Министерство сельского хозяйства Российской Федерации

Государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ

Сборник N° 21 Часть 1-ая

МОСКВА

ЦЕНТР НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКОЙ ИНФОРМАЦИИ, ПРОПАГАНДЫ И РЕКЛАМЫ 1994 г.

Министерство сельского хозяйства Российской Федерации

Государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

Сборник № 21 Часть 1-ая

МОСКВА

ЦЕНТР НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКОЙ ИНФОРМАЦИИ, ПРОПАГАНДЫ И РЕКЛАМЫ 1994 г.

Утверздено Министерством здравоохранения СССР

" 29" июля 1991 г

» 6133-91

МЕТОДЬГЯЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МЕТАБОЛИТОВ ФОСФАМИДА В БИОЛОГИЧЕСКИХ СРЕДАХ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ (Дополнение к методическим указаниям » 4323-87 от 08.06.87 г)

1.Краткая характеристика

Фосфамид(рогор, БИ-58) в организме теплокроиых животных и человека

образует продукты превращения :

0,0 -диметил —S - карбонилмотилдитиофосфат (диметоат-карбоновая кис-

о

лота,температура плавления 42 С)

0,0-диметил -S-карбметоксиметилдитиофосфат,температура кипения 98-99°С при 6,7 Па, njp=1 ,5200

0,0-диметилдитиофосфорная кислота, температура кипения 52-55°ггри 10,66 Па,П^°=1 ,5340

0,0-диметилтиофосфорная кислота, П^=1,4800 0,0-диметилфосфорная кислота, температура кипения 79-80°С при 0,13 Па, п|°*1,4082 Указанные метаболиты могут образовываться при метаболизме других пестицидов , сходных но химическому строению с фосфамидом.

Метаболиты хорошо растворимы в органических растворителях, в том числе в ацетоне, этаноле, хлороформе, етилацетате и др.

Разработчик :    Л.Г.Александрова, КНИИГТ и ПЗ, г.Киев

48

2. Методика определения метаболитов фосфамида в биологических средах (ткани внутренних органов, кровь,моча)

2.1.Основные положения

2.1.1.    Принцип метода

Метод основан на экстракции метаболитов фосфамида из биологических сред органическим растворителем (хлороформ или етилацотат), очистке полученных экстрактов и последу идем определении методом тонкослойной хроматографии . Хроматографирование исследуемых соединений проводят в подвижных фазах на основе ацетона,включающих малополярные и полярные растворители. Проявление на хроматограммах с помощью проявляющих реагентов:2,б-дибром-N- хлорхинонимина,а также 4~(п-нитробензил)пиридин а с последующей обработкой тетраэтиленпентамином.

2.1.2.    Метрологическая характеристика метода приведена в таблице N1

2.1.3.    Избирательность метода

В условиях двумерной хроматографии после 1 хроматографирования их указанной выше смеси метаболитов + фосфамид раздельно определяются фосфамид, "диметоат-карбоыовая кислота" и 0,0- диметилкарбметилдитио-фосфат,а после 11 хроматографирования раздельно определяются 0,0-ди-метилфосфорная кислота и (или) 0,0-димотилтиофосфорная кислота (или 0,0-даметилдитиофосфорнэя кислота).

Последние две кислоты,если не присутствуют одновременно в пробе, отличаются окраской зоны локализации при взаимодействии с 2,6- дибром-N-хлорхинонимином.

Определению не мешают пестициды, которые могут присутствовать в пробе (с учетом технологии возделывания с/х культур)-даазинон,ци-клоат. эптам, метоксихлор, линдаи.

49

2.2. Роактивы и растворы

0,0- диметил-З-карбонилметилдитиофосфат ("диметоат-карбоновая кислота", метаболит N1 )

0,0- фосфорная кислота, х.ч.(метаболит N2)

0,0- диметилтиофосфорная кислота, х.ч. (метаболит N3)

0,0- диметилдитиофосфорная кислота, х.ч. (метаболит N4)

0,0- диматилкарбомотоксиметилдитиофосфат (метаболит й 5)

Фосфамид, хч или товарная форма пестицида (40*/.-ный или 38'/.- ннй концентрат эмульсии)

Ацетон хч, ГОС^ 2603 -79 Бензол хч, ГОСТ 9955-75 н-Гесан, ч, ТУ 6-09-3375-78 Хлороформ, хч, ТУ 6-09-4263-76 Уксусная кислота хч, ГОСТ 61-75 Дистиллированная вода

Натрий сернокислый безводный чда, ГОСТ 4166-76

2,6-Дибром-й-хлорхшюнимиэт,ТУ 6-09-05-63-73 хч, 0,5Х-ный рествор в гексане

4-(п-нитробензил) пиридин,ТУ 6-09-15-93-74 Тетраатиленпентамин, ТУ 6-09-05-804-78 Этилацетат.хч, ГОСТ 22300-76

Натрий лимоннокислый, чда, ГОСТ 22280-78, 57. раствор Подвижные фазы:

I    хроматографирование : N 1 .бензол-этилацетат-ацетсн (60:15:25)

N 2.гексан-ацетон-хлороформ (1:1:3) и N 3 бензол-атилацетат-уксус-ная кислота (50:25:25:2).

II    подвижная фаза:ацетон-вода-этилацетат(4:6:2)

50

Проявляющие реагенты:

N 1 -2,6 -дибром -N -хлорхшю1шмин,0,5И-ный раствор в н-гексане N 2 а).4-(п-питробензил) пиридин,2/-ыый раствор в ацетоне б)тетраетилешшнтамин,10Х-ный расвор в ацетоне.

Стандартные растворы исследуемых метаболитов и фосфамида в хлороформе или етилацетате с содержанием вещества 100 мкг/мл.

Если стандартный раствор фосфамида готовят из препаративной фориы пестицида, то учитывают его процентное содержание в препарате. Срок хранения стандартных растворов до 1 месяца в холодильнике.

2.3.Приборы, аппаратура , посуда.

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М с набором колб ТУ 25-11-917-76,или аналогичный аппарат для отгонки растворителей

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73 или аналогичный

Колбы мерные , цилиндры, ГОСТ 1770-74

Термостат

Пипетки, микропипетки, ГОСТ 20292-74

Стаканы, скляг и химические емкостью 50-100 мл, ГОСТ 25336-82 Воронки химические, ГОСТ 25336-82 Воронки делительные, ГОСТ 25336-82

Колбы грушевидные, ГОСТ 25336-82 (для отгонки растворителей)

Камера для хроматографирования, ГОСТ 25336-82 Камера для опрыскивания пластинок, ГОСТ 25336-82 Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 25336-82

51

.Ваня водяная, ТУ 64-12350-76

Стеклянные капилляры для нанесения проб на хроматографические пластинке

Хроматографические пластинки "силуфол" размером 15x15 или 20x20 см

Линейка, планиметр, миллиметровая бумага

Измельчитель тканей, МРТУ 42-1505-63 или аналогичный.

2.4.Проведение определения

2.4.1.Экстракция и очистка экстрактов

Ткани внутренних органов (печень, почки, легкие, селезенка,сердце).

Измельченную пробу тканей внутренних органов массой 2 г помещают в склянку с притертой пробкой и приливают 10 мл охлажденного ацетона или этилацетата и встряхивают на холоду в течение 30-40 минут.Затем растворитель отделяют от пробы, фильтруя его через безводный сернокислый натрий (2-3 г) в колбу для отгонки растворителей.

Экстракцию повторяют еще дважды, используя свежие порции растворите ля.Объединенный экстракт отгоняют при температуре 40-50°С до объема раствора примерно 0,5 мл. Остаток раствора подсушивают безводным сернокислым натрием.

Кровь. Пробу крови 0,5-1 мл вносили в пробирку, смоченную раствором лимоннокислого натрия и приливали 10 мл хлороформа. Экстрагировали на холоду в течение 30 мин. Хлороформ отделяли от пробы, фильтровали через безводный серноислый натрий (1-2).Экстракциго повторяли еще дважды» используя по 5 мл хлороформа, в течение 10 и 5 минут Объединенные экстракты вносили в колбу для отгонки растворителей.

Пробу крови можно поместить d ступпку,куда насыпается 10г безводного сернокислого натрия и растирается в течение

Государственная комиссия по химическим средствам борьбы с вредителями,болезнями растений и сорняками

Редакционная коллегия:

Новикова К.Ф.-начальник сектора ННХСЗР; Калинин В.А.-к.с.н..профессор ,зав.кэфедры ТСХА; Гиренко Д-Б.-к.х.н.,зав.аналитической лаборатории УКР ВНШГИНТОКС; Борисов Г.С.-зав. КТЛ РРСТАЗР; Устинова Т.Н.-ведущий специалист КТЛ РРСТАЗР.

Настоящие методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

Ответственный за выпуск - Орехов Д.А., заместитель председателя

Госхимкомиссии -тел. 207-63-90

Сборник подготовлен к изданию Российской республиканской станцией

защиты растений "Главхимзащиты" МСХ РФ

г.Раменское Московской обл., ул.Нефтегазосьемки 11/41 тел.(246) 3-09-52

ОГЛАВЛЕНИЕ

Хлорорганические пестициды    стр.

1.    Методические указания по групповой идентификации хлороргашхческих пестицидов и их метаболитов в биоматериале, продуктах питания и объектах окружающей среды методом адсорбционной высокоэффективной жидкостной хроматографией.

29 июля 1991г. Л 6129-91..........9..

2.    Временные методические указания по определению модауна в эфирных маслах методом газожидкостной хроматографии.

29 июля 1991г, Л 6109-91.........18..

Фосфорорганическио пестициды

3.    Методические указания по определению бициклада в растительном материале хроматографией в тонком слое.

29 июля 1991г, Л 6113-91.........26...

4.    Временные методические указания по определению офтанола-Т (по изо-фенфосу) в воде, почве, зорне и семенах сахарной свеклы.

29 июля 1991г. л 6Ю9-91.........31...

9. Временные методические указания по определению метаболитов <ЮП, про из водных тио- и дитиофосфорпых кислот в биоматериале методом тонкослойной и газожидкостной хроматографии.

29 июля 1991г. » 6072-91.........36----

6.    Методические указания по определению метаболитов фосфамида в биологических средах методом тонкослойной хроматографией.

29 июля 1991г. J* 6133-91.........48----

7.    Методические указания по определению этрихвроса в зерновых культурах методом газожидкостной хроматографии.

29 июля 1991г. Л 6129-91.........57----

8.    Методические указания по гпзохроматографическому определению остаточных количеств этамона в столовой и сахарной свекле,зеленой массе

29 июля 1991 г, J* 6094-91...

3. Методические указания по определении зфэля (этилфосфита алюминия и фосфористой кислоты) в растительных культурах, продуктах их переработки, воде, почве методом газожидкостной хроматографии.

29 июля 1991г. N 6132-91..........70...

Пиретровды

10. Временные методические указания по определению изатрина в растительном материале методом тонкослойной хроматографии.

29 июля 1991г. N 6070-91..........85____

11. Временные методические указания по определению пиретроидов (пермет-рина .циперметрина .фенвалерата и декаметрина )в молоке и мясе методом газожидкостной хроматографии.

29 июля 1991г. N 6093-91.........91...

12.    Временные методические указания по определению суми-о в биологическом материале методом газожидкостной хроматографии.

29 июля 1991г. N 6101-91.........103....

Гетероциклические соединения

13.    Временные методические указания по определению остаточных количеств азовитз в зерне злаковых, зеленой массе растений, сахарной свекле, яблоках, почве и воде газожидкостной и тонкослойной хроматографией.

29 июля 1991г. N 5371-91.........110.....

14.    Методические указания по определению байфидана в зерновых и лекарственных культурах, воде и почве методами газогащкостпой и тонкослойной хроматографии.

29 июля 1991г. N 6131-91........123____

15.    Методические указания по определению бутизанэ С в воде и почве ме-

2

тодом газожидкостной хроматографии.

29 июля 1991г. N 6139-91........131----

16.    Временные методические указания по хроматографическому определению ивина и его метаболита, 2,6-лутидина в воде, овощах (картофель,огурцы, тома ты).

29 июля 1991г. N 6079-91.......136......

17.    Временные методические указания но хроматографическому определению ивина в биологическом материале.

29 июля 1991г. N 6078-91.......143......

18.    Временные методические указания по определению остаточных количеств ивина и его комплексов в воде методом тонкослойной хроматографии.

29 июля 1991г. N 6077-91.......149.....

19.    Временные методические указания по определению кентавра в воде методом хроматографии в тонком слое.

29 июля 1991г, N 6100-91.......155----

20.    Временные методические указания по определению лентаграна в афир-ных маслах методом тонкослойной хроматографии.

29 июля 1991г. N 6111-91.......162.....

21. Временные методические указания по определению рейсера в вфирных маслах лаванды и мяты методом газожидкостной хроматографии

29 июля 1991 г. N 6074-91.......168.....

22.    Методические указания по определению топаза в сельскохозяйственных культурах газожидкостной и тонкослойной хроматографией.

8 июня 1989г. N 5009-89........174____

23.    Временные методические указания по определению харелли в воде методом хроматографии в тонком слое.

29 июля 1991г. N 6102-91.......182...

24.    Временные методические указания по определению экспромта в воде методом хроматографии в тонком слое.

29 июля 1991г. N 6107-91

25. Методические указания по определению эллипса в почве, зерне зерновых культур методами газожидкостной и тонкослойной громатогра

29 июля 1991г, N 6273-91.......199...

Нитрофенолы и их производные

26- Методические указания по определению акрекса и диносеба в крови и моче тонкослойной хроматографией.

4 октября 1988т, N 4707-88......210...

27.    Meтодическио указания по определению трефлана в зеленой массе и зерне зориовых культур методом газожидкостной хроматографии.

29 июля 1991г. N 6125-91........215..

Производные мочевины и карбаминовой кислоты

28.    Временные методические указания по определению остаточных коли честв димилина в яблоках тонкослойной хроматографией.

29 июля 1991г, N 6075-91........222..

29.    Временные методические указания по определению остаточных количеств картолина -2 в зерне ячменя, пшеницы и других злаков.гречихи, бобах сои.сухих кормовых травах, почве и воде тонкослойной хроматографией.

29 июля 1991г. N 6097 -91.........228.

30.    Методические указания по определению картолина-2 в биосубстратах методом тонкослойной хроматографией.

29 июля 1991г. N 6115-91........240.

Алканкарбоновые кислоты и их производные

31.    Методические указания по ускоренному определению 2,4-Д и ТХА

в биоматериале (органы и ткани мелких наземных и почвенных животных) методом газожидкостной хроматографии.

32.    Методические указания по определению 2,4-Д в воде методом обра-ценно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии.

29 июля 1991г. N 6127-91.......253..

Прочие пестициды

33.    Временные методические указания по определению набу в эфирных маслах методом тонкослойной хроматографии.

29 июля 1991г, N 6110-91.........260..

34.    Временные методические указания по определению остаточных количеств нафталевого ангидрида в зерне кукурузы, льна и воде тонкослойной хроматографией.

29 июля 1991 г. N 6096-91.......265...

Методические указания по измерению концентраций пестицидов и полупродуктов их получения в воздухе рабочей зоны

1.    Методические указания по газохроматрографическому измерению концентраций бутизана в воздухе рабочей зоны.

29 июля 1991г. N 6138-91.........272____

2.    Методичесгаае указания по хроматографическому измерению концентраций видвила в воздухе рабочей зоны.

26 февраля 1991г. N 5325-91......276____

3.    Методические указания по хроматографическому измерению концентраций глина в воздухе рабочей зоны.

29 июля 1991г. N 6134*91.........281.....

4.    Временные методические указания по хроматографическому измерению концентраций грамекса в воздухе рабочей зоны.

29 июля 1991г. N 6082-91.........285......

5.    Временные методические указания по хроматографическому измерению концентраций гранстара в воздухе рабочей зоны.

29 июля 1991г. N 6090-91

6. Методические указания по измерении концентраций оксима днкамбы в воз-

духе рабочей зоны тонкослойной хроматографией.

29 июля 1991г. N 6117-91.........295.....

7.    Временные методические указания по хроматографическому измерению концентраций дгосвата и эдила в воздухе рабочей зоны.

29 июля 1991г. N 6154-91.........300.......

8.    Методические указания по измерению концентраций С~- C_Q - эфиров 2,4-ДМ;

2,4-Д и 2,4,5 - ТП- кислот в воздухе рабочей зоны методом тонкослойной хроматографии.

29 июля 1991г, N 6119-91.........308......

9. Временные методические указания по измерению концентраций дуала в

воздухе рабочей зоны методом фотометрии, тонкослойной и газожидкостной хроматографии.

29 июля 1991 г, N 6086-91.......314......

10 Временные методические указания по хроматографическому измерению концентраций кентавра в воздухе рабочей зоны

29 июля 1991 г, J* 6085-91.......323.....

11.Временные методические указания по хроматографическому измерению концентраций лондакса в воздухе рабочей зоны.

29 июля 1991г. N 6Ю4-91........329......

12 .Методические указания по хроматографическому измерению концентраций 4-нитро-о-ксилола и 3-нитро-о-ксилола в воздухе рабочей зоны.

29 июля 1991г, N 6116-91.........334.....

13. Методические указания по газохроматографическому измерению концентраций омайта в воздухе рабочей зоны.

29 июля 1991г. N 6269-91........339----

14. Временные методические указания по газохроматографическому измерению концентраций офтанола-Т (по изофенфосу) в воздухе рабочей зоны

29 июля 1991г. N 6087-91.......344----

6

15. Методические указания по хроматографическому измерению концентраций 4-родан-2 -нитроанилина в воздухе рабочей зоны.

29 июля 1991г, N 6118-91......349____

16. Временные методические указания по измерению коонцентраций тиадиа зола в воздухе рабочей зоны методом тонкослойной хроматографии

29 июля 1991г. N 6084-91......394____

17. Временные методические указания по хроматографическому измерению концентраций тотрила в воздухе рабочей зоны.

29 июля 1991г. N 6089-91......398----

18. Временные методические указания по измерению концентраций фоликура в воздухе рабочей зоны методом тонкослойной хроматографии

29 июля 1991г. N 6112-91.......362____

19-Временные методические указания по газохроматографическому измерению концентраций фюзилада в воздухе рабочей зоны.

29 июля 1991г. N 6088-91.......369____

20. Врем0шше методические указания по хроматографическому измерению концентраций харэлли в воздухе рабочей зоны.

29 июля 1991г.    *    6071-91.....373____

21. Временные методические указания по измерению концентраций экспромта в воздухе методом газожидкостной хроматографии

29 июля 1991г. Я 6081-91......378____

22. Временные методические указания по хроматографическому измерению концентраций эллипса в воздухе рабочей зоны.

29 июля 1991г. Я 6083-91......383____

23-Методические указания по измерению концентраций эфаля в воздухе рабочей зоны фотометрическим и газохромэтографмческим методом.

29 июля 1991г. Я 6120-91......387____