ЛАБСШОРНЬЕ

ИССЛЕДОВАНИЯ В ВЕТШ/1НАРИИ

БАКТЕИ^АЛЬНЫЕ

ИНТЕКЦИИ

СПРАВОЧНИК

ЛАБОРАТОРНЫЕ

ИССЛЕДОВАНИЯ

В ВЕТЕРИНАРИИ

•

БАКТЕРИАЛЬНЫЕ

ИНФЕКЦИИ

Под редакцией Б. И. АНТОНОВА

МОСКВА АГРОПРОМИЗДАТ 1986

ПРЕДМЕТНЫЙ УКАЗАТЕЛЬ

е

Агар глюкозо-кровяной 227 —    дрожжевой 27 —    картофельный 82 —    кровяной 230 —    молочно-солевой 228 —    мясо-пептонный печеночно* глюкозо - глицериновый (МППГГА) 82 —    печеночно-аминопептидный 85 —    печен очно-глюкозо-глицериновый (ГИТА) 82 —    плотный печеночно-сывороточный 85 —    полужидкий печеночно-сывороточный 85 —    полужидкий с дефибриниро-ванной кровью 248 —    сывороточно-декстрозный 85 —    шоколадный 239 Бульон глюкозо-сывороточный 227 —    дрожжевой 27 —    мясо-пептон ный печеночный (МППБ) 82 —    печен оч но-глюк озо-глицериновый 82 —    с желчью 10%-ный 186, 227 —    40%-ный 230 Вода мясная 82 —    печеночная 82 Выбор питательных сред 271 Гель агаровый 1%-ный 31 Дезагрегация ткани 314 Жидкость Карнуа 309 Индикатор для определения анаэробных условий 39 Консервирующая смесь глицериновая 185 --фосфатная буферная 185 Лизис желчью 225

Метод выявления капсулообра-зования 13, 14 —    определения вирулентности сибиреязвенных культур 14 —    флуоресцирующих антител (МФА) 180 Молоко с метиленовым синим 228 —    с 0,02%-ньм метиленовым синим 230 Обнаружение индола 217 Окраска мазков гематоксилин-эозином 309 --по Козловскому 81 --по методу Гипса 239 --по Романовскому — Гим- зе 309 --по Стампу 81 --по Фельгену 309 --по Шуляку — Шину 82 Определение гемолитической активности 8 —    концентрации углекислого газа 85 Получение и подготовка эритроцитов барана для постановки РСК и РДСК 86 Приготовление индикаторных бумажек 187 Раствор антибиотиков 272 —    веронал-мединаловый буферный 329 —    версена 282 —    гидролизата лактоальбумииа 0,5%-ный 283 —    гидролизата мышечных белков 0,3%-ный 282 —    глицерина 216 —    двууглекислого натрия 282 —    двухромовокислого калия 279 —    полиэтиленгликоля 326 —    Тироде 281 —    трипсина 283 —    уксусной кислоты 282

---

—    физиологический хлорида натрия с добавлением ионов магния и кальция (для постановки РСК и РДСК) 86 —    Хенкса 281 —    хлориду натрия феиолезиро-ванные для.РА 86 Реактив биуретовый 328 —    йодистый калий 328 Реакция диффузной преципитации в геле 333 —    с метилротом 218 —    нейтрализации с целью выявления антител к вирусу инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи 332 —    непрямой гемагглютинации (РПГА) 332 —    преципитации 8 —    связывания комплемента (РСК) 334 —    торможения гемагглютина-ции (РТГА) 332 —    Фогеса — Проскауэра 218 —    Эрлиха 181 —    метиленового синего 226 Среда Биттера с рамнозой 187 —    водно-сывороточная 145 —    дифференциальная висмут-сульфат-агар 186 -- Левина 186 --Плоски рева 186 --трехуглеводная с мочевиной 186 --Эндо 186 —    для обнаружения сероводорода 216 —    для определения способности бактерий расщеплять мочевину 218    н —    для посева по Свену — Гарду 187 —    Дюбуа — Смита 90 —    Заксе 243 —    Игла 282, 324

—    из гидролизата мышцы сердца крупного рогатого скота 252 —    из куриного мяса 260 —    Кларка 218 —    Клиглера 217 —    комбинированная Олькениц-кого 216 —    Мартена 251, 260 —    плотная ВИЭВ для изоляции кампилобактерий 125, 126 —    сафранино-железо-новобиоци-новая 123, 124 —    Симмонса 216 —    с лактозой 252 —    с повышенным содержанием лактозы 187 —    с теллуритом калия 228 —    триптический перевар бычьего сердца 337 —    Ферворта — Вольфа в модификации С. И. Тарасова 146 —    Флетчера 146 —    6,5%-ного хлорида натрия 228 —    Хоттингера 259 —    Эдварда 258 —    энтерококковая дифференциально-диагностическая 228 Среды индикаторные с амидочерным 168 --с конгоротом 168 --с лакмусом 167 --с метил ротом 167 --с нейтральротом и метиленовой синью 167 --обогащения Кауфмана 186 --Киллиана 186 --Мюллера 186 -- селенитовая 185 —    плотные питательные 252 Тест «жемчужного ожерелья» 6,7 Фаготипирование 17—28 Экстракт дрожжевой 252 Эритрит-агар 85

---

СОДЕРЖАНИЕ

©

Предисловие........................ 3

Методы диагностики бактериальных инфекций....... 5

Сибирская язва....................    5

Методические указания по лабораторной диагностике сибирской язвы ..................... 5

Методические указания по обнаружению возбудителя сибирской язвы в сырье животного происхождения и объектах

внешней среды..................... 9

Временное наставление по применению сибиреязвенного бактериофага «К» ВИЭВ для определения возбудителя сибирской язвы..................... 17

Временное наставление по применению сибиреязвенного фага «Гамма-MBA» для определения возбудителя сибирской

язвы.......................... 28

Временные методические указания по постановке реакции диск-преципитации при диагностике сибирской язвы и идентификации ее возбудителя................ 29

Наставление по исследованию кожевенного и мехового сырья

на сибирскую язву реакцией преципитации ....... 31

Эмфизематозный карбункул................. 37

Методические указания по лабораторной диагностике эмфизематозного карбункула................. 37

Злокачественный отек.................... 40

Методические указания по лабораторным исследованиям

на злокачественный отек животных.......... 40

Брадзот овец........................ 44

Методические указания по лабораторной диагностике брад-

зота овец....................... 44

Инфекционная энтеротоксемия животных и анаэробная дизентерия ягнят......................... 48

Методические указания по лабораторной диагностике инфекционной энтеротоксемии животных и анаэробной дизентерии ягнят....................... 48

Столбняк.......................... 52

Методические указания по лабораторной диагностике столбняка .......................... 52

Ботулизм.......................... 53

Методические указания по лабораторной диагностике ботулизма .......................... 53

Некробактериоз ....................... 56

Методические указания по лабораторной диагностике некро-

бактериоза....................... 56

Копытная гниль овец и    коз................ 58

Приложение к «Инструкции по профилактике и ликвидации копытной гнили овец    и    коз» .............. 58

Временные методические указания по обнаружению возбудителя копытной гнили в патологическом материале от больных овец с помощью непрямого метода иммунофлуоресценции .......................... 59

Бруцеллез......................... 60

Наставление по диагностике бруцеллеза    животных ...    60

Паратуберкулез ...................... 89

Наставление по диагностике паратуберкулезного энтерита

(паратуберкулеза) крупного рогатого скота ....... 89

Методика обнаружения в патологическом материале возбудителей туберкулеза и паратуберкулеза методом люминесцентной микроскопии.................. 92

Временное наставление по' постановке реакции связывания комплемента для диагностики паратуберкулеза крупного рогатого скота и овец с антигеном Сибирского научно-исследовательского ветеринарного института    ........ 94

Сап............................ 104

Методические указания по лабораторной диагностике сапа 104

Кампилобактериоз (вибриоз)................ 112

Извлечение из временной инструкции по диагностике, профилактике и ликвидации вибриоза крупного рогатого скота и овец........................ 112

Наставление по применению вибриозных агглютинирующих моноспецифических сывороток.............. 116

новой среды (СЖН) при лабораторной диагностике вибриоза 123 Временные рекомендации Центральной ветеринарной лаборатории по приготовлению и применению плотной среды ВИЭВ

для изоляции кампилобактерий............. 125

Наставление по применению кампилобактериозного (вибри-озного) антигена для реакции агглютинации с вагинальной

слизью (РАВС).................... 126

Лептоспироз......................... 128

Методические указания по лабораторной диагностике леп-

тоспнроза животных.................. 128

Методические указания по применению групповых агглютинирующих лептоспирозных сывороток.......... 146

Методические указания по применению флуоресцирующего

глобулина для    диагностики лептоспироза ....... 148

Листериоз......................... 151

Наставление по лабораторной диагностике листериоза животных ......................... 151

Методические указания по применению набора лиофилизи-рованных бактериофагов для идентификации возбудителя

листериоза....... 169

Рожа свиней........................ 170

Методические указания по лабораторным исследованиям на

рожу свиней...................... 170

Наставление по применению сухих рожистых люминесцирующих сывороток (для прямого метода иммунофлуоресценции) .......................... 173

Пастереллез........................ 175

Наставление по лабораторной диагностике пастереллеза птиц 175

Сальмонеллезы....................... 177

Методические указания по бактериологической диагностике

сальмонеллезов животных................ 177

Наставление по применению наборов сывороток сальмонел-лезных О-комплексных и монорецепторных О и Н-агглюти-нирующнх для экспресс-идентификации сальмонелл в РА па

стекле......................... 192

Наставление по применению комплексной и групповых саль-монеллезных флуоресцирующих сывороток (для прямого метода иммунофлуоресценции)............... 195

Временная методика серологической диагностики сальмонеллеза овец в реакции непрямой (пассивной) гемагглютина-

ции (РИГА)...................... 205

Наставление по применению серогрупповых антигенов и сывороток В, С| и Di для диагностики сальмонеллеза в пробирочной реакции агглютинации (РА) ......... 207

Колибактериоз....................... 209

Методические указания по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных....... 209

Наставление по применению агглютинирующих О-коли-

сывороток....................... 218

Диплококковые заболевания............. .    .    221

Методические указания по лабораторным исследованиям на пневмококковую (диплококковую) инфекцию животных 221

Стрентококкозы сельскохозяйственных животных...... 224

Методические указания по лабораторной диагностике стреп-

тококкоза животных.................. 224

Методические указания по лабораторной диагностике стрептококковой септицемии птиц............... 228

Методические указания по лабораторной диагностике стрептококкового полиартрита ягнят .............. 230

Методические указания по лабораторной диагностике мыта 233

Псевдомоноз........................ 235

Временное наставление по применению набора О-агглютини-рующих сывороток для диагностики псевдомоноза ....    235

Гемофил езы......................... 237

Временные методические указания по лабораторной диагностике гемофилезного полисерозита свиней....... 237

Временные методические указания по лабораторной диагностике гемофилезной плевропневмонии свиней..... 240

Методические указания по лабораторной диагностике контагиозного метрита лошадей................ 243

Микоплазмозы....................... 248

Методические указания по лабораторной диагностике инфекционной агалактии овец и коз............ 248

Методические указания по лабораторной диагностике инфекционной плевропневмонии коз............ 253

Наставление но диагностике респираторного микоплазмоза

птиц.......................... 257

Реакция агглютинации для диагностики респираторного микоплазмоза птиц с цельной кровью (ККРА) и сывороткой крови (СКРА)..................... 264

Наставление по постановке РСК при перипневмоиии крупного рогатого скота.................. 265

Дизентерия свиней..................... 268

Методические указания по лабораторным исследованиям на

дизентерию свиней, вызываемую трепонемой....... 268

Методические указания по определению чувствительности к антибиотикам возбудителей инфекционных болезней сельскохозяйственных животных................ 270

Методические указания по применению культур клеток в диагностических исследованиях.................. 279

Методические рекомендации по получению, культивированию и использованию в научных и производственных ветеринарных лабораториях первичных, перевиваемых и диплоидных культур

клеток животного происхождения.............. 279

Наставление по применению гидролизата мышечных белков ферментативного сухого (ФГМ-С) для питательных сред тканевых

культур.......................... 298

Рекомендации по профилактике, диагностике контаминнрования культур клеток микроорганизмами и    меры    по    их    деконтаминации 299

Методические указания по получению и применению в вирусологической практике перевиваемых линий клеток из лимфоидных

органов крупного рогатого скота и    почек    теленка...... 314

Методические рекомендации по очистке сыворотки крови крупного рогатого скота, используемой для культивирования клеточных

культур.......................... 326

Временное наставление по получению, контролю и использованию сыворотки крови животных для культивирования клеток и

вирусологических исследований............... 337

Предметный указатель................... 347

ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ВЕТЕРИНАРИИ:

Бактериальные инфекции

Составители: Борис Иванович Антонов,

Валерия Валентиновна Борисова, Галина Михайловна Волкова и др.

Заведующий редакцией В. Г. Федотов. Редактор В. Н. Сайта над и. Художник А. И. Бершачевская. Художественный редактор М. Д. Северина. Технический редактор Е. В. Соломович. Корректоры Н. fl. Туманова, Т. Н. Бобрикова, М. В. Писарева

ИБ № 4308

Сдано в набор 13.06.85. Подписано к печати 06-12.85. Т-22156. Формат 84хЮ8‘/«- Бумага тип. №3. Гарнитура литературная. Печать высокая. Уел. псч. л. 18.18. Уел. кр.-отт. 18,48. Уч -изд. л. 27,27.. Изд. № 360 Тираж 2 9000. экз. Заказ Л¹? 419 . Цена 1 р. 4 0 к.

Ордена Трудооого Красного Знамени ВО «АгропроМиздат», 107807, ГСП, Москва, Б-53, ул. Садовая-Сласская, 18 Набрано в ордена Октябрьской Революции и ордена Трудового Красного Знамени МПО «Первая Образцовая типография имени А. А. Жданова»Союзполиг-рафпрома при Государственном комитете СССР по делам издательств, полиграфии и книжной торговли: 1 13054, Москва, Валовая, 28

Отпечатано с матриц во Владимирской типографии СоюЗполиграфпрома при Государственном комитете СССР по долам издательств, полиграфии и книжной торговли, 600000, г. Владимир, Октябрьский проспект, д. 7.

ПРЕДИСЛОВИЕ

В деле выполнения решении партии и правительства по дальнейшему развитию животноводства, а также задач, поставленных Продовольственной программой страны, ветеринарной службе большую помощь оказывают ветеринарные лаборатории.

Ветеринарные лаборатории осуществляют диагностику инфекционных и паразитарных болезней животных, выявляют нарушения обмена веществ в их организме, проводят исследования, направленные на предупреждение отравлений, помогая тем самым специалистам совхозов, колхозов и других хозяйств успешно осуществлять лечебнопрофилактические мероприятия. От того, насколько своевременно ставится диагноз, разработаны и рекомендованы профилактические и лечебные меры, зависит успех ликвидации болезней, сохранность поголовья животных и повышение их продуктивности.

Последнее время в лабораториях появилось много приборов и приспособлений, облегчающих труд специалистов и позволяющих проводить исследования на более современном и качественном уровне, с большой достоверностью. В связи с этим многие ранее действовавшие методические указания переработаны.

Кроме того, ежегодно для лабораторной практики предлагаются новые методы диагностики. В отечественной и зарубежной литературе постоянно публикуется большое количество материалов о новых методах исследований, предлагаются различные модификации существующих методик, вводятся дополнительные диагностические тесты.

Ветеринарные лаборатории в своей работе не могут использовать всего многообразия имеющихся в литературе методов исследования или из-за того, что они недостаточно апробированы, или из-за сложности применяемого оборудования. Иногда методы, предлагаемые различными авторами, при определении одних и тех же показателей дают несовпадающие результаты.

В связи с этим в справочник включены методы лабораторных исследований патологического материала, получаемого от больных, убитых или павших сельскохозяйственных животных, апробированные Центральной ветеринарной лабораторией и утвержденные Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР. Книга содержит методические указания по диагностике инфекционных болезней бактериальной этиологии, а также методические указания по применению культур клеток в диагностических исследованиях.

Методики изложены по единой схеме,- взятие и пересылка патологического материала, методы его обработки и обогащения; бактериоско-пические исследования, включая световую и люминесцентную микроскопию; выделение культур возбудителей инфекционных болезней на питательных средах; заражение лабораторных животных как с целью выделения чистой культуры возбудителя, так и определения степени ее патогенности; гистологические исследования; идентификация и дифференциация возбудителей с использованием различных методов; серологические исследования для определения вида возбудителя.

Приведенные в справочнике методы лабораторных исследований унифицированы и стандартизированы. В широком смысле слова унификация и стандартизация подразумевают применение для различных исследований одних и тех же аппаратов, приборов, инструментов, посуды, реактивов, исключая, конечно, специальные методы исследования; применение стандартных (унифицированных) питательных сред и диагностикумов; разработку методических указаний по единой форме. Все это позволяет лабораторным работникам с меньшей затратой сил и средств, на высоком методическом и техническом уровне, качественно и в срок проводить диагностические исследования. Таким образом, стандартизация методов исследования явится способом наведения строгого порядка в работе ветеринарных лабораторий.

Книга предназначена для ветеринарных врачей, фельдшеров, а также лаборантов ветеринарных диагностических лабораторий.

В справочник не вошли материалы по диагностике туберкулеза, так как они пересматриваются и дополняются, поэтому их публикация будет осуществлена в последующих изданиях.

СТРЕПТОКОККОЗЫ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ животных

Методические указания по лабораторной диагностике стрептококкоза животных

(Утверждены Г л явным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 30 августа 1983 г.)

1. Общие положения.

1.1.    Стрептококков — инфекционная болезнь, поражающая крупный рогатый скот, свиней, овец, коз, лошадей, верблюдов, пушных зверей, домашних и лабораторных животных. Стрептококкозом болеют животные всех возрастных групп.

Различают острое, подострое и хроническое течение стрептококкоза.

Острое и подострое течение болезни наблюдают у молодняка сельскохозяйственных животных. Оно характеризуется повышением температуры, угнетением, нарушением координации движений, отеками, артритами, иногда диареей.

У взрослых животных стрептококкоз протекает преимущественно бессимптомно, но у беременных может сопровождаться абортами, а у абортировавших и принесших приплод животных — метритами и маститами.

1.2.    Возбудитель стрептококкоза относится к роду Streptococcus семейства Streptococcaceae. Род Streptococcus включает 17 серологических групп стрептококков (Ленсфилд), обозначаемых заглавными буквами латинского алфавита от А до Н и от К до Т, а также группу пневмококков.

От сельскохозяйственных животных выделяют стрептококки серо-групп А, В. С, D, Е, G, М, L, О, R, S, а наиболее часто серогрупп С и D (энтерококки).

1.3.    Диагноз на стрептококкоз устанавливают по результатам лабораторного исследования с учетом эпизоотологических и клинических данных.

1.4.    Лабораторная диагностика стрептококкоза включает микроскопию мазков-отпечатков, выделение культур стрептококков с последующей их идентификацией и дифференциацией, изучение патогенных свойств культур стрептококков.

1.5.    Материалом для лабораторного исследования служат: головной и костный мозг, кровь сердца, селезенка, печень, суставная жидкость павших или вынужденно убитых животных, головной мозг и кровь сердца абортированного плода; при метрите — истечения из шейки матки.

Взятие и доставку материала осуществляют в соответствии с действующими «Правилами взятия патологического материала, крови, кормов и пересылки их для лабораторного исследования».

Патологический материал должен быть взят и исследован в течение б ч, а при условии хранения его в охлажденном состоянии — в течение 10—12 ч.

2.    Микроскопическое исследование.

2.1.    Из доставленного материала готовят мазки-отпечатки. Мазки фиксируют над пламенем горелки и окрашивают по Граму.

В мазках из тканей внутренних органов и суставной жидкости пораженных суставов микробные клетки нередко располагаются кучками, из гноя — преимущественно в виде цепочек различной длины, а из крови сердца и отечной жидкости подкожной клетчатки — одиночно, попарно и редко короткими цепочками.

2.2.    Обнаружение в препаратах большого количества грамположи-тельных кокков, округлых или ланцетовидных, расположенных одиночно, по два, цепочками и скоплениями, позволяет предполагать стрептококковую инфекцию. Однако полиморфизм микроорганизмов, иногда наблюдающийся при лечении животных антибиотиками, затрудняет, а часто вообще исключает возможность микроскопической идентификации микробов. Поэтому микроскопическое исследование при постановке диагноза является вспомогательным и имеет ориентировочное значение.

3.    Выделение культуры стрептококков.

3.1.    Высевы из патологического материала делают пастеровской пипеткой в мясо-пептонный бульон с 1% глюкозы и 10% инактивированной нормальной сыворотки крови лошади и на мясо-пептонный агар с 1% глюкозы и 5—10% дефибринированной крови барана или кролика. Посевы инкубируют в термостате при 37—38°С в течение 18—24 ч.

3.2.    На глюкозо-кровяном агаре стрептококки растут в виде мелких росинчатых, прозрачных или слегка мутноватых колоний с ровными краями, окруженных, как правило, зоной гемолиза.

По характеру гемолиза стрептококки делят на три группы:

а-гемолитические стрептококки — вызывают неполный гемолиз эритроцитов, характеризующийся образованием вокруг колоний зеленоватой зоны гемометаморфоза;

р-гемолитические стрептококки — вызывают полный гемолиз эритроцитов, характеризующийся образованием вокруг колоний зоны просветления;

у-стрептококки — не вызывают гемолиза эритроцитов.

В препаратах из культуры с плотной питательной средой стрептококки располагаются парами, короткими цепочками, иногда образуют скопления.

На жидкой питательной среде для стрептококков большинства серологических групп характерен придонный, часто поднимающийся по стенке пробирки рост. Энтерококки и пневмококки в жидких питательных средах образуют диффузное помутнение, энтерококки — более интенсивное.

В мазках из бульонных культур стрептококки располагаются в основном цепочками различной длины.

3.3.    Выделенные культуры стрептококков дифференцируют на основании результатов определения их чувствительности к желчи, способности расти в питательных средах с повышенным содержанием хлорида и редуцировать метиленовую синь, а также терморезистентности и ферментативных свойств.

3.3.1. Лизис желчью. В две пробирки с глюкозо-сывороточным бульоном, в одну из которых добавлено 10% желчи крупного рогатого скота, а вторая — контрольная, без желчи, вносят по 0,5—0,7 см³ суточной бульонной культуры и выдерживают при 37—38°С в течение одного часа.

В случае лизиса культуры содержимое опытной пробирки просветляется.

3.3.2.    Рост на среде с 40% желчи. Чистую культуру стрептококков засевают на глюкозо-сывороточный бульон, содержащий 40% желчи крупного рогатого скота, и инкубируют при 37—38°С в течение 18— 24 ч, после чего учитывают наличие или отсутствие роста.

3.3.3.    Рост на среде с 6,5% хлористого натрия. Чистую культуру стрептококков засевают на глюкозо-сывороточный бульон, содержащий 6,5% хлористогб натрия. Учет результатов проводят через 18—24 ч инкубирования при 37—38°С по наличию или отсутствию роста.

3.3.4.    Редукция метиленовой сини. Чистую культуру стрептококков засевают в пробирки с обезжиренным молоком, содержащим 0,1% метиленового синего (среда имеет насыщенно-голубой цвет). Результаты учитывают через 18—24 ч инкубирования при 37—38°С. При редукции метиленового синего среда обесцвечивается и приобретает кремовый цвет.

3.3.5.    Терморезистентность. Пробирки с исследуемой суточной культурой, выращенной в глюкозо-сывороточном бульоне, помещают в водяную баню при 58—60°С на 30 мин. Из пробирок с прогретыми культурами делают высевы на глюкозо-кровяной агар. Посевы помещают в термостат и выдерживают при 37—38°С в течение 18—24 ч. Наличие роста культуры свидетельствует о ее терморезистентиости.

3.3.6.    Ферментативные свойства. Для определения ферментативных свойств выделенных культур стрептококков используют среды Гисса с раффинозой, сорбитом и маннитом. Посевы инкубируют при 37—38^сС 5 сут, после чего проводят учет результатов.

3.3.7.    Для дифференциации культур стрептококков пользуются таблицей. Совокупность представленных в ней признаков позволяет дифференцировать энтерококки и пневмококки от стрептококков других серологических групп.

Схема дифференциации стрептококков

Энтерококки (серо-    а    —    +    +    +    +    —    +    +

группа D)

Пневмококки    a    -f-    —    —    —    —    -{-    —    —

Стрептококки дру- В основном —    —    —    —    —    —    — —

гих серогрупп р, иногда Y

Обозначения. ( + )-тест положительный; (—) —тест отрицательный.

3.4. При выделении культуры стрептококков серологической группы D (энтерококки) следует определять разновидность энтерококков, поскольку, кроме патогенных Str. faecalis, в эту группу входит и Str.

faecium, являющийся облигатным обитателем кишечника животных и человека. Для этого используют среду с теллуритом калия или энте-рококковую дифференциально-диагностическую среду. Культуры Str. faecalis устойчивы к высокой концентрации теллурита калия (0,07%) и хорошо растут на плотной среде в его присутствии, образуя колонии черного цвета. Культуры Str. faecium на этой среде не растут.

На энтерококковой дифференциально-диагностической среде через 24—18 ч роста колонии Str. faecalis приобретают вишнево-красный цвет, а колонии Str. faecium остаются бесцветными или белыми.

3.5.    'При необходимости дифференцировать стрептококки от стафилококков используют каталазную пробу и способность стафилококков расти на средах, содержащих 10% хлорида натрия (стрептококки при указанной концентрации хлорида натрия не растут).

Для постановки каталазной пробы на предметное стекло наносят каплю свежеприготовленного 3%-ного раствора перекиси водорода. Бактериологической петлей снимают одну или несколько колоний и растирают их в капле перекиси водорода. Стафилококки в отличие от стрептококков образуют каталазу и вызывают пенообразование.

3.6.    Определение патогенных свойств чистых культур стрептококков проводят па белых мышах массой 14—16 г. Для заражения используют только свежевыделенные культуры стрептококков 18—20-часового роста на глюкозо-сывороточном бульоне.

Культуру стрептококков вводят трем белым мышам внутрибрю-шинно в дозе 0,5 см^{1 2 3}. При заражении патогенной культурой белые мыши гибнут, как правило, через 1—2 сут. Наблюдение за подопытными животными ведут в течение 5 сут.

Культуру признают патогенной при гибели не менее двух белых мышей. Из спинного мозга, крови сердца, печени и селезенки каждой павшей мыши делают посевы на глюкозо-кровяной агар и глюкозо-сывороточный бульон для выделения исходной культуры.

4.    Лабораторный диагноз на стрептококкоз считают установленным в случае выделения из патологического материала культуры стрептококков, патогенной для белых мышей.

5.    При выделении от животных патогенных культур стрептококков определяют их чувствительность к антибиотикам.

6.    Срок исследования — до 7 ди.

Приложение

Рецепты питательных сред

тивную желчь крупного рогатого скота и устанавливают pH 7,4 —7,6.

Для получения 10%-ного желчного бульона к 90 см³ МПБ прибавляют 10 см³ желчи, для получения 40%-ного — к 60 см³ МПБ прибавляют 40 см³ желчи.

Приготовленный желчный бульон разливают в пробирки по 5— 7 см³ и стерилизуют в автоклаве 20—30 мин при ИЗ—115°С.

4.    Среда с 6,5% хлорида натрия. Хлорид натрия в количестве 6,0 г растворяют в небольшом объеме дистиллированной воды, стерилизуют при 113—115°С в течение 20—30 мин, прибавляют к 100 см³ МПБ и, соблюдая правила стерильности, разливают в стерильные пробирки по 5—7 см³.

5.    Молоко с метиленовой синыо. К 100 см³ обезжиренного стерильного молока (pH 7,4—7,6) прибавляют 2 см³ 1%-ного стерильного водного раствора метиленовой сини и разливают в стерильные пробирки по 5—7 см³.

6.    Среда с теллуритом калия. К мясо-пептон ному агару, охлажденному до 45—50°С, добавляют из расчета на 1000 см³ : 50 см³ инактивированной нормальной сыворотки крови лошади, 0,1 г налидиксо-вой кислоты (венгерский лечебный препарат неграм, или невиграмон) и 0,7 г (35 см³ 2%-ного водного раствора) теллурита калия. Среду перемешивают и разливают в чашки.

7.    Энтерококковая дифференциально-диагностическая среда. К мясо-пептонному агару, охлажденному *до 45—50°С, перед употреблением, кроме 1% глюкозы и 5% дефибринированной крови, добавляют из расчета на 1000 см³ : ТТХ (2,3,5-трифенилтетразолийхлорид) — 0,1 г, 0,01%-ный водный раствор кристаллического фиолетового— 12,5 см³, налидиксовой кислоты — 0,1 г и 20% стерильного обезжиренного молока.

ТТХ и налидиксовую кислоту предварительно растворяют в небольшом количестве мясо-пептонного бульона.

8.    Молочно-солевой агар. К расплавленному мясо-пептонному агару pH 7,2—7,4, содержащему 10% хлорида натрия, добавляют 10% стерильного обезжиренного молока, тщательно перемешивают и разливают в чашки.

1

   Глюкозо-сывороточный бульон. В свежеприготовленный мясо-пептониый бульон, содержащий 1% глюкозы (pH 7,4—7,6), соблюдая правила стерильности, добавляют 10% нормальной инактивированной сыворотки крови лошади и асептично разливают в стерильные пробирки по 5—7 см³.

Сыворотку инактивируют прогреванием в течение 30 мин в водяной бане при 56°С.

2

   Глюкозо-кровяной агар. К расплавленному и стерильному 2%-ному мясо-пептонному агару, охлажденному до 45°С (не выше), содержащему 1% глюкозы, прибавляют 5—10% дефибринированной, стерильно взятой крови кролика или барана. Кровь добавляют в среду, соблюдая правила стерильности. Приготовленную среду разливают в стерильные чашки Петри (предварительно нагретые в термостате), дают ей застыть и подсушивают в термостате. Слой агара должен быть равномерно окрашен в красный цвет.

3

   Желчный бульон. К мясо-пептонному бульону добавляют на-