ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ВИРУСНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ЖИВОТНЫХ

ВЕТЕРИНАРНАЯ

МЕДИЦИНА

- САНКТ-ПЕТЕРБУРГ • •МОСКВА-•КРАСНОДАР• •2015-

Краткий словарь использованных ветеринарных терминов    665

lllinilllll<l|li11№llllllllllHWIIl1l1l|UllllhMIIII]lllllllll№lltlinilllllllIIUIII1IUI1||ll1lllllllltl|[|U|lll|IUI1IH|llll|Ulimill|||Ll|llll|l1lllll|HIIII|UHIIIIinillllWl!UllUlinillllllblinilltll№lltllllll1l|l»l

В, безоболочечные — вирусы, в структуре которых отсутствует липопротеидная оболочка.

В. оболочечные — вирусы, в структуре которых присутствует липопротеидная оболочка.

Вирусоскопия (вирусы +■ skopeo — смотрю, наблюдаю) — метод микроскопического изучения морфологии вирусов.

Гемагглютинация (греч. haima кровь + agglutinatio — склеивание) — склеивание и выпадение в осадок эритроцитов под воздействием вирусов, бактерий, токсинов идр., способных адсорбироваться на поверхности эритроцитов, а также ге-магглютининов.

Гемадсорбция (греч. haima — кровь + adsorbtio — поверхностное поглощение) — способность культур клеток, зараженных вирусами, адсорбировать эритроциты различных животных, что объясняется включением в плазматическую мембрану синтезирующихся вирусных белков.

Диагностика (греч. diagnostikos — способный распознавать) — раздел клинической ветеринарии о методах исследования животных для распознавания их болезней и состояния организма с целью назначения необходимого лечения и профилактических мероприятий.

Диагностический набор — набор стандартных препаратов, используемых для постановки диагноза (антиген, специфическая и контрольная сыворотки идр,),

ДНК-зондов метод — метод генодиагностики, основанный на способности меченой одноцепочечной молекулы ДНК взаимодействовать с комплементарной ей молекулой нуклеиновой кислоты определенного вируса с образованием двухцепочечной структуры.

ДНК-содерэкащие вирусы — вирусы, имеющие один тип нуклеиновой кислоты — ДНК, у большинства она представлена двухцепочечной структурой, у некоторых — одной цепью.

Идентификация (лат. identtftco — отождествляю) — признание тождественности, опознание-определение видовой (типовой) принадлежности микроорганизма на основании всестороннего изучения его свойств.

Иммуноферментный анализ — группа методов, позволяющих выявлять комплекс антиген —■ антитело с помощью субстрата, который расщепляется ферментом (пероксидазой, щелочной фосфатазой идр.) с появлением окрашивания.

Инактивация вирусов (лат. inactivus — неактивный) — уничтожение инфекционной активности вирусов путем повреждения генома физическим или химическим воздействием.

666    Лабораторная    диагностика    вирусных    болезней    животных

1|Г1Н||№11|||1||1||||1|Ш1||Ц|||Н1|.......................................................................................................................................................................................

Индикация возбудителя инфекции (лат* indicatio — указание) —- выявление и идентификация патогенных микроорганизмов в различных объектах.

Инокуляция возбудителя (лат. inoculatio — прививка) — введение возбудителя путем инъекции (искусственное заражение или внесение его в организм животного членистоногими переносчиками при укусах).

Консервирование вирусов (лат. conservare — сохранять) —■ общее название методов воздействия физическими и (или) химическими факторами на какие-либо объекты с целью длительного сохранения в них вирусов.

Контаминация (лат. contaminatio — смешение) — обсеменение поверхности тела животного, предметов ухода, почвы, воды, кормов, биопрепаратов и других объектов патогенными микроорганизмами.

Культивирование вирусов — выращивание вирусов в искусственных условиях.

Культуры клеток (клеточные культуры) — клетки многоклеточного организма, живущие вне его в искусственно созданных условиях среды.

Куриный эмбрион — оплодотворенное куриное яйцо, выдержанное в инкубаторе.

Лабораторные животные — животные, используемые в лабораториях при проведении исследований (мыши, крысы, кролики, морские свинки, хомяки, голуби и др.).

Лиофилизация (греч. 1уо — растворяю + phileo — люблю) — высушивание предварительно замороженного материала в глубоком вакууме.

Моноклональные антитела — строго специфические антитела, способные выявить минимальные различия в химическом составе и пространственной конфигурации молекул, являются продуктом отдельных клонов антителопродуцирующих клеток.

Парные сыворотки — сыворотки, взятые в самом начале заболевания и 2...3 недели спустя. Повышение титра антител в 4 раза и более считается основой положительной реакции.

Пассаж (фр, passage — переход) — последовательное заражение восприимчивых объектов (животные, куриные эмбрионы, культуры клеток) микроорганизмами.

Полимеразная цепная реакция (от англ. Polymerase Chain Reaction, ПЦР) —- метод генодиагностики, основанный на многократном увеличении копий строго определенных фрагментов

Краткий словарь использованных ветеринарных терминов    657

.................................пи......................................................................................................................................................................................

молекулы ДНК вируса при помощи фермента термостабильной ДНК-полимеразы.

Реакция гемагглютинацки (РГА) — метод обнаружения и идентификации вирусов, основанный на способности многих вирусов, обладающих тканевым тропизмом, агглютинировать эритроциты определенных видов животных.

Реакция иммуиофлуоресценции (РИФ) (лат. fluorescens — светящийся) — серологическая реакция, основанная на взаимодействии антиген — антитело, при этом один из компонентов, участвующий в реакции, связан с флуоресцирующим красителем.

Реакция нейтрализации (PH) — метод идентификации вируса, основанный на феномене потери им инфекционности в результате взаимодействия со специфическими антителами.

Реакция связывания компемента (РСК) — метод серологического исследования, основанный на способности образующегося комплекса антиген — антитело связывать комплемент, что выявляется по отсутствию гемолиза при добавлении гемолизина и эритроцитов.

Реакция торможения гемагглютинацки (РТГА) — метод идентификации вируса или выявления противовирусных антител в сыворотке крови, основанный на феномене отсутствия агглютинации эритроцитов вирусом, в присутствии специфических к нему антител.

РНК-содержащие вирусы — вирусы, имеющие один тип нуклеиновой кислоты — РНК, у большинства она представлена одной цепью, у некоторых — двухцепочечной структурой.

Серовариант — самостоятельная группа внутри определенного вида и серогруппы (серотипа) микроорганизмов, обусловленная наличием антигенов, отличающихся от антигенов других микроорганизмов этого вида и серогруппы (серотипа), что выявляется с помощью серологических реакций.

Серогруппа (серотип) — самостоятельная группа внутри определенного вида микроорганизмов, обусловленная наличием антигенов, отличающихся от антигенов других микроорганизмов этого вида, что выявляется с помощью серологических реакций.

Серологические реакции — реакции, широко используемые при постановке диагноза инфекционных болезней, методы обнаружения антител и антигенов в крови и других тканях.

Сыворотка крови (лат. serum — сыворотка + sanguis — кровь) — составная часть крови, представляющая собой плазму, из которой удалены форменные элементы и фибрин в процессе свертывания крови.

Тельца включения — своеобразные морфологические образования, обнаруживаемые в цитоплазме или ядрах клеток определенных тканей при некоторых вирусных инфекциях и состоящие из скопления вирионов и вирусных белков.

Термолабильность (греч. thermos —- теплый + лат. labilis — нестойкий) — неустойчивый к тепловому воздействию, изменяющийся при нагревании.

Термостабильность (греч. thermos — теплый + лат. stabilis — неизменный) — сохраняющий свои свойства при нагревании.

Титр вируса — концентрация инфекционных единиц вируса в определенном объеме материала.

Цитопатогеиное действие вирусов (ЦПД, цитопатический эффект) — специфическая морфологическая деструкция (разрушение) и функциональная патология зараженных вирусами клеток в культурах.

Штамм (нем. stamm — род, корень) — культура микроорганизмов одного вида с одинаковыми морфологическими и биологическими свойствами.

Элементарные тельца — см. Вирион (2, 3).

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ

СПИСОК

1.    Лабораторные исследования в ветеринарии. Вирусные, риккетсиозные и паразитарные болезни: справочник / под ред. Б. И, Антонова. ~~ М.: Агропромиздат, 1987. — 240 с.

2.    Вакулое, И. А. Эпизоотологический словарь-справочник / И. А. Бакулов, Г. Г. Юрков, В. А. Ведерников [и др.]. — М.: Россельхозиздат, 1986.

3.    Нымм, Э, М. Словарь ветеринарных микробиологических и вирусологических терминов / Э. М. Нымм, К. А. Петерсон, Э. А. Аавер [и др.]. — М,: Росагропромиздат, 1989.

ПРЕДМЕТНЫЙ

УКАЗАТЕЛЬ

Агар мясо-пептонный (МПА) 101, 109, 125, 326, 387, 444, 456, 476, 483, 542, 588 Альбумин бычий 7, 226, 618 Аппарат Киппа 126, 480 Бульон мясо-пептонный (МПБ) 78, 101, 109, 125, 326, 444, 456, 476, 483, 496, 542, 588 —    триптозо-фосфатный 519 Буфер верокаловый 35, 375 —    боратный 148 —    фосфатно-солевой 174, 315, 328, 561, 604 —    калий-фосфатный 231, 236, 407 *“ карбонатно-бикарбонатный 335, 561, 604, 618 Гемолизин 25, 114, 300, 369,    507 Гемолитическая система (гемсистема) 25, 116, 216 Жидкость Руге 106, 446 —    Карнуа 108 Иммуноасцитическая жидкость (ИАЖ) 84 Комплемент 27, 116, 216, 300, 370,    507

Метод вирусоскопии 99, 443, 548 —    Кербера 66 —    иммуноферментного анализа (ИФА) 88, 159, 173, 228, 233, 244, 314, 328, 336, 349, 406, 409, 436, 561, 603, 609, 617 —- кофал-теста 514 —    перекрестного иммунитета 64 —    полимеразной цепной реакции (ПЦР) 180, 253, 307, 342, 416, 425, 625 —    Рида и Менча 66, 242, 297, 324, 380, 394, 500, 523, 552, 556 —    электронной микроскопии 327,593 Окраска гистопрепаратов по Ленцу 80 —    Турбиной 584 —    Туревичу 81,584 —    мазков по Борману — Гайнуллиной 74 —    Михину 74 —    Морозову 100, 446 —    Муромцеву 73 —    Пашену 100, 447 —    Селлерсу 74 Перевиваемая линия почки свиньи (СПЭВ) 70, 386, 392

---

Предметный указатель

662    Лабораторная    диагностика    вирусных    болезней    животных

..............................................................................................................................................................................................................................

СОДЕРЖАНИЕ

1. Болезни, общие для всех

или нескольких видов животных..............*.... б

Ящур...........,..............................5

количественному определению антител к вирусу ящура в сыворотке крови животных (утверждены 10 февраля 1983 г., №115-6а)............5

1.2.    Методические указания по выделению и идентификации штаммов вируса ящура (одобрены и рекомендованы

15 октября 1973 г., б/н) ................20

Бешенство................. 72

1.3.    Методические указания

по лабораторной диагностике бешенства

(утверждены 27 февраля 1970 г,, б/н).....72

Болезнь Ауески ........................ 82

1.4.    Методические указания по лабораторной

диагностике болезни Ауески животных (рекомендованы 18 мая 1978 г., б/н)......82

1.5.    Инструкция по применению набора для определения антител к гликопротеину gl

свиней методом конкурентного иммуноферментного анализа

«ZETECT-Серелиза-АУЕСКИ-Ат»........88

Оспа.........................................98

1.6. Методические указания по лабораторной диагностике оспы крупного рогатого скота, овец, коз, свиней и верблюдов (утверждены 12 ноября 1985 г,, № 115-6а) . 98

664    Лабораторная    диагностика    вирусных    болезней    животных

|lll|IIH[||ll|||HIIIIIMIINIIlinilllllllllllllll|l|lll|llll|IU|llllllllinilll|l|rilllirlllll!lin»l№IIIIIIIIIHIIIIIIIIIMItlllllltllllHIIIIII(l<l№IIHIIIIIIIIIIII|UII|lllllittlllimilllllUIJ[lllll!lllinMIIIIIIHIMIIIIIIJIIU

Катаральная лихорадка крупного

рогатого скота, овец и коз............. . .. . 107

1.7. Методические указания по лабораторной диагностике катаральной лихорадки крупного рогатого скота, овец и коз (утверждены 11 июня 1986 г., № 432-5) .. 107

2. Болезни лошадей ................ 123

Грипп.......................................123

2.1. Временное наставление по лабораторной диагностике гриппа лошадей (рекомендовано 15 января 1973 г., б/н)... 123

Ринопневмония...............................140

2.3.    Методические указания

по лабораторной диагностике ринопневмонии лошадей

(утверждены 27 августа 1980 г., б/н).....140

Инфекционная анемия......... 145

2.4.    Инструкция по применению набора для диагностики инфекционной

преципитации (РДП)

(утверждена 24 марта 2009 г.)..........145

3. Болезни    крупного рогатого скота.................153

Лейкоз......................................153

3.1.    Методические указания по диагностике лейкоза крупного рогатого скота (утверждены 23 июля 2000 г.,

№ 13-7-2/2130)......................153

3.2.    Инструкция по применению набора

173

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ВИРУСНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ЖИВОТНЫХ

Составители:

П. И. Барышников,

В. В. Разумовская

Издание второе, исправленное

ДОПУЩЕНО

Министерством, сельского хозяйства РФ в качестве учебкою пособия для студентов вузов, обучающихся по направлению подготовки ('специальности^ «Ветеринария»

ДОПУЩЕНО

УМО вузов РФ по образованию в области зоотехнии и ветеринарии в качестве учебного пособия для студентов вузов, обучающихся по направлению подготовки (специальности) «Ветеринария» (квалификация (степень) «Ветеринарный врач»)

Содержание    665

...................................................................................................................................................................................................................

3.4, Инструкция по применению тест-системы «ЛЕЙКОЗ» для выявления вируса лейкоза крупного рогатого скота (КРС) методом

по лабораторной диагностике вирусных респираторно-кишечных инфекций крупного рогатого скота

3.6.    Наставление по применению набора компонентов для диагностики вирусной диареи — болезни слизистых крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа (утверждено 15 июля 1997 г.,

№ 13-7-2/1012)......................228

3.7.    Инструкция по применению набор для диагностики вирусной диареи — болезни слизистых КРС методом иммуноферментного анализа

3.8.    Методика по исследованию спермы крупного рогатого скота

на контаминацию вирусом инфекционного ринотрахеита — пустулевного вульвовагинита (ИРТ-ИПВ) (утверждена 8 февраля 1983 г., б/н) ..... 238

3.9.    Инструкция по применению набора для

определения антител к вирусу инфекционного ринотрахеита/ инфекционного пустулезного вульвовагинита крупного рогатого скота в сыворотке крови методом непрямого иммуноферментного анализа «ZETECT-Серелиза-ИРТ/ИПВ-Ат»......244

3.10. Инструкция по применению тест-системы

для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота методом полимеразной цепной реакции (утверждена 21 мая 2009 г.)

ББК 48.7я73 Л 12

Л12 Лабораторная диагностика вирусных болезней животных / Сост, П. И. Барышников, В, В. Разумовская: Учебное пособие. — 2-е изд., испр. — СПб,: Издательство «Лань», 2015.— 672с,: ил, — (Учебники для вузов. Специальная литература).

ISBN 978-5-8114-1882-4

Учебное издание содержит действующие методические указания, наставления и инструкции по лабораторной диагностике вирусных болезней животных, утвержденные Министерством сельского хозяйства СССР, РФ и Россельхознадзором РФ. Документы систематизированы по видам животных, в большинстве прошли многолетнюю аппробацию в Алтайской краевой ветеринарной лаборатории и включены в «Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения» (по состоянию на июль 2011 г.). Приводятся предметный указатель и библиографический список.

Предназначено для студентов, обучающихся по специальности «Ветеринария» и направлению «Ветеринарно-санитарная экспертиза», ветеринарных врачей и лаборантов ветеринарных лабораторий.

ББК 48,7я73

Рецензенты:

И, И. ГУСЛАВСКИЙ — доктор ветеринарных наук, профессор кафедры микробиологии, эпизоотологии, паразитологии и ВСЭ Алтайского государственного аграрного университета;

В, И. ПЛЕШАКОВА доктор ветеринарных наук, профессор, зав. кафедрой ветеринарной микробиологии, вирусологии и иммунологии Омского государственного аграрного университета им. П. А. Столыпина;

В. А. СИНИЦЫН —■ доктор ветеринарных наук, зав. отделом ФГБУ «Новосибирская межрегиональная ветеринарная лаборатория».

Обложка © Издательство «Лань», 2015 Е. А. ВЛАСОВА © Коллектив авторов, 2015 © Издательство «Лань»,

художественное оформление, 2015

РИНОПНЕВМОНИЯ

2 3

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ РИНОПНЕВМОНИИ ЛОШАДЕЙ

(утверждены 27 августа 1980 г., б/н)

1.    Общие положении.

1.1.    Лабораторная диагностика ринопневмонии лошадей заключается в выделении вируса на культуре клеток и его идентификации в одной из реакций: реакции торможения гемадсорбции (РТГАд), реакции иммунофлуоресценции (ИФ) или реакции нейтрализации (PH); выявлении антител в сыворотке крови больных и переболевших животных в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) или PH.

1.2.    Диагноз на ринопневмонию лошадей устанавливают на основании результатов лабораторного исследования, анализа эпизоотологических и клинических данных, а также патологоанатомических изменений.

1.3.    Для постановки лабораторного диагноза путем выделения вируса и его идентификации требуется от 4 до 18 сут, по выявлению прироста антител в крови животных — от 2 до 4 нед,

2.    Взятие и подготовка материала для исследования.

2.1.    От больных животных тампонами берут слизь из носовой полости, от павших животных — кусочки легких (на границе здоровой и пораженной ткани).

Патологический материал помещают в пенициллиновые флаконы с 2... 5 мл раствора Хенкса и в термосе со льдом направляют в лабораторию.

2.2.    В лаборатории флаконы с тампонами подвергают однократному замораживанию и оттаиванию, после чего тампоны отжимают и удаляют, а содержимое флаконов центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 20 мин. Надоса-дочную жидкость отсасывают в стерильную пробирку, куда вносят по 500 ЕД/мл пенициллина и стрептомицина, выдерживают при 4°С 2...4 ч и используют для заражения культуры клеток.

2. Болезни лошадей    141

HIIIIIIIIIHII(lllilllHlllllllllllllltllllirilllllllllll|lltlltllllllliril|l1HIIIII|l||tlll|l|IIIJ|lllllllflllllllflllllliriiniJlllHlllliriritllirillllll|lllllllllUll|llllllllllHlllll{ll|[lltlllLlllllllUIIIUIIIIIIU(ailLUlUILUllll

2.3. Из кусочков органов готовят на растворе Хенкса 10%-ную суспензию, содержащую по 500 ЕД/мл пенициллина и стрептомицина, центрифугируют 20 мин при 3 тыс. об/мин. Надосадочную жидкость отсасывают и используют для заражения культуры клеток.

3. Выделение вируса.

3.1.    Для выделения вируса ринопневмонии лошадей заражают надосадочной жидкостью (пп. 2.2, 2.3) одну из культур клеток: почки эмбриона коровы (ПЭК), почки эмбриона свиньи (ПЭС), почки кролика (ПК) или почки эмбриона лошади (ПЭЛ), приготовленную в соответствии с «Методическими рекомендациями по получению, культивированию и использованию в научных и производствен-ных целях первичных, перевиваемых и диплоидных культур клеток животного происхождения*, утвержденными Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 26 января 1978 г.

3.2.    Пробирки с монослоем культуры клеток отмывают раствором Хенкса и заражают по 0,3...0,4 мл испытуемым материалом. Пробирки выдерживают в термостате при температуре 37,5°С в течение 1,5...2 ч, затем из них удаляют исследуемую жидкость, промывают раствором Хенкса и добавляют 1...2 мл 0,5% -ного гидролизата лак-тальбумина. На каждый материал используют 5...6 пробирок культуры клеток. Для контроля оставляют 4 пробирки, в которых заменяют ростовую среду на поддерживающую. Пробирки с культурой клеток помещают в термостат при температуре 37,5°С и ежедневно просматривают под микроскопом.

3.3.    Изменения в культуре клеток, вызванные вирусом ринопневмонии, характеризуются округлением клеток и отслоением их от стекла, образованием многоядерных клеток (симпластов). Указанное цитопатичеркое действие (ЦПД) появляется на 3...6-Й день.

При отсутствии ЦПД в первом пассаже или слабом его проявлении проводят три последовательных пассажа. Каждый пассаж проверяют в реакции гемадсорбции с эритроцитами лошади.

142    Лабораторная    диагностика    вирусных    болезней    животных

.............................................................................................................................................................................................................

4- Идентификация вируса в реакции гемадсорбции и торможения гемадсорбции.

4.1.    Для постановки реакции гемадсорбции (РГАд) отбирают 3...4 пробирки с зараженной культурой клеток с выраженным ЦПД, сливают питательную среду, вносят в них по 1мл 2% ‘ной взвеси эритроцитов и оставляют на контакт на 30...40 мин при температуре 37°С. Затем эритроциты удаляют, пробирки с культурой промывают физиологическим раствором путем легкого покачивания и просматривают под микроскопом при малом увеличении.

При наличии вируса в материале отчетливо видны прикрепившиеся к клеткам эритроциты, тогда как в контрольных пробирках они проплывают в поле зрения.

При положительной РГАд идентификацию вируса проводят в РТГАд.

4.2.    Для постановки реакции торможения гемадсорбции в 4 пробирки с зараженной культурой клеток вносят по 0,5 мл неразведенной специфической сыворотки, оставляют на контакт на 30...40 мин при температуре 37°С. Затем во все пробирки вносят по 1 мл 2%-ноЙ взвеси эритроцитов. Через 30 мин эритроциты удаляют, а пробирки с культурой промывают физиологическим раствором путем легкого покачивания и учитывают реакцию. В пробирках, обработанных специфической сывороткой, при наличии вируса ринопневмонии гемадсорбция отсутствует.

5. Идентификация вируса методом иммунофлуорес-ценции.

5.1. Для идентификации вируса в реакции ИФ культуру клеток выращивают в пробирках на покровных стеклах. С появлением монослоя его заражают выделенным вирусом по общепринятой методике. На 2...3-е сутки стеклышки извлекают из пробирок, фиксируют в охлажденном ацетоне 15...20 мин, отмывают в забуференном физрастворе и окрашивают флуоресцирующей сывороткой на одно разведение ниже ее титра. Препараты выдерживают в течение 30.. .40 мин во влажной камере при 37°С, затем трехкратно отмывают физиологическим раствором, высушивают при комнатной температуре и просматривают под микроскопом.

5.2. Учет реакции. Реакцию считают положительной при наличии специфической флуоресценции, которая характеризуется тем, что в препаратах, окрашенных флуоресцирующей сывороткой, ткань флуоресцирует тусклым зеленовато-серым цветом, а вирусный антиген при этом выявляется в виде яркого желто-зеленого свечения в пери-нуклеарной зоне не менее 50% клеток при отсутствии флуоресценции в контрольных незаряженных препаратах.

6. Идентификация вируса в реакции нейтрализации.

6.1.    Предварительно определяют титр вируса. Для этого культуральную вируссодержащую жидкость центрифугируют (при 3 тыс. об/мин в течение 20 мин), надоса-дочную жидкость титруют в разведении от 10"¹ до 10~⁸ на растворе Хенкса. Каждым разведением вируса заражают 4 пробирки с культурой клеток. Результаты учитывают на 6-е сутки.

6.2.    За титр вируса принимают его наибольшее разведение, при котором отмечают ЦПД в 50% пробирок с зараженной культурой клеток. Титр выделенного вируса должен быть не менее 10^-2 ЦПД_б0/мл. Реакцию ставят со 100 ТЦД₅₀/мл вируса.

6.3.    Специфическую и контрольную (отрицательную) сыворотки инактивируют при температуре 56°С в течение 30 мин, готовят два ряда двукратных разведений. Количество разведений должно на одно превышать известный (указанный на ампуле) титр специфической сыворотки.

6.4.    В каждую пробирку, содержащую по 2 мл сыворотки, вносят равный объем вируса. Смесь сыворотки и вируса оставляют для контакта на 1..Д,5ч при температуре 18,..22°С. Каждым разведением сыворотки с вирусом заражают по 4 пробирки с культурой клеток в дозе 1,0 мл. Культуру инкубируют при 37,5°С, ежедневно просматривают под микроскопом.

6.5.    Учет реакции нейтрализации проводят на 6-й день. Подавление ЦПД в пробирках со специфической сывороткой и исследуемым вирусом при наличии выраженного ЦПД в контроле с нормальной сывороткой указывает на видовую принадлежность вируса. Вирус считают иден-

Лабораторная диагностика вирусных болезней животных

тифицированным при наличии нейтрализации не менее чем до одной трети титра положительной сыворотки с гомологичным» заведомо известным вирусом.

7. Ретроспективная диагностика.

7.1.    Для обнаружения специфических антител в крови переболевших ринопневмонией лошадей ставят РТГА и PH. Исследуют парные пробы сывороток, взятых в начале заболевания (или в день аборта) и через 2...3 недели после выздоровления. Исследуемые сыворотки инактивируют при 56°С 30 мин.

7.2.    Постановка РТГА. Реакцию проводят микрометодом с применением аппарата Такачи. В качестве антигена используют вакцинный штамм вируса, который готовят путем заражения вирусом культуры клеток.

РТГА ставят с 4 гемагглютинируюгцими единицами (ГАЕ) вируса, которые находят путем деления на 4 показателя гемагглютинирующего титра. Например, если ге-магглютинирующий титр равен 1:8, то 4 ГАЕ будет соответствовать 1:2 (8 : 4 » 2). Если титр исходного вируса 1:2, то используют неразведенную вируссодержащую жидкость.

7.2.1.    Для постановки основного опыта в лунки панели разливают по 0,025 мл физиологического раствора. В первые лунки с помощью микропипетки вносят по 0,025 мл исследуемых сывороток и титруют их в разведении 1:2 до 1:1024. Затем в каждую лунку вносят по 0,025 вируса (4 ГАЕ). Панели осторожно встряхивают и после 60-минутного контакта сыворотки с вирусом в каждую лунку добавляют по 0,05 мл 0,2% -ной взвеси эритроцитов лошади.

7.2.2.    Контроля: эритроцитов на спонтанную агглютинацию; рабочей дозы антигена по общепринятой методике.

7.2.3.    Реакцию учитывают через 2 ч. Титром сыворотки считают ее наибольшее разведение, при котором отсутствует агглютинация эритроцитов.

7.3.    Постановка реакции нейтрализации описана в п. 6.

7.4.    Ретроспективный диагноз на ринопневмонию ставят при четырехкратном приросте антител в парных пробах сывороток переболевших животных (1).

ПШ1Н1И11Ш11и!11Ш111111111Ш№М1П11ШтШ111й1«Ш№11111№Ш1т11ШП11Ш11ит11Ш11№Н1111П11Ш111№111Я|а|111Ш№П11

КРАТКИЙ СЛОВАРЬ ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ВЕТЕРИНАРНЫХ ТЕРМИНОВ

Антигены (анти + греч. genes — порождающий) — чужеродные для организма высокомолекулярные органические вещества коллоидной структуры (белки, белково* липидные и белково-полисахаридные комплексы), способные при поступлении (введении парентерально) вызывать синтез особых глобулинов-антител и вступать в специфическое взаимодействие с ними.

Антитела (анти. + тело) ™ противотела — специфические белки (иммуноглобулины), образующиеся в организме под воздействием антигенов. Они накапливаются в сыворотке крови и тканях, вступают в специфическую связь с соответствующими антигенами и разрушают или обезвреживают их.

Биологическая проба (биопроба) — один из методов диагностики инфекционных болезней с помощью заражения патологическим материалом подопытных животных (куриных эмбрионов, культур клеток) и их исследования.

Вирион полноценная внеклеточная вирусная частица.

Вирусовыделение — выделение возбудителей инфекции из организма больного животного или вирусоносителя.

Вирусоносительство — наличие возбудителя инфекции в определенных органах и тканях клинически здорового животного, не сопровождающееся иммунологической перестройкой организма.

Вирусы (лат. virus ■— яд) — облигатные внутриклеточные паразиты, отличающиеся от растительных и животных организмов малыми размерами, отсутствием клеточного строения и автономного метаболизма, наличием только одного типа нуклеиновой кислоты и дезъюнктивным способом размножения.