ГОС.УЛАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬШ С ВРВДТВДЯМИ, БСОТЕИЯМИ РАСТЕНИЙ И СОРНЯКАМИ ПРИ МСХ СССР

МЕЯХ)₍ПКЧЕ»СКИЕ УХАРАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТБ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМА)! и ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ

Часть УНТ

Москва - 1977 г.

ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИИ СРЕДСТВАМ БОРЬШ С ВРЕДИТЕЛЯМИ, БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИИ И СОРНЯКАМИ ПРИ UCX СССР

УТВСрЖДС.НО

Министерством здравоохранения СССР тс г.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ 1ШР0К0ЛИЧЕСТЗ ПЕС'ЭДДОб В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ,КОРМАХ И ВНШ1ЕЯ СРьДЕ

Часть ЛИ

Данные методики апробированы к рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями,болезнями растений и сорняками при UCX СССР

Москва - 1977 г

МЕТОД ОПРВДЕ.'1ЕНКГ| ОСТА ТОЧИ: Л КОЛИЧЕСТВ ШГДУМВОГО

ж?к 2,4-д1;хло?:Ена1СШ(х/сно1: кю:оть / 2,4-д /

3 30Д5 И ЗЕРНЕ иаЭЭДи МЕТОДОМ ГЛЗО-ШКОС7НО"| хрома тогразки ¹

Краткая характеристика препарата

С1-<Г.' — -    -    0аН₂СС0СН₂С₆Нс    Мел.вое 311,16

CI

Бекздлоьый эфир С,4-Д - белый кристаллический порошок с т.лл. 46°С и т.кшг. 18У - 190°С/ I мм рт.ст. Давление насыщенных nwipoij при 2С°С С,73¹10“''^> шл рт.ст., при 40°С -7,1¹10“^ км рт.ст. 8 поде нерастворим, «ало растворим в бензоле к дихлорэтане, хороло растворим а диэтилоаом эфире. Растворимость / вое. % / яри 20°С составляет: в метаноле -3,05, ацетоне - 5,4, а та ноле - 7,84, беиэиловом спирте -14,о, циклогексаноне - 26,С, хлороформе - 32,6, ксилоле -74,Ь.

Препарат бензолового >;нпа 2,4-Д выпускается в форме 4ОД-нсго ой^лы'ируюдего концентрата. Применяется в качестве гербицида в посевах зерновых культур, в районах хлопководства.

Препарат среднетоксичен для теплокровных животных и человека: АД™ - 1300 мг/кг / по данным Башкирского мединститута /.

Принцип метода ¹

Метод основан на экстракция бензилового э^гра 2,4-Д из анализируемых проб органическими растворителями, омылении экстракта спиртовой щелочью до 2,4-Д, экстракции 2,4-Д из омыленной пробы, метилировании 2,4-Д дяаэометаном о последу^, щим газохроматографическим определением метилового эфира 2,4-Д с помощью электронно-захватного детектора¹

Количестве иное оаряьвлэкхе метилового ajzpa 2,4-*, про-осдктса методом ьнутронного стаилаэта. Уйьимально детектируемое ко.ичество ме гиловэго a^ipa 2*4-Д с поко'двю электронно-захватного лете;:тора I нг / а пересчете на б^нзилозый эфир 2,4-Д - 1,3 иг /. £глэл"дЗ динамический диапазон детектирования метилового оиноь 2,4-Д с лоусбдо электронно-захватного детектора не менее 60 нг.

Чувствительность определения бензиновою эФ‘*о& 2,4-Д составляет: в воде - 0,002 кг/л / ДПР /; в зерно - 0,05 :хг/кг / ДПР /. Процент опродслс::.тл бензинового офнра 2,4-Д в л робах составляет 53,0 - 95,С£. Относительная оыибка определения, найденная с издсхиостыэ 0,55, составляет д 2»0£.

Реактивы и раствори

Еезьодний сульфат катрья, х.ч.

Н-гекоан, перегнанный, х.ч.

Диэтиловый эфир, х.ч., перегнанный Хлороформ, х.ч.

Уксусная кислота, ледяная Спирт этиловый, $ь£-ннй Соляипя кислота, х.ч.

Натрий едкяй, х.ч. 0,5 N и 5 ^ водные растворы Фосфорно-молибденовая кислота, х.ч. 40^-ньй водный раствор Хрсматон N-AW-Dik':f;3 , 0,16 - 0,20 мк с 5£ метилсилнкока S3-S0 Азот особой чистоты, МРТУ 6-02-375-66

Стандартный раствор беизилового эфира 2,4-Д в этаноле / растворяют 0,01 г беизилового эфира 2,4-Д в 10 мл этанола / Стандартный раствор 2,4,5-трихлорфеноксыуксусноЕ кислоты / 2,4,5-Т /: растворяют 0,0150 г в 10 mi-этанола Экстракционный раствор: растворяют фиксанал буферного рзство-ра для рН-ыетрии с рК * 6,85 / калий фосфорнокислый одноэаме-щенный и натрий фосфорнокислый дьузамешенный / в 1000 мл воды

Эфирный раствор диазометана

Полученяе диезомотана

Получение диазометана осуществляют из *;итрозо?.^,.отгл;.'.очезини.

/OS

Для получения нлтроссметЕЛмочёьины ьо взвешенную литровую круглодонную колбу поиедоют 200 г 242-ного водного раствори метиламина / метилами* используется либо в воде водного раствора, лябо в виде хлоргадргта / и добавляют при охлаждении 165 ыл кондбнтрироваягюМ соляной кислоты до кислой реек-ции / индикатор метялрот /. Затеи прилипают такое количество води, чтобы пос содс^иымого колбы достиг БОС г и прибавляют 300 г мочевины. Затем содержимое колбы остосокно кипятят с обратным холодильником 2 часа 45 минут и энергично 15 минут. Раствор в колбе охлаждают до комнатной температуры, растворяют в нем НО г 952-ного азотлстокислого натрия и охлаждаю; до 0°С. В 3-х литровом стакане готовят смесь 600 г льда я 100 г концентрированной серной кислоты, охллдзя содержимое стакана смесью льда л соли, В этот стакан при перемешивании приливают содержимое круглодошюй колбы / холодный раствор метилмочевины и нитрита нат[ая / с такой скоростью, чтобы температура не поднимальсь выше J°C. Получение яитрозометкл-мочевины проходит по следующим реакциям

СН^КН₂*НС1 4 H₂N-CO-Mh'₂ -♦ СН₅-И11-СО-ГШ₂ ♦ NH^Cl CH^-NH-CO-NH. ♦ нно₂ —*► СП^-КСНС^-СО-КН^ ■* н₂о

Нитризомотилмочевина всплывает на поверхность d виде мелких кристаллов, которые немедленно отфильтровывают на воронке 1х:шера и хорошо отсасывают под вакуумом. Затем кристаллы на фильтре размешивают до образования аасты с 50 мл холодной дистиллированной воды, отсасывают и сушат б вакуумэк-сикаторе. Выход нитрозометапмочевины 66-722 / I06-II5 г / от теоретического.

Полученную таким образом нитрозометилйочевину можно хранить в холодильнике длительное время. При те-лперлтуре выше 20°С ее не следует хранить более I часа. При темпзратуре 30°С нитрозометилмочбвиаа ыожзт разложиться без взрыва, но с выделением газообразных продуктов.

Получение дназоме^ана из натрозоиетилмочевини проходит по следующей реакции

CH^K(NO)-CO*NH₂ » кон —*•

В круглодонную колбу на 100 мл поменяют 3 мл 50^-ного водного раствора едкого кали я ДО мд диэтилового эфира. Смесь охлаждают до 5°С» после чего при взбалтывании прибавляют I г ня т ро з ометиауочедины. Колбу присоединяют к холодильнику, ниж-няЯ конец которого снабжен алонхеи с отводом, проходящим через резиновую пробку я погружениям в слой эфира на дне прием-нш:а. Приемник охлаада.от смесью льда л соли.

Реакционную колбу помешают ча водяную баню, нагретую до 50°С. Эфирный раствор в колбе доводят до кипения. Время оч времени содсрл:,о.-.ое колбы перемешивают. Отгонку прекращают после получения первых капель бесцзетного дистиллята.

Ни а коем случае не следует отгонять веоь эфир I

Приборы и пооуда

Газовый хроматограф с электронно-захватным детектором /Цвет-5, Цвет-106 к др. /

Делительные воронки на 1500, 500 и 250 мл

Колба мерная, I л

Колба Бунзена, 0,5 л

Воронка Бсхнера, диаметр 15 см

Прибор Кудерна-Дэниша или ротационный испаритель

Аппарат для встряхивания

Колбы конические с пришлифованной пробкой на 500 в 250 мл Баня водяная Холодильник Либиха Электроплитка

Вакуумный водоструйный насос

Вакуумный масляный насос

Грушевидные а круглодонные колбы на 100 мл

Пробирки, 5 мл

Стаканы химические, ъ0 мл

Мельница лабораторная / кофемолка /

Ход анализа

Вода. Пробу воды / 250 - 1000 мл / помещают ь делительную воронку, прибавляют I ца соляной кислогь и экстрагируют

/х*г

тремя порцляул диэтилового э(1:яра / 100, 50 а 50 мл /. Объединенные эфирные экстракты сушат безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляют на ротационном испарителе дли л приборе Кудерпя-Доиша до Объема 3-5 мл. Последние порции растэори-теля удаляют то.'ом воздуха / для этоа цели можно использовать резиновую грушу /. Сухой остаток растворяют в 40 мл этанола, переносят в коническую кол^у на 300 мл, прибавляют 5 ч водный* раствор едкого натра до слабощелочной реакции / универсальная индикаторная бумага /, присоединяют к колбе обратный холодильник и помещают на 2-2,5 часа на кипящую водяную баню для гидролиза бензилевого эфира 2,4-Д до 2»4-Д. После окончания гидролиза смывают обратны;: холодильник этанолом, давая смыву стечь в колбу, прибпзляют ЬО мл хлоро^рма и переносят содержимое колбы в делительную воронку на 500 мл. Экстрагируют 2,4-Д сначала 20 мл 5 н водного раствора едкого натра и 50 мл воды, а затем дваяды 5 мл 5 N водного раствора едкого натра и 50 мл поды. Продолжительность каждой экстракции 3 мин. Органический ргстворигель отбрасывают, а объединенный водный экстракт трижды промывают хлороформом по 30 мл, отбрасывая хлороформ. Затем водный экстракт подкисляют 20 мл концентрированной соляной кислоты и экстрагируют 2,4-Д диэтиловым эфиром дважды по 50 мл. Эфирный экстракт сушат безводным сульфатом натрия и удаляют растворитель на ротационном испарителе. Последние порции растворителя удаляют токсм воздуха. К сухому остатку в круглодонной колое на 100 мл прибавляют 5 мкг 2,4,5-Т / в виде раствора в диэтиловом эфире / и приливают эфирный раствор диазометана / при этом взбалтывая содержи?/ое колбы / до обесцвечивания прекращения раствора в колбе. Затем удаляют растворитель досуха, остаток растворяют в I мл н-гек-сана и аликвоту хроматографируют ори следуилих условиях /хроматограф Цвет-106 /: стеклянная спиральная колонка / длила I м, внутренний диаметр 3 мм /, заполненная Хроматином N,

0,16 - 0,20 гам, промытым кислотой и енланизарооанным ДМХС с Ъ% S5-30; скорость газа-носителя / азот особой чистоты / через колонку 50 мл/мин, скорость азота особой чистоты через детектор постоянной скорости рекомбинации 150 мл/мин, темпе-рятуря термостата колонок 170°С, температура, термос та та детектор 220°С« температура I: три теля 220°С, шкала электрометра

/W

20*10~^а, скорость диаграммной ленты потенциометра 240 мм/ч Порядок выхода йз колонки хроматографируемых веществ: «-гексан / растворитель /, метиловый эфир 2,4-Д, метиловый эфир 2*4,0-7* Брегля удерживания метилового эфира 2,4-Д I мин.

45 сек. Хроматографирование одной пробы проводят дважды. Измеряют на хроматограммах высоты пиков метиловых эфиров 2.4-Д и 2.4,5-Т. вычисляют среднее значение отношения эт;'Х dhcot и по калибровочному i{.лфику находят содержание 2,4-Д в упаренном экстракте. Для построения калибровочного графика а круг-лодоннне колбы нс KJ0 мл помещают 5, 10, 15, 20 мкг 2,4-Д а виде раствора п диэтилозом эфире и п каждую колбу помещают Т мл стандартного раствора 2,4,5-Т с содержанием 5 кхг/мд / в диэтиловом эфире / и далее поступают так, как это описано випю. На хрома то граммах измеряет высоты пиков метиловых эфиров 2,4-Д к 2.4,5-Т к строят гмфпк зависимости отношения этих висот от 0И10теи:1Я количеств 2,4-Д и 2,4,5-Т в единице объела раствора.

Растительный материал. Новоску зерна шаепицы / 20 г /, измельченного в муку на ласораторной мельнице, помещают в коническую колбу с притертой пробкой / объем колбы 500 мл / и встряхивают пи а п пара те для встряхивания в тсчеш2б часа со смесью растворителей, состоящей из 50 мл диэтклового эфира, 50 мл хлороформа и I мл ледяной: уксусной кислоты. Твердые частицы отфильтровывают на воронке Бюу.н«ра под вакуумом, колбу споласкивают небольшим количеством смеси растворителей хлороформ-диотллоьый эфир / 1:1/. Фильтрат сушат безводна сульфатом натрия л удаляют растворитель на ротационном испарителе до объема 3-5 ыл. Последние г.орцил растворителей уда-лж*т тскоу. воздуха. С ухой остаток растворяют в 40 до этанола, переносят в коническую колбу на 300 мл, прибавляют 5 N водный раствор едкого натра до слабощелочной реакции / универсальная индикаторная бумага /, присоединяют к колбе обратный холодильник и помешают ал 2 - 2,5 часа на кипящую водяную баню для гидролиза Оенздлодого эфира 2,4-Д до 2,4-Д, После окончания гидролиза смывают обратный холодильник этанолом, давая смыву стечь в колбу, прибавлял 50 мл хлороформа и переносит содержимое колбы i делительную ворокку на 500 мл* Экстрагируют 2,4-Д сначала 20 мл 5К водного раствора едкого натра и 50 мл воды, а затем дважды 5 мл 5 к бод-

/ог

кого раствора едкого натра и 50 мл водь. Продолжительность каждой экстракций 3 минуты* Органический растворитель отбрасывают* а объединенный водный экстракт трижды проиаизают хлороформом но 30 мл, отбрасывал хлороформ. Затем водный экстракт подкисляют 20 мл концентрированной соляной кислоты и экстрагируют 2,4-д диэт::лоиыг. эфиром дважды со 50 мл* Водную фазу отбрасывают, а эфирный экстракт переносят в делительную воронку на 250 мл и экстрагируют 2,4-д тремя порциями 0,5 N водного ра створа едкого натрз / 50, 25 е 25 мл /. Объединенный щелочной экстракт проиграют тремя порциями хлороформа по 10 г.*л, отбрасывая этот хлороформ. щелочной экстракт подкисляют 10 мл концентрированной соляной кислоты, приливают 5 мл 4Одного годного раствора фосфорно-молибденовой кислота л извлекают 2,4-Л тремя порциями хлороформа по 10 мл* Из объединенного хлороформекного экстракта извлекают 2,4-Л тремя порциями экстракционного раствора по 25 мл* Объединенный экстракт промывают тремя порциями хлороформа по 10 мл, подкисляют 2 мл концентрированной соляной кислоты и извлекают 2,4-Л тремя порциями дяэтилового эфира / 25* 10 и 10 мл /. Объединенный эфирный экстракт сушат безводным сульфатом натрия и удалит растворитель на ротационном испарителе. Последние порции растворителя удаляют потоком воздуха. К сухому остатку в круглодонной колбе на 100 мл прибавляют 5 мкг 2,4,5-Т / в виде раствора в диэтиловом эфире /, приливают эфирный раствор диазометана и далее поступают так, как это описано при определении в воде*

Расчет результатов анализе

Для определения содержания 2,4-Д в пр^бв используют следующую формулу

v    ^х    н    ?гт

X ■ -ы—    , где

Н_ст г

X - содержание 2,4-Д в пробе, мг/кг иля мг/л;

К - поправочный коэффициент, равный таигеяоу угла наклона калибровочного гра' ка;

?_ст- количество внесенной 2,4,5-Т, ыг«

/02

в - количество анализируемой пробы, л или кг;

Н - выоот8 пика метилового эфира 2»4-Д, мм; высота дика метилового эфира 2,4,5-Т, мм.

Для пересчета оодержаявя в пробе бензилового эфира 2,4-Д необходимо полученные результаты умножить иа 1,43774

/*9

1

И.Л.Пиленкова, А.Д.Фатьянова, Г.К.Морина¹ AJd^itopoaa.,

В .Д.Чмиль, украден >U лекябрн,.¹1530-7ь.

/01 '