Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
81.00 ₽

Купить МУК 4.2.1774-03 — официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма Penicillium canescens F-832 ВКПМ продуцента ксиланазы в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне концентраций от 10 до 3 000 клеток в 1 м3 воздуха.

Оглавление

1. Общие положения и область применения
2. Характеристика штамма-продуцента ксилиназы
3. Пределы измерений
4. Метод измерений
5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
6. Требования безопасности
7. Требования к квалификации операторов
8. Условия измерений
9. Проведение измерения
10. Вычисление результатов измерения
11. Оформление результатов измерений
Список литературы

Показать даты введения Admin

УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации,
Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

24 октября 2003 г.

Дата введения: 1 декабря 2003 г.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод микробиологического измерения
концентрации клеток микроорганизма Penicillium
canescens F- 832 ВКПМ продуцента ксиланазы
в атмосферном воздухе населенных мест
Методические указания
МУК 4.2.1774-03

1. Общие положения и область применения

Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма Penicillium canescens F-832 ВКПМ продуцента ксиланазы в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне концентраций от 10 до 3 000 клеток в 1 м3 воздуха.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 17.2.4.02-81 «Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ».

Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.

2. Характеристика штамма-продуцента ксиланазы

Микроорганизм Penicillium canescens F-832 является продуцентом фермента ксиланазы. Культура образует цепочки спор обычно прямые с гладкой оболочкой. Штамм растет на различных агаризованных и жидких средах. На сусло-агаре на 3 сутки роста при температуре 30 °С образует округлые радиально-складчатые морщинистые колонии с кремовым или сероватым налетом, диаметром 2- 3 мм. На 4-5 сутки инкубации размеры колонии достигают 5- 7 мм, конфигурация и складчатость колоний не изменяется, образуется воздушный мицелий со спорами бежевато-серого цвета, подошва колоний оранжево-коричневая.

Штамм устойчив практически ко всем широко известным антибиотикам.

ПДК штамма в атмосферном воздухе 200 кл/м3, пометка А.

3. Пределы измерений

Методика обеспечивает выполнения измерений количества клеток продуцента ксиланазы в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне концентраций от 10 до 3 000 клеток в 1 м3 воздуха при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Метод основан на аспирации из воздуха клеток продуцента ксиланазы на поверхность плотной питательной среды и подсчета выросших колоний по типичным морфологическим признакам.

Косвенный метод измерения концентрации штамма-продуцента основан на аспирации из воздуха микробных клеток на поверхность плотной питательной селективной среды и подсчета выросших колоний по зонам просветления, образующихся вокруг каждой колонии штамма, как результат продукции ксиланазы на среде с окрашенной целлюлозой.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства,
реактивы и материалы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818(щелевой прибор Кротова)

ТУ 64-12791-77

Термостаты электрические суховоздушные или водяные

 

Автоклав электрический

ГОСТ 9586-75

Бокс, оборудованный бактерицидными лампами

 

Холодильник бытовой

 

Весы лабораторные, аналитические типа ВЛА-200

 

Микроскоп биологический с иммерсионной системой типа «Биолам» Л-211

 

Лупа с увеличением ×10

ГОСТ 25706-83

Чашки Петри бактериологические плоскодонные, стеклянные, диаметром 100мм

 

Пробирки биологические, вместимостью20 и 35 мл

Пипетки мерные на 1,5 и 10 мл

Пипетки мерные на 1,5 и 10 мл

ГОСТ 10515-75

ГОСТ 10515-75

ГОСТ 1770-74

Колбы конические, вместимостью 250 и 500 мл

ГОСТ 1770-74

Секундомер

ГОСТ 9586-75

Барометр

ГОСТ 24696-79

Марля медицинская

ГОСТ 9412-77

Вата медицинская гигроскопическая

ГОСТ 25556- 81

5.2 Реактивы, растворы

Антибиотики: группы пенициллина, тетрациклина, цефалоспорина и др. нистатин или амфотерицин.

 

Спирт этиловый ректификат

ГОСТ 5962-67

Среда для штамма-продуцента: агаризованное пивное сусло 5 - 6 °Б для штамма-продуцента (агар - 1,8 %,

рН 5,9 - 6, 1 , режим стерилизации 1,1 - 1 ,2 атм в течение 30 мин)

 

Бенгальский розовый

Диметилсульфоксид

Селективная среда для штамма-продуцента, состав среды: КН2РО4 - 1г; MgSО42О - 0,5 г; (NH4)2SO4- 0,7 г; целлюлоза порошковая в пересчете на сухое вещество - 0,9 г; лактоза - 0,3 дрожжевой экстракт - 0,5 г; агар -18 г;

вода дистиллированная- до 1 000 мл

Спирт этиловый ректификат

ГОСТ 5962-67

 

 

6. Требования безопасности

При выполнении измерений концентрации клеток продуцента ксиланазы в атмосферном воздухе населенных мест соблюдают следующие требования:

6.1. Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.

6.3. «Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности» (1977).

6.4. Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.

8. Условия измерений

Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20±5 °С), атмосферном давлении 630-800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80 %.

9. Проведение измерения

9.1. Условия отбора проб воздуха

Для определения продуцента ксиланазы воздух, аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин на поверхность плотной питательной среды. Время аспирации воздуха (5- 20 мин) зависит от предполагаемой концентрации клеток продуцента.

Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора, наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска, прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.

9.2. Выполнение анализа

Метод предполагает учет количества типичных по морфологическим признакам колоний, выросших на 3-5 сутки после посева воздуха. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний продуцента.

Сусло-агар расплавляют, остужают до 60 °С, добавляют свежеприготовленный в стерильной дистиллированной воде раствор одного из антибиотиков из расчета 50 мкл на 1 мл среды (для подавления посторонней бактериальной микрофлоры) и нистатина (10 мкг/мл для подавления грибковой флоры), тщательно перемешивают и разливают по 10-15 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности. Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.

При выполнении анализа воздуха косвенным методом селективную среду расплавляют, остужают до 60 °С, добавляют 50 мг/л бенгальского розового, растворенного в 1 мл диметилсульфоксида, тщательно перемешивают и разливают по 10 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности. Бенгальский розовый предназначен для специфического окрашивания целлюлозы и для ограничения разрастания колоний на чашках.

После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат на 30 °С. Через 72 часа производят подсчет выросших типичных колоний продуцента. При необходимости культуру подвергают микроскопированию.

10. Вычисление результатов измерения

Расчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1 м' воздуха производят по формуле:

кл/м3 ,где

Х- концентрация клеток продуцента в воздухе,

N - количество колоний продуцента, выросших на чашке,

1 000 - коэффициент пересчета на 1 м3 воздуха,

V - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации).

11. Оформление результатов измерений

Результаты измерений оформляют протоколом по форме.

Протокол №
количественного микробиологического анализа
Penicillium canescens F-832 ВКПМ продуцента ксиланазы
в атмосферном воздухе

1. Дата проведения анализа_______________

2. Место отбора пробы__________________

3.Название лаборатории_________________

4.Юридический адрес организации________

Результаты микробиологического анализа

Шифр или № пробы

Определяемый микроорганизм

Концентрация, кл/м3

 

 

 

Ответственный исполнитель

Научный руководитель

Список литературы

1. Руководство по контролю загрязнения атмосферы: РД 52.04.186-96- М., 1991. 693с.

2. ГОСТ 8.563-96.. ГСИ «Методики выполнения измерений».

3. ГОСТ 17.2.4.02-81 «Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ». М.: Изд-во стандартов, 1981. 3 с.

СОДЕРЖАНИЕ

1. Общие положения и область применения. 1

2. Характеристика штамма-продуцента ксиланазы.. 1

3. Пределы измерений. 1

4. Метод измерений. 1

5. Средства измерений, вспомогательные устройства,  реактивы и материалы.. 1

6. Требования безопасности. 2

7. Требования к квалификации операторов. 2

8. Условия измерений. 2

9. Проведение измерения. 2

10. Вычисление результатов измерения. 3

11. Оформление результатов измерений. 3

Список литературы.. 3