2

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ    3

A.    Количественное определение левомицетина в    7

продовольственном сырье и продуктах

питания животного происхождения методом конкурентного иммуноферментного анализа Б. Количественное определение тетрациклина в    25

продовольственном сырье и продуктах питания животного происхождения методом конкурентного иммуноферментного анализа

B.    Количественное определение стрептомицина    40

в продовольственном сырье и продуктах питания животного происхождения методом конкурентного иммуноферментного анализа Г,    Количественное определение сульфаметазина    56

в продовольственном сырье и продуктах питания животного происхождения методом конкурентного иммуноферментного анализа Д.    Количественное определение нитрофуранов в    76

продовольственном сырье и продуктах питания животного происхождения методом конкурентного иммуноферментного анализа Е.    Количественное определение фторхинолонов    87

в продовольственном сырье и продуктах питания животного происхождения методом конкурентного иммуноферментного анализа

11

Антитела к левомицетину, концентрат, 0,7 мл: черная крышка- 1 шт.

Субстрат, содержит пероксид карбамида, 7 мл: зеленая крышка 1 шт.

Хромоген, содержит тетраметилбензидин, 7 мл: голубая крышка - 1 шт.

Стоп~реагент, содержит 1 N серную кислоту, 14 мл: желтая крышка - 1

шт.

Буфер 1, для разбавления стандартных растворов, конъюгата, антител, растворов образцов и буфера 2, 100 мл 1 шт.

Буфер 2, для разбавления стандартных образцов при анализе молока, конц., 1 мл - 1 шт.

Режим хранения.

Храните набор при температуре 2 - 8°С. НЕ ЗАМОРАЖИВАЙТЕ НАБОР.

Для хранения неиспользованных стрипов (лунок) упакуйте их в оригинальный фолъгированный пакет вместе с имеющимся осушителем и плотно закройте пакет.

Поскольку раствор хромогена светочувствителен, избегайте попадания прямых солнечных лучей на флакон с раствором.

Признаки порчи реагентов.

В случае окрашивания раствора хромогена не рекомендуется использовать раствор, поскольку окрашивание раствора хромогена является признаком его порчи.

В случае, если величина оптической плотность, измеренной в лунке с нулевым стандартом, не превышает 0.6, это также может быть признаком порчи реагентов.

12

2. МЕТОД ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА

2.1. Отбор проб и подготовка к проведению исследований.

Отбор проб осуществляют в соответствии с действующей нормативной документацией по отбору проб.

Пробы доставляют в лабораторию и хранят в холоде в темном месте.

2.1.1.    Молоко (только обезжиривание).

-    перенесите пробу молока (например, 5 мл) в стеклянную центрифужную пробирку;

-    центрифугируйте при 4 - 12°С в течение 15-ти минут при 3000 g (если у Вас нет центрифуги с охлаждением, охладите пробы до 8°С перед центрифугированием);

-    удалите верхний жирный слой и перенесите аликвоту обезжиренного молока в новую чистую пробирку;

-    для анализа используйте 50 мкл раствора на лунку планшета;

Фактор разбавления    1

Предел обнаружения    50 нг/л

Предел количественного определения    150 нг/л

Примечание: при приготовлении стандартных растворов используйте буфер 2 (см. п. 2.2.5)

Обратите внимание на примечания в кот^е раздела 2.1.4!

2.1.2.    Молоко.

-    перенесите 5 мл молока в стеклянную центрифужную пробирку;

-    добавьте в пробирку 250 мкл осадителя 1 и 250 мкл осадителя 2;

13

-    тщательно    перемешайте    (например,    на    вортексе)    и

центрифугируйте при 4 - 12°С в течение 10-ти минут при 3000 g (если у Вас нет центрифуги с охлаждением, охладите пробы до 8°С перед центрифугированием);

-    перенесите 2,2 мл супернатанта (соответствует 2 мл молока) в чистую пробирку;

-    добавьте в пробирку 4 мл этилацетата и экстрагируйте встряхиванием в течение 10 мин;

-    центрифугируйте при комнатной температуре (20 - 25 °С) в течение 10-ти минут при 3000 g;

-    перенесите 2 мл экстракта (соответствует 1 мл молока) в новую чистую пробирку и испарите экстракт досуха при 60 °С в слабом токе азота;

-    растворите сухой остаток в 250 мкл буфера 1 и тщательно перемешайте на вортексе;

-    для анализа используйте 50 мкл раствора на лунку планшета;

Фактор разбавления    0,25

Предел обнаружения    12,5    нг/л

Предел количественного определения    37,5    нг/л

Обратите внимание на примечания в конце раздела 2.1.4!

2.1.3. Сухое молоко.

-    взвесьте в центрифужной стеклянной пробирке 2 г сухого молока, добавьте 10 мл дистиллированной воды и встряхивайте пробирку до растворения пробы;

добавьте в пробирку по 1 мл осадителя 1 и осадителя 2;

-    тщательно перемешайте (например, на вортексе) и центрифугируйте при 4 - 12°С в течение 10-ти минут при 3000 g (если у Вас нет

14

центрифуги с охлаждением, охладите пробы до 8°С перед центрифугированием);

-    перенесите 3,6 мл супернатанта (соответствует 0,6 г сухого молока) в чистую пробирку;

-    добавьте в пробирку 6 мл этилацетата и экстрагируйте встряхиванием в течение 10 мин;

-    центрифугируйте при комнатной температуре (20 - 25 °С) в течение 10-ти минут при 3000 g;

-    перенесите 4 мл эфирного экстракта (соответствует 0,4 г сухого молока) в новую чистую пробирку и испарите экстракт досуха при 60 °С в слабом токе азота;

-    растворите сухой остаток в 400 мкл буфера 1 и тщательно перемешайте на вортексе;

-    для анализа используйте 50 мкл раствора на лунку планшета;

Фактор разбавления    1

Предел обнаружения    50 нг/л

Предел количественного определения    150 нг/л

Обратите внимание на примечания в коньке раздела 2.1.4!

2.1.4. Мед.

-    взвесьте в центрифужной стеклянной пробирке 2 г меда, добавьте 4 мл дистиллированной воды и встряхивайте пробирку до растворения пробы;

-    добавьте в пробирку 4 мл этилацетата и экстрагируйте встряхиванием по оси «вверх-вниз» в течение 10 мин;

-    центрифугируйте при комнатной температуре (20 - 25 °С) в течение 10-ти минут при 3000 g;

15

-    перенесите 1 мл эфирного экстракта (соответствует 0,5 г меда) в новую чистую пробирку и испарите экстракт досуха при 60 °С в слабом токе азота;

-    растворите сухой остаток в 0,5 мл буфера 1 и тщательно перемешайте на вортексе;

-    для анализа используйте 50 мкл раствора на лунку планшета;

Фактор разбавления    1

Предел обнаружения    50 нг/л

Предел количественного определения    ] 50 нг/л

Сухой остаток после испарения эфирного экстракта не растворяется полностью в буфере 1. Однако, тем не менее, экспериментальная оценка степени извлечения левомицетина показала удовлетворительный результат

-    более 80%

Примечания:

При исследовании некоторых проб, не содержащих левомицетина, наблюдается матричный эффект, иногда в области концентраций между вторым и третьим стандартами.

В силу возможного матричного эффекта, при исследовании проб по пп.2.1.1 -2.1.4. рекомендуется интерпретировать результаты анализа как положительные, если найденная по калибровке концентрация левомицетина превышает концентрацию третьего стандарта.

ВНИМАНИЕ:

При выполнении пробоподготовки по пп.2.1.5 и 2.1.6 холостые пробы могут показывать положительный результат на уровне 2-го стандарта. При расчете концентрации левомицетина в исследуемых пробах рекомендуется учитывать фоновый сигнал с помощью постановки холостого опыта. Для

16

этого в каждой серии анализов полезно выполнять испарение 4 мл

чистого этилацетата и далее следовать описанной стандартной процедуре.

Измеренный фоновый сигнал далее следует вычитать на стадии обработки

результатов.

2.1.5. Креветки, мясо и рыбная мука.

-    гомогенизируйте представительную пробу (например, 100 г) в гомогенизаторе, блендере или миксере;

-    взвесьте в стеклянной центрифужной пробирке 3 г гомогената, смешайте с 3 мл дистиллированной воды и добавьте 6 мл этилацетата;

-    интенсивно встряхивайте пробирку по оси «вверх-вниз» в течение 10 мин

-    центрифугируйте при комнатной температуре (20 - 25 °С) в течение 10-ти минут при 3000 g;

-    перенесите 4 мл эфирного экстракта (соответствует 2 г пробы) в новую чистую пробирку и испарите экстракт досуха при 60 °С в слабом токе азота;

-    растворите сухой остаток в 1 мл смеси изооктана с хлороформом (2/3) и тщательно перемешайте на вортексе;

-    добавьте к раствору 0,5 мл буфера 1 и интенсивно перемешивайте на вортексе в течение одной минуты;

-    центрифугируйте при комнатной температуре (20 - 25 °С) в течение 10-ти минут при 3000 g или более высоком ускорении;

-    для анализа используйте 50 мкл раствора (водный верхний слой*) на лунку планшета;

Фактор разбавления    0,25

Предел обнаружения    12,5    нг/л

Предел количественного определения    37,5 нг/л

17

*) в случае образования пены или геля в межфазовой зоне при

недостаточном объеме водной фазы, поместите пробирку на 5 минут в

водяную баню при температуре 80°С и затем еще раз отцентрифугируйте.

2.1.6. Яйца.

-    гомогенизируйте представительную пробу (например, 100 г) в гомогенизаторе, блендере или миксере;

-    взвесьте в стеклянной центрифужной пробирке 2 г гомогената, смешайте с 12 мл этилацетата;

-    интенсивно встряхивайте пробирку по оси «вверх-вниз» в течение 10 мин

-    центрифугируйте при комнатной температуре (20 - 25 °С) в течение 10-ти минут при 3000 g;

-    перенесите 6 мл эфирного экстракта (соответствует 1 г пробы) в новую чистую пробирку и испарите экстракт досуха при 60 °С в слабом токе азота;

-    растворите сухой остаток в 1 мл смеси изооктана с хлороформом (2/3) и тщательно перемешайте на вортексе;

-    добавьте к раствору 1 мл буфера 1 и интенсивно перемешивайте на вортексе в течение одной минуты;

-    центрифугируйте при комнатной температуре (20 - 25 °С) в течение 10-ти минут при 3000 g или более высоком ускорении;

-    для анализа используйте 50 мкл раствора (водный верхний слой*) на лунку планшета;

Фактор разбавления    1

Предел обнаружения    50 нг/л

Предел количественного определения    150 нг/л

18

*) в случае образования пены или геля в межфазной зоне при недостаточном объеме водной фазы, поместите пробирку на 5 минут в водяную баню при температуре 80°С и затем еще раз отцентрифугируйте Пугтечаиие:    по    запросу    предоставляются    методики    для

определения левомицетина в сыворотке крови, комбикормах и моче (глюкорониды левомицетина)

2.2. Порядок проведения измерений.

Предварительные замечания по проведению измерений.

S Перед использованием тест-системы доводят температуру всех реагентов до комнатной.

S Немедленно после использования охлаждают все оставшиеся реагенты до температуры 2 - 8°С.

S В процессе выполнения анализа не допускают высыхания лунок планшета.

S Воспроизводимость результатов анализа существенно зависит от тщательности отмывки колонки в процессе пробоподготовки. Внимательно следуют описанной процедуре отмывки колонки.

S На всех стадиях инкубации избегайте воздействия прямого солнечного света. При инкубации рекомендуется прикрыть планшет непрозрачным экраном.

2.2.1, Приготовление раствора коньюгата

Конъюгат левомицетина с ферментом (флакон с красной крышкой) поставляется в концентрированном виде. Поскольку разбавленный раствор коньюгата имеет ограниченную стабильность, следует готовить раствор по потребности. Перед разбавлением концентрированного раствора коньюгата осторожно встряхните содержимое флакона. Для приготовления готового к

19

использованию раствора конъюгата разбавьте концентрат конъюгата буферным раствором №1, имеющимся в комплекте набора, в отношении 1:11 (например, смешайте 200 мкл концентрата коньюгата с 2 мл буфера -данного разведения достаточно для 4-х стрипов)

2.2.2.    Приготовление раствора антител.

Антитела к левомицетину (флакон с черной крышкой) поставляются в концентрированном виде. Поскольку разбавленный раствор антител имеет ограниченную стабильность, следует готовить раствор по потребности. Перед разбавлением концентрата антител осторожно встряхните содержимое флакона. Для приготовления готового раствора антител разбавьте концентрат буферным раствором №1, имеющимся в комплекте набора, в отношении 1:11 (например, смешайте 200 мкл концентрата антител с 2 мл буфера №1 - данного разведения достаточно для 4-х стрипов).

2.2.3.    Приготовление буферного раствора №2 (только для проб молока).

Для приготовления    готового    буферного    раствора №2,

использующегося при исследовании проб молока, разбавьте концентрат буфера №2 (флакон с белой крышкой) 9 мл буферного раствора №1 и энергично перемешайте, (например, с помощью встряхивателя типа «вортекс»), периодически подогревая раствор до 40°С. Мутность раствора не влияет на результат определения, однако осадок на дне флакона после перемешивания должен равномерно распределяться в объеме раствора.

2.2.4.    Микротитровальный планшет, сенсибилизированный антителами.

Перед выполнением анализа из планшета следует извлечь необходимое количество стрипов.

20

Остальные стрипы следует тщательно    упаковать    в

фольгированный пакет вместе с осушителем, закрыть застежку пакета и поместить на хранение при температуре 2 - 8 °С.

2.2.5. Стандартные растворы.

Для приготовления готовых к использованию стандартных растворов левомицетина концентрированные растворы, входящие в состав набора, следует разбавить буфером №1 (или буфером 2) в указанной пропорции.

Не используйте пластиковую посуду, для разбавления рекомендуется использовать только стеклянную посуду!

После разбавления тщательно перемешайте готовые растворы.

Для каждой серии исследований следует готовить свежие стандартные растворы.

Стандарт 1: 50 мкл концентрата №1+ 450 мкл буферного раствора №1 *    0 нг/л

Стандарт 2: 50 мкл концентрата №2 + 450 мкл буферного раствора №1 * 50 нг/л Стандарт 3: 50 мкл концентрата №3+ 450    мкл буферного раствора №1 *    150 нг/л

Стандарт 4: 50 мкл концентрата №4+ 450    мкл буферного раствора №1 *    450 нг/л

Стандарт 5: 50 мкл концентрата №5+ 450    мкл буферного раствора №1*    1350    нг/л

Стандарт 6: 50 мкл концентрата №6+ 450    мкл буферного раствора №1 *    4050    нг/л

* При исследовании образцов молока для разведения стандартов используйте буферный раствор №2.

2.2.6. Процедура анализа.

1. Вставьте в рамку планшета лунки в количестве, необходимом для выполнения всех запланированных определений в двух повторностях. Запишите координаты лунок, предназначенных для стандартных растворов и подготовленных исследуемых растворов. Пример формы записи приведен на Рис. 1.

ВВЕДЕНИЕ

Продовольственное сырье и пищевые продукты животного происхождения, реализуемые для потребления человеком, не должны содержать остатки некоторых антибактериальных препаратов (например, левомицетина, фторхинолонов и нитрофуранов).

Ветеринарные препараты, использующиеся в терапевтических целях (стрептомицин, пенициллин, тетрациклин, сульфаметазин), применяются под строгим государственным надзором и при условии обязательной выдержки животных перед забоем до полного вывода остатков ветеринарных препаратов из организма животного

Данные меры предпринимаются в развитых странах в связи с серьезной опасностью, которую представляют многие ветеринарные препараты для здоровья человека при их хроническом поступлении

Так, например, остатки антибактериальных препаратов, попадающие в пищевые продукты животного происхождения и далее, в организм человека, угнетают микрофлору кишечника, провоцируют дисбактериоз, проявления аллергического характера, вторичные грибковые инфекции, снижают сопротивляемость организма, могут провоцировать нарушения функции почек и кроветворных органов. Имеются сведения о гемотоксичности и канцерогенных свойствах некоторых сульфаниламидных препаратов, мутагенные и канцерогенные свойства обнаружены также у нитрофуранов.

Левомицетин (хлорамфеникол) обладает гемотоксическими свойствами и может вызвать аплазию костного мозга (потеря способности к кроветворению) и, вследствие этого, апластическую анемию, сопровождающуюся быстрым снижением уровня гемоглобина и эритроцитов в крови. При развитии явлений апластической анемии

21

С1 С1 ПЗ ПЗ П11 П11 П19 П19 П27 П27 П35 П35 С2 С2 П4 П4 П12 П12 П20 П20 П28 П28 П36 П36 СЗ СЗ П5 П5 П13 П13 П21 П21 П29 П29 П37 П37 С4 С4 П6 П6 П14 П14 П22 П22 ПЗО ПЗО П38 П38 С5 С5 П7 П7 П15 П15 П23 П23 П31 П31 П39 П39 С6 С6 П8 П8 П16 П16 П24 П24 П32 П32 П49 П49 П1 П1 П9 П9 П17 П17 П25 П25 ПЗЗ ПЗЗ П41 П41 П2 П2 П10 П10 П18 П18 П26 П26 П34 П34 П42 П42

Рисунок 1. Пример формы записи координат лунок перед выполнением анализа (С-стандарты, П-пробы).

2.    Добавьте по 50 мкл стандартных и исследуемых растворов в соответствующие пары лунок

3.    Добавьте по 50 мкл разбавленного раствора коньюгата на донышко каждой лунки.

4.    Добавьте в каждую лунку по 50 мкл готового разбавленного раствора антител. Перемешайте вручную, соблюдая осторожность, и оставьте на инкубацию в течение 2-х часов при комнатной температуре (20 - 25°С).

5.    Вылейте жидкость из лунок, переверните рамку планшета и выбейте капельки жидкости, оставшиеся в лунках, путем энергичного троекратного постукивания рамки с лунками по столу, накрытому фильтровальной бумагой. Наполните лунки 250 мкл дистиллированной воды и снова вылейте воду. Выбейте капельки воды, как описано выше. Повторите процедуру промывки лунок водой еще два раза.

6.    Добавьте по 50 мкл субстрата и по 50 мкл хромогена в каждую лунку. Перемешайте вручную, соблюдая осторожность, и инкубируйте при комнатной температуре (20 - 25°С) в течение 30 минут в темноте.

7.    Добавьте в каждую лунку по 100 мкл стоп-реагента и хорошо перемешайте вручную. В течение 60-ти минут после добавления стоп-

4

молодые формы эритроцитов не обнаруживаются не только в крови, но и в пунктате костного мозга

Стрептомицин обладает ототоксичными и нефротоксичными свойствами, вызывает поражения слухового нерва (ототоксичность) и связанные с этим нарушения слуха и вестибулярные расстройства; при нарушениях функции почек возможны также нейротоксические явления.

Особенно чувствительны к стрептомицину лица, перенесшие неврит слухового нерва, инфаркт, страдающие стенокардией, гипертонией, болезнями печени и почек.

Потребление человеком продуктов, содержащих остаточные количества тетрациклинов, приводит к угнетению микрофлоры кишечника, может спровоцировать дисбактериоз, вторичные грибковые инфекции, проявления аллергического характера, вызвать тошноту, рвоту, расстройства функции кишечника, изменения слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта, снижает сопротивляемость организма и повышает устойчивость патогенных микроорганизмов.

Особенно чувствительны к препаратам тетрациклиновой группы беременные, дети раннего возраста, лица, страдающие болезнями печени и почек.

Для определения остатков ветеринарных препаратов    в

продовольственном сырье и пищевых продуктах используются инструментальные физико-химические методы анализа, такие как жидкостная хроматография высокого давления (ВЭЖХ) и хромато-масс-спектрометрия (ГХ-МС). Эти методы, однако, предусматривают использование дорогостоящего оборудования, нуждающегося    в

высококвалифицированном обслуживании.

В последнее время для скрининга остатков ветеринарных препаратов применяется удобный и быстрый иммуноферментный метод анализа (ИФА, ELISAJ, являющийся официальным методом контроля

5

продуктов    животного    происхождения, принятым в странах

Евросоюза (Директива 93/257/ЕЕС).

В основе иммуноферментного метода анализа лежит взаимодействие антигенов (определяемых антибактериальных препаратов) с антителами в лунках микротитровального полистиролового планшета.

Поставляемый планшет сенсибилизирован антителами «захвата», специфичными к антителам к тому или иному антибактериальному препарату (антигену).

Анализ выполняется следующим образом. Исследуемые (стандартные) образцы, препарат, содержащий антитела к определяемому антигену, и препарат, содержащий коньюгат антигена с ферментом, дозируются в лунки сенсибилизированного планшета. При инкубации планшета в течение определенного времени свободные и конъюгированные молекулы антигена, конкурируя между собой, связываются антителами к антигену. В то же самое время при инкубации происходит иммуносорбция этих антител на поверхность лунок планшета за счет их взаимодействия с антителами «захвата» на поверхности.

Далее, путем промывки планшета, из лунок удаляются свободные молекулы коньюгата.

После промывки планшета в его лунки дозируется раствор, содержащий субстрат и хромоген. В процессе инкубации, при химическом взаимодействии субстрата с хромогеном, в котором ферментный фрагмент молекулы коньюгата, связанной на поверхности лунки, выступает в качестве катализатора, образуются окрашенные продукты реакции. После определенного времени развития данной цветной реакции, в результате которой бесцветный хромоген окрашивается в голубой цвет, в лунки добавляется стоп-реагент, при этом голубой цвет раствора меняется на желтый.

6

Оптическая плотность в лунках, измеренная на планшетном фотометре при 450 нм, обратно пропорциональна концентрации определяемого антибактериального препарата в исследуемых образцах.

А. Количественное определение левомицетина в продовольственном сырье и продуктах питания животного происхождения методом конкурентного иммуноферментного анализа

1. ПРИНЦИП МЕТОДА

Набор реагентов «RIDASCREEN® Хлорамфеникол» предназначен для количественного определения левомицетина в молоке, сухом молоке, меде, креветках, рыбной муке, мясе и яйцах методом конкурентного иммуноферментного анализа (ELISA/ИФА). В основе процедуры анализа лежит взаимодействие антигенов с антителами.

1.1.Общие положения.

Поставляемый в комплекте набора планшет сенсибилизирован антителами «захвата», специфичными к антителам к левомицетину. Анализ выполняется следующим образом. Исследуемые (стандартные) образцы, препарат, содержащий антитела к левомицетину, и препарат, содержащий конъюгат левомицетина с ферментом, дозируются в лунки активированного планшета. При инкубации планшета в течение определенного времени молекулы левомицетина и молекулы конъюгата левомицетина с ферментом, конкурируя между собой, связываются антителами к левомицетину. В то же самое время при инкубации происходит иммуносорбция этих антител на поверхность лунок планшета за счет их взаимодействия с антителами «захвата» на поверхности.

Далее, путем промывки планшета, из лунок удаляются свободные молекулы конъюгата.

После промывки планшета в его лунки дозируется раствор, содержащий субстрат и хромоген. В процессе инкубации, при химическом взаимодействии субстрата с хромогеном, в котором ферментный фрагмент молекулы конъюгата, связанной на поверхности лунки, выступает в

9

качестве катализатора, образуются окрашенные продукты реакции. После определенного времени развития данной цветной реакции, в результате которой бесцветный хромоген окрашивается в голубой цвет, в лунки добавляется стоп-реагент, при этом голубой цвет раствора меняется на желтый.

Оптическая плотность в лунках, измеренная на планшетном фотометре при 450 нм, обратно пропорциональна концентрации левомицетина в исследуемых образцах.

1.2. Реактивы и оборудование.

1.2.1.    Средства измерения.

Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.

Меры массы по ГОСТ 7328.

Спектрофотометр (ридер), снабженный фильтром на 450 нм.

Дозаторы переменного объема на 50, 100, 250, 500 и 1000 мкл.

Цилиндр мерный 2-го класса точности вместимостью 100 мл по ГОСТ 1770.

Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1 и 10 мл по ГОСТ 29227.

1.2.2.    Вспомогательные устройства.

Центрифуга.

Шейкер типа "вортекс".

Лабораторный встряхиватель.

Гомогенизатор (Stomacher, Ultraturrax).

Микроиспаритель для испарения растворов досуха.

Магнитная мешалка.

10

Лабораторная посуда (стакан химический вместимостью 250 мл по ГОСТ 25336 или колба коническая со шлифом и притертой пробкой на 250 мл типа КН-1 по ТУ 92-891.029-91, воронки лабораторные типа В-36 или В-75 по ГОСТ 25336, стеклянный бюкс по ГОСТ 25336).

Разовые пипетки (пастерки).

Холодильник бытовой.

1.2.3. Реактивы и материалы.

Дистиллированная вода.

Этилацетат,

Изооктан/хлороформ (2/3).

Осадитель 1 (Каррез 1) - 0.36 М раствор ферроцианида (II) калия х 3 ГСО (1,52 г растворить в 10 мл дистиллированной воды).

Осадитель 2 (Каррез 2) - 1.04 М раствор сульфата цинка х 7 Н₂0 (2,99 г растворить в 10 мл дистиллированной воды).

В состав набора входят материалы и реагенты в количестве, достаточном для выполнения 96 определений (включая калибровку по стандартным растворам).

Набор содержит:

Микротитровальный планшет на 96 лунок (12 стрипов по 8 лунок), сенсибилизированных антителами «захвата» -1 шт.

Комплект стандартных растворов левомицетина со следующими концентрациями: 0 нг/л, 500 нг/л, 1500 нг/л, 4500 нг/л, 13500 нг/л, 40500 нг/л, в буферном растворе, концентрат, по 1,3 мл - 6 х 1 шт.

Коньюгат левомицетина с пероксидазой, концентрат, 0,7 мл: красная крышка - 1 шт.