Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

10 страниц

191.00 ₽

Купить МУ 4802-88 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

 Скачать PDF

Оглавление

Характеристика метода

Приборы, аппаратура, посуда

Реактивы, растворы и материалы

Отбор пробы воздуха

Подготовка к измерению

Проведение измерения

Расчет концентрации

Пояснение к формуле расчета

Приложение 1. Приведение объема воздуха к стандартным условиям

Приложение 2. Коэффициент К для приведения объема воздуха к стандартным условиям

 
Дата введения01.01.2019
Добавлен в базу01.10.2014
Актуализация01.01.2019

Этот документ находится в:

Организации:

12.12.1988УтвержденЗаместитель Главного государственного санитарного врача СССР
Стр. 1
стр. 1
Стр. 2
стр. 2
Стр. 3
стр. 3
Стр. 4
стр. 4
Стр. 5
стр. 5
Стр. 6
стр. 6
Стр. 7
стр. 7
Стр. 8
стр. 8
Стр. 9
стр. 9
Стр. 10
стр. 10

ИНФОРМАЦИОННО-ИЗДАТЕЛЬСКИЙ ЦЕНТР ГОСКОМСАН-ЭПИДНАДЗОРА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИЙ ВРЕДНЫХ ВЕЩЕСТВ В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ

Выпуск 23/1

УТВЕРЖДЕНО Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР А.И.Заиченко ”12” декабря 1988г.

N 4802-88

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ по фотометрическому измерению концентраций липазы микробной в воздухе рабочей зоны

Липаза микробная является ферментным препаратом, предназначенным для расщепления жиров, применяется в медицине, в меховой, кожевенной промышленности, в животноводстве, и других отраслях народного хозяйства.

Липаза микробная — мелкий порошок светло-коричневого цвета и легким дрожжевым запахом, растворим в воде, в солевых растворах (в частности, фосфатном буфере), не растворим в большинстве органических растворителях.

В воздухе находится в виде аэрозоля.

Ферментный препарат липаза микробная раздражает слизистые оболочки верхних дыхательных путей и легких, обладает аллергенным действием.

ПДК в воздухе 1 мг/м^.

Характеристика метода

Метод основан на фотометрическом определении цветного комплекса меди, образуемого свободными жирными кислотами, которые выделяются в результате гидролитического действия липазы, с диэтилдитиокарбаматом.

Отбор проб производится с концентрированием на фильтр.

101

Нижний предел измерения содержания жирной кислоты 1 мкг/мл в фотометрируемом растворе.

Нижний предел измерения липазы в воздухе 0,3 мг/м^ (при отборе 4 л воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций липазы в воздухе от 0,3 до 3,7 мг/м^.

Измерению не мешают белковые вещества и фосфорнокислые соли.

Суммарная погрешность измерения не превышает 25%.

Время выполнения измерения, включая отбор проб, 1 час 30 мин.

Приборы, аппаратура, посуда

Спектрофотометр.

Аспирационное устройство.

Фильтродержатели, ТУ 95.72.05-77. pH-метр типа ионометра ЭВ-74.

Размельчитель тканей РТ-2, ТУ 64-1-1305-79.

Аппарат инактивации сыворотки АИС, ТУ 64-1-1091-77 или лабораторная водяная баня.

Колбы конические, ГОСТ 10394-72, вместимостью 1000 мл. Бюретка, ГОСТ 20292-74, вместимостью 25 мл.

Мерные колбы, ГОСТ 1770-74, вместимостью от 25 до 1000 мм. Пипетки, ГОСТ 20292-74, вместимостью 1 и 5 мл.

Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, вместимостью 100 мл.

Бюксы, ГОСТ 25336-82, вместимостью 2-5 мл.

Пробирки с пришлифованными пробками, ГОСТ 10515-75, вместимостью 15 мл.

Стаканы химические, ГОСТ 25336-82, вместимостью 50; 100; 250 мл.

Реактивы, растворы и материалы

Липаза микробная.

Оливковое масло, ГОСТ 7580-55.

102

Спирт поливиниловый (ПВСО, ТУ 64-5-51-79, 2% водный р-р.

Натрий фосфорнокислый двухзамещенный, ГОСТ 4172-76, 1/15 М раствор (А).

Калий фосфорнокислый однозамещенный, ГОСТ 4198-75, 1/15 М раствор (Б).

Фосфатный буфер, 1/15 М раствор с pH 7,8. Готовят смешиванием растворов А и Б в соотношении 91,5 : 8,5. Величину pH проверяют на рН-метре.

Хлороформ, ГОСТ 215-74, хч.

Гептан, ГОСТ 5.395-78, хч.

Раствор экстракционный: готовят путем смешивания хлороформа и гептана 3:2.

Уксусная кислота, ледяная, ГОСТ 6175, 1 М раствор.

Медь азотнокислая трехводяная, ГОСТ 4163-68, чда.

Натрий хлористый, ГОСТ 4233-77, хч.

Триэтаноламин, ТУ 6-09-2448-72, ч.

Бутанол, ГОСТ 6006-78, чда.

Натрия N, N-диэтиддитиокарбамат, ГОСТ 8864-71, ч.

Реагент меди: готовят в мерной колбе на 200 мл, для этого к 10 мл 1 М раствора уксусной кислоты добавляют 12 мл триэтаноламина, 4,75 г меди азотнокислой и 100 мл воды, растворяют, добавляют 57 г хлористого натрия и 50 мл воды, затем 1 М уксусной кислотой устанавливают pH-8,1 и доводят до метки водой. Устойчив реагент месяц (до образования зеленого осадка).

Цветной реагент: в мерной колбе на 100 мл растворяют 100 мл натрия N, N-диэтилдитиокарбамата в 60 мл бутанола и доводят до метки хлороформом. Сохраняется при хранении в холодильнике в течение 2-х недель.

Эмульсия оливкового масла; готовят перемешиванием 40 мл оливкового масла с 60 мл 2% раствора ПВС в дистиллированной воде в стакане микроизмельчателя тканей при 3000 об/мин в течение 30-40 минут. Эмульсия готовится перед употреблением.

Пальмитиновая кислота, МРТУ 6-09-5841-69. Для стандарта возможно также применение олеиновой кислоты.

Стандартный раствор N 1 с концентрацией 1,5 мг/мл пальмитиновой кислоты готовят растворением кислоты в экстракционном растворе в мерной колбе на 50 мл. Раствор устойчив при хранении в холодильнике в течение недели.

103

Стандартный раствор N 2 и 3 с концентрацией 100 мкг/мл и 10 мкг/мл готовят путем соответствующего разбавления раствора N 1 экстракционным раствором. Готовят перед употреблением. Фильтры АФА-ХА-20 или АФА-ХА-10.

Отбор пробы воздуха

Воздух с объемным раствором 1 л/мин аспирируют через фильтр АФА-ХА, укрепленный в фильтродержателе.

Для определения 1/2 ПДК достаточно отобрать 2,5 л воздуха. Пробы устойчивы длительное время.

Подготовка к измерению

Градуировочные растворы готовят в пробирках, согласно таблице 12.

Таблица 12

N

стан

дарта

Стандартный раствор N 3,

Экстракционны! раствор, мл

Концентрация пальмитиновой кислоты, мкг/мл

1

0,0

5,0

0

2

0,5

4,5

1

3

1,0

4,0

2

4

2,0

3,0

4

5

3,0

2,0

6

6

4,0

1,0

8

7

5,0

0,0

10

Во все пробирки с градуировочными растворами добавляют 0,5 мл насыщенного раствора натрия бромистого и 2,5 мл реагента меди. Пробирки закрывают и встряхивают при 1500 об/мин. По 3,5 мл органического слоя переносят в пробирки с 0,4 мл цветного реагента. Перемешивают и через 5-10 минут измеряют оптиче-104

скую плотность при длине волны 440 нм. Измерение проводят в кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм по отношению к раствору сравнения, не содержащего определяемого вещества (раствор N 1 по таблице). Окраска растворов устойчива 3 часа.

Строят градуировочный график зависимости значений оптических плотностей от соответствующих им концентраций жирной кислоты в градуировочном растворе (мкг/мл).

Проверка градуировочного графика проводится в случае использования новой партии реактивов, но не реже 1 раза в квартал.

Проведение измерения

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан, добавляют 5 мл фосфатного буфера и перемешивают интенсивно в течение 10 мин стеклянной палочкой или на магнитной мешалке. В пробирки вносят 1 мл эмульсии оливкового масла и 8-10 минут выдерживают в водяной бане при 37+0,5°С, затем не вынимая добавляют в каждую пробирку по 0,5 мл раствора фермента (пробы), перемешивают и оставляют при 37°С на 1 час (точно) для проведения липолиза. По истечении этого времени в каждую пробирку добавляют 5 мл экстракционного раствора из бюретки и интенсивно встряхивают в течение 3 минут.

Определение содержания образовавшейся жирной кислоты проводят аналогично градуировочным растворам. Раствором сравнения служит эмульсия с добавлением фосфатного буфера, которым обработан чистый фильтр. Остальные реактивы добавляют в том же количестве, как при анализе проб. Концентрацию жирной кислоты находят по графику.

Расчет концентрации

Концентрацию липазы микробной (С) в воздухе (в мг/м^) вычисляют по формуле:

С - [(а * В! * В2) / (М * А * Б3 * V)J * 1000, где

105

a — концентрация жирной кислоты в анализируемом растворе, найденная по графику, мкг/мл;

Bj — общий объем раствора для экстракции жирных кислот,

мл;

В2 — общий объем раствора пробы с ферментом, мл;

Б3 — объем раствора пробы с липазой, взятый для инкубирования, мл;

V — объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям, л (см. Приложение 1);

1000 — коэффициент пересчета на 1 м^;

М — молекулярная масса жирной кислоты;

А — липолитическая активность липазы, ЛЕ/мг, ч. Единице липолитической активности (ЛЕ) соответствует такое количество фермента, которое освобождает 1 мкмоль жирной кислоты в течение часа при 37°С. Или это количество микроэквивалентов жирной кислоты, выделяющихся в результате гидролитического действия 1 мг фермента липазы. Использована липаза с активностью 200000 ЛЕ/гч (200 ЛЕ/мг ч).

Пояснение к формуле расчета:

(а * В})/М — количество мкмоль жирной кислоты в градуировочном растворе. Так как 200 мкэквив. жирной кислоты дает 1 мг липазы, то (а ф В|) / М мкэквивалентов дает А “ a/Bj/M * 2000 мг липазы.

Эти А мг липазы содержит Б3 *= 0,5 мл пробы, объем всей пробы фермента В2 * 5 мл.

V/1000 количество м^ воздуха, отобранного для анализа.

106

Приложение 1

Приведение объема воздуха к стандартным условиям проводят по следующей формуле:

V20 - IV * (273 + 20) * Р 1/ 1(273 + t°) * 101.331, где

V — объем воздуха, отобранный для анализа, л;

Р — барметрическое давление, кПА (101,33 кПа - 760 мм рт. ст.)

t — температура воздуха в месте отбора пробы, °С.

Для удобства расчета V20 следует пользоваться таблицей коэффициентов (приложение 2). Для приведения воздуха к стандартным условиям надо умножить V на соответствующий коэффициент.

223

Приложение 2

Коэффициент К для приведения объема воздуха к стандартным

условиям

°с

Давление Р, кПа

(мм рт.

ст.)

97,33

97,86

98,4

98,93

99,46

(730)

(734)

(738)

(742)

(746)

-30

1,1582

1,1646

1,1709

1,1772

1,1836

•26

1,1393

1,1456

1,1519

1,1581

1,1644

-22

1,1212

1,1274

1,1336

1,1396

1,1458

-18

1,1036

1,1097

1,1159

1,1218

1,1278

-14

1,0866

1,0926

1,0986

1,1045

1,1105

-10

1,0701

1,0760

1,0819

1,0877

1,0986

-06

1,0640

1,0599

1,0657

1,0714

1,0772

-02

1,0385

1,0442

1,0499

1,0556

1,0613

0

1,0309

1,0366

1,0423

1,0477

1,0535

+02

1,0234

1,0291

1,0347

1,0402

1,0459

+06

1,0087

1,0143

1,0198

1,0253

1,0309

+10

0,9944

0,9990

1,0054

1,0108

1,0162

+14

0,9806

0,9860

0,9914

0,9967

1,0027

+18

0,9671

0,9725

0,9778

0,9880

0,9884

+20

0,9605

0,9658

0,9711

0,9783

0,9816

+22

0,9539

0,9592

0,9645

0,9696

0,9749

+24

0,9475

0,9527

0,9579

0,9631

0,9683

+26

0,9412

0,9464

0,9516

0,9566

0,9618

+28

0,9349

0,9401

0,9453

0,9503

0,9955

+30

0,9288

0,9339

0,9391

0,9440

0,9432

+34

0,9167

0,9218

0,9268

0,9318

0,9368

+38

0,9049

0,9099

0,9149

0,9198

0,9248

224

°с

Давление

Р, кПа (мм рт. ст.

)

100

100,53

101,06

101,33

101,86

(750)

(754)

(758)

(760)

(764)

-30

1,1899

1,1963

1,2026

1,2058

1,2122

-26

1,1705

1,1763

1,1831

1,1862

1,1925

-22

1,1519

1,1581

1,1643

1,1673

1,1735

-18

1,1338

1,1399

1,1460

1,1490

1,1551

-14

1,1164

1,1224

1,1284

1,1313

1,1373

-10

1,0994

1,1053

1,1112

1,1141

1,1200

-06

1,0829

1,0887

1,0945

1,0974

1,1032

-02

1,0669

1,0726

1,0784

1,0812

1,0869

0

1,0591

1,0648

1,0705

1,0733

1,0789

+02

1,0514

1,0571

1,0627

1,0655

1,0712

+06

1,0363

1,0419

1,0475

1,0502

1,0557

+10

1,0216

1,0272

1,0326

1,0353

1,0407

+14

1,0074

1,0128

1,0183

1,0209

1,0263

+18

0,9936

0,9989

1,0043

1,0069

1,0122

+20

0,9868

0,9921

0,9974

1,0000

1,0053

+22

0,9800

0,9853

0,9906

0,9932

0,9985

+24

0,9735

0,9787

0,9839

0,9865

0,9917

+26

0,9669

0,9721

0,9773

0,9755

0,9851

+28

0,9605

0,9657

0,9708

0,9734

0,9785

+30

0,9542

0,9594

0,9646

0,9670

0,9723

+34

0,9418

0,9468

0,9519

0,9544

0,9595

+38

0,9297

0,9347

0,9397

0,9421

0,9471

225