Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1 

24 страницы

Купить бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Цена на этот документ пока неизвестна. Нажмите кнопку "Купить" и сделайте заказ, и мы пришлем вам цену.

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Методические рекомендации предназначены для скрининга полимерных материалов и изделий медицинского назначения. Данный метод позволяет автоматически произвести количественную оценку токсичности водных вытяжек из полимерных материалов и изделий. Рекомендации предназначены для специалистов санэпидстанций и лабораторий, проводящих токсикологические исследования синтетических полимеров

 Скачать PDF

Оглавление

1. Тест-объект

2. Принцип метода

3. Оборудование

4. Температурный режим эксперимента

5. Этапы исследования, их последовательность

     5.1. Приготовление вытяжек из полимерных материалов

     5.2. Приготовление опытной и контрольной проб

     5.3. Включение прибора

     5.4. Оттаивание замороженной спермы

     5.5. Приготовление рабочих образцов

     5.6. Подготовка проб к исследованию на приборе

     5.7. Накопление и обработка экспериментальных данных

6. Алгоритм обработки результатов

7. Оценка результатов исследований

8. Заключение

Список использованных источников

Динамические кинезисграммы

Экспериментальные данные

Стр. 1
стр. 1
Стр. 2
стр. 2
Стр. 3
стр. 3
Стр. 4
стр. 4
Стр. 5
стр. 5
Стр. 6
стр. 6
Стр. 7
стр. 7
Стр. 8
стр. 8
Стр. 9
стр. 9
Стр. 10
стр. 10
Стр. 11
стр. 11
Стр. 12
стр. 12
Стр. 13
стр. 13
Стр. 14
стр. 14
Стр. 15
стр. 15
Стр. 16
стр. 16
Стр. 17
стр. 17
Стр. 18
стр. 18
Стр. 19
стр. 19
Стр. 20
стр. 20
Стр. 21
стр. 21
Стр. 22
стр. 22
Стр. 23
стр. 23
Стр. 24
стр. 24

КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ЖПР2СС-МЕТ0Д ОЦЕНКИ

токсичности полимеров с использованием

Ю1ЕТОЧНОГО ТЕСТ-ОБЪЕКТА

Методические рекомендация

Москва - 1987 г.

методические рекоглекд&цяй предназначены для скр:шинга полимерных материалов л изделий медпшнского назначения. Данный метод позволяет автоматически произвести количественную оценку токсичности водных вытяг.юк из полимерных материалов и изделий.

Рекомендации предназначены для специалистов санэпидстанций и лабораторий, проводящих токсикологические исследования синтетических полимеров.

Разработаны; Всесоюзным научно-исследовательским и испытательны!/, институтом медицинской техники

Исполнители: Еськов А.И., Катов Р.И., Гурилев О.М.,

Соколов А.В., Филатов А.В.

//

о характере действия вытяжки. В этом случае можно увеличить количество образцов и тем самым повысить точность. Если за повысить ToniiocTb оказывается невозможным, вытяхка должна быть подвергнута токсикологическому исследованию другими более чувствительными и точними методам,

8. Заключение

Описанная методика позволяет количественно оценить биологическое действие исследуемой вытяжки, и таким образом, осуществлять скрининг полимерных и других материалов и изделий.

Значимость результата (заключения), получаемого по данной методике может быть повышена. Для этого путем "калибровки" по результатам исследований на целостном организме для конкретной группы изделий и материалов необходимо определить предельно допустимое значение индекса токсичности Т,тл*. Заклю-чешш о возможности использования данного образца делается аналогично п. 7, но экспериментальная величина индекса токслч-

Гт* /Ttt/I

г сравнивается с его предельно допустимым значением 1Г

СПИСОК .ЮПОЛЬЗОБАННКХ ИСТОЧНИКОВ

1.    Еськов АЛЬ, Кашов F.K., Лужецкиа А. С., Гурилев ОЛЛ., Рязанов Ю.Н., Смааик Г ЛЬ, Арефьев И.М., Лалпо В, Г. Метод токсикологической оценки полимерных материалов "Гигиена и санитария 1985, £ I, с.62-64;

2.    Еськов А. Д., Гурилев О.М., Лужецкий А.С., Рязанов Ю.Н., Кашов Р.И. Способ определения токсичности полимерного материала. Авторское свидетельство 1224723. Опубликовано I5.04.8G.

Бш. № 14.

3.    Исследование возможности создания лазерного полуавтомата для токсикологических исследований на сперме сельскохозяйственных животных". Рукопись, заютючйтельныи отчет, ВНЙШЫТ, 1986.

4.    Кори Т., Корн Т.

Справочник по математике. - М.: Наука, 1977 - 831 с.

5.    Шловаков В ЛЬ Биология воспроизведения л искусственное осеменение квотных - М., 1962. - 696 с.

6.    Тимохина В.И., Ланина С.Я. Токсикологические и санитарко-химические методы оценки полимеров для контакта с живым организмом. - В кк.: "Синтетические полимеры медицинского назначе-}шя", Ташкент, издательство "ФАН" Уз ССР, 1984 , IO^V—116 с.

7.    Ющенко К.П., Семаков В. Г. Переллпзаемость спермы быка после замораживания при оттаивании в различных средах в зависимости от количества сперматозоидов в дозе. - Сб.тр. НШСХ центр, р-нов Нечерноземкой зоны, 1978, в. 42, с. I2C-I2I.

8.    £aJt>e X    дцРРмумгъа    at-J

UjtoSjesU '//гл Уегег/иър - Илtши-сЛилу fo/i-

Jty/ncaOU'LM iny flurtUi oj

ij/icutftaJJen (Jfltt/naUjl) ~,t frUjcwH/t- venimte Жувапс и a ct ffiesi'We tftfPe "    £•

C'i&f tli'-sto lAe tojUfifo-

g Pa &re%    -

APqcA X. Ул vitto jt-tu/i

(f: t£tf

'in


Or JtyA/Лг/М iicmaUu'iUt f9&. /о *'t


ftoi&nt-u


YP fil&J&UL £.. J/OibCtffj У. U%U/fPU%L %>


0/L -/OjrUitp


yuuH&ti ф’    cm    A&^obtts nnU    яЫъ/Шй

tui&£ in Шъо ала cn ffiff# - л />0&т#ц in JUtb&sis


/ЛУ // V/ J9'&


ДИНАМИЧЕСКИЕ КИКЕЗЧСГРАИМН

Дате__Театсзратург.

Образец Jp I___________________________

Образец № 2 ___________

Образец ЖЗ ___

Образец J 4 _______________

Образец £ 5 __________

Образец Ж 6____________________

Образец £ 7 ____

Образец * 8 ___

Образец Is 9_

Образец Ж 10 __________________________

Продолжительность измерения с. Период измерения мин. с


^ЛА:**:^!Ь^Лййа




'А*-?


з:<с

•"-» «гг *■* G* •-» —

• « «01 # • •• • M • J •

-2? гчи\

• • w• « ^

j^r **

SHHi

• kw

3

s

7“

•3

Э

* 4*3

159

*

143

A

182

A

A

162 *

161 *

219

A

13Э

140

А

112

A

1 T*

A

233

A

A

174 *

231 *

30*

A

32?

Ч. — т

А

i iZ

• w V

A

144

A

376

A

A

132#*

39 *

2?9

A

179

С .# V

и

10?

A

299

A

^o«r

C»'ww

A

A

151 *

113 ♦

202

A

133

« do

i .у

А

i p2

A

12?

A

4й<

A

A

191 *

42 *

17?

A

133

•    4 -ж

•    « W

V

12?

A

129

A

1?4

A

A

34 *

26 *

3?

A

1 оо

т %0 ф

*

96

A

36

A

224

A

A

37 *

36 *

71

A

11?

• VI

33

A

94

A

263

A

A

3d *

27 ♦

39

A

43

♦    ->-7

•    4>

it

У 9

% %

A

63

A

144

A

A

21 *

13 *

46

A

39

19?

*1

37

A

71

A

299

A

A

? *

16 ♦

53

A

24

36

А

61

A

72

A

120

A

A

11 *

11 *

14

A

27

?:

*

39

A

47

A

193

A

A

14 *

2 *

3

A

17

А

7?

A

i

A

121

A

A

9 *

2 *

7

A

7

в:

А

6?

A

31

A

163

A

A

2 *

1 ♦

A

3

у*>

• W

*

33

A

37

A

123

A

A

1 *

1 *

A

I

et

WW

А

36

A

f a • a

A

129

A

A

1 -

1 *

A

2

4*

А

at« w *

A

24

*

79

A

A

*

1 *

A

I

*6

14

A

22

A

147

A

A

*

A

4

к

с. -

*

IB

A

14

A

152

A

A

*

*

A

33

А

A

A

A

11 a

A

A

*

A

2?

А

25

A

?

A

*30

A

A

*

«

A

« Ж

- «V

•*

t Q

» ф

A

A

w

A

7?

A

A

*

*

A

66

It

?

A

4

A

67

A

A

*

*

A

• “f

л w

А

1 i • £.

A

A

**

A

W\

A

A

*

*

a

Ф

Э

• T

%l

A

4

A

s

A

A

*

*

A

1 XL

• w

it

!4

A

3

A

61

A

A

*

*

A

А

а

A

A

43

A

A

*

*

A

t < 4 -

it

65

A

A

69

A

A

A

4

л»

*

Ф

A

A

26

A

A

m

*

A

с.

it

s

A

A

43

A

A

*

*

A

4

%

4

A

A

46

A

A

*

*

A

-4

it

A

A

26

A

A

*

*

A

A

A

26

A

A

*

*

A

it

A

A

t A

m •

A

A

*

A

it

A

A

О

*

A

A

*

*

A

it

A

A

d

A

A

*

*

A


0



H *    *    • л

. г.    .»•


■*    Ъ С

* 0    4 v    •

*


2°™?.


П©£5ИЗН9С?а


u: j и

и'..



Г=    О


Ы    1.^

• •    Пч


г


тг



20


?-э


izтй :г. з. 36.

05?«2£i г


Г9ТПГГ


•    :uv4

•    •. • • • •


* nz




2ЯТЯ : ОБРАЗЕ.


СРЕДНЕЕ 8Р5ЯЯ П013И2Н0СТИ t МЧН.


32.33


К


4


о


16


2*


!Д7Я 12.    2.    3*.

05?Я2£!1    4

142.24

ssssa

С?Е£Н£1 ЗР£*.Я ПОИЗИЗНОСТИ i ЛИН

р л О и к

*

*■ ♦ «

* ♦

f


I    *    •

I ‘

I I •

"* V ? ГГ ГГ Jj 24


£«tg :г. з. ее.

05М35!!    6


5?£*Я nOiSHSHvt


• • > •» .


ч-s. з:



я о


к


(

I




A


h*


УТВЕКфД

а

Цад&вдшк Управления коних

.^декарстящш средств /У И МеДНЦДЙСОДЙ тохюпш

Р    Г.ЕоСков

КОЛИЧВСТВЕННЬЙ ЭКСПРЕСС-МЕТОД ОЦЕНКИ ТОКСИЧНОСТИ ПОЛИМЕРОВ С ПОЛЬЗОВАНИЕМ КЛЕТОЧНОГО ТЕСТ-ОБЪЕКТА

Методические рекомендации

Значительный рост объема токсикологических испытаний и экспертиз в практике гигиенических исследовании полимерных материалов и изделий медицинского назначения вызывает необходимость поиска экономически эффективных методов экспресс-анализа с использованием относительно простых биологических тест-объектов. Экспресс-методы оценки токсичности применимы в следующих случаях Гб; :

1)    при отборе оптимальных лабораторных образцов материалов и изделий на первом этапе их разработки;

2)    при оценке различных технологий переработки материалов в изделие;

3)    яри выборе оптимального способа стерилизации изделия;

4)    при незначительном изменении рецептуры материала;

5)    при изменении области применения хорошо изученного материала,

В настоящее время применяют разнообразные тест-объекты, в том числе и сперму млекопитающих ГБ, 9, 10} . Сперматозоиды могут существовать вне организма в средах простого состава достаточно длительное время без изменения своих функциональных свойств. Основное назначение половых клеток, как носителей

У.


ьл

и

hi


У

9

з:

зг.

*:

О

гг.

о

CI

•51

О

с.»

г:

.

о:

ГУЬш

»*.

ш

о.

от

f-l

ы

Ы

N

ы

п

Й

э:

тс сс

И

е|

>-• о.

й

Hi

и и»

»

о.

еЮ

о


о




*


«


4


4


p.




оэ


о


кГ


N


наследственной информации, оплодотворение яйцеклетки. В связи с необходимостью продвижения мужских гаме? к месту оплодотворения. именно подвижность является основным показателем физиологического, биохимического и морфологического статуса епермаТО-ЗОКДОБ Г 51 .

Основными недостатками известных методик, в которых о Функциональном состоянии сперматозоидов судят по характеру движения и продолжительности периода подвижности, являются трудоемкость у субъективная оце;гка подвижности. Настовая методика позволяет автоматически произвести количественную оцеш^у токсичности водных вытяжек из полимерных материалов. Время эксперимента не более 4 часов.

1.    Тест-объект

3 качестве тест-объекта используется замороженная в парах :.-здкого азота гранул про Ванная сперма быка. Замороженную сперму быка можно получать на станциях искусственного осеменения или в Республиканском банке семени. В токсикологической лаборато-рхш хранить спер,ту можно неограниченно долго в сосудах Дьюара, заполненных жидким азотом. В оосуды Дьюара жидкий азот доливается каждые 3-4 дня.

Экспериментально показано, что коэффициент вариации концентрации сперматозоидов в гранулах сперш и рабочих растворах не превышает 1($ [31 . Это говорит о том, что гранулы достаточно однородны для обеспечения стандартности контрольных образцов сперш.

2.    Принцип метода

Принцип метода основан на анализе зависимости показателя

подвижности суспензия сперматозоидов от времени m, jfi) [х, 2} Показатель подвижности определен, как

/й*лйI V

где и. - постоянный коэффициент,

Л- концентрация яодвияных клеток,

!/- средний модуль скорости клетох.

Оценка показателя подвижности осуществляется путем подсчета числа флуктуации интекскзности рассеянного излучения, вызван» ных прохождением клеток через оптический зонд.

3. Оборудование

1.    Прибор для определения индекса токсичности (разработка ВНШШТ) (рис. I).

2.    Печатающее устройство УВШЧ-30~С04 (рис„ X).

3.    Комплект полистироловых кювет.

4.    Химическое оборудование из стекла (из расчета на проведение одного эксперимента):

1)    пробирки химические объемом 3-5 ил для оттаивания завороженной спермы - 10 шт.

2)    пробирки с притерта пробками объемом 1,5-2 мл для рабочих растворов - 10 шт.

3)    покровные стекла одинаковой толщины для наяривания хюэет -10 шт.

4)    пипетки объемом I мд - 3 шт.

5)    мерные колбы с притертыми пробками объемом 100 мл для приготовления изотонических растворов - 2 шт.

6)    глазные пипетки для заполнения кювет рабочими растворами -

2 шт.

Рис. I

5.    Весы аналитические - I лт.

6.    Пинцет анатомически!! - I ®т.

7.    Сосуд Дыоара емкостью 26,5 л (марка СДГГ-25) - X шт.

3. Сосуд Дьюара емкостью 5 л (марка СДС-5) - I шт.

4. Температурный режим эксперимента

Все растворы в течение эксперимента должны быть постоянно нагреты до температуры +40 + 0,5°С.

5. Этапы исследования, их последовательность

5.1.    Приготовление вытяжек из полимерных материалов

Модельная среда - дистиллированная вода.

Экстракты из полимерных материалов или изделий приготавливаются в соответствии с научно-методическголи документами для данного вида изделия.

5.2.    Приготовление опытной и контрольной проб

Для определения индекса токсичности опытный раствор необходимо сравнить с контрольной средой. В качестве контрольного раствора выбрана глюкозо-цитратная среда (состав среды: глюкоза - 4 г; цитрат натрия - С,58 г; вода дистиллированная - до 100 мл) pH 8,0 7 . Контрольная среда одновременно является разбавителем для оттаивания замороженной спермы. Опытной пробой является водная вытяжка из полимерного материала. Изотонию вытяжки достигают путем добавления сухих реактивов глюкозы и цитрата натрия. На ICO мл вытяжки добавляют 4 г глюкозы и 0,58 г цитрата натрия. Затем дозируют по I мл контрольный и испытуемый растворы в пробирки и ставят их в водяную баню при температуре +40°С. Контрольный и опытный растворы приготавливают зад

ранее за 1 час до начала эксперимента.

5.3.    Включение прибора

Включение прибора осуществляется нажатием тумблера "Сеть”. Затем необходимо нажать кнопку "Пуск", после чего ведается распечатка бланка исходных данных (приложение I), подлежащей заполнению.

5.4.    Оттаивание замороженной спермы

Отмеривают пипеткой в пробирки по С ,25 мл разбавителя и ставят их в водяную баню при температуре +40°С. Охлажденным до температуры ;здкого азота длинным анатомическим пинцетом извлекают из сосуда Дьюара гранулу спермы и быстро опускают в нагретый раствор. Каждую гранулу размораживают в отдельной пробирке. Нельзя оттаивать несколько гранул в одной пробирке! Сразу после размораживания содержимое пробирок с целью приготовления маточного раствора спермы сливают в одну пробирку и тщательно перемешивают.

5.5.    Приготовление рабочих образцов

Общий объем рабочего образца выбрал равным I мл. В каждую пробирку контрольной и опытной серии помещают по 0,2 ш суспензии сперматозоидов.

5.6.    Подготовка проб к исследованию на приборе

Каждый рабочий образец переносится в кювету, которая накрывается покровным стеклом. Излишки рабочего раствора снимаются с кюветы фильтровальной бумагой. Затем кювета устанавливается в кюветодерыателъ прибора.

5.7. Накопление и обработка экспериментальных данных

Наитием кнопки "Пуск" включается процесс накопления данных. Каждое оцененное значение показателя подвижности выдается на встроенный десятичный индикатор и печатающее устройство. При достижении нулевых значений показателя подвижности во всех десяти кюветах нажатием кнопки "Останов" производится остановка процесса накопления данных. После этого приступают к обработке результатов экспериментальных данных нажатием кнопки "Обработка". По завершении обработки автомат выдает значения среднего времени подвижности каждого образца и величину критерия токсичности на встроенные десятичные индикаторы и печатающее устройство. Кроме того по желанию оператора, на печатающем устройстве строится график зависимости т*. - Ус (t)    каждого    рабочего

образца. Таким образом, з результате работы автомата экспериментатор получает протокол испытаний, представленный в приложении I.

6. Алгоритм обработки результатов

В результате работы автомата для каадого из десяти образцов рабочих растворов, которыми заполнены десять кювет, регистрируется зависимость т - У ft)    . Для каждой такой зависи

мости вычисляется среднее значение функции [4 1 , Среднее значение функции ( Ь ср.) характеризует среднее время подвижности суспензии сперматозоидов:

Ж rr>cj • i :tf = Jr ту

где    t    -    порядковый    номер    кюветы,

J - порядковый номер оценки подвижности в £ -той кювете.

Затем вычисляется индекс токсичности 1Г

- 0пы?.

= ■ /00%

В случае использования 5 опытных я 5 контрольных образцов


имеем


- MOHIP 5

to-,. - £    J    и

' *•/


— MAiVT



= if 4; <y>. /S

i*(>


где / = 1,2,3,4,5 - соответствует кюветам с контрольным

раствором,

i = 6,7,8,9,10 - соответствует кюветам с опытным раствором.


Среднее квадратическое отклонение величины jr ллется, как


опреде-


С?


, , 'V

'rVl%rrJ

лГнтр


•Cr-Л'р


Определение значения среднего квадратического отклонения позволяет оценить разницу ыелду контролем и опытным образцом с заданной вероятностью [41 .

7. Оценка результатов исследований

Оценку характера биологического действия исследуемой вытяжки осуществляют следующим образом. Задают вероятность р , с которой необходимо оцепить характер действия. Определяют соответствующий доверительный интервал ^ 7Т= 2.6/>*€,& (•&*•£>и) При 1т +    <    1№%    вытяжка признается оказывающей угнетающее действие. При 7Г - а!г >    100$    вытяжка    признается

неоказывающей угнетающее действие. При 17'а2г I0G$< 1- + лТг достигнутая в эксперименте точность не позволяет сделать вывод