ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИЕ СРЩСШЧ БОРЬБЫ С ВРЕДИТЕЛЯМИ, БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИЕ И СОРНЯКА;м ПРИ МСХ СССР

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОДИЧЕСТВ ПЕСТйцЩСВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕСШЕЙ СРЕДЕ

Чаоть УП

Mocks а - 1976 г.

ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ г.ч-дшорФЕноксилюхсной шлотысг.ч-д) в вода,

РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ И ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ.*/ Краткая характеристика препарата CgHgOjCIg    Мол.вес 221,04

2,4-дихлорфеноксиуксусиая кмслота(2,4-Д) - белое криста—.ическое венество,стабильное при хранении.Температура плавления 141°С,температура кипения 160°С(0,4 мм рт.ст.). Константа диссоциации 2,З.Ю“³*Стабмльна при хранении в растворах различных органических растворителей м в кристаллическом состоянии.При 20°С 540 мг кислоты растворяется в I л воды,243 г кислоты в 100 мл эфира.130 г кислоты в 100 ил этилового спирта; хорошо растворима в ацетоне, четыреххлористом углероде я бензоле.

Принцип метода Метод основан на экстракции 2,4-Д из анализируемой проба органическим растворителем с последующим определением в виде метилового эфира 2,4-Д с помощью гаэо-мидкост-Нсй и тонп.осло/.ной хроматографии.При необходимости определения содержания в пробе натриевой или аминной солей 2,4-Д используются методы,которые приведены ниже,поскольку при ь.хтракция иэ пробы сол». 2,4-Д превращается в 2,4-Д кислоту.

у.-—

Метод разработали В.Д.Чиялъ,Р«Д.Васяпгнз,М.А.1лясеико (ВВ'КГИНТОКС, г.К-ев)

Утверждено 22 сентября 1975 г.. J* 1350-75.

jiix эфирор 2,4-Д к 2,4,5-Т, X - содержат* 2,4-А в пробе, лг/ir; А и В - коэффициенты.

9)Эдек?ронно-эахватиы* детектор,

В измельченную про б/(50 г) вносит I яд стаиартмаго детвора 2,4, 5-Т о содервением 2,5    и дала» посту-

дат таи,кал это описано выве,

джя построения калибровочного графика к пробам растишь* •ото матери ада прибавляет 10,15,20 и 25 мкг 2,4-Д(в вида раствора в атиловок спирте),! мл отакдаргмего раствора 4 А. 5-Т с содержанием 2,5 мкг/мл и далее поступает так,

*ж *то описано выше.

Сливочное масло.

9*6«роило-захватный детектор.

Проб/ масла(25-50 г) растворят? в 250 мд петролеиного афира и трижды экстрагирует #~ныу водный раствором бикар* Ввита на?рия(Эх75 мл).Объединенная бикарбонатам» вкстракт jeiwwm четырьмя порциями петрои»'<«всго зфкрв,отбрасывал вот вфир-ВяСарбЬйзтныЯ раствор подкисляют IQ#-vc8 сарнзй всл?**т до рй-3 к далее поступав? т&д.нк это оыисаво • опродсгстди 2,4-Д в растательпо^ м&?*даа«

Длд дрсуйтзгр&#?ро*ю:аа «сползут сплре^ауа вгяхдтг.-f« идсн^яша 2 м, чяутревлнЗ диаметр 3 юО, затеей*,* ft Ipoasross** У ,0,16-0,20 юс, 8кг&здя;з8&ят ДКХС о ЮС-Эб.Осзшкме /елозил хрояатегргфкрэмаля ангизгкчки •лвиапС^ггсмЛоллпесгзоа^се злродзв&в 2, V J. в пре > рсзд/Д-л кз-годо» аСс&зтас* кг-збр:гл

Тонкослойная хроматография

JjM&i

Подготовка пробы аналогична описанной выше.Конечный гек-сановыя экстрак' наносят на хроматографическую пластинку с тонким слоем силикагеля KCR скупленного гипсом с помощью каппиляра или медицинского нприца на I мл.Затем на хроматографическую пластинку нанносят 1,5 и 10 мкг метиле'ого эфира 2,4-Д(в виде раствгра в диэтиловом эфире) и проводят хроматографирование в системе растворителей н-гептан-аце-тон в соотношении 9:3. После окончания процесса хроматографирования пластинку извлекают из хроматографической камеры ч суват на воздухе в вытялном шкафу.Для iЗнаружения вон локализации метилового *фира 2,4-Д пластинку обрабатывают проявляющим реактивом и облучают ЗГФ-сввтом в течение 10-15 минут.При наличии в пробе метилового эфира 2,4-Д на пластинке появляется серо-черное пятно на белом фоне с величиной)^* 0,46-0,47.Количественное определение метилового эфира 2,4-Д проводят путем визуального сравнения размера и интенсивности окраски пятен стандарта с пятном пробы.

Пред проведением серийных ан&лмаов необходимо провести эксперименты по определению процента извлечения 2,4-Д из npoJ к которые были предварительно добавлены различные количества 2,4-Д, Извлечение в пределах ао£-86% считается удовлетворительным,Минимально детектируемое количество метилового эфира 2,4-Д яа хроматографической пластинке I ми

растительный материал.

Подготовка пробы и проведение определения аналогичны описанным выше.

Сливочное масло.

Подготовка пробы и проведение определения аналогичны описанным выше.

Насчет результатов анализа Дея определения содержания 2,4-Д в пробе методом гаэо-жидкотсной хроматографии по способу внутреннего стандарта используют следующую формулу

В

где X - содержание 2,4-Д в пробе,мг/л или мг/кг У,А,В - см.обозначения в тексте.

Дяя определения содержания 2,4-Д в пробе методом газожидкостной хроматографии по способу абсолютной калибровки используют следующую формулу

X _я .IOQ А НЛ1

Н, Р v; £    где

X - количество препарата в пробе,ыг/л или мг/кг

А - количество стандарта,введенное в хроматограф, мг

Hj - высота пика стандарте мм

Н₂ - высота пика препарата в пробе, мм

-    объем экстракта,введенный в хроматограф,мы Yi - общи.ч объем упаренного экстракта, мкл

р - количество анализируемо'’ пробы,л или кг

-    процент извлечения,найденный предварительно,*

Для опр деления содержания в пробе метрового эфира 2, й-А методе< тонкослойной ^юнатографни исподьзуит сле-дующув форму f

1 X к>⁵ А

д х -j—g---    _где

Д - содержание метилового Эфира 2,4-Д в пробе,мг/л или кг/кг

А - количество метило:ого эфира 2,4-Д в пробе,найденное визуальны* сравнением со стандартом,мг а - объем или вес пробы, мл или г И- процент извлечения, найденный предварительно,£

Для определения содерианкя в пробе 2,4-_ч, натриевой, динетилдтм ллп три этанола «никой осле* 2,4-Д полученные результат М90ДОД«*9 соответствие ywiotm на О₀94₀ 1_еСЭ, 1,37 ш /#57,

СОДЕРЖАНИЕ

Стр.

ХЛОЮРГАНИ ЧВСКИЕ ПЕСТИЦИДЫ

Метод определения его метаболитов а ГХЦГ в табочных изделиях способом хроматографии в тонком слое    I

авторы; л.'1». Васьковскач, Л.Л. ЭурвтеЙн

Определение остатков кельтана в молоке    7

««-тори: В.В.Молочников, В.И.Мочалов.

Определение хлорорганических пестицидов в мясе, мясопродуктах ж живот о*х жирах хроматографией в тонком слое    И

автору: И»А.18умкова_#И«Н.Карпова,С.А.Дикунова,Д.Д.Рузанкова.

Определенно остатков хлорорганических пестицидов в ~ырье

для производства сухих детских молочных смесей    18

автору: В. В. Молочников, В, И. bio чало в, Л. Н. Чу дакова •

Определение остаточных количеств 3£~2 в зерне методом газожидкостной хроматографии с детектором по захвату    24

•лехтроно*- автору:К*Ф.Новикова, Д.И.Леавшская.

ФССФОРОРГАНИЧЕСКИЕ ПЕСТИЦИДЫ

Определение антяо и фосфамида в меде    29

автор: Р.Д.Петухов.

Газо-хроматографический метод определения валексона г молоке, органах и тканях животных    33

автору: В.В.Лещев, Б.А.Королев.

Методика определения варбекса г молоке и тканях животных с помощью гаг -жидкостной хроматографии    38

авторы: А.А.Непоклонов, К.Ф.Заболотный,.

Определение '-статочных количеств Д1ШФ в молоке и воде    42

методом газо-жидкостьой хроматографии с термеионным детектором авторы: Ф.Р.Мельцер, К.Ф.Новикова.

Методик' определения дифосаСабата) в мясе, молоке л в воде Хроматографией в тонком слое    чб

авторы: Н.П.Бирюкова, Ю.Ф.Моряков,А.А.Непоклонов.

ш

_Гаао-^^матогР^а^^{ический мет}°Д определенчя метафоса в

^^стс и карбофоса в зерне.    51

gtfopn*- Д.Б.Гиренко, М.А.Клисенко

даодяка определения метилнвтрофоса в мясе.молоке и яйцах _е 50МОШЫ) газо-жидкостнс" хроматографии    55

двтор: Т. Г. Аббасов

jiso-хроматогрзфический метод определения рогора и антио ! яблоках, сливе, смородине    59

авторы: Д.Б.Гирекко, М.А.Клисенко

РГУТЬОРГ АНИ ТЕС КИК ПЕСТИЦИДЫ

Гвзохроматографический метод определения метил- и этил-ивркурхлорида в пищевых продуктах.кулинарно обработанных    62

суточных пищевых рационах,кормах и почве автор: В....Ермаков

Хроматографический метод определения ртутьорганических пестицидов в кормах,овощах.продуктах животноводства и патматериале 68 автор: В.В.Ермаков

Хроматографический метод определения ртути в рыбе и

полочных продукта"    75

авторы: А.М.Шмигидина, М.А.Клисенко, Э.П.Чурпнй.

ПРОЧИЕ ПЕСГПОЩЫ

СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИ Л МЕТОД ОПРШДОЛИЯ гатнона в воде и некоторых продуктах растительного происхождения    81

авторы: В.Е.Киряченко.К.И.Пг керич.И.Я.Постовский

Хроматографические методы определения остаточных количеств 2,4-дих ’торфеноксиуксуснсЯ кислоты(2,4-Д)    в воде,    растительном 86

материале и продуктах питания

авторы: В.Д.Чмклх», Р.Д.Васягпп, М.А.Клисенко

Определение сероуглерода в винограде автора: С.Л.Акоронко, М.Ш.Вок::;т<:Лч.

Определение остаточных количеств Севана в молоке я молочных продуктах методом г"зо-жядкостной хроматографии с детектором по захвату электронов

авторы: I.И.Маневич, В.В.Молочников, Н.И.Жаворонков

Колориметрически* метод определения севина я 1-нафтола в тканях живот! эго происхождения и моче авторы: Н.И.Жаворонков, 0.А.Малинин

Определение гербицидов эптама и тилдама в воде,почве,свекле я ее ботве методом газо-жидкостнс'.; хроматографии авторы: А.М.Ботвиньева, АЛ.Перцовеки*

Печатный дес МСХ СССР ЯДОВ 2000    й?

Л- 87S48 ст *.У-76 г.

Чувствительность определения в воде:газо-*ядкостная хроматогр!'Ия(ПИД) - 0,01 кг/л и 0,002 кг/л (Э 31), ток кос лов-мая хроматография - 3 мкг в пробе; в растительном катерна* лвггазо-жвдкостная хроматография -0,4 иг/ягОЯД) и 0,01 иг/кг(53Д), тонкослойная хроматография «* 5 миг в пробе; в сливочном масле:гаэо-шдкостная хроматографии 0,05кг/кг (ЭЗД),тонкослойная хроматография « 5 мкг в пробе.

Реактивы в растворы Безводные сульфат натрия,х.ч.

Н-гексан,х.ч.(перегнанный)

Дяэтяловый эфир,х.ч.

Бикарбонгт натрия,3^-ный водный раствор

Диметилсульфат, ЗС-выйДО объемные) раствор в абсолютном

метиловом спирте

Метиловый спирт,абсолотный

Хлористый натрий,х.ч«,насыцемны1 водны! раотвор

Силиконовый эластомер SE-30

Серная кнслота, IOJC-мый водный раотвор

Соляная кислота,концентрированная,х.ч.

Смесь растворителей I: I ч.ЮЯ-ного водного раствора серной кислоты ♦ 1,5 ч. 95^-кого этилового спирта ♦ 2,5 ч. петролеиного эфира ♦ 7,5 ч. днэтилового эфира Смесь растворителей II: I ч.днэтилового эфира ♦ I патроненного эфира Петролейныг- эфир Н-гептам,х,ч.

Ацетон,х*ч.

Хлороформ,х.ч.

Хлористая натрия,х.ч.

XpoMacop6V,80/Ю0 меш,промытый кислотой и силанызирован-ныя ДкХС

ХроматонУ ,0,16-0,20 мм,промытый кислотой и смданизмро-ванный ДОС

Кальция сернокислый,х.ч.,прокаленный при 160°С в течении б часов Силикагель КСК

Проявлявши реактив:* мерную колбу на 100 мл помеидот 0,5 г азотнокислого серебра,5 мл дистиллированной воды,

7 мл аымиака(25£-ный водный раствор) и доводят до метки ацетоном

Азотнокислое серебро,Х_#ч.

.,мииах,25£-'НЫй водный раствор

Стандартный раствор 2,4,5-Т(2,4,5-трихлорфенонд;вуксусная кислота) в этаноле о содерлаыием 2,5 и 100 миг/мд Стандартами раствор 2,4-Д в этаноле с одержанием 5 м 100 ккг/кл

«осФорно-вольфрамоБая(фософорво-молйбденоъая) кислота, х*ч.,40^-ный водный раствор

Приборы ■ посуда Газовый хроматограф с дифференциальным пламенно~яов"эа-ционным а электрсчно-захватвым детехтв*амм(Иввт-3,Цьет-5,Цвет-Ю6 ■ т.п.)

Делительная воронка на 1500,1000 , 500 мл

Стеклянная колонка длиной 20 си к внутренний дичметрон

5 си

1олба Бунзена на 500 мл Воронка Бсхнера диаметром 15 см Грушевидные колбы на 100 мл Аппарат для встряхивания ротационный испаритель И?-1

Колбы конические с пришлифованной пробкой на 250 мл Водяная баня

Контактный термометр на 100°С Верные колбы на 5,10 и 100 мл Фарфоровая чашка Песчаная баня

Вакуумный водоструйный насос Холодильник Либиха Камера хроматографическая Викро пипетки

Веди цине кий шприц на I мл Стеклянные пластинки 9x12 см Сито капроновое 100 мен Пульверизатор стеклянный

Ход анализа Гаэо-иидкостная хроматография.

Вода.

а)П1аменно-иониэационныя детектор.

Пробу воды С 250-1000 нл) помещают в дел ателье ус воровку, прибавляет соляную кислот/СГ:!) до рЯ^Химихатори**

ьо

бумага), I мд стандартного раствора 2,4, 5-Т(ь.,утренний ста! дарт) с содержанием 100 мхг/мд и экстрагируют тремя порциями хдороформа(100,50 и 50 мд).Объединенный хлороформенный экстракт г**шат,пропуская через стеклянную колонку,заполненную безводным сульфатом натрия(20 г).Растворитель удаляют на ротационном испаритде в грушевидной колбе на 100 мд;последние порции растворителя удаляют с помощью резиновое груши,Затем приливают в колбу 3 мд 5^-ного рас», вора диметнлсульфата в абсолютном метиловом спирте, тщательно споласки^ам стенки колбы,прибавляют X г безводного сульфата натрия,присоединяют к колбе обратный холодильник и помещают на водяную банюСтемпература 5Г°С) на 10 минут.(Диметилсульфат - сильный яд!Поэтому с этим реактивом необходимо работать под тягой и промывать использованную для реакций посуду раствором ам*иака в метиловом спирте).После окончание реакции метилирования содержимое колбы охлаждают под водопроводной водой,прибавляют 3 мл насиненного водного раствора хлористого натрия,I мл н-гексана,энергично встряхивают в течении 2-х минут н после расслоення фа«* вводят в хроматограф 3 шел гексанового слоя*

Условия хроматографирования:стеклянная измерительная koiofка(длина 2 и,внутренний диаметр 3 мм),заполненная Хромасорбом V,60/I00 мев,промытым ю.слотой н силанизиро-ванным АМХС с IOg SE-30 ♦ 0,2 % эпмкота 1001; ерврчитвль-вая колонкаСстек-яниая иди металлическая),заполненная ана-логнчмо* иабивк й; сь.рость гааа-аоситвдя(азот) чрез кодон-

gg - 60 мл/мин;расход воздуха через детектор - 300 мл/мин, водорода - 30 мл/мин;температура термостата колонок - 186° С, температура испарителя 230°С,шкала электрометра 1.10~*°а, скорость диаграммной ленты потенциометра 360 мм/час.

i/oрядок выхода из колонки хроматографируемых веществ: _в_{*хсан(растворитель),метиловый эфир 2,4-Д,метиловый эфир 2,4,5-Т.Относитеджное время удерживания метилового эфира

2.4- 1 по отношение к внутреннему ст.'*»да“ту - 0,58, Хроматографирование одной пробы проводят дважды.Измеряет на хроматограммах высоты пиков метиловых эфиров 2,4-Д. к 2,4,5-Т,вычисляют среднее значение отношения этих высот g по уравнение калибровочного графика находят содержание

2.4- Д в воде(мг/л).

Дхя построения калибровочного графика поступают следующим образом,К пробам воды прибавляют 25,50,75 и 100 мхг

2.4- Д(в гиде раствора в этиловом спирте), I мд стандартного раствора 2,4,5-Т с содержанием iOO мкг/мл,подкисляют соляной кислотой до рМ и далее поступают так, как это описано выше.Измеряют на хроматограммах высоты пиков метиловых эфиров 2,4-Д и 2,4,5-Т,вычисляют среднее значение их отвомения из трех параллельных определений и строят гра** фях зависимости отношения высот хроматографических пикиВ метиловых эфиров 2,4-Д и 2,4,5-Т от содержания 2,4-Д в воде(мг/л).Калибровочный график обрабатывают по методу наимомьиих квадратов и получают уравнение калибровочной прямой в виде

i ш к + вх

где У - отношение высот хроматографических пиков метиловых эфиров 2,4-Д и 2,4,5-Т

X - концентрация 2,4-Д в воде,кг/л А и В - -.оэффициенты, которые получают при обработке калибровочного графика по методу наименьших квадратов,

б)Электронво-захватный детектор,

цробу воды(250-500 мл) помещают в делительную вогонку, подкисляют соляной кислотой до рНг»Э, прибавляют I мл стаю -дартного раствора 2,4,5-Т с содержанием 2,5 мкг/мл и экстрагируют тремя порциями диэтилового эфира(100,50 и 50 мл). Объединенные эфирный экстракт переносят в делительную воронку,прибавляют 75 мл Э^-ного водного раствора бикарбоната натрия и экстрагируют в течение 3-х минут.После расслоения фаз собирают нижний водный елоа.Повторяют экстракцию еще двумя порциями по 50 мл раствора бикарбоната. Объединенный экстракт промывают двумя порциями по 50 мл петролейного эфира,отбраоывая этот эфир.Затем би-карбонатный раствор подкисляют 10£-ным водным раствором езрной ккзлоты до рВ*Э и трилды экстрагирую* дмэтиловым эфиром по 50 мл.Объединенный эфирный экстракт сушат,пропуская череэ стеклянную колонку,заполненную безводным сульфатом натрия.Растворитель удаляют на ротационном испарит ле в грушевидной колбе на 100 мл;последние порции растворителя удаляют с помощью груяи.Затем приливают я колбг 3 мл 5£-ного оаствора диметшлеульфата в абсолютном метиловом спирт# и далее поступают так,кая это описано

выше.Условия хроматографирования:стеклянная спиральная колонка(длина I м,внутренний диаметр 3 мм),заполненная ХроиатонокМ,0,16-0,20 мм,промытым кислотой и силанизи-рованным ДМХС с 5# SE-30;скорость гаэа-носителя(аэот особой чистоты) через колонку 50 мл/мин,скорость продувочного гаааСазот особой чистоты) через дееектор-150 мл/ мин,температура термостата колонок - 170°С,температура испарителя - 220°С,температура термостата детектора -220°С,шкала электрометра 20Л0~¹² а,скорость диаграммной ленты потенциометра 240 мм/час.Хроматографирование одной пробы проводят дважды.Измеряет на хроматогр ммах высоты пиков метиловых эфиров 2.4-Д и 2,4,5-Т,вычисляет среднее значение отношения этих высот и по уравнение калибровочного графика находят содержание 2,4-Д в воде.Дхя построения калибровочного графика к пробам воды прибавляет 5,10, 15 * 20 ккг 2,4-Д(в виде раствора в этиловом спирте),

I ял стандартного раствора 2,4,5-Т i содержанием 2,5 мкг/ мл,подкисляет соляном кислотой до р№*Э и далее поступает так,как это описано выше,

Минимально детектируемое количество метилового эЗнра

2,4-Д - 2 игЛинейный динамический диапазон - не менее 50 мг метилового эфира 2,4-Д.

Растительный материал. а)Плаиеино-ионизацноныый детектор.

В иэиельченнуо проб/(50 г) вносят I мл стандартного раствора 2,4,5-Т с содержанием 100 мкг/мл м экстрагирует тремя порциями по 50 мд смеем растворителей I и коничес-

в конической колбе с пришлифованной пробкой на аппарате для встраивания, щодоллительность каждой экстракции 15 кинут.Пробы с низким содержанием влаги увлажняет перед экстракцией '■.истиллированноя водой (15-25 мл).

После окончания последив г* экстракции пробу отфильтровывает на воронке Боннера под вакуумом,а остаток на фильтре промывает двумя порциями растворителей 11(по ГО мл). Объединенный экстракт переносят в делительнуо воронку, прибавляет 15 мл <Ю£-ыого водного раствора фософорно-.чо-лябде..овой(фосфороно-вольфрамовой) кислоты,15 мл концен-трярованной соляной кислоты и содержимое периодически встряхивает в течении 15 минут.После раздел нмя слоев нижний(водный) слой однократно экстрагирует 30 мл смеси растворителей II и этот экстракт объединяет с верхним слоем.Объединенный экстракт переносят ь делительнуо воронку, прибавляет 75 мл Э£-ного водного раствора бикарбоната гатрия и далее поступают так,как это описано при определения в воде с электронно-захватным детектором.

Для построения калибровочного графика т: пробам растительного материала прибавляет 25,50,75 и 100 миг 2,4-Д (в виде раствора в этиловом спирте), I ил стандартного раствора 2,4,5-Т с содержанием 2,5 мкг/мл и далее посту-па т так как это описано выше.Калибровочный график обрабатывает по методу наименьиях квадратов я получает уравнение калибровочной прямой в виде:

7 « А + ВХ

где 7 - отне еиие высот хроматографических пиков метило-