ЛАБСШОРНЬЕ

ИССЛЕДОВАНИЯ В ВЕТШ/1НАРИИ

БАКТЕИ^АЛЬНЫЕ

ИНТЕКЦИИ

СПРАВОЧНИК

ЛАБОРАТОРНЫЕ

ИССЛЕДОВАНИЯ

В ВЕТЕРИНАРИИ

•

БАКТЕРИАЛЬНЫЕ

ИНФЕКЦИИ

Под редакцией Б. И. АНТОНОВА

МОСКВА АГРОПРОМИЗДАТ 1986

ПРЕДМЕТНЫЙ УКАЗАТЕЛЬ

е

Агар глюкозо-кровяной 227 —    дрожжевой 27 —    картофельный 82 —    кровяной 230 —    молочно-солевой 228 —    мясо-пептонный печеночно* глюкозо - глицериновый (МППГГА) 82 —    печеночно-аминопептидный 85 —    печен очно-глюкозо-глицериновый (ГИТА) 82 —    плотный печеночно-сывороточный 85 —    полужидкий печеночно-сывороточный 85 —    полужидкий с дефибриниро-ванной кровью 248 —    сывороточно-декстрозный 85 —    шоколадный 239 Бульон глюкозо-сывороточный 227 —    дрожжевой 27 —    мясо-пептон ный печеночный (МППБ) 82 —    печен оч но-глюк озо-глицериновый 82 —    с желчью 10%-ный 186, 227 —    40%-ный 230 Вода мясная 82 —    печеночная 82 Выбор питательных сред 271 Гель агаровый 1%-ный 31 Дезагрегация ткани 314 Жидкость Карнуа 309 Индикатор для определения анаэробных условий 39 Консервирующая смесь глицериновая 185 --фосфатная буферная 185 Лизис желчью 225

Метод выявления капсулообра-зования 13, 14 —    определения вирулентности сибиреязвенных культур 14 —    флуоресцирующих антител (МФА) 180 Молоко с метиленовым синим 228 —    с 0,02%-ньм метиленовым синим 230 Обнаружение индола 217 Окраска мазков гематоксилин-эозином 309 --по Козловскому 81 --по методу Гипса 239 --по Романовскому — Гим- зе 309 --по Стампу 81 --по Фельгену 309 --по Шуляку — Шину 82 Определение гемолитической активности 8 —    концентрации углекислого газа 85 Получение и подготовка эритроцитов барана для постановки РСК и РДСК 86 Приготовление индикаторных бумажек 187 Раствор антибиотиков 272 —    веронал-мединаловый буферный 329 —    версена 282 —    гидролизата лактоальбумииа 0,5%-ный 283 —    гидролизата мышечных белков 0,3%-ный 282 —    глицерина 216 —    двууглекислого натрия 282 —    двухромовокислого калия 279 —    полиэтиленгликоля 326 —    Тироде 281 —    трипсина 283 —    уксусной кислоты 282

---

—    физиологический хлорида натрия с добавлением ионов магния и кальция (для постановки РСК и РДСК) 86 —    Хенкса 281 —    хлориду натрия феиолезиро-ванные для.РА 86 Реактив биуретовый 328 —    йодистый калий 328 Реакция диффузной преципитации в геле 333 —    с метилротом 218 —    нейтрализации с целью выявления антител к вирусу инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи 332 —    непрямой гемагглютинации (РПГА) 332 —    преципитации 8 —    связывания комплемента (РСК) 334 —    торможения гемагглютина-ции (РТГА) 332 —    Фогеса — Проскауэра 218 —    Эрлиха 181 —    метиленового синего 226 Среда Биттера с рамнозой 187 —    водно-сывороточная 145 —    дифференциальная висмут-сульфат-агар 186 -- Левина 186 --Плоски рева 186 --трехуглеводная с мочевиной 186 --Эндо 186 —    для обнаружения сероводорода 216 —    для определения способности бактерий расщеплять мочевину 218    н —    для посева по Свену — Гарду 187 —    Дюбуа — Смита 90 —    Заксе 243 —    Игла 282, 324

—    из гидролизата мышцы сердца крупного рогатого скота 252 —    из куриного мяса 260 —    Кларка 218 —    Клиглера 217 —    комбинированная Олькениц-кого 216 —    Мартена 251, 260 —    плотная ВИЭВ для изоляции кампилобактерий 125, 126 —    сафранино-железо-новобиоци-новая 123, 124 —    Симмонса 216 —    с лактозой 252 —    с повышенным содержанием лактозы 187 —    с теллуритом калия 228 —    триптический перевар бычьего сердца 337 —    Ферворта — Вольфа в модификации С. И. Тарасова 146 —    Флетчера 146 —    6,5%-ного хлорида натрия 228 —    Хоттингера 259 —    Эдварда 258 —    энтерококковая дифференциально-диагностическая 228 Среды индикаторные с амидочерным 168 --с конгоротом 168 --с лакмусом 167 --с метил ротом 167 --с нейтральротом и метиленовой синью 167 --обогащения Кауфмана 186 --Киллиана 186 --Мюллера 186 -- селенитовая 185 —    плотные питательные 252 Тест «жемчужного ожерелья» 6,7 Фаготипирование 17—28 Экстракт дрожжевой 252 Эритрит-агар 85

---

СОДЕРЖАНИЕ

©

Предисловие........................ 3

Методы диагностики бактериальных инфекций....... 5

Сибирская язва....................    5

Методические указания по лабораторной диагностике сибирской язвы ..................... 5

Методические указания по обнаружению возбудителя сибирской язвы в сырье животного происхождения и объектах

внешней среды..................... 9

Временное наставление по применению сибиреязвенного бактериофага «К» ВИЭВ для определения возбудителя сибирской язвы..................... 17

Временное наставление по применению сибиреязвенного фага «Гамма-MBA» для определения возбудителя сибирской

язвы.......................... 28

Временные методические указания по постановке реакции диск-преципитации при диагностике сибирской язвы и идентификации ее возбудителя................ 29

Наставление по исследованию кожевенного и мехового сырья

на сибирскую язву реакцией преципитации ....... 31

Эмфизематозный карбункул................. 37

Методические указания по лабораторной диагностике эмфизематозного карбункула................. 37

Злокачественный отек.................... 40

Методические указания по лабораторным исследованиям

на злокачественный отек животных.......... 40

Брадзот овец........................ 44

Методические указания по лабораторной диагностике брад-

зота овец....................... 44

Инфекционная энтеротоксемия животных и анаэробная дизентерия ягнят......................... 48

Методические указания по лабораторной диагностике инфекционной энтеротоксемии животных и анаэробной дизентерии ягнят....................... 48

Столбняк.......................... 52

Методические указания по лабораторной диагностике столбняка .......................... 52

Ботулизм.......................... 53

Методические указания по лабораторной диагностике ботулизма .......................... 53

Некробактериоз ....................... 56

Методические указания по лабораторной диагностике некро-

бактериоза....................... 56

Копытная гниль овец и    коз................ 58

Приложение к «Инструкции по профилактике и ликвидации копытной гнили овец    и    коз» .............. 58

Временные методические указания по обнаружению возбудителя копытной гнили в патологическом материале от больных овец с помощью непрямого метода иммунофлуоресценции .......................... 59

Бруцеллез......................... 60

Наставление по диагностике бруцеллеза    животных ...    60

Паратуберкулез ...................... 89

Наставление по диагностике паратуберкулезного энтерита

(паратуберкулеза) крупного рогатого скота ....... 89

Методика обнаружения в патологическом материале возбудителей туберкулеза и паратуберкулеза методом люминесцентной микроскопии.................. 92

Временное наставление по' постановке реакции связывания комплемента для диагностики паратуберкулеза крупного рогатого скота и овец с антигеном Сибирского научно-исследовательского ветеринарного института    ........ 94

Сап............................ 104

Методические указания по лабораторной диагностике сапа 104

Кампилобактериоз (вибриоз)................ 112

Извлечение из временной инструкции по диагностике, профилактике и ликвидации вибриоза крупного рогатого скота и овец........................ 112

Наставление по применению вибриозных агглютинирующих моноспецифических сывороток.............. 116

новой среды (СЖН) при лабораторной диагностике вибриоза 123 Временные рекомендации Центральной ветеринарной лаборатории по приготовлению и применению плотной среды ВИЭВ

для изоляции кампилобактерий............. 125

Наставление по применению кампилобактериозного (вибри-озного) антигена для реакции агглютинации с вагинальной

слизью (РАВС).................... 126

Лептоспироз......................... 128

Методические указания по лабораторной диагностике леп-

тоспнроза животных.................. 128

Методические указания по применению групповых агглютинирующих лептоспирозных сывороток.......... 146

Методические указания по применению флуоресцирующего

глобулина для    диагностики лептоспироза ....... 148

Листериоз......................... 151

Наставление по лабораторной диагностике листериоза животных ......................... 151

Методические указания по применению набора лиофилизи-рованных бактериофагов для идентификации возбудителя

листериоза....... 169

Рожа свиней........................ 170

Методические указания по лабораторным исследованиям на

рожу свиней...................... 170

Наставление по применению сухих рожистых люминесцирующих сывороток (для прямого метода иммунофлуоресценции) .......................... 173

Пастереллез........................ 175

Наставление по лабораторной диагностике пастереллеза птиц 175

Сальмонеллезы....................... 177

Методические указания по бактериологической диагностике

сальмонеллезов животных................ 177

Наставление по применению наборов сывороток сальмонел-лезных О-комплексных и монорецепторных О и Н-агглюти-нирующнх для экспресс-идентификации сальмонелл в РА па

стекле......................... 192

Наставление по применению комплексной и групповых саль-монеллезных флуоресцирующих сывороток (для прямого метода иммунофлуоресценции)............... 195

Временная методика серологической диагностики сальмонеллеза овец в реакции непрямой (пассивной) гемагглютина-

ции (РИГА)...................... 205

Наставление по применению серогрупповых антигенов и сывороток В, С| и Di для диагностики сальмонеллеза в пробирочной реакции агглютинации (РА) ......... 207

Колибактериоз....................... 209

Методические указания по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных....... 209

Наставление по применению агглютинирующих О-коли-

сывороток....................... 218

Диплококковые заболевания............. .    .    221

Методические указания по лабораторным исследованиям на пневмококковую (диплококковую) инфекцию животных 221

Стрентококкозы сельскохозяйственных животных...... 224

Методические указания по лабораторной диагностике стреп-

тококкоза животных.................. 224

Методические указания по лабораторной диагностике стрептококковой септицемии птиц............... 228

Методические указания по лабораторной диагностике стрептококкового полиартрита ягнят .............. 230

Методические указания по лабораторной диагностике мыта 233

Псевдомоноз........................ 235

Временное наставление по применению набора О-агглютини-рующих сывороток для диагностики псевдомоноза ....    235

Гемофил езы......................... 237

Временные методические указания по лабораторной диагностике гемофилезного полисерозита свиней....... 237

Временные методические указания по лабораторной диагностике гемофилезной плевропневмонии свиней..... 240

Методические указания по лабораторной диагностике контагиозного метрита лошадей................ 243

Микоплазмозы....................... 248

Методические указания по лабораторной диагностике инфекционной агалактии овец и коз............ 248

Методические указания по лабораторной диагностике инфекционной плевропневмонии коз............ 253

Наставление но диагностике респираторного микоплазмоза

птиц.......................... 257

Реакция агглютинации для диагностики респираторного микоплазмоза птиц с цельной кровью (ККРА) и сывороткой крови (СКРА)..................... 264

Наставление по постановке РСК при перипневмоиии крупного рогатого скота.................. 265

Дизентерия свиней..................... 268

Методические указания по лабораторным исследованиям на

дизентерию свиней, вызываемую трепонемой....... 268

Методические указания по определению чувствительности к антибиотикам возбудителей инфекционных болезней сельскохозяйственных животных................ 270

Методические указания по применению культур клеток в диагностических исследованиях.................. 279

Методические рекомендации по получению, культивированию и использованию в научных и производственных ветеринарных лабораториях первичных, перевиваемых и диплоидных культур

клеток животного происхождения.............. 279

Наставление по применению гидролизата мышечных белков ферментативного сухого (ФГМ-С) для питательных сред тканевых

культур.......................... 298

Рекомендации по профилактике, диагностике контаминнрования культур клеток микроорганизмами и    меры    по    их    деконтаминации 299

Методические указания по получению и применению в вирусологической практике перевиваемых линий клеток из лимфоидных

органов крупного рогатого скота и    почек    теленка...... 314

Методические рекомендации по очистке сыворотки крови крупного рогатого скота, используемой для культивирования клеточных

культур.......................... 326

Временное наставление по получению, контролю и использованию сыворотки крови животных для культивирования клеток и

вирусологических исследований............... 337

Предметный указатель................... 347

ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ВЕТЕРИНАРИИ:

Бактериальные инфекции

Составители: Борис Иванович Антонов,

Валерия Валентиновна Борисова, Галина Михайловна Волкова и др.

Заведующий редакцией В. Г. Федотов. Редактор В. Н. Сайта над и. Художник А. И. Бершачевская. Художественный редактор М. Д. Северина. Технический редактор Е. В. Соломович. Корректоры Н. fl. Туманова, Т. Н. Бобрикова, М. В. Писарева

ИБ № 4308

Сдано в набор 13.06.85. Подписано к печати 06-12.85. Т-22156. Формат 84хЮ8‘/«- Бумага тип. №3. Гарнитура литературная. Печать высокая. Уел. псч. л. 18.18. Уел. кр.-отт. 18,48. Уч -изд. л. 27,27.. Изд. № 360 Тираж 2 9000. экз. Заказ Л¹? 419 . Цена 1 р. 4 0 к.

Ордена Трудооого Красного Знамени ВО «АгропроМиздат», 107807, ГСП, Москва, Б-53, ул. Садовая-Сласская, 18 Набрано в ордена Октябрьской Революции и ордена Трудового Красного Знамени МПО «Первая Образцовая типография имени А. А. Жданова»Союзполиг-рафпрома при Государственном комитете СССР по делам издательств, полиграфии и книжной торговли: 1 13054, Москва, Валовая, 28

Отпечатано с матриц во Владимирской типографии СоюЗполиграфпрома при Государственном комитете СССР по долам издательств, полиграфии и книжной торговли, 600000, г. Владимир, Октябрьский проспект, д. 7.

ПРЕДИСЛОВИЕ

В деле выполнения решении партии и правительства по дальнейшему развитию животноводства, а также задач, поставленных Продовольственной программой страны, ветеринарной службе большую помощь оказывают ветеринарные лаборатории.

Ветеринарные лаборатории осуществляют диагностику инфекционных и паразитарных болезней животных, выявляют нарушения обмена веществ в их организме, проводят исследования, направленные на предупреждение отравлений, помогая тем самым специалистам совхозов, колхозов и других хозяйств успешно осуществлять лечебнопрофилактические мероприятия. От того, насколько своевременно ставится диагноз, разработаны и рекомендованы профилактические и лечебные меры, зависит успех ликвидации болезней, сохранность поголовья животных и повышение их продуктивности.

Последнее время в лабораториях появилось много приборов и приспособлений, облегчающих труд специалистов и позволяющих проводить исследования на более современном и качественном уровне, с большой достоверностью. В связи с этим многие ранее действовавшие методические указания переработаны.

Кроме того, ежегодно для лабораторной практики предлагаются новые методы диагностики. В отечественной и зарубежной литературе постоянно публикуется большое количество материалов о новых методах исследований, предлагаются различные модификации существующих методик, вводятся дополнительные диагностические тесты.

Ветеринарные лаборатории в своей работе не могут использовать всего многообразия имеющихся в литературе методов исследования или из-за того, что они недостаточно апробированы, или из-за сложности применяемого оборудования. Иногда методы, предлагаемые различными авторами, при определении одних и тех же показателей дают несовпадающие результаты.

В связи с этим в справочник включены методы лабораторных исследований патологического материала, получаемого от больных, убитых или павших сельскохозяйственных животных, апробированные Центральной ветеринарной лабораторией и утвержденные Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР. Книга содержит методические указания по диагностике инфекционных болезней бактериальной этиологии, а также методические указания по применению культур клеток в диагностических исследованиях.

Методики изложены по единой схеме,- взятие и пересылка патологического материала, методы его обработки и обогащения; бактериоско-пические исследования, включая световую и люминесцентную микроскопию; выделение культур возбудителей инфекционных болезней на питательных средах; заражение лабораторных животных как с целью выделения чистой культуры возбудителя, так и определения степени ее патогенности; гистологические исследования; идентификация и дифференциация возбудителей с использованием различных методов; серологические исследования для определения вида возбудителя.

Приведенные в справочнике методы лабораторных исследований унифицированы и стандартизированы. В широком смысле слова унификация и стандартизация подразумевают применение для различных исследований одних и тех же аппаратов, приборов, инструментов, посуды, реактивов, исключая, конечно, специальные методы исследования; применение стандартных (унифицированных) питательных сред и диагностикумов; разработку методических указаний по единой форме. Все это позволяет лабораторным работникам с меньшей затратой сил и средств, на высоком методическом и техническом уровне, качественно и в срок проводить диагностические исследования. Таким образом, стандартизация методов исследования явится способом наведения строгого порядка в работе ветеринарных лабораторий.

Книга предназначена для ветеринарных врачей, фельдшеров, а также лаборантов ветеринарных диагностических лабораторий.

В справочник не вошли материалы по диагностике туберкулеза, так как они пересматриваются и дополняются, поэтому их публикация будет осуществлена в последующих изданиях.

КАМПИЛОБАКТЕРИОЗ (ВИБРИОЗ)

Извлечение из временной инструкции по диагностике, профилактике и ликвидации вибриоза крупного рогатого скота и овец

(Утверждена Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 5 марта 1971 г. с изменениями от 13 мая 1976 г. и 6 марта 1979 г.)

Диагностика вибриоза

Взятие материала и пересылка его для лабораторного исследования на вибриоз.

27. Для бактериологического исследования на вибриоз в ветеринарную лабораторию направляют:

а)    от коров, нетелей и овцематок — абортированный плод (целиком с плодными оболочками или от крупных плодов голову, желудок, печень, легкие), плаценту или часть ее.

В случае непригодности плода, плодовых оболочек и плаценты для исследований в лабораторию направляют слизь из шейки матки, стерильно взятую в первые 3—4 дня после аборта (при отсутствии гнойных выделений из матки) или в период охоты. Слизь берут также от животных, у которых наблюдается расстройство полового цикла (в период охоты);

б)    от быков станций (пунктов) по искусственному осеменению животных — препуциальную слизь и сперму, а от быков, используемых для естественного спаривания,— препуциальную слизь и секрет придаточных половых желез, взятые с соблюдением стерильности.

Сперму от быков берут при помощи искусственной вагины. Перед этим быка-донора купают или обтирают влажной суконной тряпкой, помещение и инструменты обеззараживают.

У быков, используемых для естественного спаривания, получают секрет придаточных половых желез путем массажа через прямую кишку.

Перед получением спермы (секрета) и препуциальной слизи полость препуция предварительно не обрабатывают;

в)    от животных, убитых с диагностической целью,— влагалище, матку, лимфоузлы тазовой полости.

28.    Для бактериологического исследования пробы слизи из половых органов животных берут стерильным марлевым тампоном при помощи специальных инструментов конструкций Павловского, Жабое-дова, Казеева, а также применяемых при искусственном осеменении коров шприца-катетера или полистироловой пипетки, соединенной со шприцем.

Примечание. При исследовании быков обработку полости препуция бактерицидными средствами прекращают за 30 дн. до исследования.

29.    Взятый для исследования материал доставляют в ветеринарную лабораторию нарочным, обязательно в закрытой таре со льдом.

При этом:

плоды или их органы, плаценту доставляют в возможно короткий срок: в течение первых суток после аборта. В холодное время года плоды рекомендуется замораживать;

из проб слизи половых органов, взятых от коров и быков в хозяйствах, ветеринарный врач делает на месте посевы на питательные среды с соблюдением стерильности. При невозможности высева на месте тампоны со слизью помещают в пробирки с 3—5 мл стерильного физиологического раствора и доставляют в лабораторию не позднее чем через 6 ч после взятия;

на станциях (пунктах) по искусственному осеменению животных высевы из проб препуциальной слизи и спермы должен проводить на месте ветврач ветеринарной лаборатории.

30.    Для серологического исследования на вибриоз в ветеринарную лабораторию направляют пробы влагалищной слизи, полученной от коров (в стадах при подозрении на вибриоз), у которых наблюдается расстройство полового цикла, а при необходимости и от половозрелых телок. Слизь берут от животных, не имеющих патологических выделений из влагалища (гной, примесь крови и т. п.), в период полового покоя животных.

Для получения слизи используют прибор, состоящий из стеклянной,

хорошо отполированной с обоих концов трубки длиной 40 см и 1—1,4 см в диаметре и марлевого тампона (используют прямоугольный кусок марли со сторонами 10—12 см), к середине которого привязывают прочную нитку длиной 60—70 см. Нитку пропускают через трубку и втягивают с се помощью тампон внутрь трубки. Свободный конец нитки наматывают снаружи на трубку и оба отверстия трубки закрывают бумажными колпачками. Смонтированные приборы завертывают в бумагу по 10—15 штук, обвязывают шпагатом и стерилизуют в автоклаве 30 мин при давлении 1 атм.

Перед введением тампона во влагалище наружную часть половых органов обмывают теплой водой с мылом. Трубку, освобожденную от обертки, осторожно вводят во влагалище до упора в его переднюю стенку. В трубку вводят металлический поршень, имеющийся в наборе, и с его помощью выталкивают тампон. Трубку и поршень извлекают, а тампон с ниткой оставляют во влагалище на 40—60 мин.

Через указанный срок тампон извлекают за нитку из влагалища, предохраняя его от загрязнения, и сразу погружают на дно пробирки, в которую предварительно наливают 5 мл стерильного формализирован-ного (0,3%) 3%-ного раствора хлористого натрия, а нитку отрезают. Пробирку закрывают резиновой стерильной пробкой и отправляют в лабораторию в тот же день или сохраняют на льду до утра следующего дня. Тампоны, загрязненные фекалиями, гнойными массами или кровью, для исследования непригодны.

Бактериологическая диагностика вмбриоза.

31.    Для постановки бактериологического диагноза на вибриоз требуется выделение культуры возбудителя этой инфекции вибрио фетус венереалнс или вибрио фетус интестиналис.

Возбудитель вибриоза подвижен, по Граму не красится, хорошо окрашивается всеми анилиновыми красками и весьма четко фуксином Циля в разведении 1 : 5 (1—2 мин). В мазках из абортированных плодов и другого патматериала вибрионы имеют вид запятой, летящей чайки, S-образной формы. При исследовании материала, полученного от давно инфицированных животных или после их лечения, могут быть обнаружены диссоциированные формы вибрионов в виде длинных спирилл, малоизвитых нитей и кокковидных форм, в 2—4 раза мельче обычных кокков.

32.    Для получения культуры возбудителя вибриоза используют полужидкие и плотные питательные среды, в том числе полужидкий 0,15—0,2%-ный мясо-печеночный лептонный агар (ПЖА), сафрамиио-железо-новобиоциновуюсреду (СЖН), 2—3%-ный мясо-печеночный пеп-тонный агар (МППА), среду Китта — Тароцци без масла, агар Мартенам другие (при изготовлении ПЖА и МППА вместо мясного отвара используют экстракт мышцы сердца крупного рогатого скота).

Для обогащения в питательные среды добавляют 5—10% дефибри-иировалной крови крупного рогатого скота, овец, кроликов или сыворотку крови лошади, аминопептид-2 (5—10%), экстракт сухих дрожжей (5 г на 1 л среды), тиогликолят натрия (0,5 г на 1 л среды).

33.    При исследовании абортированных плодов посевы делают из содержимого сычуга, легких, печени, измененных участков плаценты, головного мозга, амниотической жидкости в 5 пробирок с ПЖА или СЖН из каждого органа. Сперму или секрет придаточных половых желез от быков, слизь из шейки матки или препуция высевают в 5 пробирок с ПЖА или СЖН (из каждой пробы). Рекомендуется также делать высевы и на плотные среды.

Первичные посевы из спермы (секрета), слизи проводят обычным способом, или дробно (материал вносят в пробирку с ПЖА или СЖН, перемешивают и из этой пробирки делают посев в 5 пробирок, которые инкубируют), или «с подсосом* (после внесения части материала на дно первой пробирки с ПЖА или СЖН в пастеровскую пипетку с оставшимся материалом засасывают небольшое количество стерильной среды у другой стенки пробирки, пипетку извлекают и засевают таким же образом вторую пробирку и т. д.).

При обработке спермы (секрета), слизи в лаборатории материал перед посевом обрабатывают одним из следующих способов:

а)    центрифугированием в течение 10 мин при 1000 об/мин с последующим высевом надосадочной жидкости;

б)    фильтрацией через мембранные фильтры № 5—№ 2— № 5. Мембранные фильтры готовят двумя способами:

первый — фильтры стерилизуют кипячением в дистиллированной воде 2 раза по 10 мин со сменой воды. Колбу Бунзена и фильтр Зейтца стерилизуют обычным способом. Мембранные фильтры закладывают в фильтр Зейтца в стерильных условиях в следующем порядке: № 5— № 2—№ 5 (фильтр № 5 при этом способе стерилизации можно заменить стерильной фильтровальной бумагой);

второй — колбу Бунзена и фильтр Зейтца стерилизуют обычным способом, затем в фильтр Зейтца закладывают нестерильные мембранные фильтры и весь прибор (в перевернутом состоянии, погружая в воду мембранные фильтры) кипятят в дистиллированной воде дважды по 10 мин со сменой воды.

Посевы помещают в эксикатор или микроанаэростат и культивируют в условиях пониженного содержания кислорода воздуха путем замены 10—15% его объема углекислым газом, после чего выдерживают в термостате при 37°С в течение 6—10 дн. с просмотром через каждые 3 дня. При посеве «с подсосом» начиная с третьего дня пробирки, в которых отсутствует рост, просматривают ежедневно и по мере выявления роста проводят микроскопию культур.

34.    На ПЖА вибриозная культура растет под поверхностью среды в виде серовато-голубоватого диска толщиной от 1 до 4 мм. На плотной питательной среде вибрионы растут в виде нежного мслкоросинчатого налета или отдельных голубоватых колоний (заметных через лупу).

На СЖН при росте чистой культуры вибрионов цвет среды не изменяется (розовый), при развитии посторонней микрофлоры или смешанном росте (вибрионы и посторонняя микрофлора) среда становится ярко-желтой.

35.    При бактериологическом исследовании первичного материала выделенные культуры вибрионов часто бывают загрязнены посторонней микрофлорой. Получение чистой культуры является необходимым условием для дифференциации патогенных и сходных с ними других видов вибрионов.

Для очистки загрязненных посторонней микрофлорой культур применяют следующие методы:

а)    заражение беременных морских свинок путем введения им в брюшную полость или во влагалище 0,5 мл исследуемой полимипробной культуры с последующим высевом материала из абортированных плодов. Нели в течение 10—12 дн. аборта не происходит, свинок убивают и высевы делают из эмбрионов и полости матки;

б)    рассев загрязненной культуры на чашки Петри с плотной средой с последующим отсевом отдельных колоний возбудителя на ПЖА в пробирках;

в)    посев культуры в пастеровские пипетки под слой полужидкой питательной среды;

г)    посев культур па ПЖА или СЖН «с подсосом»;

д)    заражение трех крупных небеременных самок белых мышей виутривлагалищно в течение двух дней подряд с последующим их убоем на 8-й дн. Для посева на ПЖА используют кусочки рогов матки; заражение трех самок белых мышей внутрибрюшинно в дозе 0,5 мл культуры с последующим убоем их на 3—4-й дн. и высевом крови из сердца, а также материала из печени, селезенки и рогов матки;

е)    фильтрацию смешанных культур через мембранные фильтры.

36.    Для обнаружения вибрионов в патологическом материале и смешанных, культурах, а также для определения принадлежности их к тому или иному типу прим'еняют метод флуоресцентной микроскопии, руководствуясь при этом «Наставлением по применению кампило-бактериозных (вибриозных) люминесцирующих сывороток при лабораторной диагностике кампилобактериоза (вибриоза) животных».

37.    Дифференциацию вибрионов, выделенных от крупного рогатого скота, по видам и типам проводят по культуральным, биохимическим и серологическим свойствам возбудителя, пользуясь при этом таблицей (см. с .117). Для дифференциации пригодны только чистые культуры.