику;

-    различные штаммы синегнойной палочки обладают разной чувствительностью к набору индикаторных пиоцинов.

Для пиоцинотипироваиия чаще всего используются метод «перекре-щи-вающихся полос» и бульонный метод, когда используются индикаторные штаммы синегнойной палочки.

Метод фаготипирования основан на различной чувствительности культур синегнойной палочки к набору типовых бактериофагов коллекции Zindberg. Набор включает 19 фагов. Считается, что фаготипирование является достаточно информативным методом при изучении синегнойной инфекции, однако если фаготипирование применяется как единственный метод тестирования, то результаты следует воспринимать с большой ост-рожностью.

ЭПИЗООТОЛОГИЯ

В последние годы появляется все больше сообщений, свидетельствующих о постоянно возрастающей патогенности синегнойной палочки и делаются выводы о том, что этот микроб следует считать патогеном с высокой приспособляемостью к окружающей среде. Синегнойная палочка вызывает заболевания с различными клиническими признаками у людей, сельскохозяйственных и домашних животных, пчел, шелкопрядов, морских моллюсков, рыбы, а также овощных растений.

8

В Краснодарском крае P.aeuginosa чаще других микроорганизмов выделяется из внутренних органов абортированных плодов, павших телят и поросят, спермы хряков- и быков-производителей, влагалищных выделений маток, куриных эмбрионов, различных видов кормов и объектов окружающей среды.

Наиболее подвержены заболеванию молодые животные, у которых снижена естественная резистентность организма.

Псевдомонозом, чаще всего, поражаются поросята в подсосный период и, реже, после отъема, телята - в первые две недели жизни. Появлению и распространению болезни способствуют нарушения ветеринарно-санитарных правил содержания животных и птицы, высокая их концентрация, повышенная влажность помещений, несоблюдение профилактических перерывов при эксплуатации животноводческих помещений, нерациональное использование антибиотиков и химиопреларатов.

Нередко синегнойная палочка выделяется в ассоциации с энтеробактериями - кишечной палочкой, протеем, сальмонеллой и др., что затрудняет диагностику заболевания и проведение лечебно-оздоровительных мер.

Серотиповой профиль синегнойной палочки выделенной от больных и павших животных в различных хозяйствах Краснодарского края представлен основными типами: у телят 02, 06, 07, 08, 09, 010 и 011; у поросят - 02, 03,05,06 и 08. Штаммы P.aeruginosa, выделяемые от взрослого поголовья, чаще относили к 02, 06, 08, 011. Среди изолятов, выделенных от птицы, большинство представлены серотипами 02, 05 и 08, а пушных зверей - 05, 06, 08.

Особого внимания заслуживает вопрос об источнике и путях передачи возбудителя. Основным местом экологического обитания синегнойной палочки является желудочно-кишечный тракт человека и животных, откуда с фекалиями микроб попадает в почву, воду, корма, различные объекты внешней среды. Однако бактерия может и не встречаться в кишечнике, так как в норме ингибируется антагонистами (молочнокислой микрофлорой, энтерококком, непатогенной кишечной палочкой). Усиленное размножение микроорганизма происходит при изменении химического состава кишечного содержимого, а именно: дача некачественного корма, пероральное применение антимикробных средств, отравление различными веществами. Таким образом, появление в кишечнике синегнойной бактерии может свидетельствовать о наличии микроэкологических нарушений гомеостаза.

Основным источником возбудителя являются больные животные и птица, которые с калом, мочой, мокротой из легких, пухом и волосом выделяют возбудителя во внешнюю среду. Особая роль, как источника возбудителя принадлежит контаминированной этим микроорганизмом сперме быков- и хряков-производителей, яйцу птицы, предназначенному у инкубации. Очень часто факторами передачи возбудителя для пушных зверей является обсемененное синегнойной палочкой мясо, мясо-костная и рыбная

9