Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

41 страница

248.00 ₽

Купить МУ 1.2.2968-11 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Методические указания устанавливают порядок оценки действия наноматериалов на растения по морфологическим признакам в ходе тестирования безопасности новых видов наноматериалов и нанотехнологий, а также мониторинга состояния окружающей среды.

 Скачать PDF

Оглавление

I. Область применения

II. Нормативные ссылки

III. Общие положения

     3.1. Цель биологического тестирования наноматериалов

     3.2. Требования к лабораториям, проводящим оценку действия наноматериалов на растения по морфологическим признакам

     3.3. Квалификация специалистов, проводящих исследования

     3.4. Мероприятия по обеспечению качества проводимых исследований

     3.5. Соблюдение мер конфиденциальности

     3.6. Ответственность организации, проводящей исследование

     3.7. Меры предосторожности при введении наноматериалов в растения, препарировании биоматериала, отборе и консервации проб, проведении исследований

     3.8. Нештатные ситуации и меры по их устранению

IV. Порядок оценки действия наноматериалов на высшие растения по морфологическим признакам в лабораторных условиях

     4.1. Составление плана (дизайна) исследования

     4.2. Определение вида растительных организмов, пригодных для проведения исследований

     4.3. Определение способа (метода) введения наноматериалов

     4.4. Подготовка проб наноматериалов для введения в растения

     4.5. Определение численности экспериментальных групп

     4.6. Расчет доз вводимых наноматериалов

     4.7. Получение токсикологической характеристики наноматериала

     4.8. Составление отчета о результатах работ по оценке действия наноматериалов на растения по морфологическим признакам

V. Порядок оценки действия наноматериалов на высшие растения по морфологическим признакам в естественных популяциях

     5.1. Составление плана (дизайна) исследования

     5.2. Определение видового состава популяции, подлежащего сбору (обследованию)

     5.3. Контрольные группы

     5.4. Определение периодичности обследования растений в естественных популяциях на повреждающее действие наноматериалов

     5.5. Порядок обследования флоры в чрезвычайных ситуациях (аварийные промышленные выбросы)

     5.6. Составление отчета о результатах работ по оценке действия наноматериалов на природную флору по морфологическим признакам

VI. Методы оценки действия наноматериалов на высшие растения по морфологическим признакам

     6.1. Перечень реактивов и оборудования, применяемых при оценке действия наноматериалов на растения по морфологическим признакам

     6.2. Характеристика органов и систем, подлежащих обследованию (на примере цветковых растений)

     6.3. Оценка действия наноматериалов по качественным показателям

     6.4. Оценка действия наноматериалов на растения с использованием методов морфометрии

     6.5. Форма представления результатов по оценке действия наноматериалов на растения по морфологическим показателям

VII. Критерии оценки состояния низших растений - биоиндикаторов, применяемых в мониторинге наноматериалов

     7.1. Метод оценки безопасности наноматериалов на модельной системе грибов и грибоподобных организмов в условиях in vitro

     7.2. Метод оценки безопасности наноматериалов по прорастаемости конидий и ветвлению проростков гриба Alternaria alternata в условиях in vitro

Приложение 1. Типовой протокол эксперимента по оценке действия наноматериалов на растения по морфологическим признакам

Приложение 2. Обозначения и сокращения

Приложение 3. Рекомендуемая литература по оценке морфологических признаков высших растений и грибов

 
Дата введения17.10.2011
Добавлен в базу01.09.2013
Актуализация01.01.2019

Этот документ находится в:

Организации:

17.10.2011УтвержденГлавный государственный санитарный врач Российской Федерации
ИзданРоспотребнадзор2012 г.
РазработанГосударственное учебно-научное учреждение Биологический факультет Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова
РазработанУчреждение Российской академии медицинских наук Институт биохимии им. А.Н. Баха РАН
РазработанУчреждение Российской Академии наук Центр Биоинженерия РАН
РазработанУчреждение Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт питания РАМН
РазработанФГУП Всероссийский научно-исследовательский институт метрологической службы
РазработанООО Интерлаб
РазработанФедеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Нормативные ссылки:
Стр. 1
стр. 1
Стр. 2
стр. 2
Стр. 3
стр. 3
Стр. 4
стр. 4
Стр. 5
стр. 5
Стр. 6
стр. 6
Стр. 7
стр. 7
Стр. 8
стр. 8
Стр. 9
стр. 9
Стр. 10
стр. 10
Стр. 11
стр. 11
Стр. 12
стр. 12
Стр. 13
стр. 13
Стр. 14
стр. 14
Стр. 15
стр. 15
Стр. 16
стр. 16
Стр. 17
стр. 17
Стр. 18
стр. 18
Стр. 19
стр. 19
Стр. 20
стр. 20
Стр. 21
стр. 21
Стр. 22
стр. 22
Стр. 23
стр. 23
Стр. 24
стр. 24
Стр. 25
стр. 25
Стр. 26
стр. 26
Стр. 27
стр. 27
Стр. 28
стр. 28
Стр. 29
стр. 29
Стр. 30
стр. 30

Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

1.2. ГИГИЕНА, ТОКСИКОЛОГИЯ, САНИТАРИЯ

Порядок биологической оценки действия наноматериалов на растения по морфологическим признакам

Методические указания МУ 1.2.2968—11

Издание официальное

Москва * 2012

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

1.2. ГИГИЕНА, ТОКСИКОЛОГИЯ, САНИТАРИЯ

Порядок биологической оценки действия наноматериалов на растения по морфологическим признакам

Методические указания МУ 1.2.2968—11

МУ 1.2.2968—11

цидных ламп для обеззараживания воздуха и поверхностей в помещениях» (№ 11-16/03-06 от 28 февраля 1995 г.); технологические операции проводят в соответствии с зональностью помещений; в отдельных помещениях осуществляют переодевание и хранение верхней одежды, прием пищи; выделяют отдельное складское помещение для хранения материалов и обработанных ими биологических образцов.

3.3. Квалификация специалистов, проводящих исследования

Сотрудники лаборатории, проводящие оценку действия наноматериалов на растения по морфологическим признакам, должны иметь специальное образование и практический опыт работы с веществами 1—2 класса опасности в форме традиционной дисперсности не менее 0,5 года.

Персонал обязан:

•    знать свойства наночастиц и наноматериалов, применяемых при проведении исследований, включая возможные последствия от их воздействия на организм человека;

•    ознакомиться с мерами по снижению рисков, имеющих место при работе с наноматериалами;

•    быть ознакомлен с практикой и общими рекомендациями, касающимися работы в данной лаборатории;

•    пройти инструктаж по технике безопасности и стандартным, операционным процедурам работы с наноматериалами;

•    пройти обучение по технике безопасности проведения исследований с использованием наноматериалов.

ЗА. Мероприятия по обеспечению качества проводимых исследований

3.4.1.    Контроль за качеством работ включает в себя: оформление перечня исследований, проводимых в организации, с указанием для каждого исследования руководителя и заказчика, названия исследуемого наноматериала; перечня исследуемых биологических образцов, даты начала и состояния каждого исследования на текущий момент времени; оценку протоколов и методов исследования на соответствие правилам лабораторной практики; мониторинг текущих исследований; отчет о проведенных проверках и рекомендации по устранению недостатков.

3.4.2.    Для осуществления программы по обеспечению качества исследований все производственные операции проводятся в соответствии со стандартными операционными процедурами (СОП). Соблюдение СОП осуществляется в целях обеспечения качества, достоверности и воспроизводимости результатов исследования.

МУ 1.2,2968—11

3.5. Соблюдение мер конфиденциальности

Организация, проводящая исследования действия наноматериалов на растения по морфологическим признакам, должна обеспечить конфиденциальность результатов исследований в рамках принятых ею обязательств и в соответствии с законодательством Российской Федерации. Сотрудники, принимающие участие в проведении исследований действия наноматериалов на растения по морфологическим признакам обязаны соблюдать конфиденциальность в отношении любых данных, полученных в ходе исследования, в соответствии с законодательством Российской Федерации.

3.6. Ответственность организации, проводящей исследование

Организация, осуществляющая исследование действия наноматериалов на растения по морфологическим признакам, должна являться самостоятельной правовой единицей, несущей юридическую ответственность.

Основным документом, подтверждающим результаты определения наноматериалов, является отчёт о проведённом исследовании. Отчет должен удовлетворять требованиям, изложенным в пунктах 4.8 и 5.5,

3.7. Меры предосторожности при введении наноматериалов в растения, препарировании биоматериала, отборе и консервации проб, проведении исследований

3.7.1.    Наночастицы и наноматериалы, используемые в биологических экспериментах, следует во всех случаях рассматривать как потенциально опасные вещества, если иное не установлено. Уровень потенциальной опасности наноматериалов для человека и окружающей среды может быть предварительно оценен с применением МР 1.2.2522—09.

3.7.2.    Каждый наноматериал, используемый в исследовании, должен быть снабжён паспортом безопасности, составленным в соответствии с ГОСТ 30333-2007.

3.7.3.    Органы и ткани растений, подвергнутых воздействию наноматериалов, следует рассматривать как источники потенциальной биологической опасности.

3.7.4.    В ходе проведения исследований необходимо соблюдать правила безопасного обращения с наноматериалами, установленные в утверждённых руководителем лаборатории инструкциях по технике безопасности и действующих СОП.

11

3.8. Нештатные ситуации и меры по их устранению

3.8.1.    При розливе дисперсии наноматериала внутри бокса биологической безопасности:

•    подождать не менее 5 мин для очистки воздуха от аэрозоля;

•    обязательно надеть одноразовый халат, очки и перчатки;

•    во время проведения уборки оставить бокс включенным;

•    собрать пролитую дисперсию (раствор) наноматериала специальной абсорбирующей губкой или одноразовыми впитывающими салфетками, замоченными в дезинфицирующем растворе (для биогенных наноматериалов) или в растворе лабораторного детергента (для абиогенных наноматериалов);

•    салфетками, смоченными дезинфицирующим раствором (для биогенных наноматериалов) или раствором лабораторного детергента (для абиогенных наноматериалов) протереть все поверхности внутри бокса, включая стены, рабочую поверхность и размещенное внутри бокса оборудование;

•    уничтожить после обезвреживания все загрязненные одноразовые материалы согласно правилам лаборатории по уничтожению биологически опасных материалов;

•    предметы многократного использования перед процедурами очистки и автоклавирования поместить в контейнеры с крышками или завернуть в бумагу;

•    загрязненные биогенными наноматериалами предметы, которые нельзя автоклавировать, перед удалением из рабочей зоны бокса биологической безопасности замочить на 20 мин в дезинфицирующем растворе, в случае загрязнения абиогенными наноматериалами - замочить на 1 ч в растворе лабораторного детергента;

•    одноразовую одежду, в которой проводилась уборка бокса биологической безопасности, запечатать в пакеты и уничтожить после обезвреживания;

•    перед возобновлением работы (или перед выключением бокса) оставить бокс биологической безопасности работающим еще на 10 мин.

3.8.2.    При розливе дисперсии (раствора) наноматериала в лаборатории, вне бокса биологической безопасности:

•    вызвать специальную службу, если пролитый наноматериал представляет серьезную биологическую опасность, относится к уровню биологической опасности второго уровня или выше;

•    удалить из лаборатории весь персонал; в зону пролитой жидкости вернуться после осаждения аэрозоля не ранее, чем через 15 мин;

МУ 1.2.2968—11

•    всю загрязненную одежду запечатать в специальные пакеты для биологических отходов и уничтожить после обезвреживания;

•    при проведении уборки надеть одноразовый халат, обязательно использовать очки и перчатки из латекса или полимерного материала;

•    положить на пролитую жидкость несколько бумажных полотенец для ее абсорбции, сверху положить второй слой полотенец или салфеток, пропитанных дезинфицирующим средством (если пролит биогенный наноматериал) или лабораторным детергентом (для абиогенного наноматериала);

•    через 20 мин собрать и уничтожить после обезвреживания все загрязненные одноразовые материалы согласно правилам лаборатории по уничтожению и дезинфицированию биологически опасных материалов;

•    предметы многократного использования подвергнуть обеззараживанию;

•    протереть поверхности всего оборудования в зоне розлива наноматериала соответствующим обеззараживающим средством;

•    одноразовую одежду, в которой проводилась уборка, собрать в пакеты и уничтожить после обезвреживания.

3.8.3. При транспортировании наноматериала вне лаборатории:

•    вызвать представителей специальных служб и оказывать им содействие по устранению пролитой жидкости и рассыпанных порошков, представляющих биологическую опасность;

•    материал, представляющий биологическую опасность, собрать и запечатать в промаркированный контейнер, размещенный внутри специальной тары для транспортирования; эта тара должна иметь крышку, быть небьющейся и иметь маркировку биологически опасного материала;

•    из зоны, загрязнённой наноматериалом, удалить посторонних людей;

•    при обеззараживании загрязнённой территории следовать инструкциям представителей специальных служб.

IV* Порядок оценки действия наноматериалов

на высшие растения по морфологическим признакам в лабораторных условиях

4.1. Составление плана (дизайна) исследования

Перед1 проведением исследования сотрудником, ответственным за проведение исследования, составляется его подробный план. План подписывается всеми исполнителями работ и утверждается руководителем

13

организации (лаборатории, испытательного центра), проводящей исследование.

План исследования включает:

•    наименование и адрес заявителя (заказчика) исследования;

•    наименование и адрес организации, которая производила отбор проб (образцов);

•    информацию, представленную заявителем (заказчиком) исследования;

•    сведения о свойствах наноматериала;

•    сведения о традиционном аналоге наноматериала;

•    применяемый носитель наноматериала (растворитель, разбавитель, эмульгатор и т. д.);

•    используемые растения: вид, число растений в группе, перечень опытных групп и контролей;

•    характеристику вводимого наноматериала и его традиционного аналога: дозу введения, способ введения, схему введения, время между введениями;

© наименование исследуемых материалов (проб), количество (число, объем, масса) проб, метод отбора проб, способ консервации проб;

•    метод статистической обработки результатов;

•    перечень определяемых показателей.

При составлении плана исследований следует использовать методы отбора проб и биологического тестирования наноматериалов на растительных объектах, утверждённые в установленном порядке (МУ 1.2.2635—10, МУ 1.2.2742—10 и другие).

Вносимые в план исследования изменения утверждаются руководителем исследования, а отклонения от утверждённого плана (незапланированные события, непредвиденные обстоятельства и т. д.) записываются, пронумеровываются, подписываются руководителем исследования, датируются и прилагаются к отчёту, составляемому по результатам исследования.

4.2. Определение вида растительных организмов, пригодных для проведения исследований

Для оценки действия наноматериалов на цветковые растения по морфологическим признакам в лабораторных условиях целесообразно использовать проростки семян цветковых растений - пшеницы, ржи, ячменя, овса, кукурузы, редиса красного круглого, белой горчицы, лука, фасоли обыкновенной, картофеля. Семена тест-культур должны принад-

МУ i.2.2968—И

лежать к одному виду и сорту, соответствовать 1-му классу, быть одного года урожая, не обработанными протравителями и удостоверенными соответствующими документами.

Наиболее удобной моделью для оценки действия наноматериалов на растения по морфологическим признакам являются проростки семян кресс-салата. Кресс-салат как биоиндикатор отличается быстрым прорастанием семян и почти стопроцентной всхожестью, которая заметно уменьшается в присутствии загрязнителей. КрОхме того побеги и корни этого растения под действием загрязнителей подвергаются заметным морфологическим изменениям (задержка роста, искривление побегов, уменьшение длины и массы корней). Кресс-салат как биоиндикатор удобен еще и тем, что действие стрессоров можно изучать одновременно на большом числе растений при небольшой площади рабочего места. Привлекательны и весьма короткие сроки эксперимента. Семена кресс-салата прорастают уже на 3—4-й день.

Для предварительной оценки повреждающего действия наноматериалов на проростки семян может быть использована следующая шкала:

1.    (-) Повреждающее действие отсутствует.

Всхожесть семян достигает 90—100%, всходы дружные, проростки крепкие, ровные. Эти признаки характерны для контроля, с которым следует сравнивать опытные образцы;

2.    (+) Слабое повреждающее действие.

Всхожесть 66—90 %. Проростки почти нормальной длины, крепкие, ровные;

3.    (++) Среднее повреждающее действие.

Всхожесть 20-Ч>0 %. Проростки по сравнению с контролем короче и тоньше. Некоторые проростки имеют уродства;

4.    (+++) Сильное повреждающее действие.

Всхожесть семян очень низкая (менее 20 %). Проростки мелкие и уродливые.

4.3. Определение способа (метода) введения наноматериалов

Наноматериалы вводят в цветковые растения путем проращивания семян в субстратах, содержащих наноматериалы в виде водных дисперсий, или путем нанесения наноматериалов на поверхность семян. Процедура введения наноматериалов в растения путем проращивания семян в кварцевых субстратах, содержащих наноматериалы, включая описание условий проведения эксперимента, подготовку лабораторной посуды, субстрата для проращивания семян, подготовку семян, процедуру про-

МУ 1.2.2968—11

ращивания семян или нанесения на них наноматериалов, представлена в МУ 1.2.2635—10.

4.4. Подготовка проб наноматериалов для введения в растения

Введение нерастворимых наноматериалов допускается в виде водных дисперсий (суспензий, взвесей). При приготовлении дисперсии наноматериалов необходимо применять физические методы диспергирования (перемешивание, встряхивание, ультразвуковая обработка). Применение детергентов и минеральных веществ, способных оказать повреждающее действие на организм растений, не допускается. В отдельных случаях возможно применение специальных носителей, стабилизирующих дисперсии наноматериалов (электролиты, полимеры, растворы ПАВ), которые не должны в рабочих концентрациях оказывать повреждающее воздействие на растения, что подтверждается данными литературы или исследованиями с использованием дополнительных контрольных групп растений, обрабатываемых этими носителями наноматериалов в эквивалентных опытным группам количествах.

4.5. Определение численности экспериментальных групп

При проведении стандартного эксперимента формируется 4 группы проростков растений, Семена для проращивания разделяют на следующие группы:

•    1-я группа, контрольная, не обрабатываемая наноматериалом;

•    2-я группа подвергается воздействию изучаемыми наноматериалами не менее чем в трёх возрастающих концентрациях;

•    3-я группа подвергается воздействию традиционного аналога наноматериала (если таковой имеется) не менее чем в трёх возрастающих концентрациях;

•    4-я группа подвергается воздействию носителя (дисперсионной среды), если используется иная, чем дисперсия в деионизованной воде форма введения наноматериала.

Численность семян в каждой группе, подвергаемой воздействию одной концентрации каждого тестируемого образца, должна быть не менее 10 экземпляров.

Растения группы 1 подвергают экспозиции деионизованной водой по той же схеме, что и тестируемый наноматериал и его традиционный аналог.

МУ 1.2.2968—11

4.6. Расчёт доз вводимых наноматериалов

Доза вводимых в растения наноматериалов рассчитывается как массовая концентрация в единице массы (объёма) субстрата для проращивания семян. Для наноматериалов, предварительно охарактеризованных по величине удельной поверхности в расчёте на единицу массы, дополнительно рассчитывают дозу в единицах площади поверхности межфазной границы наноматериала на единицу массы/объёма указанных сред. Для монодисперсных наноматериалов дозу выражают через число частиц в единице массы/объёма сред, применяемых при тестировании.

4.7.    Получение токсикологической характеристики наноматериала

Токсикологическая характеристика наноматериала должна включать изучение зависимости доза-эффект:

а)    относительно дозы, выраженной через массу наноматериала;

б)    относительно дозы, выраженной через площадь поверхности частиц;

в)    относительно дозы, выраженной через число частиц (в случае монодисперсных наноматериалов).

4.8.    Составление отчёта о результатах работ по оценке действия наноматериалов на растения по морфологическим признакам

По завершении исследований оформляют отчет, в котором должны быть представлены:

•    название, адрес организации-исполнителя;

•    даты начала и завершения исследований;

•    цель и задачи исследования;

•    описание исследуемого наноматериала, включая имеющиеся сведения о физических, химических, биологических, токсикологических свойствах;

•    вид, количество растений в каждой группе;

•    форма, дозы, кратность и путь введения исследуемого наноматериала в растения;

•    методы оценки повреждающего действия наноматериалов на растения;

•    методы статистической обработки результатов;

•    результаты исследования, представленные в виде обобщающих таблиц, рисунков, с соответствующей статистической обработкой, и комментариев к ним;

17

•    обсуждение результатов;

•    выводы;

•    список использованной литературы.

Отчет о результатах проведенного исследования составляется ответственным исполнителем, утверждается руководителем организации и скрепляется печатью организации.

Обязательным требованием к отчёту является оформление в соответствии с ГОСТ 7.32-2001.

V. Порядок оценки действия наноматериалов

на высшие растения по морфологическим признакам в естественных популяциях

5. Л Составление плана (дизайна) исследования

План оценки действия наноматериалов на растения по морфологическим признакам в естественных популяциях включает:

•    наименование и адрес заявителя (заказчика) исследования;

•    наименование и адрес организации, которая производила отбор проб (образцов);

•    информацию, представленную заявителем (заказчиком) исследования;

•    обоснование выбора сроков (сезона) обследования растений в естественных популяциях;

•    характеристику территории, на которой производится обследование растений (местоположение, наличие антропогенных факторов загрязнения, близость к предприятиям наноиндустрии, наличие пылевых или жидких выбросов этих предприятий), мест сбора образцов;

•    характеристику обследуемой флоры: вид растений, число растений в группе, перечень опытных групп;

•    наименование исследуемых материалов (проб): единица измерений проб (объем, масса), метод отбора пробы, способ консервации пробы;

•    количество отбираемых проб;

•    сведения о свойствах наноматериала, присутствующего в окружающей среде (если он известен);

•    перечень определяемых показателей;

•    метод статистической обработки результатов.

МУ 1.2.2968—11

5.2. Определение видового состава популяции, подлежащего сбору (обследованию)

С целью исследования влияния наноматериалов на растения отбирают пробы травянистых растений. Для этого определяют доминантные виды, представленные в фитоценозе очень большим количеством экземпляров, зарегистрированных на определенной площади. Оценку действия наноматеряалов производят на основе морфометрического анализа доминантных видов.

Методики отбора проб растительного сырья для исследования представлены в МУ 1.2.2742—10 и МР 1.2.2640—10.

5.5. Контрольные группы

В целях достоверного выявления морфологических изменений в растениях, подвергшихся воздействию наноматериалов в природных условиях целесообразно проводить сопоставление полученных данных с результатами обследования аналогичных по видовому составу и условиям произрастания растительных популяций, не подвергавшихся воздействию наноматериалов (на чистых, не зараженных наноматериалами территориях). При невозможности отбора образцов растений из таких популяций следует ориентироваться на референтные данные о морфологических параметрах растений данной таксономической принадлежности, представленные в специализированной литературе (определителях растений). Перечень рекомендуемых для этого литературных источников приведён в прилож. 3 (ссылки 1—4).

5.4. Определение периодичности обследования растений в естественных популяциях на повреждающее действие наноматериалов

В зависимости от цели и задач мониторинга выделяют следующие виды наблюдений за повреждающим действием наноматериалов на флору:

•    исходные наблюдения, фиксирующие уровни повреждающего действия наноматериалов на растения в естественных популяциях на момент начала проведения мониторинга;

•    плановые (периодические или сезонные) наблюдения в соответствии с графиком мониторинга;

•    внеплановые (оперативные) наблюдения в случае возникновения чрезвычайных ситуаций (промышленных аварийных выбросов);

•    сплошное обследование с целью определения зоны поражения в случае промышленных аварийных выбросов.

19

ББК51.2

П59

П59 Порядок биологической оценки действия наноматериалов на растения по морфологическим признакам: Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2012.—39 с.

ISBN 978—5—7508—1116—8

1.    Разработаны Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Г. Г. Онищенко, И. В. Брагина, О. И. Аксенова, Т. Ю. Завистяева); Учреждением Российской академии медицинских наук «Научно-исследовательский институт питания» РАМН (В. А. Тутельян,

И. В. Гмошинский, С. А. Хотимченко, М. М. Гаппаров, В. В. Бессонов, О. И. Пе-редеряев, И. В. Аксенов, Е. А. Арианова, Р. В. Распопов, В. В. Смирнова,

А. А. Шумакова, О. Н. Тананова, В. А. Шипелин, А. А. Казак); Учреждением Российской академии наук «Институт биохимии им. А. Н. Баха» (В. О. Попов,

Б. Б. Дзантиев, А. В. Жердев, О. Д. Гендриксон, И. В. Сафенкова); Государственным учебно-научным учреждением «Биологический факультет Московского государственного университета им. М. В. Ломоносова» (М. П. Кирпичников,

К. В. Шайтан, А. П, Бонарцев, А. В. Феофанов, С. Н. Еланский, В. И. Гмошинский); Федеральным государственным,унитарным предприятием «Всероссийский научно-исследовательский институт метрологической службы» (С. А. Ко-ноногов, С. С. Голубев); Учреждением Российской академии наук «Центр «Биоинженерия» РАН (К. Г. Скрябин, О. А. Зейналов, Н. В. Равин, С. П. Ком-барова); ООО «Интерлаб» (А. Н. Веденин, Гг В. Казыдуб).

2.    Рекомендованы Государственной Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 17 октября 2011 г.

4.    Введены в действие с момента утверждения.

5.    Введены впервые.

ББК 51.2

ISBN 978—5—7508—1116—8

© Роспотребнадзор, 2012 © Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2012

МУ 1.2 2968—11

Плановое наблюдение за состоянием дикорастущей флоры в зонах промышленного загрязнения наноматериалами, проводится один раз в год - в начале вегетационного периода (май—июнь для средней полосы России).

5.5. Порядок обследования флоры в чрезвычайных ситуациях (аварийные промышленные выбросы)

Сплошное обследование проводится после аварии с целью оценки действия наноматериалов на растения. Сплошное обследование флоры проводится на всей территории, расположенной на прогнозируемом следе выпадений осадков, содержащих наночастицы, в соответствии с данными метеорологических наблюдений на момент выброса и в течение последующих суток.

5.6. Составление отчёта о результатах работ по оценке действия наноматериалов на природную флору по морфологическим признакам

По завершении исследований оформляют отчет, в котором должны быть представлены:

•    название, адрес организации-исполнителя;

•    даты начала и завершения исследований;

•    цель и задачи исследования;

•    описание наноматериала, являющегося контаминантом объектов окружающей среды (если он известен), включая имеющиеся сведения о физических, химических, биологических, токсикологических свойствах;

•    видовой состав обследованных растений;

•    объём обследования (число отобранных образцов растений на каждой территории);

•    контрольные точки для отбора проб растений (в привязке к расположению предприятий наноиндустрии - потенциальных источников загрязнения, сельхозугодий, населённых пунктов);

•    схема отбора биологических образцов;

•    критерии оценки повреждающего действия наноматериалов на растения;

•    методы статистической обработки результатов;

•    результаты исследования, представленные в виде обобщающих таблиц, рисунков, с соответствующей статистической обработкой, и комментариев к ним;

•    обсуждение результатов;

•    выводы;

МУ 1.2.2968—11

Содержание

I. Область применения...................................................................................................5

II.    Нормативные ссылки..................................................................................................6

III.    Общие положения.......................................................................................................8

3.1.    Цель биологического тестирования наноматериалов.................................8

3.2.    Требования к лабораториям, проводящим оценку действия

наноматериалов на растения по морфологическим признакам.................9

3.3.    Квалификация специалистов, проводящих исследования........................10

3.4.    Мероприятия по обеспечению качества проводимых исследований......10

3.5.    Соблюдение мер конфиденциальности......................................................11

3.6.    Ответственность организации, проводящей исследование......................11

3.7.    Меры предосторожности при введении наноматериалов в растения,

препарировании биоматериала, отборе и консервации проб, проведении исследований...........................................................................11

3.8.    Нештатные ситуации и меры по их устранению.......................................12

IV.    Порядок оценки действия наноматериалов на высшие растения по

морфологическим признакам в лабораторных условиях....................................13

4.1.    Составление плана (дизайна) исследования..............................................13

4.2.    Определение вида растительных организмов, пригодных для

проведения исследований...........................................................................14

4.3.    Определение способа (метода) введения наноматериалов.......................15

4.4.    Подготовка проб наноматериалов для введения в растения....................16

4.5.    Определение численности экспериментальных групп.............................16

4.6.    Расчёт доз вводимых нано материалов.......................................................17

4.7.    Получение токсикологической характеристики наноматериала.............17

4.8.    Составление отчёта о результатах работ по оценке действия

наноматериалов на растения по морфологическим признакам...............17

V.    Порядок оценки действия наноматериалов на высшие растения по

морфологическим признакам в естественных популяциях................................18

5.1.    Составление плана (дизайна) исследования..............................................18

5.2.    Определение видового состава популяции, подлежащего сбору

(обследованию)............................................................................................19

5.3.    Контрольные группы...................................................................................19

5.4.    Определение периодичности обследования растений в естественных

популяциях на повреждающее действие наноматериалов.......................19

5.5.    Порядок обследования флоры в чрезвычайных ситуациях

(аварийные промышленные выбросы).......................................................20

5.6.    Составление отчёта о результатах работ по оценке действия

наноматериалов на природную флору по морфологическим признакам.....................................................................................................20

3

VI.    Методы оценки действия наноматериалов на высшие растения по

морфологическим признакам.................................................................................21

6.1.    Перечень реактивов и оборудования, применяемых при оценке

действия наноматериалов на растения по морфологическим признакам.....................................................................................................21

6.2.    Характеристика органов и систем, подлежащих обследованию (на

примере цветковых растений)....................................................................22

6.3.    Оценка действия наноматериалов по качественным показателям..........23

6.4.    Оценка действия наноматериалов на растения с использованием

методов морфометрии.................................................................................24

6.5.    Форма представления результатов по оценке действия

наноматериалов на растения по морфологическим показателям............26

VII.    Критерии оценки состояния низших растений - биоиндикаторов,

применяемых в мониторинге наноматериалов.....................................................28

7.1.    Метод оценки безопасности наноматериалов на модельной системе

грибов и грибоподобных организмов в условиях in vitro.........................28

7.2.    Метод оценки безопасности наноматериалов по прорастасмости

конидий и ветвлению проростков фиба Altemaria alternata в условиях in vitro...........................................................................................33

Приложение L Типовой протокол эксперимента по оценке действия наноматериалов на растения по морфологическим

признакам........................................................................................37

Приложение 2. Обозначения и сокращения...........................................................38

Приложение 3. Рекомендуемая литература по оценке морфологических

признаков высших растении и грибов.........................................39

4

МУ 1.2.2968— И

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

17 октября 2011 г.

Дата введения: с момента утверждения

1.2. ГИГИЕНА, ТОКСИКОЛОГИЯ, САНИТАРИЯ

Порядок биологической оценки действия наноматериалов на растения по морфологическим признакам

Методические указания МУ 1.2.2968—11

I. Область применения

1.1.    Настоящие методические указания устанавливают порядок оценки действия наноматериалов на растения по морфологическим признакам в ходе тестирования безопасности новых видов наноматериалов и нанотехнологий, а также мониторинга состояния окружающей среды.

1.2.    Требования, изложенные в настоящих методических указаниях, применяются в ходе проведения исследований безопасности наноматериалов и нанотехнологий в целях принятия решений по оценке рисков, связанных с воздействием наночастиц и наноматериалов, а также при мониторинге загрязнения окружающей среды нанотехнологической продукцией.

1.3.    Методические указания разработаны с целью обеспечения единства измерений и адаптации имеющихся методов и средств измерений в ходе оценки безопасности наноматериалов и нанотехнологий для состояния окружающей среды, компонентов естественных биоценозов.

1.4.    Методические указания предназначены для специалистов органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека и Федеральной службы по надзору в сфере природопользования, а также могут быть использованы научно-исследовательскими организациями гигиенического профиля,

5

медицинскими учебными заведениями и иными организациями и учреждениями, проводящими исследования по оценке безопасности наноматериалов.

П. Нормативные ссылки

1.    Федеральный закон от 30 марта 1999 г. № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».

2.    Федеральный закон от 2 января 2000 г. №29-ФЗ «О качестве и безопасности пищевых продуктов».

3.    Федеральный закон от 26 июня 2008 г. № 102-ФЗ «Об обеспечении единства измерений».

4.    Федеральный закон от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании».

5.    Федеральный закон от 10 января 2002 г. № 7-ФЗ «Об охране окружающей среды».

6.    Постановление Правительства Российской Федерации от 21 декабря 2000 г. № 987 «О государственном надзоре и контроле в области обеспечения качества и безопасности пищевых продуктов».

7.    Постановление Правительства Российской Федерации от 21 декабря 2000 г. № 988 «О государственной регистрации новых пищевых продуктов, материалов и изделий».

8.    Приказ Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации от 23 августа 2010 г. №708н «Об утверждении Правил лабораторной практики».

9.    Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 23 июля 2007 г. № 54 «О надзоре за продукцией, полученной с использованием нанотехнологий и содержащей наноматериалы».

10.    Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 31 октября 2007 г. № 79 «Об утверждении Концепции токсикологических исследований, методологии оценки риска, методов идентификации и количественного определения наноматериалов».

11.    Приказ Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 19 июля 2007 г. №224 «О санитарно-эпидемиологических экспертизах, обследованиях, исследованиях, испытаниях и токсикологических, гигиенических и иных видах оценок».

12.    СанПиН 2.1.7.1322—03 «Гигиенические требования к размещению и обезвреживанию отходов производства и потребления».

6

МУ 1.2.2968—11

13.    ГН 1.2.2633—10 «Гигиенические нормативы содержания приоритетных наноматериалов в объектах окружающей среды».

14.    СП 2.2.2.1327—03. «Гигиенические требования к организации технологических процессов, производственному оборудованию и рабочему инструменту».

15.    «Методические указания по применению бактерицидных ламп для обеззараживания воздуха и поверхностей в помещениях», от 28 февраля 1995 г. № 11-16/63-60.

16.    МУ 3.5.5.1034—01 «Обеззараживание биологического материала и объектов внешней среды, зараженных бактериями I—IV групп патогенности, при исследованиях методом ПЦР».

17.    МУ 1.2.2520—09 «Токсиколого-гигиеническая оценка безопасности наноматериалов».

18.    МУ 1.2.2635—10 «Медико-биологическая оценка безопасности наноматериалов».

19.    МУ 1.2.2636—10 «Проведение санитарно-эпидемиологической экспертизы продукции, полученной с использованием нанотехнологий и наноматериалов».

20.    МУ 1.2.2742—10 «Порядок отбора проб для выявления и идентификации наноматериалов в растениях».

21.    МР 1.2.2522—09 «Выявление наноматериалов, представляющих потенциальную опасность для здоровья человека».

22.    МР 1.2.2566—09 «Оценка безопасности наноматериалов in vitro и в модельных системах in vivo».

23.    МР 1.2.2639—10 «Использование методов количественного определения наноматериалов на предприятиях наноиндустрии и в контролирующих организациях».

24.    МР 1.2.2640—10 «Методы отбора проб, выявления и определения содержания наночастиц и наноматериалов в составе сельскохозяйственной, пищевой продукции и упаковочных материалов».

25.    МР 1.2.2641—10 «Определение приоритетных видов наноматериалов в объектах окружающей среды, живых организмах и пищевых продуктах».

26.    ГОСТ 6709-72 «Вода дистиллированная. Технические условия».

27.    ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия».

28.    ГОСТ 8.207-76 «Государственная система обеспечения единства измерений. Прямые измерения с многократными наблюдениями. Методы обработки результатов наблюдений. Основные положения».

7

МУ 1.2.2968—11

29.    ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования».

30.    ГОСТ 12.0.004-79 «ССБТ. Организация обучения работающих безопасности труда. Общие положения».

31.    ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».

32.    ГОСТ 26678-85 «Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия».

33.    ГОСТ 3-88 «Перчатки хирургические резиновые. Технические условия».

34.    ГОСТ 28498-90 «Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний».

35.    ГОСТ 29227-91 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».

36.    ГОСТ Р 51232-98 «Вода питьевая. Общие требования к организации и методам контроля качества».

37.    ГОСТ 24104-2001 «Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия».

38.    ГОСТ 7.32-2001 «Отчет о научно-исследовательской работе. Структура и правила оформления».

39.    ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025—2006 «Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий».

40.    ГОСТ 30333-2007 «Паспорт безопасности химической продукции. Общие требования».

III. Общие положения

3.L Цель биологического тестирования наноматериалов

Оценка действия наноматериалов на растения по морфологическим признакам осуществляется в следующих целях:

•    определение безопасных для растений концентраций наноматериалов;

•    определение критических органов - мишеней воздействия наноматериалов;

•    выявление природы и механизмов влияния наноматериалов на растения;

•    мониторинг загрязнения окружающей среды наночастицами и другой нанотехнологической продукцией;

•    разработка мер по охране окружающей среды от вредного воздействия наночастиц и наноматериалов;

МУ 1.2.2968—11

• санитарно-гигиеническое нормирование промышленных выбросов наночастиц и наноматериалов в окружающую среду.

3.2. Требования к лабораториям, проводящим оценку действия наноматериалов на растения по морфологическим признакам

3.2.1.    Наличие аккредитации в установленном порядке. Организации, проводящие исследования, должны иметь аккредитацию в соответствии со стандартом ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025—2006 согласно Федеральному закону от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании».

3.2.2.    Соблюдение правил надлежащей лабораторной практики в соответствии с Приказом Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации от 23 августа 2010 г. № 708 н «Об утверждении Правил лабораторной практики».

3.2.3.    Оснащение необходимым оборудованием и средствами измерений, прошедшими поверку (калибровку) в установленном порядке; эксплуатация оборудования и средств измерений проводится в соответствии с техническим паспортом и инструкцией по применению; результаты проведения поверки (калибровки) и текущего ремонта оборудования фиксируются в специальном журнале, доступном в любое время сотрудникам, эксплуатирующим оборудование или обеспечивающим его обслуживание; применяются средства измерений, имеющие сертификат Ростехрегулирования и зарегистрированные в Государственном реестре средств измерений.

3.2.4.    Наличие выделенных оборудованных помещений для работы с биологическими объектами, содержащими наноматериалы (препарирование, пробоподготовка, исследование); материал, поступивший в лабораторию, должен быть обработан в комнате пробоподготовки; для обработки материала должны быть установлены ламинарные шкафы, обеспечивающие горизонтальный поток воздуха, а также возможность работы без ламинарного потока и длительную экспозицию облучения внутренних поверхностей ультрафиолетовым светом; перемещение пробирок, штативов и прочих должно производиться только в одном направлении; работы с биологическими материалами и образцами, содержащими наночастицы, следует проводить в резиновых одноразовых перчатках; обеззараживание проб, содержащих биогенные наноматериалы, проводят в соответствии с МУ 3.5.5.1034—01; биологические образцы, подвергнутые воздействию наноматериалов, инактивируют автоклавированием; помещение регулярно облучают бактерицидными лампами в соответствии с «Методическими указаниями по применению бактери-

9