СПРАВОЧНИК

ЛАЮРАТОРНЫЕ

ИССЛЕДОВАНИЯ

В ВЕТЕРИНАРИИ

•

БАКТЕРИАЛЬНЫЕ

ИНФЕКЦИИ

Под редакцией Б. И. АНТОНОВА

МОСКВА АГРОПРОМИЗДДТ 1986

указанием серий, номеров и количества исследованных проб и номеров шкур, от которых требуется вторичная доставка проб,

О шкурах, давших при контрольном исследовании положительную реакцию, лаборатория обязана сообщить также и главному ветеринарному врачу района (города), по месту нахождения кожевенного предприятия (заготовительного пункта).

21.    Вся посуда, употребляемая для исследования, должна быть чисток и прозрачной. Для этого ее промывают в теплой соленой воде (1—2%-иом растворе поваренной соли) при помощи волосяных ершей н щеток с последующим промыванием в чистой воде. Уленгутовские пробирки, кроме того, промывают в дистиллированной воде. После мытья посуду просушивают,

22.    Преципитирующую сибиреязвенную сыворотку и стандартный сибиреязвенный антиген хранят в темном месте при температуре не ниже Т и не выше 15°С. Сыворотка, подвергшаяся замораживанию, к примет мню непригодна.

Приложение

Схема постановки реакции преципитации при исследовании кожевенно-мехового сырья на сибирскую язву

I. Компоненты (должны быть прозрачны)

1.    Экстракты кож. Экстрагирующую жидкость для парного, мороженого, пресносухого, сухосоленого сырья готовят на физиологическом растворе NaCl с Добавлением 0,3% кристаллической карболовой кислоты, а для _мокрссоленого сырья — 0,3%-ный раствор кристаллической карболовой кислоты на дистиллированной воде.

2.    Преципитирующая сибиреязвенная сыворотка. Для сухссоленого и мокросоленого сырья с добавлением х.ч. поваренной соли (NaC3) от 3 до 5%; для пресносухого сдвоенными пробами—1%.

Я. Контроли

1.    Преципитирующей сибиреязвенной сыворотки:

а)    со стандартным сибиреязвенным антигеном (+) в течение 1 — 2 мин;

б)    с экстрактом заведомо благополучных боенских кож (—) в течение часа;

в)    с экстрагирующей жидкостью (—) в течение часа.

2.    Асбестовой ваты на нейтральность (при поступлении каждой новой партии).

—*1,5 атм 30 мин

—*В автоклаве

III. Стерилизация проб

чМокросолепого сырья 2 г

V, Заливка проб экстрагирующей жидкостью-    \

I j    I    I

Парного, мороженого 10 мл Мокросоленого: одиночных 7—8 мл

I    I

Пресносухого: одиночных 10 мл Сухосоленого: одиночных 10 мл сдвоенных 15 мл    сдвоенных    15    мл

VI. Экстрагирование проб-\

I    I

Холодный способ: 16—20 ч Горячий способ: ог свиных шкур при комнатной температуре в водяной бане кипятить в течение 30 мин

VII. Фильтрация экстрактов

Перед разливом на фильтры содержимое баночек взбалтывать VIII.    Соединение компонентов- 1 Наслаивание: разливателем Флоринского или пастеровской пипеткой сыворотки 0,25—0,3 мл, экстракта 0,25—0,3 мл IX.    Учет результатов исследования- I I Парное, мороженое: через 10—15 мин Через асбестовую вату до прозрачности экстрактов I I Подслаивание: пастеровской пипеткой экстракта 0,25—0,3 мл, сыворотки 0,25—0,3 мл I i Пресносухое: одиночных — в течение 10—15 мин, сдвоенных — через 30 мин

---

Сухосоленое: одиночных — через    Мокросоленое: через 60 мин

30 мин

сдвоенных — через 60 мин

37

ПРЕДМЕТНЫЙ УКАЗАТЕЛЬ

Агар глкжозо-кровяной 227 —    дрожжевой 27 —    картофельный 82 —    кровяной 230 —    молочно-солевой 228 —    мясо-пептон ный печеном no- глюк озо - глицериновый (МПП1ТА) 82 —    печеночно-аминопептидиый 85 —    печеночн о-глюкозо-глицериновый (ГИТА) 82 —    плоти ы й печейочно-сыворо-точпый 85 —    полужидкий печеночно-сывороточный 85 —    полужидкий с дефибриннро-ванной кровью 248 —    сывороточпо-дскстрозный 85 —    шоколадный 239 Бульон глюкозо-сывороточпый 227 —    дрожжевой 27 —    мисо-псптопиый печеночный (МППБ) 82 —    печеночпо-глкжозо-глицери-новый 82 —    с желчью 10%-ный 186, 227 —    40%-ный 230 Вода мясная 82 —    печеночная 82 Выбор питательных сред 271 Гель агаровый 1%-ный 31 Дезагрегация ткани 314 Жидкость Карлу а 309 Индикатор для определения анаэробных условий 39 Консервирующая смесь глицериновая 185 --фосфатная буферная 185 Лизис желчью 225

Метод выявления калеулообра-зования 13, 14 —    определения вирулентности сибиреязвенных культур 14 —    флуоресцирующих антител (МФА) 189 Молоко с метиленовым синим 228 —    с 0,02%-ныт метиленовым сипим 230 Обнаружение индола 217 Окраска мазков гематокенлил-эозином 309 —    — по Козловскому 81 --ио методу Гипса 239 —    — по Романовскому — Гнм-зе 309 —    — по Стампу 81 --по Фельгену 309 --по Шуляку — Шину 82 Определение гемолитической активности 8 —    концентрации углекислого газа 85 Получение и подготовка эритроцитов барана для постановки РСК и РДСК 86 Приготовление индикаторных бумажек 187 Раствор антибиотиков 272 —    веронал-мединаловый буферный 329 —    верее}]а 282 —    гидролизата лактоальбумина 0,5%-ный 283 —    гидролизата мышечных белков 0,3%-пып 282 —    глицерина 216 —    двууглекислого натрия 282 —    дву хромовокислого калия 279 —    поли этиленгликоля 326 —    Тироде 281 —    трипсина 283 —    уксусной кислоты 282 347

---

—    физиологический хлорида натрия с добавлением ионов магния и кальция (для постановки РСК и РДСК) 86 —    Хепкеа 281 —    хлорида натрия фенолезиро-ваниые для РА 86 Реактив биуретовып 328 —    йодистый калий 3.28 Реакиля дмсjxf>yзiiой лреципитании в геле 333 —    с мстил ротом 218 —    нейтрализации с целью выявления антител к вирусу инфекционного ринотрахентя и Ш!русной диареи 332 —    непрямой гем агглютинации (РИГА) 332 —    преципитации 8 —    связывания комплемента (РСК) 334 —    торможения гемагглютина-ЩП1 (РТГ'А) 332 ■— Фогеса — Проскауэра 218 —    Эрлиха 181 —    метиленового синего 226 Среда Бигтера с рамнозой 187 —    водно-сывороточная 146 —    дифференциальная висмут-сульфат-агар 186 —    — Левина 186 —    — Плоски рева 186 —    — трехуглеводная с мочевиной 186 --Эндо 186 —    для обнаружения сероводорода 216 —    для определения способности бактерий расщеплять мочевину 218 —    для посева по Свену — Гарду 187 —    Дюбуа — Смита 90 —    Заксе. 243 —    Игла 282, 324

—    из гидролизата мышцы сердца крупного рогатого скота 252 —    fin куриного мяса 260 —    Кларка 218 —    Клнглера 217 —    комбинированная Олькеииц-кого 216 —    Мартена 251, 260 —    плотная ВИЭВ для изоляции ка.мпплобактерий 125, 126 —    гафрапино-железо-новобиоцн-новая 123, 124 —    Симмонса 216 —    с лактозой 252 —    с повышенным содержанием лактозы 137 —    с теллуритом калия 228 —    триптический перевар бычьего сердца 337 —    Ферворта — Вольфа в модификации С, И. Тарасова 146 —    Флетчера 146 —    6,5%-ного хлорида натрия 228 —    Хоттингера 259 —    Эдварда 258 —    энтсрококковая дифференциально-диагностическая 228 Среды индикаторные с амидочерным 168 —    — с конгоротом 168 —    — с лакмусом 167 —    — с мстил ротом 167 —    — с иейтральротом и метиленовой синью 167 —    — обогащения Кауфмана 186 -- Киллиана 186 —    — Мюллера 186 —    — селенитовая 185 —    плотные питательные 252 Тест «жемчужного ожерелья» 6,7 Фа готипирование 17—28 Экстракт дрожжевой 252 Зрнтрит-агар 85

---

Временные методические указания по обнаружению возбудителя копытной гнили в патологическом материале от больных овец с помощью непрямого метода иммунофлуорссцеи-

ции.......................... 59

Бруцеллез......................... 00

Наставление по диагностике    бруцеллеза    животных ...    00

Паратуберкулез .    *.................... 89

Наставление по диагностике паратуберкулезного энтерита

{паратуберкулеза) крупного рогатого скота    '....... 89

Методика обнаружения в патологическом материале возбудителей туберкулеза и паратуберкулеза методом люминесцентной микроскопии.................. 92

Временное наставление по постановке реакции связывания комплемента для диагностики паратуберкулеза крупного рогатого скота и овец с антигеном Сибирского научно-исследовательского ветеринарного    института    ........ 94-

Сап ............................ 104

Методические указания по лабораторной диагностике сапа 104

Кампилобэктерпоз (вибрпоз)................ 112

Извлечение из временной инструкции по диагностике, профилактике и ликвидации вибриоза крупного рогатого скота к овец........................ 112

Наставление по применению вибриозных агглютинирующих

моноспецифическнх сывороток........... .    .    116

Наставление по применению кампилобактериозных (вибриозных) люминесцируюших сывороток при лабораторной диагностике камин лобактериоза (вибриоза)    животных    ....    120

Рекомендации Центральной ветеринарной лаборатории по приготовлению и применению сафранино-желсзо-новобиоци-новой среды (СЖН) при лабораторной диагностике вибриоза    123

Временные рекомендации Центральной ветеринарной лаборатории по приготовлению и применению плотной среды ВИЗВ

для изоляции камгшлобактсрий............. 125

Наставление по применению кампилобактериозного (внбри-озпого) антигена для реакции агглютинации с вагинальной

слизыо (РАВС)..................... 126

Лептоенпроз......................... 123

Методические указаЕшя по лабораторной диагностике легт-

тоснироза животных................. 128

Методические указания по применению групповых агглютинирующих лептоспирозиых сывороток.......... 14G

Методические указания по применению флуоресцирующего

глобулина для диагностики лептослироза ......*    148

Листериоз......................... 151

Наставление по лабораторной диагностике листериоз а животных ......................... 151

Методические указания по применению набора лиофилизи-рооаипых бактериофагов для идентификации возбудителя

лкетериоза....................... 169

Рожа свиней........................ 170

Методические указания по лабораторным исследованиям на

рожу свиней...................... 170

Наставление по применению сухих рожистых лгоминесци-рующих сывороток (для прямого метода иммунофлуоресценции) .......................... 173

то

Пастереллез , . . ....... 175

Наставление по лабораторной диагностике пастереллеза птиц 175

Сал ьмонсллсзы....................... 177

Методические указания по бактериологической диагностике

сальмонеллезов животных................ 177

Наставление по применению наборов сывороток сальмсшел-лезнмх О-комплексных и монорецепторных О- и Н-агглютн-лирующнх для экспресс-идентификации сальмонелл в РА на

стекле......*    *................. 192

Наставление по применению комплексной л групповых саль-мопеллезлых флуоресцирующих сывороток (для прямого метода иммупофлусресценции).......*....... 195

Временная методика серологической диагностики сальмонеллеза овец в реакции непрямой (пассивной) гем агглютинации (РИГА)..... 205

Наставление по применению серогрупновых антигенов и сывороток В, и Dj для диагностики сальмонеллеза в пробирочной реакции агглютинации (РА) .........    207

Колибактериоз ....................... 209

Методические указания по бактериологической диагностике колибактерноза (эшерихмоза)    животных........ 209

Наставление по применению агглютинирующих G-кол и-сывороток....................... 218

Диплококковые заболевания................ 221

Методические указания по лабораторным исследованиям па пневмококковую (диплокок ковую)    инфекцию животных 221

Стрептококкозы сельскохозяйственных животных...... 224

Методические указания по лабораторной диагностике стреп-

тококкоза животных....... 224

Методические указания по лабораторной диагностике стрептококковой септицемии птиц............... 228

Методические указания по лабораторной диагностике стрептококкового полиартрита ягнят .............. 230

Методические указания по лабораторной диагностике мыта 233

Псевдомоноз........................ 235

Временное наставление по применению набора О-агглютннн-рующих сывороток для диагностики псевдомоноза ....    235

Гемофилезы......................... 237

Временные методические указания по лабораторном диагностике гемофнлезпого полисерозита свиней..... 237

Временные методические указания по лабораторной диагностике гемофил ез мой плевропневмонии ев и псп..... 240

Методические указании по лабораторной диагностике контагиозного мегрнта лошадей..... 243

Микоплазмозы.................... 248

Методические указания по лабораторной диагностике инфекционной агалнктии овец и коз ............ 248

Методические указания по лабораторной диагностике инфекционной плевропневмонии коз........ 253

Наставление но диагностике респираторного мнкоплаэмозя

птиц........ 257

Реакция шгдюпшащш для диагностики респираторного микоплазмола птиц с дельной кровью (ККРА) и сывороткой крови (СКРА)...... 204

351

Наставление по постановке РСК при псрипневмошги крупного рогатого скота * . *...............

Дизентерия свиней.....................

Методические указания по лабораторным исследованиям на

дизентерию свинен, вызываемую треп он ем ой.......

Методические указания по определению чувствителыюсти к антибиотикам возбудителен инфекционных болезней сельскохозяйственных животных ................

Методические указания по применению культур клеток в диагностических исследованиях ..................

Методические рекомендации по получению, культивированию и использованию в научных и производственных ветеринарных лабораториях первичных, перевиваемых и диплоидных культур

клеток животного происхождения..............

Наставление по применению гидролизата мышечных белков ферментативного сухого (ФГМ-С) для питательных сред тканевых

культур.......*..................

Рекомендации по профилактике, диагностике коктаминнрования культур клеток микроорганизмами и меры по их деконтаминации Методические указания по получению и применению в вирусологической практике перевиваемых линий клеток из лимфоидных

органов крупного рогатого скота и почек теленка ......

Методические рекомендации по очистке сыворотки крови крупного рогатого скота, используемой для культивирования клеточных

культур...................,......

Временное наставление по получению, контролю и использованию сыворотки крови животных для культивирования клеток и

вирусологических исследований , *.............

Предметный указатель...................

ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ВЕТЕРИНАРИИ: Бактериальные инфекции

Составители: Борис Иванович Антонов,

Валерия Валентиновна Борисова, Г а ли на Михайловна Волкова и др*

Заведсюший редакцией В. Г, Федотов. Редактор В, И, Сайтаниди. Худ ожпнк А. И. Бершаче.вская. Художественный редактор /VI. Д. Севе-рина, Технический редактор Я. В. Соломович. Корректоры //. Д. Туманова , Т. Н. Бобрикова, М. В. Писарева

ИБ И* 4Ш

Сдано г набор 13.00,85, Поди и сазго к печати 0о,12.85. Т-22156. Формат 8т X ¹ 0Я¹ Д_е. Бумага тип. Л'г 3 . Гарнитура литературная. Печать высокая. Уел. неч. л. 18-18. Уел. кр.-отт. 18,1S. Уч -над. л. ’’37,27. Изд. дт 300. Тираж 29000 экз. Заказ ,V?    .    Цена    1    р.    40    к.

Ордена Трудопого Красного Знамени ВО «Агроиромп.здат», 107807, ГСП, Мосина, Б-53, ул. Садовая-Опасенаи, 1$

Набрано п ордена Октябрьской Резолюции и ордена Трудопого Красного Знамени Mi 10 «Первая Образцовая типографии имени Л. Л. Жданова » Союз пол иг-рзфмр.!ма при Государственном комитете СССР по делам издательств, полигра-фи и и книжной торговли: 113034, Москва, Валовая, 28

Отпечатано с матриц во Владимирской типографии Союзполиграфпрома при Государственном комм'готе СССР по долам издательств, полиграфии и книжной торговли, 600000, г. Владимир, Октябрьский проспект, д. 7.

ББК 48.73 Л 12

УДК 619:616.9—08 (031)

Составители: В. И. Лнтошх?, В. В. Борисова, Я. М. Волкова, Л. Я. Каменева, Л. Я. Кошеленко, Г. Л. Михальский, В. В. Поповцев, Л. Я. Прянишникова, В. Е. Храпова

Лабораторные исследования в ветеринарии. Бакте-Л12 риальные инфекции: Справочник/Сост. Б. И, Антонов, В. В. Борисова, П. М. Волкова и др.; Под ред. Б. И. Антонова.— М.: Агропромиздат, 1986.— 352 с.

В книге даны методы лабораторных исследований патологического матер нала с целью определении возбудители инфекционной болезни Она изложены но единой схеме; бактериологические п блктгриоскоп ичсск но исследовании, био проба, идентификация и дифференциация возбудителей. Методы унифицированы и гтандартнэнрованы.

Для ветврачей и фельдшеров, л я бор ниток ветеринарных лабораторий.

3805020000—079    ББК 48.73

^Л 035(01)—86

© ВО «Агропромиздат», 1986

ПРЕДИСЛОВИЕ

\\ деле выполнения решений партии и правительства по дальнейшему развитию животноводства, а также задач, поставленных Продо-ши|ы’ I пен пой программой страны, ветеринарной службе большую помощь оказывают ветеринарные лаборатории.

Ветеринарные лаборатории осуществляют диагностику инфекционных и паразитарных болезней животных, выявляют нарушения опмеил веществ в их организме, проводят исследования, направленные н I предупреждение отравлений, помогая тем самым специалистам сов--миоп, колхозов и других хозяйств успешно осуществлять лечебно-|||нн|шлактические мероприятия. От того, насколько своевременно tiiiniiTCH диагноз, разработаны и рекомендованы, профилактические и лечебные меры, зависит успех ликвидации болезней, сохранность ши одонья животных и повышение их продуктивности.

I Ьследнее время в лабораториях появилось много приборов и приспособлений, облегчающих труд специалистов и позволяющих проводить исследования на более современном и качественном уровне, с болы мой достоверностью. В связи с этим многие ранее действовавшие методические указания переработаны.

Кроме того, ежегодно для лабораторной практики предлагаются новые методы диагностики. В отечественной и зарубежной литературе ИМГ10ЯШЮ публикуется большое количество материалов о новых метола,ч исследований, предлагаются различные модификации существующих методик, вводятся дополнительные диагностические тесты.

Ветеринарные лаборатории в своей работе не могут использовать всего многообразия имеющихся в литературе методов исследования или и I за того, что они недостаточно апробированы, или из-за сложности применяемого оборудования. Иногда методы, предлагаемые различными авторами, при определении одних и тех же показателей дают несовпадающие результаты.

В связи с этим в справочник включены методы лабораторных исследований патологического материала, получаемого от больных, убитых или павших сельскохозяйственных животных, апробированные i Митральной ветеринарной лабораторией и утвержденные Главным у правлением ветеринарки Министерства сельского хозяйства СССР, К и и е ' а с од о р ж: и т методик ески е указ анн я п о ди агностике и: кфекдп ошшх Полезней бактериальной этиологии, а также методические указания по применению культур клеток в диагностических исследованиях.

Методики изложены по единой схеме: взятие и пересылка патологи-чм'кого материала, методы его обработки и обогащения; бактериоско-ипческие исследования, включая световую и люминесцентную микроскопию; выделение культур возбудителей инфекционных болезней на ниппельных средах; заражение лабораторных животных как с целью выделения чистой культуры возбудителя, так и определения степени ее наI(ценности; гистологические исследования; идентификация и дифференциация возбудителей с использованием различных методов; сероло-I пческие исследования для определения вида возбудителя.

3

Приведенные в справочнике методы лабораторных исследований унифицированы и стандартизированы. В широком смысле слова унификация и стандартизация подразумевают применение для различных исследований одних и тех же аппаратов, приборов, инструментов, посуды, реактивов, исключая, конечно, специальные методы исследования; применение стандартных (унифицированных) питательных сред и диагностикумов; разработку методических указаний по единой форме. Все это позволяет лабораторным работникам с меньшей затратой сил и средств, на высоком методическом и техническом уровне, качественно и в срок проводить диагностические исследования. Таким образом, стандартизация методов исследования явится способом наведения строгого тюрпдка в работе ветеринарных лабораторий.

Книга предназначена для ветеринарных врачей, фельдшеров, а также лаборантов в старин а рных диагностических л абораторн й.

В справочник не вошли материалы по диагностике туберкулеза., так как они пересматриваются и дополняются, поэтому их публикация будет осуществлена в последующих изданиях.

Наставление по исследованию кожевенного и мехового сырья на сибирскую язву реакцией преципитации

(Утверждено Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 25 мая \97\ г.)

1. Прием проб на исследование.

1. Пробы кожевенного и мехового сырья для исследования на сибирскую язву принимают ветеринарные лаборатории в порядке, уста-

3i

новленном «Указаниями по ветеринарно-санитарной обработке заготовляемого кожепенного и мехового сырья», утвержденными Главным управлением животноводства и ветеринарии Минсельхоза СССР 30 декабря 1954 г.

Примечание. В случае несоблюдения установленных требований по отбору и пересылке проб для исследования ветеринарные лаборатории дают соответствующие указания предприятиям (заготовительным пунктам), приславшим пробы, а прн необходимости могут требовать вторичного отбора и присылки проб.

2.    Пробы от парного или мороженого сырья до стерилизации выдерживают для накопления преципитиногена в течение 2 сут при комнатной температуре (не ниже 2f)°C).

При приеме и подготовке, проб для исследования (до стерилизации) следует соблюдать все меры предосторожности, предусмотренные в отношении поступающего в лабораторию заразного материала.

II. Порядок исследования проб.

3.    Работа по исследованию проб кожевенного и мехового сырья на сибирскую язву реакцией преципитации, как парного, так и консервированного (пресиосухое, мороженое, сухосоленое, мокросоленое), слагается из следующих процессов: стерилизации, измельчения и экстрагирования проб, фильтрации экстрактов, соединения компонентов и учета результатов исследования.,

4.    Стерилизация проб. Исследуемые пробы стерилизуют в автоклаве при 1,5 атм в течение 30 мин или при 1 атм в течение 1 ч; на кожевенно-сырьевых заводах стерилизацию проб проводят в камерах Кру-пина под давлением 0,7 атм в течение 1 ч 45 мин при температуре 110— П5°С.

При стерилизации необходимо следить за тем, чтобы пробы не замокали. Для этого мокросоленое сырье стерилизуют в отдельной таре с решетчатой подставкой на дне или, при необходимости совместной стерилизации проб различной копсервировкн, его помещают в нижней части автоклава (камеры) также на решетчатой подставке и отделяют от другого сырья пергаментной бумагой, куском брезента и т. п,

По окончании экспозиции выключают автоклав (камеру), спускают пар и вынимают пробы.

О проведенной стерилизации проб и тары делают соответствующие записи в специальном журнале с указанием даты, организации, приславшей пробы, наименования стерилизуемого материала и режима, при котором проводилась стерилизация (экспозиция, показания термометра, манометра).

5.    Измельчение проб. После стерилизации пробы охлаждают и проверяют наличие и правильность нумерации, затем их измельчают автоматическими или ручными приборами (предварительно удалив шерсть), учитывая, что чем мельче измельчены пробы, тем полнее будет экстрагирован антиген.

О проведенной проверке нумерации проб, обнаруженных неправильностях, а также о количестве измельченных проб делают отметку в рабочей тетради.

От каждой пробы пресносухого, сухосоленого, мороженого и парного сырья измельчают точно по массе 1 г и помещают в баночку емкостью 50 мл с соответствующим номером пробы.

Затвердевшие обеззараженные пробы пресносухого и сухосоленого

сырья для удобства измельчения могут быть размягчены текучим паром в автоклаве однократно в течение 10—15 мин.

От каждой пробы мокросоленого сырья измельчают по 2 г, при этом простерилизованные мокросоленые пробы (на связке) непосредственно перед измельчением промывают в водопроводной воде (17—18°С) в течение не более 25—30 с, перебирая их руками. Затем пробы слегка отжимают, перекладывают в сухой кювет и измельчают. Нельзя промывать пробы сразу после стерилизации — горячие, а также в теплой или горячей воде.

6.    Кожевенное и меховое сырье пресносухой и сухосоленой консер-вировки разрешается исследовать сдвоенными пробами. Сдваивание проб при исследовании мороженого, парного и мокросоленого кожсырья не допускается.

7.    При исследовании сдвоенных проб от каждой пробы измельчают по 1 г (в одну баночку 2 г).

8.    Экстрагирование проб. При исследовании парного, мороженого, пресносухого, сухосоленого сырья применяют экстрагирующую жидкость, приготовленную путем добавления к физиологическому раствору (0,85%-ный раствор хлористого натрия на дистиллированной воде) 0,3% кристаллической карболовой кислоты. Для исследования мокросоленого сырья экстрагирующую жидкость готовят на дистиллированной воде с 0,3% карболовой кислоты без хлористого натрия.

Приготовленную экстрагирующую жидкость до заливки проб контролируютпрецицитирующей сывороткой. Правильно приготовленная экстрагирующая жидкость при наслаивании на преципитирукмцук» сыворотку (или при подслаивании сыворотки) должна давать четкую границу без образования кольца.

9.    Измельченные пробы заливают экстрагирующей жидкостью посредством разливательного прибора; пресносухое, сухосоленое, парное и мороженое — по 10 мл, а мокросоленое — по 7—3 мл.

Сдвоенные пробы лресиосухого и сухосоленого сырья заливают 15 мл экстрагирующей жидкости. Содержимое каждой баночки обязательно взбалтывают для быстрейшего погружения в жидкость измельченных проб. Продолжительность экстрагирования — от 16 до 20 ч (холодный способ) при комнатной температуре (лучше 9—15°С).

Пробы от свиных шкур экстрагируют горячим способом — в пробирках в кипящей водяной бане в течение 30 мин. Соотношение экстрагирующей жидкости и весь дальнейший порядок исследования Свиных шкур аналогичны исследованию проб кожевенного и мехового сырья других видов животных с учетом консервировки.

10.    Фильтрация экстрактов. После экстрагирования проб экстракты фильтруют через воронки диаметром 39 мм в укороченные бактериологические пробирки, укрепленные в отверстиях линеек аппаратуры Флори некого. Для удобства мойки и быстроты фильтрации рекомендуется воронки укреплять в покровных линейках резиновыми колечками.

В качестве фильтра применяют асбестовую вату, которую (при получении каждой новой партии) проверяют лакмусом на нейтральность. В случае кислой или щелочной реакции асбест перед работой промывают дистиллированной водой и физиологическим раствором, после этого отжимают и вновь проверяют на нейтральность. Плотность набивки фильтра должна обеспечивать возможность получения прозрачного экстракта в течение 1—2 ч. В крайнем случае (при отсутствии асбестовой ваты) в качестве фильтра может быть применен лигнин.

Перед разливом экстрактов на фильтры жидкость каждой баночки

взбалтывают. При разливе нужно следить» чтобы жидкость нс стекала ла рядом стоящий фильтр.

При снятии фильтров (линеек с воронками) экстракты просматривают via количество и прозрачность. При наличии мутных экстрактов допускается вторичная их фильтрация. Количество экстракта» необходимое для исследования* должно быть 1/2 или \/3 объема укороченной бактериологической пробирки.

III. Постановка реакции преципитации.

11.    Для постановки реакции преципитации применяют преципити-рующую сибиреязвенную сыворотку, которая должна быть совершенно прозрачной, что достигается путем отстаивания ее во флаконах в течение 10—14 дн. с последующим осторожным декантированием верхнего слоя; в случае необходимости сыворотку можно фильтровать через асбестовую вату.

12.    При исследовании сырья сухосоленой и мокросоленой консер-вировки к преципитиругощей сыворотке добавляют 3—4%, а в некоторых случаях и до 5% х. ч. хлористого натрия. При исследовании сдвоенными пробами иресносухого сырья к сыворотке добавляют 1% хлористого натрия, сухосоленого — 3—5%. При индивидуальном исследовании пресносухого сырья, а также парного и мороженого, хлористый натрий к сыворотке не добавляют.

Неиспользованную в тот же день приготовленную преципитирую-щую сыворотку можно использовать на следующий день при условии хранения ее в закрытом сосуде в холодильнике.

13.    Подготовленную преципитирующую сибиреязвенную сыворотку перед постановкой реакции преципитации с экстрактами из исследуемых проб проверяют на активность и специфичность:

стандартным сибиреязвенным антигеном — реакция положительная, т. е. характерное кольцо — диск появляется в течение 1—2 мин после соединения компонентов;

экстрактом заведомо благополучных боенских кож — реакция отрицательная при наблюдении в течение часа.

Результаты контроля преципитиругощей сыворотки записывают в журнал лабораторных исследований.

14.    Соединение компонентов проводят осторожным наслаиванием профильтрованных, прозрачных экстрактов на преципитирующую сыворотку, разлитую в специальные узкие пробирки (Уленгута).

Разлив сыворотки и наслаивание экстрактов проводят разливателем Флоринского одновременно в 10 пробирок по 0,25—0,3 мл каждого компонента. Вначале разливают сыворотку, а затем на нее наслаивают экстракты.

Начало и конец наслаивания каждой сотни экстрактов фиксируют на бумажном ярлыке, который вкладывают в соответствующий штатив с пробирками, например: 12 ч 15 мин — 12 ч 20 мин.

При исследовании небольшого количества проб можно пользоваться пастеровской пипеткой, при этом экстракт наслаивают па сыворотку или сыворотку подслаивают под экстракт.

Соединение компонентов — ответственный и важный момент в проведении исследований, и только наличие резко выраженной границы между компонентами (совершенно прямая линия) дает правильные результаты исследования. Если резко выраженная граница между ком^ понентами отсутствует — необходимо провести повторное соединение компонентов.

15.    Учет результатов исследования проводят путем просмотра ис-

следуемых экстрактов на черном фоне при проходящем дневном свете у окна или при электрическом свете настольной лампы с абажуром.

16.    При исследовании проб от парного, мороженого и пресносухого кожевенного сырья учет результатов проводят через 10—12 и не позднее 15 мин с момента соединения компонентов; от сухосоленого — через 30 мин; от мокросоленого — через 60 мин.

Результаты исследования сдвоенных проб пресносухой консерви-ровки учитывают через 30 мин, а сухосоленой — через 60 мин.

17.    Реакцию считают положительной, если на границе соприкосновения экстрактов с сывороткой в течение указанного времени появляется ясно выраженный серовато-белый диск (кольцо). При отрицательном результате на резко выраженной границе между компонентами незаметно никаких следов преципитации. В остальных случаях (слабо выраженное кольцо, помутнение в виде облачка и т. п.) реакцию считают сомнительной.

Результаты диагностической оценки записывают в журнал лабораторных исследований с обозначением в положительном случае (+) плюс, в сомнительном (+—) плюс-минус и в отрицательном (—) минус.

Примечание. Применяемые для консервирования сырья парадихлорбензол, кремнефтористый натрий, 10%~ный дуст (ДДТ) и нафгалин не влияют на показания реакции преципитации.

IV. Проверочно-контрольные исследования.

18.    При получении положительных или сомнительных результатов исследования лаборатория должна немедленно потребовать вторично доставить пробы от соответствующих шкур для проверочно-контрольного исследования.

Окончательное заключение о тюке или штабеле, в котором была обнаружена хотя бы одна шкура, давшая положительную или сомнительную реакцию, лаборатория дает только после проверочно-контрольного исследования.

Для проверочно-контрольного исследования отбирают по три пробы с разных мест от шкуры, давшей положительную или сомнительную реакцию, причем одна проба должна быть взята с места первого среза. Использовать кусочки проб, оставшиеся от первого исследования, для проверочно-контрольного исследования не разрешается.

Диагностическую оценку осуществляют по результатам реакции трех проб. Если все три пробы от данной шкуры дают отрицательный результат — шкура считается благополучной в отношении сибирской язвы независимо от положительного результата реакции преципитации при первом исследовании.

В том случае, когда хотя бы и одной пробе из трех будет получен положительный результат исследования — шкура считается неблагополучной в отношении сибирской язвы.

19.    Если при контрольно-проверочном исследовании проб от шкурок мерлушки или козлика получен положительный результат, то пробы от этих шкурок подвергают обязательному бактериологическому исследованию на сибирскую язву. При отрицательном результате бактериологического исследования такие шкуры считают благополучными в отношении сибирской язвы, и их выпускают без ограничений.

Результаты проверочно-контрольного исследования вносят в журнал лабораторных исследований.

20.    По окончании исследования лаборатория сообщает о полученных результатах ветеринарному врачу, приславшему пробы, с точным

35