АБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ВЕТЕРИНАР ИИ

ВИРУСНЫЕ, РИККЕТСИОЗНЫЕ И ПАРАЗИТАРНЫЕ БОЛЕЗНИ

СПРАВОЧНИК

ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ВЕТЕРИНАРИИ

ВИРУСНЫЕ, РИККЕТСИОЗНЫЕ И ПАРАЗИТАРНЫЕ БОЛЕЗНИ

Под редакцией Б. И. АНТОНОВА

т

5.3. Результаты реакции считаются положительными при задержке гемолиза эритроцитов на менее чем на ( + + + ) в разведении сыворотки 1 : 5. С выявленными положительными сыворотками ставится количественная проба, т. е. проводится титрование этих сывороток в возрастающих вдвое разведениях 1:5; 1 : 10; 1 : 20 и т.д. (табл. 3),

3. Схема титрования положительной сыворотки

Разведение сыворотки 1:5 контроль Ингредиенты 1:5 1:10 1:20 1:40 1Я0 1:160 Исследуемая 0,20 0,20 0,20 0,2Э 0,20 0,20 0,20 сыворотка Антиген, раз- 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 _ веденный по титру Комплемент в 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 рабочем титре Физиологичес- _ _ _ _ _ _ 0,20 кий раствор Термостат при 37 °С 45 мин или рефрижератор при 4°( : 16- -18 ч Гемолитичес- 0,40 0,40 0,40 0,40 0,40 0,40 0,40 кая система Результат Термостат при 37 °С 45 мин 4-4-4-4- +++4* 4-4~Ь4- 4-4-4- +4-

5.4. Титром испытуемой сыворотки считают ее наибольшее разведение, давшее задержку гемолиза эритроцитов. В приведенном примере таблицы 3 титр исследуемой сыворотки равен 1 :40.

ПРЕДМЕТНЫЙ УКАЗАТЕЛЬ

Агар мясо-пептонный 83, 92 Альбумин бычий 63, 64 Аппарат Киппа 35, 39 Бульон мясо-пептонный 92 —    триптозно-фосфатный 113 Гемолизин 105 Гемолитическая система (гем- система) 56, 105 Жидкость Барбагалло 170, 188 —    Руге 127 Иммуноасцитическая жидкость (ИАЖ) 13 Йодный реактив Мелена 79 Комплемент 16, 24, 105 Метод гельминтоскопии 164, 176 —    биопсии 176 —    биохимический 179, 187 —    Вишняускаса 160 —    Гнединой 175 —    Ковоана 175 —    комбинированный 177 —    микроагглютинации с помощью аппарата Такачи 85, 105 —    раздавленной капли 198, 204, 210, 213, 215, 226 —    световой микроскопии (три-хинеллоскопии) 179 —    седиментации с целлофановыми пленками 160 —    Щербовича 185 —    Фюллеборна 183 Методика Бермана 171, 183 —    Кивако 176 —    комбинированная в модификации Котельникова и Хренова 173 Методика культивирования личинок стронгилят и лавроско-пии 168 —    седиментации с центрифугированием по Котельникову, Корчагину и Хренову 172 —    упрощенная модификация методики Бермана 171 —    флотации 160, 164, 166, 176

Окраска гистопрепаратов по Ленцу 1! ---Туревичу 11 —    мазков по Борману —Гайнуллиной 7 ---Бурри 227 ---Лейшману 225, 228 --— Михину 6 ---Морозову 127 ---Муромцеву 6 ---Нохту 70 ---Паппенгейму 70 ---Пашену 127 ---Романовскому 191, 199, 211, 215, 216, 225, 228 ---Романовскому    — Гим- эе 21 --- Селлерсу 6 — --Стемну 21 ■---Щуренковой 191 Перевиваемая линия почки свиньи (СПЭВ) 92 Первично-трипсинизированная культура клеток почки свиньи (ПЭС) 41, 92 --эмбриона коров (ПЭК) 58 --тестикулов бычка (ТБ) 58 Раствор азотнокислого натрия 185 —    азотнокислого свинца 159, 160, 173 —    азотнокислого серебра 127 —    Альсевера 96 Раствор аммиачной селитры 164, 166, 173, 176 —    борной кислоты 184 —    буферный борантный 157 —    веронал-мединаловый 12, 13, 149 —    гексаметафосфата 56, 61 —    гипосульфита натрия 185 —    забуференного глицерина 181 —    забуференный физиологический (ЗФР) 82 —    лимоннокислого натрия 97 —    мертиолята 40, 98, 156 —    сернокислого цинка 160, 171, 172 —    соляной кислоты 179

---

—    уксусной кислоты 177 —    фосфатно-буферный 9, 66, 96 —    Хенке 63, 81 —- хлорида цинка 177 —    электролита 68 —    Эрла 100 Реакция гемагглюгннацин (РГА) 36, 60 —    гемадсорбции (РГАд) 42, 59 Среда 199, 81, 92 —    0,5 %-ного гидролизата лак-тальбумина 81, 92, 113 —    Игла 97, 100 —    диффузионной преципитации (РДП) 55, 61, 141, 155 —    длительного связывания комплемента (РДСК) 16, 23, 9ft —    ЙАТ 151 —    иммунофлуоресценции (ИФ) 54, 79, 80, 91, 111 —    иммуноэлектроосмиофореза (РИЭОФ) 147 —кольцепреципитации в капилляре 182 —    нейтрализации (PH) 42, 81, 91, 94, 115, 117 —    нейтрализации вирусных гемагглютинииов (РНВГ) 63 —    непрямой гемагглютинации (РИГА) 64, 65, 66, 82, 84 —    непрямой иммунофлуоресценции 180 —    подавления иммунофлуоресценции 54, 91 —    радиальной иммунодиффу-вии (РРИД) 71, 76, 78 диагиостикум —    связывания комплемента (РСК) 23, 24, 56, 57, 192, 199, 219

--конглютинирующего комплекса 207 —    торможения гемагглютинации (Р'ГГА, или РЗГА) 43, 60 --гемадсорбции (РТГАд) 42, 60 --непрямой гемагглютииа- ции (РТНГА) 62, 63, 142 —    формалиновая 205, 226 ■— Игла (МЕМ) 113 —    Кнтта — Тароцци 83, 92 —    пептонно-агаровая 211 —    Петровского 211 —    поддерживающая 87, 92 —    ростовая 92 —    Сабуро 134 Тельца Бабеща — Нсгри 5, 6 Тканевая цитопатическая доза (ТЦД) 64, 103 Термолабильные ингибиторы 35, 95 Термостабильные ингибиторы 35, 95 Цитопатическое    действие (ЦПД) 58, 81, 87, 93 Эритроцитарный

---

СОДЕРЖАНИЕ

Предисловие........ 3

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСНЫХ И РИККЕТСИОЗНЫХ ИНФЕКЦИИ

Болезни, общие для всех видов животных...... 5

Бешенство......... 5

Методические указания по лабораторной диагностике бешенства .     5

Болезнь Ауески .............12

Методические указания по лабораторной диагностике болезни Ауески животных.........12

Лихорадка Ку........... .    16

Методические указания по серологической диагностике лихорадки Ку животных....... 16

Хламидийные инфекции ...........20

Методические указания по лабораторным исследованиям на хламидийные инфекции сельскохозяйственных животных 20

Болезни лошадей............33

Грипп .......... 33

Временное наставление по лабораторной диагностике гриппа лошадей .     33

Ринопневмония.............40

Методические указания по лабораторной диагностике ри-

нопневмонии лошадей..........40

Инфекционная анемия ........... 44

Временные методические указания по лабораторной диагностике инфекционной анемии лошадей.....44

Методика постановки реакции диффузионной преципитации (РДП) для серологической диагностики инфекционной

анемии лошадей........ 43

Болезни крупного и мелкого рогатого скота.....51

Респираторно-кишечные инфекции крупного рогатого скота .    61

Методические указания по лабораторной диагностике вирусных респираторно-кишечных инфекций крупного рогатого скота .............51

Методические указания по серодиагностике инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота в реакции непрямой гемагглютинации (РИГА) ...    .....    65

Лейкоз крупного рогатого скота....... 67

Методические указания по диагностике лейкоза крупного рогатого скота............67

Аденоматоз овец и коз...........76

Временные методические указания по лабораторной диагностике аденоматоза овец и коз.......76

Временная методика постановки реакции по определению

гиперпротеинемии у овец и коз.......79

Болезни свиней ............. 79

Вирусный (трансмиссивный) гастроэнтерит.....79

Методические указания по лабораторной диагностике вирусного (трансмиссивного) гастроэнтерита свиней    .    ,    79

Временное наставление по применению набора для серо-диагностики трансмиссивного гастроэнтерита свиней    .    .    84

Энтеровирусный гастроэнтерит .    .    .     86

Методические указания по лабораторной диагностике энте-

ровирусного гастроэнтерита свиней ...... 86

Грипп...............89

Наставление по применению набора антигенов и сывороток

для диагностики гриппа свиней.......89

Энзоотический энцефаломиелит (болезнь Тешена) ...    91

Методические указания по лабораторной диагностике энзоотического энцефаломиелита (болезни Тешена) свиней    91

Парвовирусная болезнь...........95

Методические указания по диагностике парвовирусной болезни свиней............95

Болезни птиц.............97

Болезнь Марека (нейролимфоматоз птиц).....97

Методические указания по лабораторной диагностике болезни Марека (нейролимфоматоза) птиц.....97

Вирусный энтерит гусят ...........102

Методические указания по лабораторной диагностике вирусного энтерита гусят..........102

Лейкоз птиц..............104

Временное наставление по лабораторной диагностике лейкоза птиц............. 104

Оспа птиц..............125

Методические указания по лабораторной диагностике оспы птиц..............125

Инфекционный ларннготрахеит кур....... 128

Временное наставление по лабораторной диагностике инфекционного ларинготрахеита кур .......    128

Временные методические указания по определению биологической активности вирусвакцины из штамма ВНИИБТ против инфекционного ларинготрахеита птиц    ....    132

Инфекционный бронхит кур.........138

Наставление по лабораторной диагностике инфекционного

бронхита кур............138

Болезни пушных зверей и пчел........ 145

Миксоматоз кроликов...........145

Временные методические указания по лабораторной диагностике мнксоматоза кроликов........145

Алеутская болезнь норок (плазмоцитоз)......147

Наставление по применению набора антигена и контрольных сывороток в реакции иммуноэлектроосмофореза для серологической диагностики алеутской болезни    норок    .    147

Наставление по прижизненной диагностике алеутской болезни норок при помощи йодно-агглютинационного    теста    151

Трансмиссивная энцефалопатия норок.......152

Временные методические указания по лабораторной диагностике трансмиссивной энцефалопатии норок .    .    152

Вирусный энтерит норок..........154

Временные методические указания по гистологическому исследованию на вирусный энтерит норок.....154

Гепатит песцов, лисиц и собак.........155

Временное наставление по постановке реакции диффузионной преципитации (РДП) в агаровом геле для диагностики вирусного гепатита песцов, лисиц и собак ...    155

Острый паралич пчел и заболевание, вызываемое нитевидным

вирусом пчел.............157

Методические указания по постановке реакции диффузионной преципитации (РДП) в агаровом геле для диагностики острого паралича пчел и заболевания, вызываемого нитевидным вирусом пчел..........157

ПАРАЗИТАРНЫЕ БОЛЕЗНИ

Гельминтозы........... 159

Методические указания по диагностике гельминтозов животных ..............159

Методические указания по лабораторным исследованиям

на гельминтозы плотоядных........176

Трихинеллез..............179

Методические указания по лабораторной диагностике трихинеллеза животных..........179

Временное наставление по применению реакции непрямой иммунофлуоресцепции для прижизненной диагностики

трихинеллеза свиней .......... 180

Трихинеллез клеточных пушных зверей и его диагностика 182 Приложение к «Инструкции по профилактике ликвидации трихинеллеза в звероводческих хозяйствах (фермах)»    .    182

Стронгилоидоэ.............183

Методические указания по лабораторным исследованиям

на стронгилоидоэ животных........ 183

Телязноз...... 184

Методические указания по лабораторным исследованиям

на телязиоз крупного рогатого скота......184

Акантоцефалезы ............185

Методические указания по лабораторным исследованиям на акантоцефалезы животных (макроканторинхоз свиней, полиморфоз, филиколлез водоплавающих птиц)    ...    185

Промежуточные (дополнительные) хозяева.....186

Методические указания по лабораторным исследованиям промежуточных (дополнительных) хозяев на личинки гельминтов ....... 186

Лротозоозы..............190

Пироплазмидозы..... 190

Извлечение из временной инструкции о мероприятиях по

борьбе с пироплазмидозами животных.....190

Анаплазмоз крупного и мелкого рогатого скота ....    191

(Приложение № I к «Инструкции по борьбе с анаплазмозом крупного и мелкого рогатого скота»).....191

Методика постановки РСК для диагностики анаплазмоза крупного и мелкого рогатого скота......192

Эперитрозооноз ............. 194

Методические указания по лабораторным исследованиям

на эперитрозооноз овец.........194

Трипанозомозы.............198

Методические указания по лабораторным исследованиям на случную болезнь лошадей, ослов, мулов ....    198

Извлечение из инструкции по борьбе с трипанозомозом верблюдов, лошадей, ослов, их гибридов и собак    .    .    .    204

Временные Методические указания по постановке и учету реакции связывания конглютинирующего комплекса (РСКК) для диагностики су-ауру у верблюдов    .    .    .    207

Трихомоноз..............209

Методические указания по лабораторной диагностике трихомоноза крупного рогатого скота.......209

Балантидиоз .............212

Извлечение из временной инструкции о мероприятиях по борьбе с заболеванием свиней балантидиозом    .    .    .    212

Гистомоноз..............213

Методические указания по лабораторным исследованиям на гистомоноз (тифлогепатит) птиц .    .    .    .    .    .    213

Токсоплазмоз.............216

Методические указания по лабораторным исследованиям

на токсоплазмоз животных........216

Временное наставление по применению токсоплазменного антигена КазНИВИ и ИЗ АН КазССР в реакции связывания комплемента (РСК, РДСК) для серологической диагностики токсоплазмоза и токсоплазмоносительства у

животных.............219

Лейшманиоз...... 224

Методические указания по лабораторным исследованиям

на лейшманиоз собак..........224

Боррелиоз (спирохетоз) птиц ......... 226

Методические указания по лабораторным    исследованиям

на боррелиоз (спирохетоз) птиц.......    226

Безноитиоз крупного рогатого скота .......    227

Методические указания по лабораторным исследованиям

на безноитиоз крупного рогатого скота.....227

Акариозы ..............228

Саркоптоидозы.............228

Извлечение из инструкции о мероприятиях по борьбе с cap.

коптоидозами (чесоткой) овец и коз...... 228

Извлечение из инструкции о мероприятиях по борьбе с саркоптоидозами (чесоткой) пушных зверей    и    кроликов    .    229

Извлечение нз инструкции о мероприятиях по предупреждению и ликвидации саркоптоза свиней.....230

Извлечение из инструкции по профилактике и ликвидации заболевания северных оленей чесоткой (саркоптозом)    ,    231

Инвазионные болезни пчел ....... 232

Нозематоз.............. 232

Методические указания по лабораторным исследованиям

на нозематоз медоносных пчел.......232

Предметный указатель ...........235

ББК 48.73 Л12

УДК 619: 616.98/.99 (031)

Составители: Б. И. Антонов, В. В. Борисова, Л. П. Каменева, Л. И. Ковалерчук, Г. А. Михальский, В, Д. Пев• нева, Л. И. Прянишникова.

Лабораторные исследования в ветеринарии: Ви« Л12 русные, риккетсиозные и паразитарные болезни: Справочник/Под ред. Б. И. Антонова. — М.: Агро-промиздат, 1987.—-240 с.: ил.

В книге даны методы лабораторного исследования патологического ма!ермала с целью определения возбудителей вирусных, риккетсиозных и паразитарных болезней животных. Они изложены по единой схеме. Методы унифицированы и стандартизированы.

Для ветврачей и фельдшеров, лаборантов ветеринарных лабораторий.

ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ВЕТЕРИНАРИИ: ВИРУСНЫЕ, РИККЕТСИОЗНЫЕ И ПАРАЗИТАРНЫЕ БОЛЕЗНИ

Справочник

Составители; Борис Иванович Антонов, Валерия Валентиновна Борисова, «Людмила Петровна Каменева и др.

Зав. редакцией В. Г. Федотов. Редактор В. //. Сайтаниди. Художественный редактор Н. А. Никонова. Технический редактор И. А. Зубкова. Корректор И. В. Карпова

И Б № 5093

Сдано в набор 02.10.86. Подписано к печати 22.01.87.    Т-00912.    Формат

84X108711. Бумага тип. JV* 2. Гарнитура Литературная. Печать высокая. Уел. псч. л. 12,6. Уел. кр.-отт. 12,6. Уч.-иэд. л. 18,25. Изд. № 226. Тираж 33 000 экз. Заказ .Ns 668. Цена 1 р. 10 к.

Ордена Трудового Красного Знамени ВО «Агропромнздат», 107807, ГСП, Москва, Б-53, ул. Садовая-Спасская, 18

Владимирская типография Союэполиграфпрома при Государственном комитете СССР по делам издательств, полиграфии и книжной торговли 600000, г. Владимир, Октябрьский проспект, д. 7

© ВО «Агропромнздат», 1987

ПРЕДИСЛОВИЕ

Успешное выполнение намеченной XXVII съездом КПСС широкой программы развития в нашей стране агропромышленного комплекса в немалой степени зависит от хорошей организации ветеринарного обслуживания животноводства, четко налаженной работы ветеринарных диагностических лабораторий. Проводимые в лабораториях исследования позволяют правильно организовать мероприятия по предупреждению инфекционных и инвазионных болезней, а в случаях возникновения заболевания своевременно поставить диагноз и принять целенаправленные меры по его быстрейшей ликвидации.

В работе ветеринарных лабораторий все большее применение находят современные методы исследований, одновременно идет совершенствование диагностики многих заболеваний, предлагаются новые более чувствительные и достоверные методы, позволяющие полнее и на ранних стадиях выявлять заболевших животных и тем самым способствовать быстрейшему оздоровлению хозяйств.

Специалисты лабораторий постоянно расширяют перечень показателей и болезней, на которые проводятся исследования.

За последнее время утверждено значительное количество инструктивных документов по проведению лабораторных исследований, что позволило более четко организовать работу специалистов, улучшить качество исследований, получать сопоставимые результаты.

Оснащение лабораторий современным оборудованием позволяет внедрять в работу более точные инструментальные методы.

В своей работе ветеринарные лаборатории не могут использовать всего многообразия предлагаемых методов исследования из-за того, что они или недостаточно апробированы, или из-за сложности используемого оборудования. Имеют место случаи, когда предлагаемые различными авторами методы при определении одних и тех же показателей дают несовпадающие результаты. Поэтому в настоящий справочник включены методы лабораторных исследований патологического материала, полученного от больных, убитых или павших сельскохозяйственных животных, апробированные Центральной ветеринарной лабораторией и утвержденные в разные годы бывшим Министерством сельского хозяйства СССР.

Книга содержит методические указания по диагностике вирусных, риккетсиозных, хламидиозиых болезней, а также методические указания по лабораторной диагностике паразитарных болезней животных и пчел.

Методики излагаются по единой схеме: взятие и пересылка патологического материала, методы его обработки, микроскопические исследования, включая световую и люминесцентную микроскопию, выделение возбудителей на куриных эмбрионах и культурах клеток, заражение лабораторных животных, гистологические исследования, идентификация и дифференциация возбудителей с использованием различных методов, определение биологической активности вакцин и исследования на напряженность иммунитета.

Методы лабораторных исследований, представленные и справочнике, унифицированы и стандартизированы, что создает возможность для стандартизации аппаратов, приборов, инструментов, посуды, реактивов, биопрепаратов и другого специального имущества, определения объема подготовки специалистов и степень оснащения ветеринарных диагностических лабораторий. Таким образом, стандартизация методов исследования является способом наведения строгого порядка в ветеринарной лабораторной работе.

Временное наставление по применению токсоплазменного антигена КазНИВИ и ИЗ АН КазССР

в реакции связывания комплемента (РСК, РДСК)

для серологической диагностики токсоплазмоза и токсоплазмоносительства у животных

(Утверждено 31 декабря 1976 г.)

1.    Определение, назначение и метод применения.

1.1.    Токсоплазменный антиген КазНИВИ и Института зоологии АН КазССР представляет собой ультразвукоустойчивую стабильную антигенную фракцию из токсонлазм. Препарат лиофилизирован в ампулах, имеет вид мелкопористой белой таблетки, хорошо растворим, его рабочее разведение указано на этикетке.

Антиген хранится при 4—10 °С. Срок годности сухого препарата — 2 года. Разведенный антиген можно использовать в течение 7—10 дн.

1.2.    Антиген применяется для серологической диагностики токсоплазмоза и токсоплазмоносительства у животных путем постановки реакции связывания комплемента (РСК, РДСК). Основанием для проведения серологических исследований могут быть эпизоотологи-ческие и клинические показания, которые позволяют заподозрить проявление токсоплазмоза у животных (невыясненная этиология бесплодия, патология родов, гибель молодняка и переболевание взрослых животных).

1.3.    Диагноз на токсоплазмоз проводят согласно «Временной инструкции по борьбе с токсоплазмозом сельскохозяйственных животных» и «Методическим указаниям по лабораторным исследованиям на токсоплазмоз животных», утвержденным Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 21 января 1985 г.

2.    Компоненты реакции:

физиологический раствор, pH 6,8—7,4;

эритроциты барана, трижды отмытые физиологическим раствором центрифугированием при 2—3 тыс. об/мин в течение 15— 20 мин. Из осадка отмытых эритроцитов готовят 2,5—3 %-ную взвесь на физиологическом растворе;

гемолитическая сыворотка. В качестве этого компонента используют гемолизин, выпускаемый биопромышленностью, титр которого указан на этикетке ампулы. В реакции гемолизин берут в тройном титре. Например, если титр гемолитической сыворотки 1 : 1200, то следует развести сыворотку 1 :4, для чего к 0,1 мл сыворотки прибавляют 39,9 мл физиологического раствора. Перед работой 2,6— 3 %-ную взвесь эритроцитов и разведенную по тройному титру гемолитическую сыворотку смешивают в равных объемах и смесь (гемолитическую систему) ставят в термостат при 37 °С на 45 мин для сенсибилизации эритроцитов;

комплемент — сыворотка крови морских свинок, отделенная от сгустка через сутки после взятия крови. Лучше всего использовать сухой комплемент, выпускаемый биопромышленностью. Для реакции используют комплемент в рабочем титре, который определяют в день ее постановки;

токсоплазменный антиген КазНИВИ и Института зоологии АН КазССР в рабочем титре;

исследуемые сыворотки крови в разведении 1 :5, инактивированные прогреванием в течение 30 мин при температуре: для крупного рогатого скота, овец и свиней — 57 °С; для лошадей — 58— 59 °С; для птиц, крыс, мышей — 60 °С; для ослов и мулов — 64 °С; кроликов и зайцев, собак, кошек, лисиц — 65 °С.

Для титрования комплемента и контролей реакции также используют предварительно проверенные нормальные сыворотки крови от клинически здоровых животных и свободных от неспецифических реакций и сыворотки крови от животных гипериммунизированных токсоплазмамн для больных токсоплазмозом.

Реакцию связывания комплемента ставят в объеме 1 мл: антиген, сыворотку и комплемент берут в дозе по 0,2 мл, а гемолитическую систему — 0,4 мл.

3. Титрование комплемента.

3.1.    В день постановки реакции производят титрование комплемента, для чего его разводят физиологическим раствором I : 10— 1 : 15. Эти разведения комплемента являются наиболее оптимальными для постановки реакции в объеме I мл.

Комплемент титруют по нормальной и заведомо положительной сывороткам в присутствии антигена и без него, а также по 2—3 исследуемым сывороткам в безантигенном ряду для определения их антикомплементарных свойств и правильного выбора титра комплемента. В безантигеиные ряды пробирок вместо антигена вносят по 0,2 мл физиологического раствора.

Схема титрования комплемента дана в таблице 1.

3.2.    После выдерживания пробирок в термостате производят учет результатов титрации комплемента. Схема определения титра комплемента приведена в таблице 2.

3.3.    Титром комплемента является наименьшая его доза, которая дает полный гемолиз взвеси эритроцитов. В приведенной схеме (табл. 2) титр комплемента в разведении 1 : 10 равен 0,06, так как в 1, 2, 4 и 5 рядах в пробирках с 1 по 8 отмечается полный гемолиз эритроцитов, при соответствующей задержке гемолиза — во всех пробирках 3-го ряда (положительная сыворотка4-антиген).

3.4.    Учитывая возможные антикомплементарные свойства антигена, в основной опыт комплемент берется с надбавкой к найденному титру (в нашем примере он равен 0,06). Для токсоплазменного антигена делают надбавку: 10—20 %—для РСК и 50—55 %—для РДСК. Тогда в объеме 0,2 мл (разовой дозы комплемента) рабочий титр комплемента в разведении 1 : 10 будет составлять для РСК 0,06+10—20% и равняться 0,066—0,072.

Если в основной опыт взят рабочий титр 0,072, то для получения разовой дозы комплемента (0,2 мл) к нему нужно добавить 0,128 мл физиологического раствора (0,072+0,128), определить общее количество комплемента в рабочем титре, необходимое для постановки основного опыта. Например, если в опыте будет использовано 100 пробирок, то для постановки реакции потребуется 20 мл

	Комер* пробирок										Контроль
Ивгрсдвеиты. мл	1	3	3	4	б	б	7	8	9	10	компле мента	гемоли тической сметены
Комплемент в разведении 1 : 10	0,20	0,18	0.16	0.14	0,12	0,10	0,08	0.06	о.м	0,02	0.2	—
Физиологический раствор	—	0,02	0,04	0.06	0,08	0,10	0,12	0.14	0.16	0.18	0.4	0.6
Антиген в рабочем титре или физиологический раствор для безантигенного ряда	0,2	0.2	0,2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	—	—
Сыворотка (нормальная, ток-соплазменная, исследуемая в разведении 1:5...)	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0,2	0,2	0.2	0.2	0.2	—	—
		Термостат при 37 9С 45 мин
Гемолитическая сыворотка	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4

Номера пробирок в титр комплемента Контрол. Иягредиенты 1 2 3 1 4 5 6 7 8 9 10 КОМПЛР- геыолж-л песков системы 0.2 0.1в | 0.18 1 0.14 0.12 0,10 0.08 0.06 0.04 0.02 кевта Нормальная сыворотка + антиген + комплемент + гемолитическая система ++ ++ ++ — ++ ++ Нормальная сыворотка + физиологический раствор + комплемент + гемолитическая система + ++ + ++ ++ Положительная сыворотка + антиген + комплемент + гемолитическая система ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + ++ ++ ++ ++ Положительная сыворотка + физиологический раствор + комплемент + гемолитическая система ++ ++ ++ + + + + Исследуемая сыворотка + физиологический раствор + + ++ + — ++ ++

комплемент ■+• гемолитическая система

комплемента (0,2 мл-100). Это количество получают путем добавления к 7,2 мл разведенного 1 : 10 комплемента 12,8 мл физиологического раствора (0,072+0,128—100=20).

З.б. При достаточном опыте работы с токсоплазменным антигеном титрацию комплемента можно проводить только по безантиген-ному ряду нормальной, токсоплазменной и 2—3 исследуемым сывороткам.

4.    Постановка основной реакции.

4.1.    В основную реакцию наряду с используемыми сыворотками берут в качестве контроля заведомо положительные и отрицательные сыворотки, с которыми реакция ставится так же, как с испытуемыми.

4.2.    Для постановки основной реакции берется два ряда пробирок: 1-й-—опытный и 2-й — контрольный (контроль сывороток). Каждую сыворотку в разведении 1 :5 наливают по 0,2 мл в опытную и контрольные пробирки. Антиген в рабочем титре наливают по 0,2 мл только в пробирки 1-го ряда, во 2-й контрольный ряд вместо антигена наливают по 0,2 мл физиологического раствора. После этого во все пробирки наливают по 0,2 мл комплемента в рабочем титре. Одновременно ставят контроля: антикомплементарности антигена (0,2 мл антигена+ 0,2 мл комплемента+ 0,2 мл физиологического раствора), его гемотоксичности (0,2 мл антигена+ 0,4 мл физиологического раствора) и стабильности гемолитической системы (0,6 мл физиологического раствора).

4.3.    Все пробирки хорошо встряхивают для смешивания ингредиентов и ставят для РСК в термостат при 37 °С на 45 мин, а для РДСК —в рефрижератор при температуре 4°С на 16—18 ч.

4.4.    Для РСЖ в пробирки после выдерживания в термостате добавляют по 0,4 мл гемолитической системы, затем их встряхивают и ставят в термостат при 37 °С на 45 мин.

4.5.    При постановке РДСК пробирки после выдерживания в холодильнике вначале ставят в термостат на 15 мин, а затем ко всем пробиркам добавляют по 0,4 мл гемолитической системы, штатив с пробирками хорошо встряхивают и ставят в термостат при 37 °С на 45 мин.

4.6.    Результаты реакции в РСК и РДСК учитывают сразу после выдерживания пробирок в термостате и через 2—6 ч стояния при комнатной температуре.

5.    Учет результатов реакции.

5.1.    При учете разультатов прежде всего смотрят контроли:

контроль сывороток (2-й ряд) — во всех пробирках должен

быть гемолиз;

заведомо отрицательные сыворотки должны дать гемолиз;

заведомо положительные сыворотки должны дать задержку гемолиза;

контроль антигена: на антикомплементарность — должен дать гемолиз; на гемотоксичность — задержку гемолиза;

контроль стабильности гемолитической системы должен дать задержку гемолиза.

5.2.    Результаты учитывают по четырехплюсовой системе или в % задержки гемолиза эритроцитов: положительная реакция на (+ + + + )—задержка гемолиза на 100%; на (+ ++)—задержка гемолиза на 75%; на (+ + )—задержка гемолиза на 50 % и на (+)—задержка гемолиза на 25%. Полный гемолиз эритроцитов — отрицательная реакция.